MEMBRANA CELULAR

Karina Cortes Vargas 402

La membrana plasmtica es una estructura laminar formada por fosfolpidos (con cabezahidroflica y cola hidrofbica) y protenas que engloban a las clulas, define sus lmites y contribuye a mantener el equilibrio entre el interior (medio intracelular) y el exterior (medio extracelular) de stas. Adems, se asemeja a las membranas que delimitan los organelos de clulas eucariotas. Tambin delimita la clula y le da forma.

FORMA Y TAMAO DE LA CLULA La mayor parte de las clulas tienen un tamao comprendido entre 12 y 60 micras (1 micra = 10 m). Existen, sin embargo, clulas -6 de tamao inferior como las clulas bacterianas y clulas de tamao superior, e incluso macroscpico, como por ejemplo los ovocitos de las aves. La forma de la clula es muy variada; entre los organismos unicelulares existen una gran diversidad de formas que dependen de las adaptaciones a sus particulares condiciones de vida e incluso algunos carecen de forma fija (amebas); en el caso de los organismos pluricelulares existe tambin una gran diversidad de formas celulares que dependen de la presin que ejercen las clulas adyacentes y, sobre todo, de la funcin en que se han especializado. FUNCIONES DE LA MEMBRANA CITOPLASMICA La membrana citoplsmica de los procariotas es una notable estructura multifuncional (como uno podra esperar de la constatacin del gran nmero de tipos de protenas), siendo el sitio donde se producen muchos procesos metablicos complejos, en un grado desconocido en el resto del mundo vivo. Las principales funciones de la membrana procaritica son: Barrera osmtica (que mantiene constante el medio interno), impidiendo el paso libre de sales y de compuestos orgnicos polares. Es el lmite metablicamente activo de la clula: establece la frontera entre el protoplasto y el medio externo, impidiendo la prdida de metabolitos y macromolculas del protoplasto. Permite selectivamente el paso de sustancias entre el exterior y el interior (y viceversa).

 Interviene, adems, en procesos bioenergticos (fotosntesis, respiracin). Participa en la biosntesis de componentes de membrana, de pared y de cpsulas, en la secrecin de protenas. Protenas de Membrana Las protenas de membrana representan su principal componente funcional, desempeando un papel fundamental en la regulacin y control de su permeabilidad. Entre las protenas de membrana, podemos distinguir tambin polipptidos que poseen funcin enzimtica, receptores para diversas seales (como las hormonales), que producen la adhesin celular y protenas con una variedad enorme de funciones que iremos estudiando a lo largo de este espacio curricular. Hidratos de carbono de la membrana Los glcidos de la membrana se presentan en forma de oligosacridos o, con menor frecuencia, como monosacridos. En todos los casos se encuentran unidos en forma covalente a lpidos, constituyendo glucolpidos, o a protenas, constituyendo las famosas glicoprotenas. La ubicacin de los glcidos en las membranas plasmticas se realiza, en forma casi exclusiva, en la capa superficial o externa de la bicapa fosfolipdica. Permeabilidad de la membrana La permeabilidad selectiva de las membranas determina qu tipo de sustancias pueden entrar y salir de la clula. El ingreso de sustancias necesarias, el pasaje de agua y la salida de los productos de desecho, se vern posibilitados y regulados por medio de la membrana plasmtica. TRANSPORTE DE NUTRIENTES Lo primero que tiene que hacer un microorganismo a la hora de su nutricin es captar los nutrientes que necesite desde el medio exterior. Debido a que la bicapa lipdica acta como barrera que impide el paso de la mayor parte de las sustancias, esto significa que deben existir mecanismos especficos para lograr la entrada de los nutrientes. Adems, teniendo en cuenta que las bacterias suelen vivir en medios diluidos, deben realizar un trabajo para trasladar muchos de esos nutrientes en contra del gradiente de concentracin. Tradicionalmente se viene considerando tres mtodos principales de transporte de sustancias a travs de la membrana:

 Transporte pasivo inespecfico (= difusin simple). Transporte pasivo especifico (= difusin facilitada). Transporte activo. TRANSPORTE PASIVO INESPECFICO O DIFUSIN SIMPLE Este transporte consiste en la difusin pasiva de ciertas sustancias para las que la membrana es impermeable, debido a la diferencia de concentracin (DC) a ambos lados de dicha membrana (la sustancia tiene mayor concentracin fuera que dentro de la clula). Aparte de esta diferencia de concentracin, en la difusin pasiva influyen: La constante de permeabilidad (P), es decir, el grado de permeabilidad de la membrana a la sustancia en cuestin. El rea o superficie total (A) a travs de la que se produce el transporte. Las membranas citoplsmicas son impermeables en s mismas a la mayor parte de las molculas. Slo se da en el caso de O 2, CO2, NH3, agua y otras pequeas sustancias polares no ionizadas. La difusin simple se produce por el paso de estas sustancias a travs de poros inespecficos de la membrana citoplsmica. TRANSPORTE PASIVO ESPECFICO O DIFUSIN FACILITADA Es un proceso que permite el paso de compuestos por difusin a travs de transportadores estereoespecficos y (al igual que en el caso anterior) sobre la base de un gradiente de concentracin (en la direccin termodinmicamente favorable). El transportador suele ser una protena integral de membrana (permeasa o facilitador), cuya conformacin determina un canal interior, y por el cual un determinado sustrato puede alcanzar el interior, sin gasto de energa. Se piensa que cuando el soluto se une a la parte de la permeasa que da al exterior, esta protena sufre un cambio conformacional que libera la molcula en el interior. Como al entrar la molcula, enseguida entra en el metabolismo y desaparece como tal, esto basta para mantener el gradiente de concentracin que permite esta difusin. Aunque este sistema de transporte es muy comn en eucariotas, es muy raro encontrarlo en bacterias. La explicacin evolutiva es que los procariotas suelen vivir en ambientes con pocas concentraciones de nutrientes, y por lo tanto no es frecuente que se den gradientes adecuados. Una de las pocas excepciones

la constituye el glicerol, que es transportado por difusin facilitada en una amplia gama de bacterias, tanto Gram-positivas como Gram-negativas. Conforme el glicerol entra, es rpidamente convertido a glicerol-fosfato; por lo tanto, la concentracin interna de glicerol como tal es prcticamente nula, lo que facilita esta difusin incluso a bajas concentraciones exteriores de esta sustancia. En Zymomonas existe un facilitador de membrana que transporta glucosa.

TRANSPORTE ACTIVO Consiste en el transporte de sustancias en contra de un gradiente de concentracin, lo que requiere un gasto energtico. En la mayor parte de los casos este transporte activo (que supone un trabajo osmtico) se realiza a expensas de un gradiente de H+ (potencial electroqumico de protones) previamente creado a ambos lados d la membrana, por procesos de respiracin y fotosntesis; por hidrlisis de ATP. Los sistemas de transporte activo son los ms abundantes entre las bacterias, y se han seleccionado evolutivamente debido a que en sus medios naturales la mayora de los procariotas se encuentran de forma permanente o transitoria con una baja concentracin de nutrientes.

Los sistemas de transporte activo estn basados en permeasas especficas e inducibles. El modo en que se acopla la energa metablica con el transporte del soluto an no est dilucidado, pero en general se maneja la hiptesis de que las permeasas, una vez captado el sustrato con gran afinidad, experimentan un cambio conformacional dependiente de energa que les hace perder dicha afinidad, lo que supone la liberacin de la sustancia al interior celular. Estudiaremos los siguientes tipos de transporte activo: Transporte activo ligado a simporte de protones. Transporte activo ligado a simporte de iones Na+. Transporte activo dirigido por ATP. Transporte acoplado a translocacin de grupos.

TRANSPORTE ACTIVO LIGADO A SIMPORTE DE PROTONES Como se recordar, el simporte se puede definir como el transporte simultneo de dos sustratos en la misma direccin, por un mismo transportador sencillo. En el caso del transporte activo ligado a simporte de protones, lo que ocurre es que uno de los sustratos (H+) ha creado previamente un gradiente de concentracin, cuya disipacin es aprovechada por el otro sustrato para entrar con l. Este otro sustrato puede ser: Una molcula de carga negativa: en este caso, su simporte ligado a protones tiende a disipar slo el gradiente de concentracin. Ejemplos: transporte de iones fosfato, de glutamato, etc. Una molcula neutra: en este caso, su simporte tiende a disipar no slo el gradiente de concentracin, sino tambin el gradiente elctrico. Ejemplo: en Escherichia coli, la lactosa usa una -galactsido-permeasa, que es una de las permeasas bacterianas ms intensamente estudiadas. Por otro lado, ciertas molculas catinicas (iones K+, lisina), son transportadas directamente a travs de permeasas, en ausencia de simporte de protones. TRANSPORTE ACTIVO LIGADO A SIMPORTE DE IONES SODIO Se puede considerar una versin modificada del anterior: algunas sustancias no son transportadas activamente de forma directa por el potencial electroqumico de protones, sino indirectamente, a travs de un gradiente de Na+ que a su vez se origina a expensas de dicha fuerza protn-motriz (fpm).

El sustrato entra por una permeasa, junto con iones Na +, pero a su vez este sodio se recicla por un sistema de antiporte, a expensas de la disipacin del potencial de protones. Ejemplo: el azcar melibiosa, en el caso de la enterobacteria E. coli. Estos dos tipos de transporte activo ligados a simporte quedan inhibidos si tratamos las clulas con algn agente ionforo (p. ej., el antibitico valinomicina), que destruye el potencial electroqumico de protones. El transporte activo ligado a simporte de iones (H+, Na+) resulta muy econmico, ya que slo se gasta un protn por cada molcula transportada, mientras que por cada ATP sintetizado se suelen gastar 3 protones que se disipan en las ATPasas. Las permeasas que realizan este transporte suelen ser protenas integrales de membrana provistas de unos 12 segmentos transmembranosos en configuracin de a-hlice. TRANSPORTE ACTIVO DIRIGIDO POR ATP El tipo paradigmtico de este tipo de transporte se denomina de transportadores ABC o ATPasas de trfico, y se conocen muchos ejemplos en eubacterias y arqueas. Vamos a describir el caso de un sistema ABC en enterobacterias (como E. coli). Se trata de un sistema de varios componentes, en el que existen protenas periplsmicas que captan el sustrato con gran afinidad, y lo llevan hasta unas protenas de membrana, las cuales acoplan el paso de dicho sustrato hasta el citoplasma (sin alteralo qumicamente) con la hidrlisis de ATP. La denominacin de "transportadores ABC" se debe a que en todos ellos existe una o dos protenas perifricas de membrana citoplsmica que poseen un dominio (de unos 200 aminocidos) conservado evolutivamente, denominado "cassette de unin a ATP" (las iniciales de ATP-binding cassette generan la sigla "ABC"). Al parecer este dominio ABC conservado es muy antiguo, y parece que ya exista antes de la divergencia evolutiva entre procariotas y eucariotas. Existen muchos ejemplos de protenas ABC, tanto en procariotas como eucariotas (de hecho constituyen la mayor familia de protenas filogenticamente relacionadas de todo el mundo vivo). Los primeros ejemplos de esta gran familia estaban implicados en transportar sustancias a uno u otro lado de la membrana. En otro tema veremos ejemplos de transportadores ABC que funcionan "al revs" de los de este tema: son "exportadores" de protenas recin sintetizadas que deben insertarse en las envueltas bacterianas o ser excretadas al medio. Pero se ha descubierto que la gran familia de protenas ABC est implicada en otros procesos (regulacin gentica, reparacin de ADN, patogenicidad, etc.). Elementos de este tipo de sistema:

 Porinas u otras protenas de membrana externa para lograr la difusin del sustrato desde el medio hasta el espacio periplsmico. Protena(s) solubles de espacio periplsmico que se unen al sustrato con gran afinidad. Un heterodmero formado por dos protenas integrales de membrana (cada una de ellas posee 5 o 6 trechos en a-hlice que atraviesan la membrana citoplsmica), que son la permeasa propiamente dicha del sistema (el canal por donde pasa el sustrato). Dos protenas perifricas de membrana citoplsmica, adosadas al lado citoplsmico, que incluyen el mdulo conservado ABC que acopla la hidrlisis de ATP con el transporte unidireccional del sustrato a travs de la membrana. Modelo del mecanismo de este sistema: 1. El sustrato exgeno normalmente entra al periplasma a travs de algn canal inespecfico o porina de membrana externa (por ejemplo, en enterobacterias se pueden usar las porinas generales conocidas como OmpF y OmpC). La protena periplsmica especfica, antes de su unin al sustrato tiene una determinada configuracin (denominada abierta), con dos grandes lbulos globulares unidos formando un ngulo (la forma recuerda una almeja a medio abrir). Cuando el sustrato pasa al periplasma, la correspondiente protena de unin periplsmica se une a l con gran afinidad (0.1-1 mM), y al unirse cambia de conformacin. En esta configuracin, llamada cerrada, el sustrato se encuentra enterrado entre los dos lbulos de la protena (almeja cerrada). Mientras tanto, el dmero de protenas integrales de membrana (antes de la unin con la protena periplsmica) se encuentra en un estado energizado pero incapaz de transportar sustrato. En esta situacin, puede unirse (por la parte que da al periplasma) al complejo formado por la protena periplsmica (en configuracin cerrada) ligada al sustrato. Al hacer esto, el heterodmero de membrana cambia de conformacin, de modo que ahora muestra mayor afinidad hacia la protena periplsmica y se abre su canal para dejar entrar el sustrato. Entonces, el complejo de membrana alcanza su estado de mnima energa, y con ello descarga el sustrato en el citoplasma y se logra la separacin de la protena periplsmica (que vuelve a su configuracin abierta).

2.

3.

4.

5.

Finalmente, la hidrlisis de ATP catalizada por las protenas perifricas ABC (adosadas a la membrana y asociadas a las protenas integrales) suministra la energa para que el heterodmero de membrana vuelva a su estado energizado inicial, preparado as para otro ciclo de transporte.

El sistema ABC de bacterias Gram-negativas, queda puesto de manifiesto cuando lo impedimos por algn procedimiento que altere o elimine la membrana externa (conversin a esferoplastos): Por ejemplo: tratemos E. coli con el quelante EDTA en una solucin tamponada isotnica (con un 20% de sacarosa). Centrifugamos y el sedimento de clulas lo resuspendemos en una solucin de MgCl2 en fro (0C). El resultado es que las protenas del periplasma escapan al medio externo. Esto es un caso de tratamiento por choque osmtico que origina prdida de contenidos del periplasma. Se comprueba que ciertos sistemas de transporte quedan inutilizados, debido a que requieren para su funcionamiento, amn de protenas de membrana citoplsmica, otras especficas del espacio periplsmico. Por contra, este sistema no se ve afectado por los agentes ionforos. Por esta razn, a este sistema en Gram-negativas se le ha llamado durante mucho tiempo transporte activo sensible a choque osmtico. Los sistemas ABC de bacterias Gram-positivas estn menos estudiados, pero en general se parecen a los de Gram-negativas, salvo que carecen del transportador libre periplsmico. En su lugar existe una protena con funciones equivalentes (captar el nutriente del exterior), pero que est anclada al lado externo de la

membrana citoplsmica, cerca del heterodmero integral de membrana (la unin es mediante su cistena N-terminal, que se une a un fosfolpido).

TRANSPORTE ACOPLADO A TRANSLOCACION DE GRUPOS Es un sistema de transporte que acopla la entrada del sustrato con su modificacin qumica por unin covalente con un grupo qumico. Estrictamente hablando, no es un transporte activo, porque no funciona en contra de un gradiente de concentracin, pero se considera de hecho como activo, ya que la concentracin del sustrato modificado dentro de la clula supera con creces a la del sustrato sin modificar en el exterior. Este sistema supone un ahorro de energa metablica: aunque en el transporte se gasta un enlace rico en energa, el sustrato queda modificado en su paso a travs de la membrana en la forma que la bacteria emplea como primer intermediario de su ruta metablica. Es decir, con un solo proceso se cumplen dos funciones distintas: transporte y preparacin qumica para la ruta, que de todas formas habra que realizar. No es de extraar que este tipo de transporte haya sido seleccionado frecuentemente en la evolucin bacteriana, y que hoy lo encontremos en muchos procariotas, especialmente en bacterias anaerobias o aerobias facultativas que recurren a fermentaciones (recordar que las fermentaciones tienen un rendimiento energtico menor que los procesos respiratorios; por lo tanto, es lgico que se seleccionen mecanismos ahorradores como el descrito). El caso mejor estudiado de esta clase de transporte lo constituye el llamado sistema de fosfotransferasa de azcares (segn las casi inevitables iniciales inglesas: PTS). En E. coli el sistema PTS permite el transporte de glucosa, manosa, fructosa y los polioles sorbitol y manitol. Consta de varios componentes que funcionan como una cadena de transportadores del grupo fosfato de alta energa del fosfoenolpirvico (PEP) hasta el azcar a transportar en cuestin. Veamos cmo funciona el sistema: 1. Por un lado, el azcar se une al enzima EIIC especfico, pero ste por s mismo no puede liberar al azcar sin modificar en el interior celular.

2.

Mientras tanto, la EI cataliza (en presencia de Mg++) la transferencia del fosfato de alta energa del PEP a la HPr. La HPr fosforilada (HPr-P) transfiere el fosfato al enzima IIA especfico del azcar [p. ej., la glucosa (EIIAGlc ) o el manitol (EIIAMtl)]. La EIIA-P rpidamente, y en presencia de Mg++, transfiere el fosfato a la enzima-IIB especfica con la que se asocia (p. ej., EIIBGlc), que a su vez fosforila el azcar (en el caso de la glucosa convirtindola en glucosa-6-P): en este momento la EIIC pierde su afinidad por el azcar modificado, que de esta forma entra en el citoplasma, preparado ya para actuar como sustrato de la primera reaccin del catabolismo de este azcar.

3.

4.

En bacterias es frecuente encontrar varios sistemas de transporte para un mismo nutriente (p. ej., Escherichia coli posee cinco sistemas para transportar la galactosa y tres sistemas para algunos de los aminocidos. Los diversos sistemas se diferencian en cuanto a su requerimiento energtico, su afinidad, su regulacin, etc. Lgicamente, la evolucin ha debido seleccionar esta redundancia de sistemas de transporte con objeto de permitir que el microorganismo sobreviva bajo diversas circunstancias ambientales. TRANSPORTE DE HIERRO El hierro es un cofactor de muchas enzimas y citocromos, por lo que las bacterias necesitan captarlo. La captacin de hierro se complica porque el in frrico (Fe3+) es muy insoluble. Adems, las bacterias que viven dentro de animales superiores tienen un problema: en los fluidos y tejidos de sus patrones el hierro libre es muy poco abundante (el hierro suele estar acomplejado con protenas), por lo que se vuelve vital aprovisionarse con este elemento de alguna manera. Muchas bacterias secretan unas molculas de bajo peso molecular llamadas en general siderforos, que son capaces de formar quelatos (complejos) con el hierro frrico. Por ejemplo, Escherichia coli secreta un siderforo llamado enterobactina. Cuando la enterobactina se une al hierro, forma un complejo octadrico, que luego se engarza con un receptor especfico de la membrana externa, tras lo que el hierro se libera al espacio periplsmico, desde donde entra al citoplasma por medio de una protena de unin periplsmica acoplada a un sistema ABC similar al visto ms arriba.