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ACCION DE LA LIPASA PANCREATICA BIOQUIMICA

ACCION DE LA LIPASA PANCREATICA

I.

Objetivos:
Demostrar experimentalmente la hidrolisis enzimtica de los triglicridos.

II.

Materiales y reactivos:

5 6 4 7

2
a) Materiales:
1) Pipetas 2) Vasos 3) Erlenmeyer 4) Mortero 5) Tubos de ensayo 6) Gradilla 7) Probeta

b) Reactivos:
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FENOLFTALEINA

ACEITE

ACEITE NEUTRALIZADO

PANCREATINA

AGUA DESTILADA

NaOH

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III.

Procedimientos: 1) Neutralizacin del aceite, colocar 20 ml. De aceite en un matraz,


aadir dos gotas de fenolftalena y neutralizar hasta una coloracin ligeramente rosada.

FENOLFTALEINA

ACEITE

ACEITE NEUTRALIZADO

ACCION DE LA LIPASA PANCREATICA BIOQUIMICA 2) Preparar una solucin de pancreatina (una pastilla) disuelta en 20 ml de buffer PH 8.

SOLUCIN FINAL

3) Hidrolisis de triglicridos. Seguir las indicaciones del siguiente cuadro. Soluciones / Tubos ml. de aceite neutro ml. buffer fosfato pH8 ml. de agua destilada ml. sol. pancreatina Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4

2 4 5 ----

2 4 ----5

2 ----4 5

2 4 ----5*

5*: hervir la solucin de pancreatina.

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a. Antes de agregar a la sol. De pancreatina agitar la solucin, si el color ligeramente no persiste aadir NaOH 0.01 N poco a poco hasta obtenerlo.

b. Llevar a hervir los 10 ml. De sol. De pancreatina

c. Luego de haber agregado la sol. De pancreatina. Llevar a bao mara de 37C por media hora.

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d. Luego titular el contenido de cada tubo con NaOH 0.1N hasta el color rosado usando solucin alcohlica de fenolftalena como indicador.

IV.

Resultados :

1. Muestra del tubo uno no se rotulo 2. Muestra dos se rotulo con 7 ml. 3. Muestra tres se rotulo con 6 ml. 4. Muestra cuatro se rotulo con 4 ml.

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V.

Cuestionario
Qu otras lipasas conoces?

Lipasa pancretica En los seres humanos, la lipasa pancretica es secretada por el pncreas, junto con las sales biliares en la vescula, en respuesta a las hormonas que se liberan cuando el quimo (alimento parcialmente digerido) entra en el intestino. Las sales biliares funcionan para emulsionar las grasas en gotitas ms pequeas, lo que aumenta la superficie y la eficacia de la lipasa al catalizar su digestin. Lipasa intracelular La lipasa tambin cumple funciones intracelulares en los lisosomas, organelas que ayudan a eliminar los productos de desecho de las clulas. No existe un consenso claro sobre el papel especfico de la lipasa dentro de los lisosomas que no sea el de desglosar las lipoprotenas dentro de la clula; sin embargo, los investigadores del Albert Einstein College of Medicine sugieren que esa lipasa puede funcionar tambin en la regulacin del almacenamiento intracelular de lpidos. Lipasa Gstrica es un componente del jugo gstrico segregado por las clulas principales del estmago, este da el punto final a la digestin que se lleva a cabo en el estmago, ayuda a formar el quimo y facilita su paso al intestino delgado para seguir con la digestin de tubo bajo. Lipasa Lingual es un potente catalizador de Lpidos, que los transforma en triglicridos y cidos grasos libres. Se activa cuando llega al estmago por la presencia de pH acido. Esta enzima se encuentra en la leche materna que llega a las glndulas mamarias a travs de la secrecin de ella del pncreas y el transporte a travs de la sangre.

LIPASAS E.C. 3.1.1.1


Lipasas no especficas.- hidrolizan todas las posiciones del triglicrido:


Staphilococcus aureus,Candida rugosa

Lipasa 1,3-especficas .- conducen a 2- acil monoglicridos : Rhizopus


arrhizus

Lipasa 2-especficas.- conducen a 1,3-diacilgliceridos : Geotrichum


candidum.

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explique cmo se realiza la digestin de los lpidos a nivel de los componentes del aparato digestivo. DIGESTIN DE LPIDOS
La mayor reserva de lpidos en los alimentos tanto de origen vegetal como animal est constituida por los triacilgliceroles (TG). La ruta de digestin de los TG depende en cierta manera del largo de la cadena de los cidos grasos que los constituyen. Los TG que contienen cidos grasos de cadena corta y media (no ms de 12 tomos de carbono) son hidrolizados en la boca y en el estmago a 2monoacilglicerol (2-MAG) y cidos grasos (AG) libres por accin de las enzimas denominadas lipasas sintetizadas en la lengua (lingual) y en el estmago (gstrica). Estas dos enzimas presentan mayor actividad en los nios que ingieren grandes cantidades de leche de vaca que contiene alto contenido en TG con cidos grasos de cadena corta. La lipasa lingual es importante en el recin nacido porque en ellos no est bien establecida la secrecin de lipasa pancretica. Los cidos grasos de cadena corta y media son absorbidos directamente por las clulas epiteliales intestinales. Luego entran a la sangre portal y son transportados al hgado unidos a la albmina. El resto de la grasa dietaria ingresa al intestino donde es emulsionada en pequeas partculas, que son estabilizadas por accin de compuestos anfipticos llamados sales biliares. Las sales biliares son sintetizadas en el hgado y almacenadas en la vescula biliar para luego se secretadas en el lumen del intestino. Estos compuestos actan como detergentes, unindose a las gotas lipdicas que son disgregadas por la accin peristltica del msculo intestinal. Esta grasa emulsionada es atacada por enzimas digestivas provenientes del pncreas entre las que se encuentran la lipasa y la colipasa. La lipasa pancretica es la responsable de separar los cidos grasos de todos los largos de cadena de los TG produciendo cidos grasos libres y 2-MAG. La colipasa es secretada como pro-colipasa y convertida en colipasa por accin de la tripsina. El complejo lipasa-colipasa es el que tiene actividad hidroltica. Adems se secreta bicarbonato (cuya secrecin es estimulada por la hormona intestinal secretina) que neutraliza el cido que entra al intestino desde el estmago junto con la comida parcialmente digerida,incrementando el pH a aproximadamente 6, condiciones ptimas para la accin de las enzimas digestivas del intestino. La secrecin de sales biliares y de enzimas pancreticas est estimulada por la hormona intestinal colecistoquinina. El pncreas tambin produce esterasas y fosfolipasa A2 que remueven el colesterol de los steres de colesterol y el cido graso en posicin 2 de los fosfolpidos (resultando en lisofosfolpidos) respectivamente. Los cidos grasos y 2-MAGs producidos por digestin de los TG son nuevamente emulsionados por las sales biliares junto con otros lpidos dietarios 8

ACCION DE LA LIPASA PANCREATICA BIOQUIMICA (colesterol, vitaminas liposolubles y lisofosfolpidos) y empaquetados en micelas. Las micelas viajan a travs de la capa de agua que se encuentra en la superficie de las microvellosidades de las clulas del epitelio intestinal donde los cidos grasos, 2-MAG y dems lpidos dietarios son absorbidos. Las sales biliares no son absorbidas si no que cuando llegan al leon el 95 % de las sales biliares son reabsorbidas y luego regresan al hgado va circulacin enteroheptica. Slo el 5 % de las sales biliares son excretadas en las heces bajo circunstancias normales Una vez dentro de las clulas del intestino los cidos grasos son reesterificados en el retculo endoplsmico liso con el 2-MAG para formar TG. En este proceso los cidos grasos son activados a acil-CoA de la misma forma en la cual se activan para sufrir -oxidacin. Los TG son insolubles en agua y no pueden entrar directamente en el torrente sanguneo ya que coalesceran impidiendo el flujo sanguneo por lo cual necesitan ser transportados en partculas que reciben el nombre de lipoprotenas. Las clulas intestinales empaquetan los TG junto con protenas, colesterol, vitaminas liposolubles y fosfolpidos en lipoprotenas llamadas Quilomicrones. Ms adelante se describir en profundidad el metabolismo de esta lipoprotena.

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5. cul es el destino de los cidos grasos liberados por accin de las lipasas digestivas.
los cidos grasos de cadena corta liberados en el estmago y tambin en el intestino, son absorbidos rpidamente y conducidos va vena porta al hgado. De esta forma constituyen una forma muy rpida de proveer de combustible metablico a este rgano. Cabe recordar que el hgado es un rgano mayoritariamente gluconeogentico mas que glicoltico, por lo cual requiere del aporte de cidos grasos como principal fuente energtica. Los monoglicridos junto con los cidos grasos insaturados, son emulsionados por las sales biliares y los fosfolpidos de la secrecin biliar, formndose as las micelas mixtas que favorecen su transferencia hacia las clula del epitelio intestinal para su absorcin. Se ha propuesto, aunque no demostrado en forma inequvoca, la existencia de un transporte activo de cidos grasos y de monoglicridos en las clulas del epitelio intestinal.

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6. Averige sobre la composicin de los frmacos que se utilizan como reemplazo en la actividad de la lipasa pancretica.

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REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1.- Marangoni A, Rousseau D. Engineering triacylglycerols: The role of interesterification. Trends Food Sci & Technol 1995; 6: 329-335. 2.- Carey M, Small D M, Bliss C M. Lipid digestion and absorption. Ann Rev Physiol 1983;45: 651-677. 3.- Bracco U. Effect of triglyceride structure on fat absorption. Am. J Clin Nutr 1994; 60(suppl): 1002S-1009S. 4.- bioqumica de Harper.

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