Revista de Hematologa Vol. 7, No.

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INTRODUCCIN
En medicina el trmino quimera se emplea
para designar a aquel individuo cuyo cuerpo
contiene poblaciones celulares que provienen
de diferentes individuos de la misma o de
diferente especie, ya sea espontnea o
artifcialmente (1). La coexistencia de clulas
de dos diferentes organismos en el cuerpo es
llamado quimerismo.
El trasplante de mdula sea (TMO) es
una modalidad de tratamiento cuyo objetivo
es proporcionar las condiciones para la
reconstitucin de la mdula sea daada.
En el TMO alognico el donante pertenece
a la misma especie que el receptor, presenta
la mayor compatibilidad y generalmente es
un familiar de primer grado (2-6). Se pueden
presentar diferentes grados de quimerismo
en el TMO. Cuando el paciente no presenta
ninguna evidencia de clulas del receptor
despus de un tiempo del trasplante se
considera quimerismo completo; mientras que
si el paciente presenta evidencia de clulas
tanto del receptor como clulas del donador
se considera como quimerismo mixto (cuadro
1)(8).
Con el surgimiento de procedimientos
de trasplante cada vez ms avanzados se
Quimerismo por microsatlites.
Olga Vernica Barrales-Benitez, Samuel Canizales-Quinteros.
Departamento de Hematologa y Oncologa. Departamento de Medicina Genmica y Biologa
Molecular, Instituto Nacional de Ciencias Mdicas y Nutricin Salvador Zubirn,
Mxico, D.F., Mxico.
Solicitud de reimpresos: Olga V. Barrales-Benitez. Departamento de Hematologa y Oncologa. Instituto Nacional de Ciencias Mdicas y
Nutricin SZ. Vasco de Quiroga 15, Colonia Seccin XVI, Delegacin Tlalpan, C.P. 14000, Mxico, D.F., Mxico.
Tel.: 54 870 900 Ext. 2704
ha hecho necesario establecer el grado de
quimerismo en los pacientes despus del
trasplante con el objeto de: a) verifcar el
xito del trasplante, b) prevenir recada de la
enfermedad, c) iniciar inmunoterapia (linfocitos
del donador) para evitar rechazo, d) observar
el origen de las recadas debidas y e) intentar
nuevos esquemas de acondicionamiento (2,
5-7, 9, 10).
METODOLOGA.
El fundamento en el que se basa la
deteccin del grado de quimerismo es el
empleo de diferentes marcadores genticos
polimrfcos entre donador y receptor. La
eleccin del marcador y de la tcnica a emplear
depende de la sensibilidad y especifcidad, de
si hay diferencia de gnero entre donador y
receptor, y del tipo de enfermedad del paciente
pre-trasplante. Las diferentes tcnicas de
rutina empleadas para detectar grado de
quimerismo se muestran en el cuadro 2. A
pesar de las diferencias en los protocolos de
estas metodologas, todas se basan en que
el receptor y el donador son estudiados antes
del trasplante en la bsqueda de marcadores
genticos diferentes, los cuales se consideran
marcadores informativos (figura1). Un
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marcador gentico se considera informativo
cuando: a) se encuentra ampl i amente
distribuido en diferentes cromosomas; b)
presenta gran variabilidad o polimorfsmo, lo
que permite demostrar mltiples alelos y por
lo tanto heterocigocidad. A continuacin estos
marcadores son analizados en el paciente
post TMO alognico para medir y cuantifcar
la cantidad de clulas del receptor y del
donador, y establecer el grado de quimerismo
(8).
Uno de los mtodos ms empleado
por diversos investigadores se basa en la
amplifcacin por Reaccin en Cadena de la
Polimerasa (PCR) de un sistema STR/VNTR
altamente polimrfco que se considera muy
Cuadro 1
Diferentes grados de quimerismo.
Grado de quimerismo Defnicin
Quimerismo completo Se detecta 100% clulas de donador, completa sustitucin
hematopoytica.
Quimerismo mixto Se detectan clulas del receptor, en particular parecen linfo-
citos.
Quimerismo dividido Uno o ms linajes pueden ser del receptor o del donador
(clulas mieloides 100% receptor, clulas linfoides 100%
donador)
Microquimerismo Se detectan menos del 1% de clulas del receptor, se observa
generalmente en trasplantes de rganos slidos.
Cuadro 2
Mtodos para la deteccin de quimerismo.
TECNICA VENTAJAS DESVENTAJAS INFORMATIVIDAD
Fenotipifcacin
eritrocitaria
Simple y efectivo en caso
de Leucemi a Mi el oi de
Crnica.
Transfusiones sanguneas pue-
den interferir. Detecta un solo
tipo celular.
Baja
Citogentica Efecti vo para cl ul as
cromosoma Fi l adel fi a
positivo.
Menos sensi bl e, eval a sol o
clulas en divisin; altos falsos
positivos.
Baja
FISH Estudia gran nmero celu-
lar; bajos falsos positivos,
muy sensible.
Restringido a donador de sexo di-
ferente a receptor; requiere gran
cantidad de muestra.
Alta
RFLP Evala clulas nucleadas;
requiere poca cantidad de
muestra.
Baja sensibilidad. Da resultador
errneos por mltiples sitios de
restriccin.
Alta
STR/VNTR No depende del sexo del
donador ni de compatibili-
dad de HLA.
Baja sensibilidad (0.4-5 %)por
competicin por el cebador.
Muy alta
Marcadores para
cromosoma Y
Muy sensible Requiere donador de sexo femeni-
no, no sirve si son del mismo sexo
donador y receptor
Alta
Marcadores para
Cromosoma X
Muy sensible Requiere donador de sexo mas-
culino, no sirve si son del mismo
sexo donador y receptor
Alta
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informativo y sensible (11). Los STR (del
ingls short tandem repetition, repetidos
cortos consecutivos) y los VNTR (del ingls
variable number tandem repetition, nmero
variable de repetidos consecutivos) son
secuencias repetidas agrupadas de DNA que
constituyen aproximadamente de un 10 a un
15% del genoma y consisten en formaciones
de varias repeticiones cortas que se organizan
consecutivamente (en tandem).
Las familias de DNA satlite varan de
acuerdo con su localizacin en el genoma,
la extensin total de la formacin consecutiva
y la longitud de las unidades repetidas que
constituyen la formacin (12). Cuando la
secuencia de repeticiones consecutivas
tiene una longitud de 2 a 8 nucletidos se
denomina STR o microsatlite (fgura 2); y si
tiene de 15 a 50 nucletidos se llama VNTR
o minisatlite (13,14). Estas secuencias
polimrficas son heredadas de manera
mendeliana codominante.
Existen tres caractersticas importantes de
estas secuencias STR o VNTR que las hacen
muy tiles para los estudios de ligamiento
gentico. Primero, un microsatlite con
frecuencia tiene varios alelos (extensiones
de nucletidos repetidas) presentes en la
poblacin, haciendo que la probabilidad
de que un individuo sea heterocigoto sea
mayor del 70% (fgura 3). Los marcadores
ms informativos tienen hasta varias docenas
de alelos o ms y, por lo tanto, resulta poco
probable que dos individuos no emparentados
compartan los mismos alelos Segundo, a
diferencia del anlisis con RFLP (del ingles
restriction fragment lenght polimorfism
polimorfsmo en la longitud del fragmento de
restriccin) o con VNTR, la genotipifcacin
con microsatlites no requiere el uso de
tediosas tcnicas como Southern blot.
Con la tcnica de PCR se usan cebadores
complementarios a secuencias especfcas
de DNA que flanquean los microsatlites
y generan productos de amplifcacin que
diferen en longitud, dependiendo de cuantos
repetidos estn presentes (fgura 3). Tercero,
miles de microsatlites han sido totalmente
identificados en el genoma humano, de
manera que muy pocas regiones del genoma
no pueden ser mapeadas usando estos
marcadores (12)
Por otra parte, el uso de amplifcacin
del DNA permite determinar el grado de
quimerismo con muy poca cantidad de
muestra, una gran ventaja cuando el paciente
esta rechazando el injerto y presenta severa
leucopenia. Dependiendo de la longitud del
Figura 1.- Anlisis de quimerismo para marcadores
genticos. A y C son marcadores informativos R =
receptor; D = donador.
Figura 2.- Anlisis de quimerismo por marcadores
microsatlites. Repetidos consecutivos STR que
muestran la diferencia en nmero de repetidos en
dos cromosomas. F = cebador delantero, R = cebador
inverso.
Quimerismo por microsatlites.
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fragmento y de la efciencia de la amplifcacin,
la sensibilidad del mtodo para detectar grado
de quimerismo es de 1% a 5 % (15).
EXPERIENCIA EN EL INSTITUTO.
En el Instituto Nacional de Ciencias
Mdicas y Nutricin SZ se emplea un panel
de ocho marcadores que se consideran
informativos por haber sido previamente
i denti fi cados en un grupo de fami l i as
mexi canas (16). Estos marcadores se
encuentran ubi cados en cromosomas
Cuadro 3
Marcadores microsatlites fuorescentes.
Locus Cromosoma Fluorocromo Tamao
D1s534 1 FAM 196-212
D1s1661 1 FAM 89-101
D2s1360 2 FAM 126-181
D3s1764 3 TET 225-253
D3s4545 3 FAM 192-240
D5s1470 5 TET 163-207
D9s1121 9 HEX 184-212
D12s2078 12 FAM 250-282
Figura 3.- Demostracin por microsatlites de los diferentes alelos que presenta un individuo debido al
diferente nmero de repetidos consecutivos . Esto se observa grfcamente en un gel de electroforesis (lado
izquierdo).
diferentes y estn unidos a diversos fuorforos
(cuadro 3), lo que permite que se pueda
amplificar en un mismo tubo de reaccin
dos o tres marcadores para, posteriormente
analizar en un secuenciador automatizado
(ABI-PRISM 373). De esta manera se puede
mostrar, en un gel de electroforesis, los
diferentes alelos que permitan determinar
cuales son los marcadores informativos para
cada paciente antes del trasplante (fgura 4).
Los pacientes son estudiados nuevamente
a tiempos variables post-trasplante para
OV Barrales-Benitez, S Canizales-Quinteros
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determinar el grado de quimerismo y de
esta forma prevenir un rechazo o recada
de la enfermedad (fgura 5). A la fecha se
han estudiado 27 pacientes en los que la
frecuencia de los 8 marcadores informativos
fue como sigue: D2s1360 en el 63% de los
pacientes; el D3s1764 en 59%; el D5s1470
en 52%; el D9s1121 y el D3s4545 en 48%
cada uno de ellos; el D12s2078 en 44%; el
D1s1661 en 15% y el D1s534 en 7%.
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Figura 4.- Panel de 8 marcadores microsatlites
de un paciente y su donador previo al TMO donde:
D2s1360, D3S4545 y D12s2078 resultaron marcadores
informativos. D = donador, R = receptor.
Figura 5.- Estimacin del grado de quimerismo en
un paciente post trasplante mediante microsatlites.
Los marcadores D2s1360, D3s4545 y D12s2078
son informativos para este paciente. D = donador,
R(pre) = receptor pre- trasplante, R(post) = receptor
post-trasplante.
Quimerismo por microsatlites.
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