Isolation and screening of Biofilm forming bacteria for optimation of biofilm production by addition of sugar and antibiotics variation

and its concentration in Nile tilapia oral vaccines development (Oreochromis niloticus Lac)
Student: Fajar Mutsika Final project (2009), Degree program in Microbiology, School of Life Sciences andTechnologyITB, email: fajar.mustika@gmail.com Advisor: DR. Maelita R. Moeis, School of Life Sciences and Technology ITB, email: Maelita@sith.itb.ac.id Degree: Degree of Science (S.Si), Conferred April 2009

Abstract Biofilm is a novel antigen in vaccine production. Biofilms consist of glycocalix materials that remain stable even in the gastrointestinal system of fish. The purpose of this research was to develop oral vaccines for Nile tilapia vaccination from isolated bacterial pathogen. This experiment began with pathogen isolation at wounds, blood, gills and intestines of bacterial infected fish. The bacterial isolates were screened to identify biofilm-forming bacteria with high production and consistency of the biofilm properties, by agitated and static attachment assay, as well as the advanced pathogenicity level by bath challenge and hemolysis test. The selected isolate was identified as Aeromonas sp. Paddy straw was used as adhesion surface by bacteria in biofilm forming process. Increase in the dry weight of straw indicated the increase of biofilm formation on straw. Optimation of biofilm production was divided into two major steps of optimation. The first optimation was to determine incubation period and amount of straw combination for the optimum biofilm formation. By administration 0.5%, 1%, 1.5% and 2% straw and 36h, 48h, 60h, 72h of tested incubation time, 60h and 1.5% straw combination gave the most efficient result, with an increasing the average straw dry weight of 13.53%. The second optimation was done to see th effect of addition of glucose, lactose and sucrose at 0.1; 0.25; 0.5; 0.75 and 1 g/l, and addition of ampicillin and erythromycin at 62.5; 125; 250 and 500 g/ml, toward dry weight increase of straw 1010 CFU/ml inocula. Pretest for antibiotics addition optimation was done to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) of each

antibiotics. MIC value at 1010 CFU/ml Aeromonas sp. was 500 g/ml for Streptomycin, Ampicillin >500 g/ml and <125g/ml for Erythromycin. From this optimation showed that sugar and antibiotics addition at the above concentrations, resulted in an increase in straw dry weight significantly (P<0.05). The Ampicillin addition resulted in the highest increase of straw dry weight (40.69%). Key words: Oral vaccines, Biofilms, Aeromonas sp., Oreochromis niloticus

Isolasi Dan Skrining Bakteri Patogen Penghasil Biofilm Untuk Optimasi Produksi Biofilm Melalui Penambahan Variasi Jenis Dan Konsentrasi Gula Serta Antibiotik Dalam Pengembangan Vaksin Oral Ikan Nila (Oreochromis Niloticus. Lac)
Mahasiswa: Fajar Mustika Skripsi (2009), Program Studi Mikrobiologi SITH, email: fajar.mustika@gmail.com Pembimbing: DR. Maelita R.Moeis, email maelita@sith.itb.ac.id Gelar: Sarjana Sains (S.Si), Wisuda April 2009

Abstrak Biofilm merupakan antigen baru yang digunakan dalam produksi vaksin, mengandung materi glikokaliks yang stabil hingga dalam saluran percernaan ikan. Penelitian ini bertujuan untuk mengembangkan vaksin oral bagi ikan Nila, menggunakan bakteri patogen yang telah diisolasi. Tahap pertama penelitian dimulai dengan isolasi patogen bagian luka, darah, insang dan jeroan pada ikan Nila yang terinfeksi penyakit bakteri. Skrining terhadap isolat dilakukan untuk memperoleh isolat yang mampu menghasilkan biofilm paling banyak dan konsisten dengan attachment assay statis maupun teragitasi, serta memiliki sifat patogenisitas paling tinggi melalui uji patogenisitas dengan bath challenge dan uji hemolisis. Isolat terbaik diidentifikasi sebagai Aeromonas sp. Jerami digunakan sebagai permukaan adhesi bakteri untuk membentuk biofilm, sehingga pertambahan berat kering jerami merupakan indikasi pertambahan jumlah biofilm yang terbentuk. Optimasi produksi biofilm terdiri dari 2 tahapan utama. Optimasi tahap I dilakukan untuk menentukan jumlah jerami dan waktu inkubasi optimal terhadap formasi biofilm. Dari variasi jumlah jerami 0,5%; 1%; 1,5%; 2% dan waktu inkubasi 36 jam, 48 jam, 60 jam dan 72 jam yang diuji, 2% jerami dengan waktu inkubasi 60 jam menghasilkan biofilm yang paling efisien, dengan kenaikan berat kering rata-rata jerami sebesar 13,53%. Optimasi tahap II dilakukan untuk mengetahui efek penambahan glukosa, laktosa dan sukrosa pada konsentrasi 0,1; 0,25; 0,5; 0,75 dan 1 g/l, serta ampisilin dan eritromisin pada konsentrasi 62,5; 125; 250 dan 500 g/ml, terhadap pertambahan berat kering jerami dengan inokulum 1010 CFU/ml. Untuk optimasi dengan

penambahan antibiotik, dilakukan studi pendahuluan penentuan konsentrasi hambat minimum antibiotik (MIC), untuk mengetahui kisaran konsentrasi antibiotik yang ditambahkan. Nilai konsentrasi hambat minimum (MIC) 1010 CFU/ml Aeromonas sp. untuk streptomisin 500 g/ml; ampisilin >500 g/ml dan eritromisin <125 g/ml. Hasil penelitian menunjukkan bahwa penambahan gula dan antibiotik pada konsentrasi diatas dapat menghasilkan kenaikan persen berat kering jerami secara bermakna (P<0,05). Penambahan ampisilin menghasilkan kenaikan rata-rata berat kering jerami paling besar (40,69%). Kata kunci: Vaksin oral, Biofilm, Aeromonas sp., Oreochromis niloticus