Tecnicas de coloracion y observacin de microorganismos

Introduccin Los exmenes microscpicos o directos juegan un papel importante en el proceso primario de caracterzacion e identificacin de los microorganismos . los exmenes en fresco estn mas caracterizados para bacterias y protozoos , sobre todo , en el caso de las bacterias nos permiten determinar la movilidad Los exmenes de tincin se usan para revelar el tamao, la forma y laagrupacion delos microorgansmos, para demostrar sus estructuras internas y externas, lo cualnos ayuda a la clasificacin de los diferentes microorganismos Los colorantes son compuestos organicos que estn constituidos por un grupo cromoforo y un auxocromo unidos a un anillo bencnico. Tienen afinidad particular por sustancias celulares especificas . las soluciones empleadas para teir a las bacterias son generalmente acuosas. Los microorganismos, concretamente las bacterias, pueden observarse directamente al microscopio de campo claro. Sin embargo, debido al bajo contraste entre las clulas y su entorno, estos procedimientos se utilizan en ocasiones muy limitadas, como por ejemplo para la observacin de la movilidad bacteriana. Los microscopios de contraste de fases, interferencia diferencial (DIC o la microscopa de Nomarski) y campo oscuro permiten aumentar el contraste, emplendose para la observacin de vainas, filamentos u otras estructuras bacterianas. La tincin es un mtodo sencillo para incrementar el contraste entre la clula y su entorno y por lo tanto contribuye a mejorar la imagen observada. Las tcnicas de tincin con diversos colorantes facilitan la observacin al aumentar notablemente el contraste. En Microbiologa todas las tinciones se realizan a partir de suspensiones de microorganismos extendidas en un portaobjetos (frotis), secadas y fijadas. La fijacin, procedimiento que permite preservar estructuras celulares, se puede llevar a cabo con diferentes tratamientos: fijacin por calor o fijacin qumica. La fijacin por calor es la ms utilizada para la observacin de bacterias. Este procedimiento consiste en pasar el portaobjetos, con la suspensin bacteriana extendida y seca, a travs de una llama de un mechero. La fijacin por calor preserva la morfologa externa de los microorganismos pero no las estructuras internas. La fijacin qumica con agentes como etanol, folmaldehido y cido actico entre otros muchos, se utiliza para preservar las estructuras celulares. Se pueden utilizar dos tipos de procedimientos, la tincin positiva es la ms frecuente, en ella un colorante se une a ciertas estructuras microbianas. Todos los colorantes utilizados en microbiologa tienen en comn la presencia de grupos cromforos, grupos con dobles enlaces conjugados que son los responsables del color mediante la unin a estructuras celulares por enlaces inicos, covalentes o hidrfobos, los que establecen enlaces inicos son los ms recuentes. Entre los colorantes que se unen por enlaces covalentes destaca el reactivo de Schiff, utilizado para la tincin de DNA, donde el colorante se une a la desoxi-ribosa. Por otra parte, en la tincin negativa se utilizan compuestos que no penetran en las clulas sino que impregnan el medio circundante. Los microorganismos aparecen refringentes sobre un fondo negro.

Objetivo: Entrenamieniento en preparacin de extendidos y realizacin decoloraciones Observacin microoscopica de morfologa y agrupamentos bacterianos Materiales: Lamina portaobjetos Lamina excavadora Asa deplatino Cristalizador Pinzas portaobejtos