DETERMINAO DO POTENCIAL HDRICO DE TECIDOS VEGETAIS PELO MTODO DENSIMTRICO (OU DE SCHARDAKOW) INTRODUO

O mtodo densimtrico para determinao do w de tecidos vegetais foi desenvolvido pelo fisiologista russo Schardakow. Esse mtodo baseia-se na imerso de tecidos vegetais em uma srie de solues de concentraes conhecidas para as quais pode-se determinar o respectivo potencial osmtico. Ocorrer transferncia lquida de gua entre as amostras de tecido vegetal e as soluestestes de presses osmticas conhecidas at o estabelecimento de um equilbrio dinmico. A soluo-teste em que o tecido no ganha e nem recebe gua consiste no ponto isopistico. A ocorrncia de transferncia de gua determinada pela mudana de densidade das solues-testes. A densidade das solues aumenta, diminui ou permanece invarivel, conforme o tecido tenha potencial hdrico menor, maior ou igual ao da soluo externa, respectivamente. O agente osmtico deve ser uma substncia, preferencialmente, metabolicamente inativa. Depois de um perodo de aproximadamente 2 horas, alguns cristais de um corante (azul-de-metileno, metil laranja) so adicionados aos tubos contendo os tecidos imersos e uma amostra da soluo colorida de cada tubo transferida por meio de um tubo de vidro capilar a outro tubo contendo a soluo de concentrao correspondente para se verificar se houve alterao da densidade da soluo em contato com o tecido.
OBJETIVO

Determinar o potencial hdrico de um tecido foliar pelo mtodo densimtrico.

MATERIAL

Solues de sacarose de 0,0; 0,10; 0,2; 0,3; 0,4 e 0,5 M Tubos de ensaio grandes (6) Tubos de ensaio pequenos (6) Azul-de-metileno (cristais) Pipetas de ponta capilar (pipeta Pasteur) Tesoura ou lmina de barbear
PROCEDIMENTO

Coloque 2 ml de cada uma das solues de sacarose (0,0; 0,10; 0,2; 0,3; 0,4 e 0,5 M) em tubos de ensaio grandes e a mesma srie de solues em tubos de ensaio pequenos. Do material indicado pelo instrutor, tome pequenos fragmentos (cortados com lmina de barbear ou tesoura) e coloque-os em cada um dos tubos de ensaio grandes at o nivel dos 2 ml das solues de sacarose. Aps 2 horas, coloque um pequeno cristal de azul-de-metileno em cada tubo grande e agite, a fim de colorir as solues que estiveram em contato com os fragmentos. Com uma pipeta de ponta capilar, recolha um pouco de cada soluo colorida e solte, lentamente, uma gota no meio da soluo de igual concentrao que permaneceu sem fragmentos nos tubos de ensaio pequenos. Observe, contra uma fonte de iluminao, se a gota se desloca para cima, para baixo ou permanece mais ou menos estacionada (se o potencial hdrico do material estudado for superior, inferior ou igual ao da soluo em que esteve submerso). Caso a gota colorida no fique estacionada em qualquer das solues, pode-se repetir o ensaio, utilizando uma srie de solues, cujas concentraes sejam intermedirias entre as concentraes em que a gota desceu e subiu, respectivamente. Determine o potencial hdrico do tecido em MPa, consultando a tabela apropriada, que relaciona as molaridades das solues de sacarose s suas presses osmticas.

QUESTES

1. Qual o fundamento do mtodo de Schardakow de determinao do potencial hdrico de tecidos vegetais? 2. Por que o mtodo de Schardakow, de determinao do potencial hdrico, tambm denominado mtodo densimtrico ? 3. Em folhas de Tradescantia, encontrou-se, pelo mtodo densimtrico, um potencial hdrico de - 0,3 MPa. Em plasmlise incipiente, o mesmo tecido apresentou um potencial osmtico de - 0,2 MPa. Considerando que no tenha havido alterao no volume celular, pergunta-se: a) Qual a presso de turgescncia (P) do tecido (potencial de presso)? b) Esse tecido absorveria gua se fosse colocado em gua pura? Por qu? 4. Voc pode, com esse mtodo, determinar o valor da presso osmtica das clulas? Explique. 5. Quais so as vantagens e desvantagens do mtodo densimtrico na determinao do potencial hdrico de tecidos vegetais? 6. Qual a funo do azul-de-metileno nessa prtica? E se o tecido usado fosse de beterraba, haveria necessidade desse corante?