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EXPERIMENTO

Ao das proteases bromelina e papana na digesto do colgeno - Aula 2

Verso: agosto 19, 2011 4:52 PM

Ao das proteases bromelina e papana na digesto do colgeno - Aula 2

1. Resumo
Nessa atividade prtica sero executados vrios ensaios de gelificao da gelatina na presena do suco de abacaxi para verificar a influncia do pH. Tambm ser verificada a ao inibitria do feijo cru na atividade proteoltica.

2. O experimento 2.1 Materiais

Extratos de abacaxi preparado na aula 1; Feijo cru; Vinagre; Limpador multiuso com alcalinizante; Peneira fina; Liquidificador; Caixa de isopor com gelo ou geladeira; Gelatina; 5 tubos de ensaio; 6 pipetas volumtricas ou seringas de 10 mL graduadas; Bquer 200 mL; Bquer 500 mL.

Figura 1: Materiais necessrios

2.2 Procedimento
Na aula 1, os alunos puderam verificar que: - A diminuio da temperatura promove a gelificao da gelatina; - A gelatina no gelifica na presena de um extrato contendo protease; - A gelificao ocorre se o extrato contendo protease for fervido antes de ser adicionada gelatina. Retome esses resultados rapidamente com os alunos e lembre as questes que foram inseridas no final do roteiro para pesquisa. Verifique quais hipteses foram formuladas pelos grupos para explicar por que em certas circunstncias ocorre a gelificao e em outras no. Discuta ainda o que se pode concluir em relao s enzimas. Ela pode ter sua eficcia alterada? Em quais circunstncias?

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Caso ainda desconheam, apresente aos alunos o conceito de pH e comente que, em nosso corpo, diferentes solues, como o soro, a lgrima, a urina, a saliva, o suco gstrico e a bile no apresentam o mesmo pH. Considerando essas diferenas de pH, ser que uma enzima produzida no estmago teria a mesma atividade em qualquer outro meio? Aps essas discusses iniciais, apresente aos alunos a proposta de atividade prtica que ser realizada nesta aula.

2.2.1 Protocolo Experimental

1) Descongelar temperatura ambiente uma alquota do extrato de abacaxi reservada para esta aula e diluir 1:3 (1 parte de extrato + trs partes de gua). Reservar o restante para a aula seguinte. A discusso inicial pode ser realizada enquanto o suco descongela; 2) Preparar a gelatina conforme as instrues na embalagem e mant-la temperatura ambiente. Esperar esfriar para us-la no experimento; Segurana No colocar os vidros quentes diretamente sobre a bancada, pelo risco de ocorrer trincas. No caso de quebra de vidraria, utilize um descarte adequado ou envolva a vidraria quebrada em papel de jornal.

3) Preparar a soluo de feijo batendo copo de feijo cru em 1 copo (100 mL) de gua. Coar e reservar o filtrado no gelo (ou na geladeira) at o momento do uso;

Figura 2: Preparo da soluo de feijo (A) e filtragem (B) Segurana No abrir a tampa do liquidificador durante o uso, nem inserir objetos como colher ou bagueta dentro do copo durante o funcionamento. 4) Preparar uma soluo 2:1 de limpador multiuso com alcalinizante (duas partes do produto para uma parte de gua);

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Figura 3: Preparo da soluo de limpador multiuso com alcalinizante Segurana Cuidado no manuseio de produtos de limpeza. No deixar entrar em contato com os olhos e no ingeri-los. 5) Numerar os tubos de ensaio de um a cinco e preparar uma sequncia, conforme a tabela 1; Tabela 1: Sequncia de tubos com a composio de cada teste observado no experimento. Tubo 1 2 3 4 5 Composio
4 mL gelatina + 2 mL gua 4 mL gelatina + 2 mL suco de abacaxi 4 mL gelatina + 1 mL suco de abacaxi + 1 mL vinagre 4 mL gelatina + 1 mL suco de abacaxi + 1 mL limpador 4 mL gelatina + 1 mL suco de abacaxi + 1 mL soluo de feijo

Teste
controle 1 controle 2 abacaxi + vinagre abacaxi + limpador abacaxi + feijo

Figura 4: Preparo dos tubos

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6) Colocar os tubos na caixa de isopor com gelo (ou na geladeira) at que o tubo 1 (controle 1) gelifique. Isso dever ocorrer aps alguns minutos; 7) Observar os tubos e anotar na tabela 2 os resultados positivos e negativos para a gelificao.

Figura 6: Resultado positivo (A) e Resultado negativo (B) Espera-se que ocorra inativao da enzima devido alterao de pH nos ensaios com limpador multiuso e vinagre. Tabela 2: Resultados do teste de gelificao. Tubo 1 2 3 4 5 Composio
Gelatina + gua Gelatina + suco de abacaxi Gelatina + suco de abacaxi + vinagre Gelatina + suco de abacaxi + Limpador multiuso Gelatina + suco de abacaxi + feijo

Resultado (gelificao) + + + +

O resultado positivo indica gelificao da gelatina. O negativo indica no gelificao da gelatina.

Tubos 1 e 2: Controles positivo (1) e negativo (2) para gelificao da gelatina. O controle positivo indica ocorrncia de gelificao. O controle negativo indica degradao da gelatina pela ao da bromelina e consequente ausncia de gelificao. Tubos 3 e 4: Espera-se que a gelatina gelifique devido inativao enzimtica causada pela alterao de pH do meio. A gelatina pode tambm gelificar parcialmente, resultado da diminuio da atividade. Tubo 5: Espera-se que a gelatina gelifique devido presena de inibidores enzimticos. Pea que os alunos respondam s questes a seguir e que depois as discutam. 1. O que ocorreu com a enzima nos tubos 3 e 4? Resposta: Ocorreu diminuio/perda da atividade devido ao pH. Esse resultado demonstra a discusso do incio da aula: o pH influencia na atividade da enzima.

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2. No tubo 5, a bromelina est ativa ou inativa? Proponha uma explicao. Resposta: Inativa, verificada pela gelificao. Isso ocorre porque o feijo cru possui enzimas que inativam as proteases. Na discusso, os alunos devero tirar concluses a respeito do processo de inibio enzimtica. Estimule curiosidades como: ns comemos feijo e as nossas proteases funcionam, por qu? Aborde a questo dos fatores antinutricionais nos alimentos e a importncia do preparo e da conservao dos mesmos. As leguminosas como soja e feijo possuem substncias que tambm so enzimas, inibidoras de proteases, assim, o alimento dever ser submetido a tratamento trmico para inativar essas enzimas. O preparo inadequado pode causar a indigesto e problemas pancreticos, se houver uma ingesto excessiva (vide bibliografia 2). Voc pode retomar o resultado do experimento feito na primeira aula com o abacaxi fervido como exemplo de inibio da protease pela fervura. Finalize introduzindo perguntas, que sero respondidas na aula seguinte, como, por exemplo, ser que os produtos industrializados como sucos de frutas conservam as caractersticas nutricionais da fruta? Comente que esse ser o tema de investigao da prxima aula.

3. Sugesto de roteiro de trabalho:

A seguir, sugerimos um roteiro de trabalho para ser utilizado na ntegra ou adaptado, e que poder ser entregue aos alunos. Ele contm todas as orientaes necessrias para o desenvolvimento da aula prtica e tambm algumas questes que auxiliaro no fechamento da atividade.

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PRTICA LABORATORIAL DE BIOLOGIA Ao das proteases bromelina e papana na digesto do colgeno - Aula 2 Nome: __________________________ N_____ Srie: _____ Data: ________ Objetivo da aula prtica:
Essa aula tem como objetivo verificar a influncia do pH e a ao do feijo cru sobre a atividade da bromelina.

Protocolo Experimental Materiais:

Extratos de abacaxi preparados na aula 1; Feijo cru; Vinagre; Limpador multiuso com alcalinizante; Peneira fina; Liquidificador; Caixa de isopor com gelo ou geladeira; Gelatina; 5 tubos de ensaio; 6 pipetas volumtricas ou seringas de 10 mL graduadas; Bquer 200 mL; Bquer 500 mL.

Procedimento:
1.Descongelar temperatura ambiente uma alquota de suco de abacaxi reservada para esta aula e diluir 1:3 (uma parte de suco + trs partes de gua). Reservar o restante para a aula seguinte; 2.Preparar a gelatina conforme as instrues na embalagem e mant-la temperatura ambiente; 3.Preparar a soluo de feijo batendo copo de feijo cru em 1 copo (100 mL) de gua. Coar e reservar no gelo (ou em geladeira) at o momento do uso; 4.Preparar uma soluo 2:1 de limpador multiuso com alcalinizante (duas partes do produto para uma parte de gua); 5.Numerar os tubos de ensaio de um a cinco e preparar uma sequncia, conforme a tabela 1: Tabela 1: Sequncia de tubos com a composio de cada teste observado no experimento. Tubo 1 2 3 4 5
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Composio
4 mL gelatina + 2 mL gua 4 mL gelatina + 2 mL suco de abacaxi 4 mL gelatina + 1 mL suco de abacaxi + 1 mL vinagre 4 mL gelatina + 1 mL suco de abacaxi + 1 mL limpador 4 mL gelatina + 1 mL suco de abacaxi + 1 mL feijo e gua

Teste controle 1 controle 2 abacaxi+vinagre abacaxi+ limpador abacaxi+ feijo

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6.Colocar os tubos na caixa de isopor com gelo (ou na geladeira) at que o tubo 1 (controle 1) gelifique. Isso dever ocorrer aps alguns minutos. 7.Observar os tubos e anotar na tabela 2 os resultados positivos e negativos para a gelificao. Tabela 2: Resultados do teste de gelificao. Tubo 1 2 3 4 5 Composio
Gelatina + gua Gelatina + suco de abacaxi Gelatina + suco de abacaxi + vinagre Gelatina + suco de abacaxi + limpador multiuso Gelatina + suco de abacaxi + feijo

Resultado (gelificao)

Questes:
1. O que ocorreu com a enzima nos tubos 3 e 4?

2. No tubo 5, a bromelina est ativa ou inativa? Proponha uma explicao.

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4. Referncias complementares
1.Nutrio. Software educacional que oferece conceitos fundamentais sobre nutrio atravs de uma apresentao simplificada e dinmica com textos, esquemas, figuras e animaes. YOKAICHIYA, D. K. et al. Nutrio. In: Biblioteca Digital de Cincias. Janeiro/2006. Disponvel em: http://www.ib.unicamp.br/lte/bdc/visualizarMaterial.php?idMaterial=47 Acesso em: 26/01/2009 2. Estudo da Atividade Proteoltica presente em frutos. Artigo cientfico apresentando experimento de atividade proteoltica em frutos sob uma abordagem bioqumica. LIMA, S. L. T. et al. Estudo da Atividade Proteoltica presente em frutos. In: Revista QUMICA NOVA NA ESCOLA, n 28. 2008. Disponvel em: http://qnesc.sbq.org.br/online/qnesc28/11-EEQ-6906.pdf Acesso em:26/01/2009 3.Enzyme. Software educacional com textos, imagens, animaes e simulaes sobre estrutura, funo e cintica enzimtica. GALEMBECK, E.; PEDROSO-FILHO, C. E. S. Enzyme. In: Biblioteca Digital de Cincias. Setembro/2007. Disponvel em: http://www.ib.unicamp.br/lte/bdc/visualizarMaterial.php?idMaterial=528 Acesso em: 27/01/2009 4.O Projeto de Pesquisa. Site contendo guia de como fazer projetos, explicando, por exemplo, o que hiptese. Disponvel em:http://www.pedagogiaemfoco.pro.br/met05.htm Acesso em:27/01/2009 5. Bioqumica Bsica. Livro que aborda conceitos de Biqumica. MARZZOCO, A.; TORRES, B.B. Bioqumica Bsica. 3. ed. Guanabara Koogan. 2007. 6. Bioqumica. Livro que aborda a Bioqumica com profundidade. VOET, D. Bioqumica. 3. ed. Armed. 2006

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FICHA TCNICA
Universidade Estadual de Campinas Reitor: Fernando Ferreira Costa. Vice-reitor: Edgar Salvadori de Decca. Pr-reitor de ps-graduao: Euclides de Mesquita Neto. Instituto de Biologia Diretora: Shirlei Maria Recco Pimentel. Diretor Associado: Flavio Antonio Mas dos Santos.

EXECUO

Projeto EMBRIAO Coordenao geral: Eduardo Galembeck. Coordenao de Mdia - Audiovisuais: Eduardo Paiva. Coordenao de Mdia - Software: Eduardo Galembeck. Coordenao de Mdia - Experimentos: Helika A. Chikuchi, Marcelo J. de Moraes e Bayardo B. Torres. Apoio Logstico/Administrativo: Eduardo K. Kimura, Gabriel G. Hornink, Juliana M. G. Geraldi.

OBJETO DE APRENDIZAGEM

Ao das proteases bromelina e papana na digesto do colgeno - Aula 2 Coordenao do Experimento: Bianca Caroline Rossi Rodrigues. Redao: Bianca Caroline Rossi Rodrigues, Maurcio Aurlio Gomes Heleno, Helika A. Chikuchi e Eduardo Galembeck. Pesquisa: Bianca Caroline Rossi Rodrigues, Maurcio Aurlio Gomes Heleno e Roney Vander dos Santos. Reviso de Contedo: Daniela Kiyoko Yokaichiya e Helika A. Chikuchi. Testes de Bancada e captura de Imagens: Gislaine Lima Marchini, Roney Vander dos Santos e Cristiane Zaniratto. Edio de Imagem: Florencia Mara Pin Pereira Dias. Adequao Lingustica: Lgia Francisco Arantes de Souza e Raquel Faustino. Diagramao: Henrique Oliveira e Thais Goes.

A Universidade Estadual de Campinas autoriza, sob licena Creative Commons Atribuio 2.5 Brasil - cpia, distribuio, exibio e execuo do material desenvolvido de sua titularidade, sem fins comerciais, assim como a criao de obras derivadas, desde que se atribua o crdito ao autor original da forma especificada por ele ou pelo licenciante. Toda obra derivada dever ter uma Licena idntica a esta. Estas condies podem ser renunciadas, desde que se obtenha permisso do autor. O no cumprimento desta licena acarretar nas penas previstas pela Lei n 9.610/98.

Laboratrio de Tecnologia Educacional Departamento de Bioqumica Instituto de Biologia - Universidade Estadual de Campinas UNICAMP Rua Monteiro Lobato, 255 CEP 13083-862, Campinas, SP, Brasil

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