CROMATOGRAFA

INTRODUCCIN:

PROCEDIMIENTO:

Los bilogos, mdicos y qumicos necesitan con frecuencia separar los componentes de una mezcla como paso previa a su identificacin. La cromatografa es una tcnica de separacin de sustancias que se basa en las diferentes velocidades con que se mueve cada una de ellas a travs de un medio poroso arrastradas por un disolvente en movimiento. Los mtodos colorimtricos de determinacin de aminocidos se basan en la reaccin especfica de stos con determinados compuestos, dando derivados coloreados. La formacin de color se toma como resultado positivo e indica su presencia, mientras que el no desarrollo de color es indicativo de que no est presente. Para cada prueba se utiliza un control negativo, tambin denominado blanco de la reaccin, en el que al reactivo se aade agua destilada o solvente adecuado!. "unque en la presente prctica se llevar a cabo la determinacin cualitativa de aminocidos ausencia o presencia de dic#os compuestos!, las reacciones coloreadas pueden tambin ser utilizadas para la determinacin cuantitativa de dic#as biomoleculas. $ay una amplia gama de mtodos colorimtricos que permiten la determinacin cuali% y cuantitativa de aminocidos. "unque son mtodos muy generales, algunos de ellos permiten discriminar entre diferentes tipos de estos compuestos. "s, #ay mtodos de determinacin de aminocidos con el grupo amino libre mtodo de la nin#idrina!. &n este mtodo, el aminocido reacciona con otro compuesto formando derivados coloreados que se pueden determinar cuantitativamente por espectroscopia visible.

" iniciar la prctica de laboratorio, se e'plic las diferentes precauciones y cuidados que se debe tener con los diferentes reactivos que se utilizan en la prctica. (s tarde teniendo en cuenta, estas precauciones se empez a realizar el monta)e para cromatografa el cual consiste en colocar una tira de papel para cromatografa, previamente marcada y con la sustancia de aminocidos que se va a analizar dentro de un probeta en la cual se encuentra la fase mvil, es decir una mezcla #omognea de butanol, cido actico y agua. Luego al tener listo el monta)e se espera apro'imadamente unas dos #oras y media a que la fase mvil ascienda sobre el papel y arrastre los diferentes aminocidos que se encuentran presentes. Para que despus se puedan tinturar con el reactivo de nin#idrina. "l finalizar la prctica se calcula la referencia de frente *f! de cada coloracin encontrada y se compara con una tabla en la cual se #alla diferentes aminocidos y sus *f que son aceptados por la comunidad. OBJETIVOS: "prender a realizar un monta)e para cromatografa. +dentificar los diferentes aminocidos presentes en una solucin de +sopropanol. RESULTADOS: "l calcular los *f de las manc#as de coloracin encontradas en la tira de papel para cromatografa se obtuvo,

*eferencia de frente,
Rf = D1 D2
34< 3istancia recorrida por la sustancia 36< 3istancia recorrida por la fase mvil

-entro de la manc#a,
Centro =
Ls< Lmite superior de la manc#a Ls Li Li < Lmite inferior de la manc#a 2

Mancha 1: Lmite superior de la manc#a, .,/ cm Lmite inferior de la manc#a, 0,1 cm -entro de la manc#a, 2.0 cm 34, 0.50 cm 36, 41 cm
5.85 Rf = = 0.45 13

lquidos que depende de su tensin superficial la cual a su vez, depende de la co#esin o fuerza intermolecular del lquido!, que le confiere la capacidad de subir o ba)ar por un tubo capilar. -uando un lquido sube por un tubo capilar, es debido a que la fuerza intermolecular o co#esin intermolecular! entre sus molculas es menor a la ad#esin del lquido con el material del tubo es decir, es un lquido que mo)a!. &l lquido sigue subiendo #asta que la tensin superficial es equilibrada por el peso del lquido que llena el tubo. 3. Las aplicaciones que tiene la cromatografa para nuestra carrera son, 3eteccin de burbu)as -oncentracin de protenas p$ y conductividad 3eteccin de pigmentos

Mancha 2: Lmite superior de la manc#a, 42 cm Lmite inferior de la manc#a, 7,7 cm -entro de la manc#a, 4.,4 cm 34, 5.5 cm 36, 41 cm
Rf = 8 .8 = 0.68 13

. :no de los errores que se pudo cometer a la #ora de realizar la prctica fue el mal mane)o del papel de cromatografa como insertarlo mal en la probeta, o contaminarlo con nuestros dedos cuando se lo manipulo. !. La nin#idrina #idrato de triceto#idrindeno! reacciona con aminocidos que tengan el grupo amino libre, dando lugar a la formacin de amoniaco y an#drido carbnico, con reduccin del reactivo nin#idrina! a #idrindantina La #idrindantina reacciona a su vez con el amoniaco y otra molcula de nin#idrina para dar un compuesto de adicin doble que presenta una coloracin azul%p;rpura &l derivado coloreado presenta m'imo de absorcin en torno a 072 nm. La reaccin se lleva a cabo en caliente y a valores de p$ comprendidos entre / y 5. La tcnica es muy sensible, por lo que es ideal para detectar concentraciones ba)as de aminocidos, utilizndose para revelar su presencia en

CONCLUSIONES: 8eniendo en cuenta la tabla de *f para aminocidos muy probablemente la muestra que se e'amin, es decir aminocidos en +sopropanol tendra dos aminocidos "lanina y 9alina. CUESTIONARIO: 1. Los aminocidos que se detectaron en la muestra fueron dos, "lanina y 9alina 2. &l principio fsico que usa el papel de cromatografa es la absorcin por capilaridad. &s una propiedad de los

cromatogramas y fracciones procedentes de otras tcnicas de separacin.