PRACTICA13: PRODUCCION DE ANTIBIOTICOS

OBJETIVOS
Aislar, seleccionar microorganismos productores de antibiticos en muestras de suelo. Determinar el espectro de actividad microbiana y la produccin de antibiticos.

GENERALIDADES
S.A Waksman, menciona que el suelo contiene una flora profusa y mezclada que vara con el clima, la vegetacin, el contenido en minerales y otros factores, y es a la vez un medio en el que la formacin de antibiticos podra tener importancia en la competicin por los alimentos. Un sondeo del suelo consiste en obtener muestras de orgenes tan diversos como sea posible, cultivarlas en placas, subcultivar todas las colonias de grmenes prometedores, tales como los actinomicetos y examinar cada una de ella en busca de actividad bacteriana. Alternativamente, el cultivo primario en placa puede inocularse mediante pulverizacin o por formacin de una capa de agar en bacterias apropiadas, cuyo crecimiento puede verse inhibido en una zona que rodea a algunas colonias originales. Esto en slo un principio: muchos miles de colonias examinadas de esta forma producen un antibitico ya conocido o intil en virtud de su toxicidad. Entonces se puede definir a los antibiticos como ya se adelant, los antibiticos en un principio involucraban productos del metabolismo de hongos y bacterias, capaces de inhibir en pequeas dosis los procesos vitales de ciertos microorganismos, destruyendo o impidiendo su desarrollo y reproduccin. Los antibiticos naturales son productos del metabolismo secundario de ciertos microorganismos provenientes del suelo, como los hongos del gnero Penicillium o las bacterias del gnero Streptomyces. El metabolismo secundario comienza cuando el microorganismo detiene su crecimiento por alguna razn (por ejemplo, por agotamiento de nutrientes), y los intermediarios metablicos o productos finales comienzan a acumularse dentro de la clula. Estos intermediarios y productos finales pueden resultar txicos, y por eso la clula los convierte en productos menos txicos, como los antibiticos. La produccin y secrecin de las sustancias antibiticas no afectan al microorganismo productor, y le ofrecen una ventaja desde el punto de vista de la supervivencia ya que le permiten colonizar ambientes con ms eficacia que sus competidores.

Las fuentes de los antibiticos en el ambiente A pesar de todos los beneficios de tener una poblacin saludable de microbios, aadimos al ambiente ms de 1 milln de libras (453.600 Kg.) de antibiticos y agentes antibacteriales cada semana. Hay varias rutas a travs de las cuales los agentes anti-microbianos entran al ambiente. Varios estudios han mostrado que la introduccin por estas rutas ha cambiado la susceptibilidad de los microbios en esos ambientes y/o ha cambiado a los microbios predominantes.

Aguas Servidas. No todos los antibiticos que tomamos son procesados por nuestro cuerpo. Algunos de ellos son expulsados como desecho y vienen a parar en las plantas de tratamiento de agua. Un estudio mostr que el 46.4% de las bacterias aisladas del material de desecho producido despus del tratamiento del agua de una de estas plantas posean resistencia a mltiples antibiticos. Se ha demostrado que las aguas servidas de los hospitales y de las fbricas de farmacuticos colaboran en la aparicin de la resistencia a antibiticos en las plantas de tratamiento. Los ros contaminados con efluentes urbanos y con aguas que se escurren de las reas agrcolas poseen ms poblaciones de bacterias resistentes a los antibiticos que las reas ro arriba de las fuentes de la contaminacin. La resistencia a los antibiticos en los ros es seleccionada indirectamente por el aumento en los desechos industriales que contienen metales pesados. Desechos mdicos. La prescripcin de antibiticos en las instituciones mdicas inevitablemente produce desechos. Las descargas de los hospitales han mostrado un aumento en las poblaciones de bacterias resistentes a ciertos antibiticos tales como la oxitetraciclina. La Produccin. La venta de antibiticos en el mundo es aproximadamente de $8,000 millones al ao. Cada ao se producen 50 millones de libras (22,68 millones de Kg.), de los cuales el 50% est prescrito para el uso humano. Las descargas de agua de desecho de las plantas farmacuticas han sido asociadas con un aumento en la resistencia a antibiticos (simple o mltiple) en organismos indicadores. Productos caseros. En los ltimos 5 aos, se han introducido a mercado ms de 700 productos antibacteriales para el uso domstico. stos incluyes medias deportivas, pastas de dientes, plsticos para la cocina, cemento y pinturas. Los ingredientes antibacteriales ms comunes en estos productos son el triclosn, compuestos amoniacales cuaternarios, alcohol y blanqueadores.

Uso en los cultivos. Aproximadamente unos 300,000 libras (136.080 Kg.) de antibiticos son usados en las plantas de produccin cada ao. Estos antibiticos son atomizados o fumigados en cultivos de alto valor, como por ejemplo, en rboles frutales, para prevenir infecciones bacterianas. Este uso puede seleccionar la resistencia bacteriana en nuestros cultivos. No todo lo que se fumiga le llega a la fruta. La mayor parte de los antibiticos terminan en el suelo y eventualmente llegan a las aguas subterrneas. Produccin animal. Los antibiticos son aadidos comnmente a niveles subteraputicos en el alimento animal con el fin de promover el crecimiento. Tambin son aadidos a las aguas en acuicultura. Cada ao, los animales que consumimos reciben unos 24 millones de libras (casi 11 millones de Kg.) de antibiticos. La resistencia a los antibiticos en nuestro alimento se ha convertido en una preocupacin a nivel de salud debido a esta prctica. Las bacterias resistentes a las drogas tales como Salmonella typhimurium, Escherichia coli y Enterococcus han aumentado clnicamente, a medida que aumenta el uso de antibiticos en los animales. Tambin es posible que nuestra microbiota entrica normal est ganando resistencia a los antibiticos debido a la exposicin a alimentos provenientes de animales tratados. Una teora popular es que las variedades de la bacteria Enterococcus (VRE) (causante de infecciones post-quirrgicas) resistentes a la vancomicina han aumentado en Europa debido al uso del antibitico avoparcina como un promotor del crecimiento en animales. Sin embargo, por lo menos un estudio ha demostrado que el VRE ocurre raramente en la carne molida de res y de cerdo. Se ha demostrado que el uso de la oxitetraciclina en la acuicultura causa un cambio estacional en las especies de bacteria hacia el grupo de las Enterobacteriaceae, adems de estar asociado a un aumento en la resistencia a los antibiticos

CLASIFICASION DE LOS ANTIBITICOS. Antibiticos que actan en la pared bacteriana. Ejemplo: penicilina. La pared bacteriana protege a la clula contra los cambios osmticos y contiene elementos patgenos caractersticos de cada especie. Basamento qumico de la pared (micropeptidos) es una unin tridimensional de pptidos acetil-glucosamino y acetil-muramico. Los Gram (+) 40-90 % y los Gram (-) 4-10 % de muramil pptidos. Un antibitico de este tipo impide la unin de ciertas estructuras qumicas del mucopeptido. Como consecuencia, la clula bacteriana, sin pared no resiste los cambios osmticos se hincha y estalla. Antibiticos que actan sobre la membrana celular. La membrana celular se ubica debajo de la pared celular y es de gran importancia. Este tipo de antibiticos puede alterar la permeabilidad y provocan salinidad en el interior de la clula. Antibiticos que interfieren en la sntesis proteica. Ejemplo: Tetraciclinas. La proteinosntesis es de vital importancia en la vida de la bacteria y los diferentes pasos del mecanismo de obtencin pueden ser infectados por los antibiticos. Estos son bacteriostticos y bactericidas. Sin produccin o con produccin alterada mueren. Antibiticos que impiden la formacin de ARN. Son los que interfieren a la polimerasa y la inhabilitan.

MATERIALES
Muestras de suelo. Agar comn fabricado a 50c, incubadora. Placas petri.pipetas de 1ml Balanza analtica. Discos de penicilina de diferentes concentraciones.

PROCEDIMIENTO
Aislamiento de microorganismos a partir del suelo 1. 2. 3. 4. Preparar una suspensin al10% de suelo en agua estril . Mantener en agitacin en agua estril por 60 minutos. Preparar diluciones sucesivas de la dilucin de 10-1,10-2,10-3,10-4 . Sembrar .1ml de cada dilucin en una placa petri con agar nutritivo y con ayuda de una esptula extenderlo por toda la placa 5. Incubar a 30 C durante 3 das.

Seleccin e identificacin de microorganismos productores de antibiticos 1. Colocar en 5 placas de petri estriles 1 ml de la suspensin sensible y aadir 15ml de agar comn. 2. Mesclar con los movimientos adelanta, atrs ,izquierda , derecha hasta que se solidifique. 3. Sobre las superficies de la placa sembrar a partir de las colonias aisladas 8 estras procurando que cada estra por corresponda a colonias de morfologa distinta. 4. Incubar las placas a 30 c durante 48 horas, observar los halos de inhibicin sobre los organismos sensibles de las colonias aisladas a partir de suelo productoras de antibitico.

-Aislar el microorganismo productor.

CONCLUSIONES
o

El aislamiento de microorganismos a partir del suelo es relativamente fcil ya este es muy rico en contener este tipo de microorganismos. En la prctica se pudo observar los halos de inhibicin sobre los microorganismos sensibles de las colonias aisladas a partir del suelo productoras de antibiticos.

ANEXOS

AO LA INTEGRACION NACIONAL EL RECONOCIMIENTO DE NUESTRA DIVERSIDAD

Tema: PRODUCCIN DE ANTIBIOTICOS

ASIGNATURA: BIOTECNOLOGIA CATEDRTIC: Blga. MARIA CUSTODIO VILLANUEVA ALUMNA

: LAZARO MUCHA MARISOL

SEMESTRE : TERCERO

HUANCAYO PER 2012