AO DE LA INTEGRACIN NACIONAL Y EL RECONOCIMIENTO DE NUESTRA

DIVERSIDAD

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA - SEDE SULLANA

SEMINARIO:

CURSO:
MICROBIOLOGIA GENERAL.

PROFESOR:
Mcblgo. JORGE BERMEJO BENITES.

ESCUELA:
INGENIERA AGROINDUSTRIAL.

ALUMNOS:
-

GARCA DE LA CRUZ, ALFREDO.

MORALES ROA, EDUARDO.

RIVERA ALARCN, LUIS DANIEL.

SILVA JUAREZ, RONALD ISAAC.

Sullana, Marzo 2012

El presente trabajo tiene como objetivo principal dar a conocer que son los
anticuerpos monoclonales, como se producen, su descubrimiento, y sus
aplicaciones.

ANTICUERPO MONOCLONAL
Un anticuerpo monoclonal es un anticuerpo homogneo producido por una clula
hbrida producto de la fusin de un clon de linfocitos B descendiente de una sola y
nica clula madre y una clula plasmtica tumoral.
Los anticuerpos monoclonales (en acrnimo Mab, de la frase en ingls con
indntico significado que en espaol: monoclonal antibody), son anticuerpos idnticos
porque son producidos por un solo tipo de clula del sistema inmune, es decir, todos
los clones proceden de una sola clula madre. Es posible producir anticuerpos
monoclonales que se unan especficamente con cualquier molcula con carcter
antignico. Este fenmeno es de gran utilidad en bioqumica, biologa molecular y
medicina.
Produccin de anticuerpos monoclonales
Si una sustancia extraa (antgeno) se inyecta en el cuerpo de un ratn o un
humano, alguna de las clulas B de su sistema inmune se transformar en clulas
plasmticas y empezarn a producir anticuerpos que se unirn a ese antgeno. Cada
clula B produce un solo tipo de anticuerpo, pero diferentes linfocitos B producirn
anticuerpos estructuralmente diferentes que se unen a distintas partes del antgeno.
Esta mezcla fisiolgica natural de anticuerpos es conocida como ' anticuerpos
policlonales'.
Para producir anticuerpos monoclonales, primero se extraen clulas B del bazo
de un animal que ha sido expuesto al antgeno. Estas clulas B son fusionadas en
presencia de PEG (polietilenglicol) con clulas tumorales de mieloma mltiple (un tipo
de cncer) que pueden crecer indefinidamente en cultivo celular. Esta fusin hace a
las membranas celulares ms permeables. Estas clulas fusionadas hbridas, llamadas
hibridomas pueden multiplicarse rpida e indefinidamente, puesto que son clulas
tumorales despus de todo y pueden producir gran cantidad de anticuerpos. Los
hibridomas son suficientemente diluidos y cultivados para obtener un nmero
diferente de determinadas colonias, las cuales producen slo un tipo de anticuerpo.
Los anticuerpos de diferentes colonias son analizados para conocer su capacidad de
unirse a un antgeno determinado, por ejemplo con un tipo de test llamado ELISA, y
para seleccionarse y aislarse de la manera ms efectiva.
El proceso de produccin de anticuerpos monoclonales es complejo. Primero se
disgrega el bazo del ratn inmunizado, donde se acumulan los linfocitos B que tienen
una escasa viabilidad en cultivo, y se fusionan con clulas de mieloma deficientes en
enzimas implicados en la sntesis del nuevo ADN como la timidina quinasa (TK) o la

hipoxantina guanina fosforibosil transferasa (HGPRT). Los productos de la fusin

celular (hibridomas) son cultivados en medio HAT (de hipoxantina, aminopterina y
timidina) donde las clulas mielmicas son eliminadas. Solamente pueden crecer en el
medio de cultivo HAT las clulas que son producto de la fusin entre un linfocito y una
clula de mieloma. Las clulas hbridas obtenidas tras el proceso de fusin contienen
un nmero elevado de cromosomas (72 del mieloma y 40 del linfocito B) que en las
sucesivas divisiones celulares se irn perdiendo hasta oscilar entre los 70 y los 80
cromosomas. Como consecuencia de dicho proceso, algunas clulas pierden la capacidad
de secrecin de anticuerpos o bien funciones bsicas para la viabilidad celular. Por ello
tan pronto como se identifica como positivo un pocillo se somete a un proceso de
clonacin para evitar el crecimiento de clulas no productoras que al ser
metablicamente ms eficientes acabaran por dominar el cultivo.
Los anticuerpos monoclonales pueden ser producidos en cultivos celulares o en
animales. Cuando las clulas de un hibridoma son inyectadas en cultivos de tejidos
como el peritoneo (cavidad peritoneal), produce tumores que sintetizan un fluido rico
en anticuerpos llamado lquido asctico.
Se conoce la tecnologa necesaria para la produccin de anticuerpos en ausencia
de inmunizacin del animal. Es la denominada tecnologa de los anticuerpos
recombinantes. Los avances en la tecnologa gnica han facilitado en gran medida la
manipulacin gentica, produccin, identificacin y conjugacin de fragmentos de
anticuerpos recombinantes, obtenindose nuevos anticuerpos multivalentes y
multiespecficos.
Estas tecnologas han permitido desarrollar estrategias de screening de
anticuerpos monoclonales fuera del cuerpo humano. Para ello es necesario disponer, en
primer lugar de enormes libreras de genes de anticuerpos, habitualmente mediante
amplificacin PCR de cADN de linfocitos, o, alternativamente, mediante sntesis in
vitro de genes usando cebadores randomizados ("randomized wobble"). El mtodo de
'screening' de estas libreras debe tener una eficiencia comparable a la del sistema
inmune, lo que se puede conseguir exponiendo en la superficie de microorganismos los
anticuerpos producidos. Ejemplos de los microorganismos empleados son los fagos
filamentosos como M13 o bacterias. Esta presentacin en superficie permite
establecer un enlace fsico entre la funcin de unin al antgeno y el gen del
anticuerpo, de forma que la afinidad al antgeno permite aislar el microorganismo
portador del gen del anticuerpo de inters entre millones de otros. Una vez aislado el
clon especfico se amplifica para la produccin del anticuerpo de inters por ejemplo
en E. coli.

Descubrimiento de los anticuerpos monoclonales

Los investigadores Niels K. Jerne, Georges Khler y Cesar Milstein,
describieron la tcnica que permita el cultivo de hibridomas o clulas hbridas de
linfocitos B con clulas plasmticas tumorales de mieloma mltiple. Con esta fusin de
dos clulas, una programada para producir un anticuerpo especfico pero que no se
multiplica indefinidamente (linfocito) y otra inmortal con gran capacidad de
crecimiento pero que no produce inmunoglobulina (clula de mieloma), se combina la
informacin gentica necesaria para la sntesis del anticuerpo deseado y una
capacidad de sntesis proteica, permitiendo su multiplicacin indefinida tanto in vitro
como in vivo. Por esta aportacin a la ciencia Jerne, Klher y Milstein recibieron el
premio Nobel de Medicina en 1984.
En el ao 2010, los anticuerpos monoclonales han cumplido 30 aos desde su
invencin dejando de ser una curiosidad biolgica para ser una forma de tratamiento y
diagnstico muy importante en diversas enfermedades. Existen ms de 17 anticuerpos
monoclonales aprobados por la FDA, pero el nmero de anticuerpos monoclonales en
fase de ensayo clnico es elevado y representan un 30 por ciento de todos los
compuestos en investigacin en el 2005. Muy importante para tratamientos de
distintas enfermedades como artritis reumatoide, distintos canceres, enfermedad de
Crohn...

Aplicaciones de los anticuerpos monoclonales

Una vez que se han producido anticuerpos monoclonales que se unen a
determinadas sustancias, estos pueden ser usados para detectar la presencia y
cantidad de esta sustancia, gracias a la prueba de Western blot, que detecta una
sustancia en una solucin o con una prueba de inmunofluorescencia, que detecta una
sustancia en una clula entera. Los anticuerpos monoclonales tambin son usados para
purificar una sustancia con tcnicas llamadas inmunoprecipitacin y cromatografa.
Los anticuerpos monoclonales muestran una serie de ventajas sobre los anticuerpos
policlonales como:
1. Mayor homogeneidad.
2. Reproductibilidad de sus efectos, como consecuencia de su homogeneidad.
3. Mayor capacidad potencial de seleccionar los mejores anticuerpos en afinidad,
tipo de reconocimiento.

Los anticuerpos monoclonales se utilizan en muchos campos como:

1. La investigacin biomdica, como la identificacin y clonacin de genes, la
identificacin y aislamiento de protenas, la activacin de enzimas,
conocimiento de la estructura molecular y morfognesis.
2. Diagnstico: En medicina, gracias a la gran especificidad y capacidad
prcticamente ilimitada de los anticuerpos monoclonales para reconocer
cualquier estructura qumica, permite la deteccin de hormonas, vitaminas,
citocinas; la monitorizacin de drogas, deteccin de enfermedades infecciosas
en microbiologa; la deteccin de alergenos en alergia, hematologa, marcadores
tumorales e infartos de miocardio, aplicaciones forenses, inmunoescintografa.
En las tcnicas diagnsticas se emplean diversas herramientas de biologa
molecular
como
ELISA,
EIA,
citometra,
inmunohistoqumica,
inmufluorescencia. Los anticuerpos monoclonales son unas de las sustancias ms
utilizadas en los laboratorios de diagnstico.
3. Catlisis: Los anticuerpos monoclonales se han utilizado como catalizadores de
mltiples reacciones qumicas.
4. Biosensores: Los anticuerpos monoclonales acoplados a transductores
electrnicos pueden detectar tanto molculas orgnicas como inorgnicas como
la contaminacin de metales pesados en alimentos y agua, deteccin de gases
txicos, etc. Un biosensor es un instrumento analtico formado por un material
biolgico inmovilizado como una enzima, anticuerpo, clula entera, orgnulo o
combinaciones de los mismos, en ntimo contacto con un sistema transductor
adecuado que convierta la seal bioqumica en una seal elctrica cuantificable.
5. Tratamiento: Las aplicaciones teraputicas constituyen el campo ms
importante de los anticuerpos monoclonales, ya que son capaces de erradicar
ciertas infecciones y destruir clulas, incluidas las tumorales, mediante
distintos mecanismos. Por esta razn, son excelentes sustancias para el
tratamiento de enfermedades infecciosas, enfermedades autoinmunes, el
cncer o en trasplantes para evitar el rechazo. Existen varios anticuerpos
monoclonales aprobados para su uso en determinadas enfermedades.

Anticuerpos monoclonales quimricos y humanizados

Los anticuerpos monoclonales de ratn o marinos, pese a ser perfectamente
vlidos para todos los usos teraputicos, no son tiles para su empleo en seres
humanos, especialmente en terapias que requieran tratamientos prolongados, ya que el
sistema inmune los identifica como cuerpos extraos y reacciona para destruirlos, por

lo que su eficacia teraputica se ve claramente disminuida. Adems pueden presentar

posibles efectos secundarios como nefrotoxicidad, reacciones anafilcticas, etc. Por
ello se debera obtener anticuerpos monoclonales humanos.

Se han desarrollado diferentes tcnicas para ofrecer soluciones a la inicial

imposibilidad de obtener anticuerpos monoclonales enteramente humanos, entre las
que destacan la transformacin de linfocitos B humanos en cultivo mediante el virus
de Epstein-Barr, la utilizacin de ratones con inmunodeficiencia severa combinada, el
uso de ratones transgnicos, o tcnicas de ADN recombinante. Todas estas tcnicas
han presentado distintos inconvenientes que han imposibilitado el desarrollo final de
los anticuerpos monoclonales humanos.

Sin embargo, se ha obtenido una segunda generacin de anticuerpos

monoclonales, basada en la humanizacin de los anticuerpos monoclonales de ratn
mediante ingeniera gentica, evitando as el rechazo del sistema inmune al ser
introducidos en el organismo. Son los llamados anticuerpos quimricos. Un anticuerpo
quimrico es creado de tal manera que incorpora parte animal y parte humana. La
parte animal o hipervariable (un 30%) es indispensable para que el anticuerpo
reconozca la sustancia extraa (antgeno) y la parte humana (un 70%) es responsable
de que el sistema inmunitario pueda contribuir a aadir efectividad a su accin. De
este modo es posible modificar los anticuerpos monoclonales, casi de manera infinita
para dotarlos de propiedades efectoras y de reconocimiento diferentes a las
originales y minimizar la posibilidad de generar respuesta inmune frente al propio
anticuerpo teraputico.

Un anticuerpo monoclonal humanizado significa que contiene un 90% de

material humano, lo que reduce la inmunogenicidad de los anticuerpos, es decir, el
rechazo del sistema inmunitario. La humanizacin es una tcnica que se basa en la
estructura terciaria del sitio de combinacin con el antgeno, el paratopo, donde
existen unas regiones responsables de la unin al antgeno mientras que otras zonas
slo sirven de soporte estructural al paratopo. Por lo tanto las regiones estructurales
se obtienen de un anticuerpo humano mientras que las regiones responsables de la
unin al antgeno proceden del anticuerpo del ratn.

Anticuerpos monoclonales aprobados para uso teraputico

Cada vez son ms los anticuerpos monoclonales que tienen utilidad teraputica
en muchas enfermedades como el cncer, el rechazo de trasplantes de rganos,
enfermedades autoinmunes y alrgicas.
Anticuerpos monoclonales usados en la clnica
Anticuerpo
monoclonal

Abciximab

Antgeno

Mecanismo de accin

Glicoproten Inhibe la agregacin

a Gpllb/llla
plaquetaria

Indicaciones
Antitrombtico en
intervenciones coronarias y
angioplsticas

Adalimumab TNF-alfa

Inhibe el efecto
proinflamatorio de TNF-alfa

Enfermedad de Crohn,
Artritis reumatoide,
Espondilitis anquilopoytica

Alemtuzuma
CD52
b

ADCC( Antibody-dependent
cell-mediated cytotoxicity),
CDC

Leucemia linfoide crnica B

Basiliximab CD25

Prevencin del rechazo

Inhibe la activacin de
agudo en trasplante de
linfocitos T mediada por CD25
rin.

Bevacizuma
VEGF
b

Inhibe el efecto
proangiognico del VEGF

Cncer colorrectal

Cetuximab

Bloquea la unin de EGF a su

receptor en las clulas
tumorales y su proliferacin
ADCC, CDC

Cncer colorrectal

EGFR

Daclizumab CD25

Inbibe la activacin de
Prevencin del rechazo
linfocitos T mediada por CD25 agudo en trasplante de rin

Denosumab RANKL

Inhibicin de los osteoclastos

Osteoporosis en mujeres
posmenopausicas con alto
riesgo de fracturas

Edrecoloma EpCAM,
b
ADCC, CDC

Inhibe receptores de factores

de crecimiento

Cncer colorrectal

Efalizumab

Inhibe la adhesin de linfocitos

Psoriasis
T al endotelio y su activacin

CD11a

Getuzumab CD33

Efecto citotxico por dao al

ADN y apoptosis

Leucemia mieloide aguda

Ibritumoma
CD20
b

Radioterapia, ADCC, CDC,

apoptosis

Linfoma no Hodgkin

Infliximab

Inhibe el efecto
proinflamatorio de TNF-alfa

Enfermedad de Crohn,
Artritis reumatoide,
Espondilitis anquilopoytica

Inmunosupresor; anergia y
apoptosis de linfocitos T tras
su activacin

Tratamiento del rechazo

agudo en trasplante

Ofatumuma
CD20
b

Produce apoptosis

Leucemia linftica crnica,

Linfoma no Hodgkin folicular,
, artritis reumatoide y
esclerosis mltiple

Omalizumab IgE

Disminuye los niveles de IgE

en circulacin, bloquea la
unin a sus receptores

Asma de origen alrgico

TNF-alfa

Muromomab CD3

Palivizumab

VSR protena
Inmunoterapia pasiva
F

Ranibizuma
VEGF
b

Rituximab

Inhibe el efecto
proangiognico del VEGF

CD20, ADCC,
Produce apoptosis
CDC

Profilaxis enfermedad virus

sincitial respiratorio en nios
Degeneracin macular
asociada a la edad de tipo
exudativo
Linfoma no Hodgkin,
Leucemia linftica crnica

Tositumoma
CD20
b

Radioterapia, ADCC, CDC,

muerte dependiente de
lisosomas y adhesin
homotpica, no apopttica ni
autofgica

Trastuzuma
ErbB2/neu
b

Inhibe la proliferacin de
Cncer de mama
clulas tumorales mediada por
metastsico
ErbB2 y ADCC

Linfoma no Hodgkin

Biologa de los microorganismo.- BROCK 10ma edicin.

http://es.wikipedia.org/wiki/Anticuerpo_monoclonal