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Biomaghreb
SOMMAIRE
PAGES
INDEX ALPHABETIQUE BIOCHIMIE / ELECTROLYTES BIOCHIMIE / ENZYMES BIOCHIMIE / SUBSTRATS HEMATOLOGIE / HEMOSTASE IMMUNOHEMATOLOGIE / HEMATOLOGIE SEROLOGIE ET TESTS RAPIDES 8 - 13 16 - 23 26 - 39 42 - 47 50 - 54 56 - 63
Biomaghreb
INDEX ALPHABETIQUE
DESIGNATION ACIDE URIQUE ALBUMINE ALPHA-AMYLASE ANTICORPS MONOCLONAL anti-A ANTICORPS MONOCLONAL anti-AB ANTICORPS MONOCLONAL anti-B ANTICORPS MONOCLONAL anti- D ANTIGLOBULINE POLYVALENTE ASO LATEX AUTO FIBRI 1 AUTO FIBRI 2 BILIRUBINE DIRECTE BILIRUBINE TOTALE BILIRUBINE TOTALE ET DIRECTE CALCIUM CALIBRATEUR BILIRUBINE TOTALE ET DIRECTE CAPACITE TOTALE DE FIXATION DU FER Rf 20091 20031 30111 30131 30121 30141 30181 40037 30033 30034 20102 20103 20101 20051 201010 20062 Page 26 27 16 50 51 52 53 54 56 42 43 28 29 30 8 31 9
Biomaghreb
DESIGNATION CEPHALINE KAOLIN CHLORURE DE CALCIUM CHOLESTEROL CHOLESTEROL-HDL CREATININE CREATINE KINASE CRP LATEX FACTEURS RHUMATOIDES LATEX FER FERROZINE FIBRINOGENE HEMOGLOBINE GAMMA GT GLUCOSE GOT- ASAT GPT-ALAT LDH MAGNESIUM Rf 30021 30051 20111 20113 20151 20006 40034 40036 20061 30031 30041 20021 20121 20042 20046 20011 20071 Page 44 44 32 33 34 17 57 58 10 45 46 18 35 19 20 21 11
Biomaghreb
DESIGNATION PHOSPHATASE ALCALINE DGKC PHOSPHORE COLOR PHOSPHORE UV PROTEINES TOTALES STREPTOLYSINE ETALONNEE THROMBOPLASTINE TPHA TRANSAMINASES COLOR TRIGLYCERIDES UCG UREE COLOR UREE UV
Rf 20015 20181 20083 20161 40022 30011 40011 20041 20131 40032 20141 20142
Page 22 12 13 36 59 47 61 23 37 62 38 39
Biomaghreb
BIOCHIMIE ELECTROLYTES
Page CALCIUM
Rf. 20051 Rf. 20054 2 x 160 ml 2 x 125 ml 8
FER FERROZINE
Rf. 20061 Rf. 20064 2 x 100 ml 5 x 100 ml 10
MAGNESIUM
Rf. 20071 Rf. 20074 2 x 160 ml 2 x 125 ml 11
PHOSPHORE UV
Rf. 20083 320 tests 13
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 20051, (320 Tests) R1 : 2 x 80ml R2 : 2 x 80 ml R3 : 1 x 4 ml Rf. 20054, (250 Tests) R1 : 1 x 125 ml R2 : 1 x 125 ml R3 : 1 x 3 ml CALCUL D.O. Echantillon xn D.O. Standard mg/l mg/dl mmol/l n = 100 n = 10 n = 2,5 n = Valeur du standard
CALCIUM
Mthode colorimtrique
PRINCIPE
Le calcium forme avec le complexant crsolphtaline en milieu alcalin un compos color en violet dont lintensit est proportionnelle la concentration en calcium.
REACTIFS
Ractif 1 Tampon Alcalin 1 -Propanol Ractif 2 Solution chromogne Rsctif 3 Standard Complexant crsolphtaline 0.62 mmol/ll Hydroxy 8 quinoline Standard calcium 69 mmol/l 10mg/dl 100 mg/l 2.5 mmol/l 500 mmol/l
LINEARITE La mthode est linaire jusqua 150 mg/l (3,75 mmol/l). si la concentration est leve, diluer lchantillon au 1/2 dans une solution de NaCI 9 g/l. Multiplier le rsultat par 2. VALEURS USUELLES Srum Nouveau-ns Enfants 7.5 - 12 mg/dl 1,87 - 3 mmol/l 10.0 -11 mg/dl 2.50 - 2.87 mmol/l 9.0 - 10.6 mg/dl 2,25 - 2,65 mmol/l
PREPARATION ET STABILITE
Mlanger 1 volume de ractif R1 avec 1 volume de ractif R2. Stabilit : 4 heures 20 - 25C 20 heures 2-8C
Adultes
ECHANTILLONS
Srum, plasma recueilli sur hparine. Urine dilue au 1/3 avec de leau distille, acidifie pH : 3,4 avec HCI dilu.
Urine
Nouveau-ns Enfants
MODE OPERATOIRE
570 nm (550-590) Longueur donde : Temprature : 20 - 25C Cuve : 1 cm dpaisseur Ajuster le zro du spectrophotomtre sur le blanc ractif.
Blanc Standard Echantillon Mlange ractif --1 ml Standard 20 l -1 ml Echantillon -20 l 1 ml
1-8 mg/kg/24h 0,025-0,2mmol/kg/24h 2-6 mg/kg/24h 0,05-0,150mmol/kg/24h 150 - 300 mg/24h 3,5 - 7,5 mmol/24h
Adultes
NOTES Utiliser du matriel plastique usage unique pour toutes les manipulations. La prsence dans certains dtergents de chelateurs tel que lEDTA peut empcher dans certains cas la formation du complexe color. BIBLIOGRAPHIE Stern J., Lewis W.H.P., Clin. Chim. Acta 2, 576 (1957)
Mlanger et Incuber 5 minutes temprature ambiante, Lire les densits optiques. La coloration est stable 1 heure.
FT Fr 01
Dc 2007
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 20062, (50 Tests) R1 : 1 x 100 ml R2 : 2 x 5 g Rf. 20063, (100 Tests) R1 : 2 x 100 ml R2 : 2 x 10 g
Kit Complmentaire
Rf : 20061 Rf : 20063 Fer Ferrozine Fer SFBC
PRINCIPE La capacit totale de fixation du fer est value aprs saturation de la transferrine par une solution de fer et adsorption de lexcs sur hydroxycarbonate de magnsium. La dtermination du fer est ensuite ralise laide du coffret fer ferrozine (Rf. 20061) ou Fer SFBC (Rf 20063).
MODE OPERATOIRE
Echantillon Ractif 1 1 ml 2 ml
Mlanger, incuber 5 minutes puis ajouter: Ractif 2 2 mesures pleines environ 200 mg.
REACTIFS
Ractif 1 Solution saturante de fer Ractif 2 Adsorbant Fer 5 mg/l 89,5 mol/l
Attendre 20 minutes en agitant plusieurs fois. centrifuger 10 minutes environ 3000 tr/mn.
Hydroxycarbonate de magnsium Determination de la C.T.F. Doser le fer dans le surnageant en utilisant les kits suivants : - fer ferrozine Rf : 20061 - fer SFBC Rf : 20063 En cas de dosage du fer et de la capacit totale de fixation, il est souhaitable de commencer par la saturation de la transferine et ensuite de mener paralllement le dosage du fer srique et de la capacit totale de fixation. Tenir compte de la dilution 1/3 pour le calcul.
PREPARATION ET STABILITE Les ractifs sont prts lemploi et stables jusqu la date de premption indique sur ltiquette.
ECHANTILLONS
Srum non hmolys. Le prlevement peut tre conserv 7 jours entre 2 et 8C ou plusieurs semaines congel - 20C.
NOTE
La contamination par le fer tant une des causes principales derreur, lusage de pipettes et de cuves en matire plastique et usage unique est recommand.
FT Fr 02
Dc 2007
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 20061, (100 Tests) R1 R2 R3 R4 : : : : 2 1 1 1 x x x x 100ml 2,5g 5 ml 10 ml Rf. 20064, (250 Tests) R1 R2 R3 R4 : : : : 5 1 1 2 x x x x 100ml 5g 12 ml 10 ml
FER FERROZINE
(Mthode colorimtrique)
PRINCIPE
A pH 4,8 le fer Ferrique (Fe +++) est libr instantanment de la transferrine. Lacide ascorbique le rduit en fer ferreux (Fe++). La ferrozine forme avec le fer ferreux, un complexe color soluble, mesurable de 560 580 nm. La prsence de thioure permet dliminer linterfrence des ions cuivreux.
Eau distille Standard R4 Echantillon Ractif A Ractif B
Standard
200 l 1 ml
REACTIFS
Ractif 1 Guanidine, HCI Tampon actate pH 5 Acide ascorbique Ferrozine Standard 40 mmol/l 1 mg/l 17,9 mol/l 4,5 mmol/l
Mlanger attendre 10 minutes puis lire les densit optiques. Stabilit de la coloration : 30 minutes
CALCUL
(DO Echant. - DO blanc Echant.) Fer srique = xn DO Standard mg/l mol / l :n=1 : n = 17.9
LINARIT
jusqu 1000 g/dl (179,7 mol/l)
PREPARATION ET STABILITE
Dissoudre le contenu dune cuillre dacide ascorbique (environ 250 mg) dans 50 ml de ractif 1 (ractif A). Ajouter 40 I de ferrozine dans 1 ml de ractif A (ractif B) Le ractif B est prpar extemporanment. Conservs + 4C, les ractifs sont stables jusqu la date de premption indique sur les flacons. Aprs prparation, le ractif B est stable: 3 jours 20 - 25C 2 semaines 2 - 8C
VALEURS USUELLES
Hommes Femmes 69-158g/dl 12,5-28,3 mol/l 59-145 g/dl 10,7-26,0 mol/l
ECHANTILLON
Srum, plasma hparin non hmolys
MODE OPERATOIRE
562 nm (530-590) Longueur donde : 20 - 25C Temprature : Cuve : 1 cm dpaisseur Zro de lappareil : - Ractif A pour les Blancs Echantillons - Blanc Ractif pour le standard et les chantillons
NOTES : Lutilisation de matriel en verre ncessite un trempage de plusieurs heures dans de lacide chlorhydrique 2N puis un rinage soigneux leau distille.Il est prferable dutiliser du matriel plastique usage unique. les doses leve danticoagulant (Hparine) peuvent provoquer des troubles dans le mlange ractionnel. Les volumes suggrs peuvent tre modifis proportionnellement sans aucune interfrence dans le calculs.
BIBLIOGRAPHIE
Persijn et al Clin. Chem. Acta 35,91 (1971) Stoockey L. Anal. Chem. 42,779 (1970) Williams et al. Clin. Chem. 23,237(1977)
FT Fr 03
Dc 2007
10
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 20071, (320 Tests) R1 : 2 x 80 ml R2 : 2 x 80 ml R3 : 1 x 5 ml Rf. 20074, (250 Tests) R1 :1 x 125 ml R2 : 1 x 125 ml R3 : 1 x 3 ml
MAGNESIUM
PRINCIPE
Le magnsium forme un complexe color avec la calmagite en milieu alcalin. La prsence dEGTA rend la raction spcifique. Lintensit de la coloration produite est proportionnel la concentration en magnsium.
CALCUL
D.O Echantillon magnesium mg/dl mg/l mmol/I Urine : : : : D.O Standard xn
REACTIFS
Ractif 1 Tampon Amino-Mthyl propanol 1 mmol/l EGTA 0,20 mmol/l Ractif 2 Calmagite Ractif 3 Standard magnsium 0,30 mmol/l 2 mg/dl 20 mg/l 0,824 mmol/l
LINEARITE
Jusqu 50 mg/l (5 mg/dl - 2,06 mmol/l)
VALEURS USUELLES
Srum, Plasma 1,6 - 2,5 mg/dl 16 - 25 mg/l 0,65-1,05 mmol/l 0,65 - 12,5 mmol/24h
PREPARATION ET STABILITE
Mlanger 1 volume de ractif R1 avec 1 volume de ractif R2. Stabilit du ractif de travail : 24 heures 20-25C 4 jours 2-8C
Urine
NOTES
Utiliser uniquement du matriel plastique usage unique.
ECHANTILLONS
Srum, plasma recueilli sur hparine Urine dilue au 1/10 avec de leau distille, acidifie pH 3,4 avec de lHCI dilu.
BIBLIOGRAPHIE
Gindier E. Clin. Chem. 17, 662, (1971).
MODE OPERATOIRE
Longueur donde :...................520 nm (500 - 550) Temprature :............................20-25C Cuve :........................................1 cm dpaisseur Ajuster le zro du spectrophotomtre sur le blanc ractif.
Blanc
Standard Echantillon Ractif de travail 1 ml
Standard
10 l 1 ml
Echantillon
10 l 1 ml
Mlanger, lire les DO aprs une incubation de 5 minutes. Stabilit de la coloration : 1 heure.
11
FT Fr 04
Juin 2008
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 20081, (100 Tests) R1: 1 x 100 ml R2: 1 x 100 ml R3: 1 x 4 ml R4: 1 x 70 ml Rf 20082, (200 Tests) R1: 2 x 100 ml R2: 2 x 100 ml R3: 1 x 10 ml R4: 1 x 120 ml Rf 20084, (250 Tests) R1: 2 x 125 ml R2: 2 x 125 ml R3: 1 x 10 ml R4: 1 x 125 ml
PHOSPHORE
Mthode colorimtrique
CALCUL
DO Echantillon xn DO Etalon mg/l n = 50 mmol/l n = 1.61 Urines : multiplier par 5 le rsultat obtenu.
PRINCIPE
En milieu alcalin, le complexe phospho-molybdate est rduit en complexe phosphomolybdique de couleur bleu et dont lintensit est proportionnelle la concentration en phosphore.
REACTIFS
R1 Ractif rducteur : Chlorydrate dhydroxylamine Polyvinilpyrrolidone Acide sulfurique 0.14 mmol/l 10 g/l 89.63 mmol/l
LINEARITE
La mthode est linaire jusqu 150 mg/l (4,8mmol/l). Si la concentration est plus leve, diluer lchantillon et refaire le test.
R2 R3 R4
Sel de molybdate dammonium 6.07 mmol/l Etalon 50 mg/l 1.61 mmol/l Solution de soude 2 N
VALEURS USUELLES
Srum Enfants Adultes 1,10 - 2,10 mmol/l 43 - 65 mg/l 0.90 - 1,45 mmol/l 28 - 45 mg/l 12 - 42 mmol/24 h 0.272- 1.3 g/24 h
PREPARATION ET STABILITE
Mlanger 1 volume de ractif R1 avec 1 volume de R2 Stabilit : 4 heures 20-25C 1semaine + 4C
ECHANTILLONS
- Srum ou plasma recueilli sur hparine. - Urine dilue au 1/5 dans leau distille.
Urine
MODE OPERATOIRE
Longueur donde :...................................680 nm Temprature :..........................................T laboratoire Cuve .......................................................1 cm Ajuster le zro du spectrophotomtre sur le blanc ractif. Blanc Ractif Eau distille R3 Etalon Srum ou urine 1/5 Mlange ractionnel 50 I --Etalon -50 I -50 I 2 ml 2 ml 2 ml Echantillon ---
NOTES
Utiliser du matriel plastique usage unique pour toutes les manipulations.
BIBLIOGRAPHIE
Clin. Chim. Acta. 15, 155 (1967).
Bien mlanger, laisser 2 minutes la temprature du Laboratoire (prsence dun trouble pour lchantillon). R4 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml
Mlanger (le trouble disparait). Laisser 15 minutes temprature du laboratoire, lire 680 nm. La coloration est stable 1 heure temprature du laboratoire. FT Fr 06 Dc 2007 12
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 20083, (320 Tests) R1 : 4 x 80 ml R2 : 1 x 10 ml
PHOSPHORE
Mthode U.V.
PRINCIPE
Le phosphore inorganique est dos selon la raction suivante:
Phosphore Molybdate dAmmonium + Acide Sulfurique Complexe phospho-molybdique
CALCUL
D.O. Echantillon Phosphore = D.O. Standard mg/dl mg/l mmol/l Urine : : : : n=5 n = 50 n = 1,61 multiplier le rsultat par 10 xn
REACTIFS
Ractif 1 Acide sulfurique Molybdate dammonium Dtergent Standard phosphore 200 mmol/l 0,40 mmol/l O.S 5 mg/dl 50 mg/l 1.61 mmol/l
LINEARITE
Jusqu 200 mg/l (20 mg/dl - 6,46mmol/l).
VALEURS USUELLES
Adultes 2,5-5,0 mg/dl 25-50 mg/l 0,81-1,61 mmol/l 4,0 - 7,0 mg/dl 40 - 70 mg/l 1,29 - 2,26 mmol/l 6,5-48,5 mmol/24h 0,5-1,5g/24
Ractif 2 Standard
Enfants
STABI LITE
La stabilit des ractifs est indique sur chaque conditionnement. Urines
ECHANTILLONS
Srum, plasma (non hmolyss) Urine dilue 1/10 avec de leau distille.
NOTES
Si lechantillon est lipmique faire un blanc en mlangeant 10 l dchantillon avec 1 ml de solution de NaCI 9g/l et lire la densit optique 340 nm.
MODE OPERATOIRE
Longueur donde :...................................340 nm Temprature :..........................................20-25C Cuve......................................................1 cm dpaisseur Ajuster le zro du spectrophotomtre sur le blanc ractif. Blanc Standard Echantillon Ractif de travail --1 ml Etalon 10 l -1 ml Echantillon -10 l 1 ml
BIBLIOGRAPHIE
Daly J.A, Ertingshaussen G., Clin. Chem., 18, 263 (1972). NB: Le standard est une solution aqueuse. Il est prfrable dutiliser des talons dorigine srique en particulier, pour des raisons de viscosit sur les analyseurs automatiques.
Mlanger et lire les DO aprs une incubation de 5 minutes. La coloration est stable 30 minutes.
13
FT Fr 07
Dc 2007
Biomaghreb
BIOCHIMIE ENZYMES
Page
AMYLASE
Rf. 20031 Rf. 20032 Rf. 20033 20 x 3 ml 30 x12 ml 10 x 10 ml
16
CREATINE KINASE LS
Rf. 200063 Rf. 200071 Rf. 200072 60Tests 150Tests 100Tests
17
GAMMA GT
Rf. 20021 Rf. 20022 Rf. 200222 20 x 3 ml 10 x10 ml 13 x10 ml
18
GOT-ASAT
Rf. Rf. Rf. Rf. 20042 20043 20050 200492 20046 20047 20040 200462 20011 20012 200123 200125 200126 20 x 3 10 x10 9 x 50 2 x 110 20 x 3 10 x 10 9 x 50 2 x 110 20 x 3 10 x 10 9 x 50 15 x 10 2 x 55 ml ml ml ml
19
GPT - ALAT
Rf. Rf. Rf. Rf. ml ml ml ml
20
LDH
Rf. Rf. Rf. Rf. Rf. ml ml ml ml ml
21
PHOSPHATASES ALCALINES PAL DGKC Rf. 20015 Rf. 20016 Rf. 20017 Rf. 20018
22 20 x 3 10 x 10 4 x 30 5 x 50 ml ml ml ml 23
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 20031, (60 Tests) 20 flacons x 3 ml : Ractif prt lemploi Rf 20032, (360 Tests) 30 flacons x 12 ml : Ractif prt lemploi Rf 20033, (100 Tests) 10 flacons x 10 ml : Ractif prt lemploi
ALPHA AMYLASE
Dtermination Cintique Colorimtique Directe CNPG3
MODE OPERATOIRE
Longueur donde............................................405 nm Temperature.......................................................37C Cuve...................................................1 cm paisseur Ajuster le Zro du spectrophotomtre sur lair ou leau distille. Dans un tube introduire Ractif -amylase Equilibrer 37C Echantillon
PRINCIPE
Dtermination cintique en colorimtrie de lactivit amylase du srum, plasma ou urine selon la raction :
5 CNPG3 -amylase 3 CNP + 2 CNPG2 + 2 G3 + 2 Glucose
L-amylase hydrolyse le 2-chloro-4-nitrophenyl-Dmaltotrioside (CNPG3) pour librer le 2-chloronitrophenol et former le 2-chloro-4- nitrolphenyl--D-maltoside (CNPG2), le maltriose (G3) et le glucose (G). La vitesse de formation du 2-chloro-nitrophenol mesure par la variation de la densit optique 405 nm par minute est proportionnelle lactivit -amylase dans lchantillon.
REACTIFS
Ractif CNPG3 prt lemploi renferme: 2-chloro-4-nitrophenyl-Dmaltotrioside (CNPG3) Tampon MES pH = 6 NaCL Ca (CH3 COO)2 KSCN Azide Sodium
2.5 mmol/l 50 mmol/l 250 mmo/l 4.5 mmol/l 375 mmol/l 152 mmol/l
CALCUL
amylase (U/L) Srum = D.O / min / x 3178 amylase (U/L) Urine = D.O / min / x 7829
VALEUR USUELLES
37C Srum, plasma < 100 U/l < 380 U/l
ECHANTILLON
- Srum ou plasma recueilli sur hparine ou iodo-actate (EDTA ou citrate ne doivent pas tre utiliss). - Hmolyse gnante - Urine Urine
BIBLIOGRAPHIE
Kaufman RA. Tietz NW-Clin Chem. 26: 8461 (1980) Ranson JHC.Curr Prob Surg, 16:1 ( 1979) Young DS. et al, v. clin chem, 21 (1975).
REMARQUES
Le ractif doit tre conserv entre 15 - 25C avant son utilisation. NE PAS PIPETER PAR LA BOUCHE afin dviter la contamination par lamylase salivaire.
FT Fr 08
Dc 2007
16
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 200063, (60 Tests) R1: 2 x 24 ml R2: 2 x 6 ml Rf 200071, (150 Tests) R1: 5 x 24 ml R2 : 5 x 6 ml Rf 200072, (100 Tests) R1: 6 x 24 ml R2 : 6 x 6 ml
CREATINE KINASE LS
CK-Nac activ, IFCC mthode
MODE OPERATOIRE 1- Dclenchement de la raction par le serum
Longueur donde : Temprature cuvette Zero de lappareil Ractif de travail chantillon 340nm.Hg 334 ou Hg 365 nm) +25 / +30 / +37C 1 cm de trajet optique air ou eau distille Macro 2500l 100l Semi-Micro 1000l 40l Micro 500l 20l
PRINCIPE
Dtermination cintique de la cratine kinase ractive par la N.acetylcystene selon les ractions suivantes: CK Cratine phosphate + ADP cratine + ATP D- Glucose + ATP HK D-Glucose- 6 P + ADP
G-6PDH
D-Glucose-6-phosphate- NADP
D-Gluconate-6-P+ NADPH+H
CK = cratine kinase HK= Hexokinase G-6-PDH=Glucose-6-phosphate deshydrogenase. Lactivit catalytique de la CK est determine en mesurant la vitesse dapparition du NADPH+H+ 340 nm.
mlanger et incuber 2 minutes , mesurer la variation de labsorbance par minutes pendant 1 3 min
Calcul
340nm A/min.x Hg 334nm A/min.x Hg 365nm A/min.x Macro 4130 4207 7429 Semi-Micro 4130 4207 7429 Micro 4130 4207 7429
REACTIFS
Ractif 1 Tampon imidazole Acetate pH : 6.7 Glucose Ractif 2 : Substrat N-Acetyl cysteine Cratine phosphate ADP AMP NADP Diadenosine pentaphosphate Hexokinase Glucose-6-phosphate deshydrogenase 100 mmol/l 20 mmol/l 20 mmol/l 30 mmol/l 5 mmol/l 5 mmol/l 2 mmol/l 10 mol/l 2500 Ul/l 1500 Ul/l
mlanger et incuber 2 minutes , mesurer la variation de labsorbance par minutes pendant 1 3 min.
Calcul
340nm A/min.x Hg 334nm A/min.x Hg 365nm A/min.x Macro 3965 4039 7132 Semi-Micro 3965 4039 7132 Micro 3965 4039 7132
PRELEVEMENT
Serum ou plasma prlev sur hparine non hmolys ou sur EDTA - lchantillon est stable : 7 jours : 2 - 8C 2 jours : 20 - 25C
LINEARIT
Jusquau 900 U/l 37 C si la /min est suprieure 0,200 (340 ou 334 nm) recommencer la mesure sur une dilution du serum dans une solution de chlorure de sodium 9 g/l. Multiplier le rsulat par le facteur de dilution appliqu.
VALEURS USUELLES
Hommes Femmes 25C 10-80 U/l 10-70 U/l 30C 15-130 U/l 15-110 U/l 37C 25-195 U/l 25-170 U/l
Dans tous les cas chaque laboratoire doit tablir ses propres valeurs de rfrence.
BIBLIOGRAPHIE
Bablok W. et al. A genral Regression Procedure for Method
1- transformation
JClin Chem Clin Biochem 1988 ; 26 : 78-790 Black H.R. Quallich H gareleck CB. Racial diffrences in serum 2- Creatine kinase levels Am J Med 7986 ; 81 : 479-487 GLick M.R, Ryder KW, Jackson SA. Graphital Comparisons of 3- Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986 ; 32 ; 470-474. Passing H. Bablok W. A New Biometrical Procedure for Testing the Equality of Measurements from Two Different Analytical Methods. J Clin Chem Clin Biochem 1983 ; 21 : 707-720. Guder W. G., Narayanan S., Wisser H., Zawta B. List of Analytes Preanalytical 4- Variables, Brochure in Samples : From The Patient to the Laboratory. Darnstadt GIT Veriag 1996
FT Fr 47
Oct 2008
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 20021, (60 Tests) R1 : 1 x 65 ml R2 : 20 x 3 ml (Iyoph) Rf. 20022, (100 Tests) R1 : 1 x 110 ml R2 : 10 x 10 ml (Iyoph) Rf. 200222, (125 Tests) R1 : 1 x 140 ml R2 : 13 x 10 ml (Iyoph)
GAMMA GT
Mthode colorimtrique cintique (IFCC)
PRINCIPE
Dtermination cintique de la Gamma Glutamyl transfrase selon la raction suivante:
GGT Glupa Carboxy + glycylglycine -> T L- Y Glutamylglycylglycine + 5 amino 2 nitrobenzoate
CALCUL
405 nm : Ul/l = DO/mn x 1190 410 nm : Ul/l = DO/mn x 1339
LINARIT
La mthode est linaire jusqu 500 U/l 37C. Si lactivit est suprieure, rpter le test en diluant le srum au 1/10 avec une solution de NaCI 9 g/l. Multiplier le rsultat par 10.
REACTIFS
Ractif 1 Tampon Glycylglycine Solution tampon pH 7,9 30 C Ractif 2 Substrat 150mmol/l
VALEURS USUELLES
25C 30C 8 - 38 U/l 5 - 25 U/l 37C 11 - 50 7 - 32
Glupa Carboxy
6 mmol/l
Hommes Femmes
6 - 28 U/l 4 - 18 U/l
PREPARATION ET STABILITE
Reprendre le subtrat R2 par 3 ml (rf 20021) ou 10 ml (Rf 20022 et 200222) de tampon R1. Le ractif de travail est stable 7 jours 20-25C 1 mois +4C
NOTES
Plasmas contenant des Citrates, Oxalates ou de lEDTA ne peuvent pas tre utiliss dans ce test.
ECHANTILLON
Srum non hmolys
BIBLIOGRAPHIE
Lum G. and Gabino S.R. Clin. Chem. 18, 358 (1972) Szasz G., Clin. Chem., 15, 124 (1969)
MODE OPERATOIRE
Longueur donde :405 nm (410) Temprature :25, 30 ou 37 C Cuve :................................................1 cm dpaisseur Ajuster le zro du spectrophotomtre sur lair ou leau distille.
Solution de travail
1 ml
3 ml
Mlanger et Incuber 1 minute. Mesurer laugmentation de la densit optique par minute pendant 1 3 minutes.
FT Fr 10
Dc 2007
18
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf.20042,(60 Tests) R1: 1 x 65 ml R2: 20 x 3 ml (Iyoph) Rf 20043,(100 Tests) R1: 1 x 110 ml R2: 10 x 10 ml (Iyoph) Rf. 20050, (450 tests) R1 : 9 x 50ml R2 : 9 x 50 ml (Iyoph) Rf. 200492, (220 tests) R1 : 2 x 110 ml R2 : 2 x 110 ml (Iyoph)
GOT-ASAT
Mthode cintique IFCC sans phosphate de pyridoxal
CALCUL
340 nm DO/min x 1750 = U/l
PRINCIPE
Dtermination cintique de lactivit aspartate aminotransfrase. La raction est initie par addition de lchantillon du patient au ractif. Le schma ractionnel est le suivant:
2 oxoglutarate + L-Aspartate GOT Glutamate + oxaloacetate Oxalocetate + NADH + H+ MDH Malate + NAD+
LINEARITE
Si la DO/min 340 nm est suprieure 0.15, rpter le test en diluant lchantillon au 1/10 avec une solution de NaCI 9 g/l. Multiplier le rsultat par 10.
VALEURS USUELLES
25C Femmes Hommes jusqu 16 Ul/l jusqu 19UI/I 30C Jusqu 22 Ul/l Jusqu 26 Ul/l 37C Jusqu 31UI/I Jusqu 38UI/I
Le taux de diminution de la concentration en NADH est directement proportionnel lactivit aspartate amino transferase dans lchantillon. GOT: Transaminase flutanique oxaloactique MDH: Malate Dehydrogenase
REACTIFS
Ractif 1 SolutionTampon Ractif 2 Substrat Tampon Tris PH 7.8 30C 80 mmol/l L- aspartate 200 mmol/l NADH LDH MDH Oxoglutarate 0.18 mmo/l 800 U/l 600 U/l 12 mmol/l
REMARQUE
Lhmolyse peut interfrer.
BIBLIOGRAPHIE
Bergmeyer H; Bower and Cols. Clin. Chim Acta 70, (1976) Bergmeyer H et Wahiegeld Clin. Chem 24, 58 (1978). minutes.
PREPARATION ET STABILITE
Reprendre le substrat R2 par 3 ml Rf (20042) ou10 ml Rf (20043) de Tampon R1. Pour les Rf (20050) et (200492) reconstituer chaque R2 par un flacon R1. cette solution de travail est stable : 7 jours 2-8C. : 24 heures 20-25C.
ECHANTILLON
Srum ou plasma hparin sans hmolyse.
MODE OPERATOIRE
Longueur donde..............................................340 nm Temprature................................................25-30-37C Cuve....................................................1 cm dpaisseur Ajuster le zro du spectrophotomtre sur lair ou leau distille. Solution de travail 1 ml 3 ml
Mlanger et incuber 1 minute. Mesurer la diminution de la densit optique par minute pendant 1 3 minutes. 19 FT Fr 11 Dc 2007
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 20046, (60 Tests) Rf 20047, (100 Tests) R1: 1 x 65 ml R2: 20 x 3 ml (Iyoph) R1: 1 x 110 ml R2: 10 x 10 ml (Iyoph) Rf. 20040, (450 Tests) R1: 9 x 50 ml R2: 9 x 50 ml (Iyoph) Rf. 200462, (220 Tests) R1: 2 x 110 ml R2: 2 x 110 ml (Iyoph)
GPT-ALAT
Mthode cintique (IFCC) sans phosphate de pyridoxal
PRINCIPE
Dtermination cintique de lactivit Alanine amino transfrase La raction est initie par addition de lchantillon du patient au ractif. Le schma ractionnel est le suivant: 2-oxoglutarate + L-Alanine GPT Glutamate +Pyruvate Pyruvate + NADH + H LDH
+
solution de travail
1 ml
3 ml
Lactate + NAD
Mlanger et incuber 1 minute. Mesurer la diminution de la densit optique par minute pendant 1 3 minutes.
Le taux de diminution de la concentration en NADH est directement proportionnel lactivit alanine trans ferase dans lchantillon. GPT: Transaminase Glutanique pyruvique LDH: Lactate Dehydrogenase
CALCUL
340 nm
DO/min x 1750 = UI/I
REACTIFS
Ractif 1 Tampon Tris PH 7.5 30C 100 mmol/l SolutionTampon Alanine 500 mmol/l Ractif 2 Substrat NADH LDH Oxoglutarate 0.18 mmo/l 1200 Ull 15 mmol/l
VALEURS USUELLES
25C 30C 37C
PREPARATION ET STABILITE
Reprendre le substrat R2 par 3 ml Rf (20046) ou 10 ml Rf (20047) de Tampon R1. Pour les Rf (20040) et (200462) reconstituer chaque R2 par 1 flacon R1. Cette solution de travail est stable 7 jours 2-8C. 24 heures 20-25C.
Femmes
jusqu 16 U/l
REMARQUE
Lhmolyse peut interfrer.
ECHANTILLON
Srum ou plasma hparin sans hmolyse.
BIBLIOGRAPHIE
Bergmeyer H. Schaibe and Walefeld. Clin. Chem. 24 58 - 73 (1978). Bergmeyer and Horder Clin. Chem. Acta 105 147 F (1980).
MODE OPERATOIRE
Longueur donde..................................................340 nm Temprature ................................................ 25-30-37C Cuve......................................................1 cm dpaisseur Ajuster le zro du spectrophotomtre sur lair ou leau distille.
FT Fr 12
Dc 2007
20
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 20011, (60 Tests) R1: 1 x 65 ml R2: 20 x 3 ml (Iyoph) Rf. 200123, (450 Tests) R1: 9 x 50 ml R2: 9 x 50 ml (Iyoph) Rf. 20012, (100 Tests) R1: 1 x 110 ml R2 :10 x 10 ml (Iyoph) Rf. 200125, (150 Tests) R1: 1 x 160 ml R2: 15 x 10 ml Rf. 200126, (110 Tests) R1: 2 x 55 ml R2 : 2 x 55 ml (Iyoph)
LDH
Mthode cintique SFBC
PRINCIPE
Dtermination cintique de lactivit lactate dehydrognase. Selon les recommandations de la Socit Franaise de Biologie Clinique. (SFBC) La raction est initie par addition de lchantillon du patient au ractif. Le schma ractionnel est le suivant: Pyruvate + NADH + H+ LDH L- Lactale + NAD+
CALCUL
340nm
LINEARITE
Si la DO/min 340 nm est suprieure 0.160 Rpter le test en diluant lchantillon au 1/10 ave une solution de NaCI 9 g/l. Multiplier le rsultat par 10.
Le taux de diminution de la concentration en NADH est directement proportionnel lactivit lactate deshydrogenase dans lchantillon.
VALEURS USUELLES
30C Adultes 140 280 U/l 415 690 U/l 37C 230 430 U/l 565 940 U/l
REACTIFS
Ractif 1 Solution Tampon Ractif 2 Goenzyme Tampon Tris pH 7.2 80 mmol/l Pyruvate 1.6 mmol/l NaCl 200 mmol/l NADH 0.2 mmo/l Enfants de 0 6 mois
REMARQUE
Lhmolyse peut interfrer.
PREPARATION ET STABILITE
Reprendre le substrat R2 par 3 ml (Ref 20011) ou 10 ml (Ref 20012 / 200125) de Tampon R1 Pour les rf (200126) et (200123), reconstituer chaque flaon R2 par 1 flaon de R1. Cette solution de travail est stable 15 jours 2-8C ou 24 heures 20-25C.
BIBLIOGRAPHIE
Bergmeyer, H.U., J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 13,507 (1975). Howell B.F. and coll. Clin. Chem. 25, 269 (1979). Commission Enzymologie - SFBC - Inform. Sci - Biol 1981,5.
ECHANTI LLON
Srum ou plasma hparin sans hmolyse.
MODE OPERATOIRE
Longueur donde................................................340 nm Temprature......................................................30-37C Cuve....................................................1 cm dpaisseur Ajuster le zro du spectrophotomtre sur lair ou leau distille. Solution de travail 1 ml 3 ml
Mlanger et incuber 1 minute. Mesurer la diminution de la densit optique par minute pendant 1 3 minutes.
21
FT Fr 13
Dc 2007
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 20015, (60 Tests) R1 : 20 x 3 ml R2 : 1 x 7 ml Rf. 20017, (120 Tests) R1 : 4 x 30 ml R2 : 2 x 7 ml Rf. 20016, (100 Tests) R1 : 10 x 10 ml R2 : 1 x 11 ml Rf. 20018, (250 Tests) R1 : 5 x 50 ml R2 : 2 x 14 ml
PHOSPHATASE ALCALINE
Dtermination Cintique Mthode DGKC
attendre 1 minute puis mesurer laugmentation moyenne de la D.O par minute pendant 1 3 minutes.
PRINCIPE
Dtermination cintique de lactivit phosphatase alcaline (PAL) selon la mthode recommandee par la socit allemande de chimie clinique (DGKG) PAL
nitro-4 phnylphosphate H2O -------> nitro 4 phnol+ phosphate.
CALCUL
405 nm ...............PAL (U/L) = D.O/min x 2750 410 nm ...............PAL (U/L) = D.O/min x 2910
LINEARITE
Si la variation moyenne de D.O/min > 0,250 refaire le test en diluant lchantillon au 1/5 dans une solution de NaCl 9g /l et multiplier le rsultat par 5.
REACTIFS
R1 : Ractif tampon Tampon diethanolamine (pH 9.8) Chlorure de magnsium R2 : substrat Nitro 4 phnylphosphate 1 mol/l 0.5 mmol/l
VALEURS USUELLES
25C 30C Jusqu 500 U/l 50-230 U/l 37C Jusqu 650 U/l 70-300 U/l
10 mmol/l
Enfants Adultes
PREPARATION
Ractif de travail : Rf. : 20015 R1..................................... 3 ml R2....................................0,3 ml Rf. : 20016 R1....................................10 ml R2......................................1 ml R1....................................30 ml R2......................................3 ml R1....................................50 ml R2......................................5 ml
BIBLIOGRAPHIE
Haussamen T.U. et al. Clin. Chim. Acta. 35, 271-273 (1977).
REMARQUE
Rf. : 20017 La mesure de lactivit enzymatique est meilleure dans les quatre heures qui suivent le prlvement.
Rf. : 20018
STABILITE
Stabilit du ractif de travail: - 15 - 25C ................5 jours - 2 - 8C...................15 jours
PRELEVEMENT
Srum, plasma recueilli sur hparine, non hmolys.
MODE OPERATOIRE
Longueur donde: Temprature: Cuve: Zro de lappareil: 405 nm (Hg 400-Hg 420) 25, 30 ou 37C 1 cm dpaisseur air ou eau distille
Dans un tube hmolyse introduire : Solution de travail Equilibrer 25, 30 ou 37C Echantillon 1 ml 20 l
Biomaghreb
PRESENTATION
R.f 20041(50 Tests Rf. 20039 (200 Tests TGO) TGO + 50 Tests TGP) R1: 2 x 100 ml R1 : 1 x 50ml R3: 2 x 100 ml R2 : 1 x 50 ml R3 : 1 x 100 ml R4: 1 x 14 ml R4: 1 x 9ml Rf. 20048 (100 Tests TGP) R2: 2 x 50ml R3: 2 x 50 ml R4: 1 x 9ml Rf. 20049 (100 Tests TGO) R1: 2 x 50ml R3: 2 x 50ml R4: 1 x 9ml
TRANSAMINASES
Mthode colorimtrique
Etablissement de la courbe dtalonnage sur papier millimtr: - en abscisse: nombre dunits/ml - en ordonne: densits optiques 2- Dosage Pour chaque srum, prparer les tubes suivants:
TGO 1 ml TGP 1 ml
PRINCIPE
Dtermination colorimtrique de lactivit TGO ou TGP selon les ractions suivantes :
TGO: Aspartate + ctoglutarate TGO oxaloacetate+ glutamate TGP: Alanine + ctoglutarate TGP pyruvate + glutamate
Le pyruvate ou loxaloactate forms sont doss sous forme de leurs drivs 2,4 dinitrophnylhydrazones.
REACTIFS
Ractif 1 Substrat TGO Tampon phosphate pH 7,5 aspartate ctoglutarate tampon phosphate pH 7,5 alanine. ctoglutarate. 85 mmol/l 200 mmol/l 2 mmol/l 95 mmol/l 200 mmol/l 2 mmol/I 1 mmol/l
Ractif 1 Ractif 2 Incuber 5 min 37C Srum Mlanger et mettre 37C Ractif 3
Mlanger. Attendre 5 min. Photomtrer dans les mmes conditions que la courbe dtalonnage. 3- Stabilit de la coloration :...................1 heure 4- RSULTATS Dterminer partir de la courbe dtalonnage le nombre dunits TGO et TGP par ml de srum.
STABILITE
Les ractifs sont stables plusieurs annes 2-8C. Le ractif 3 est conserver labri de la lumire Ractif auxiliaire : Soude 0,4 N
ECHANTILLONS
Srum Hmolyse gnante
LINEARITE
Pour une activit TGO > 150 units/ml, et TGP > 125 units/ml, refaire la dtermination en diluant lchantillon au 1/10me dans une solution de chlorure de sodium 9 g/l. Multiplier alors le chiffre lu sur la courbe par 10.
MODE OPERATOIRE
Longueur donde : 505 nm (490 520 nm) Zro de lappareil : eau distille 1- Courbe dtalonnage Dans des tubes essai rpartir (en ml) :
N des tubes Eau distille Ractif 1 Ractif 4 Ractif 3 1 0,2 1 1 2 0,2 0,9 0,1 1 3 0,2 0,8 0,2 1 4 0,2 0,7 0,3 1 5 0,2 0,6 0,4 1
VALEURS USUELLES
TGO : < 40 units/ml TGP : < 45 units/ml
BIBLIOGRAPHIE
REiTMANS; FRANKELS. Am. d. Clin. Path. 28,56 (1957).
Mlanger. Attendre 5 min. Photomtrer UnitsTGO/ml Units TGP/ml 0 0 22 25 55 50 95 150 83 126 23 FT Fr 15 Dc 2007
Biomaghreb
BIOCHIMIE SUBSTRATS
Page
ACIDE URIQUE Rf. Rf. Rf. Rf. ALBUMINE Rf. 20094 BILIRUBINE DIRECTE Rf. 20102 BILIRUBINE TOTALE Rf. 20103 BILIRUBINE TOTALE ET DIRECTE Rf. 20101 Rf. 20105 CALIBRATEUR BILIRUBINE TOTALE ET DIRECTE Rf. 201010 CHOLESTEROL Rf. 20111 Rf. 20112 Rf. 20115 Rf. 20118 CHOLESTERROL-HDL Rf. 20113 Rf. 200113 Rf. 200112 CREATININE Rf. 20151 Rf. 20152 Rf. 20153 GLUCOSE Rf. 20121 Rf. 20126 Rf. 20124 Rf. 20127 Rf. 20122 PROTEINES TOTALES Rf. 20161 Rf. 20162 TRIGLYCERIDES Rf. 20131 Rf. 20132 Rf. 20138 UREE COLOR Rf. 20141 Rf. 20146 Rf. 20148 UREE UV Rf. 20143 Rf. 20147
25
26 20091 20092 20095 20096 3 x 125 4 x 30 2 x 120 5 x 120 ml ml ml ml 27 4 x 250 ml 28 2 x 160 ml 29 2 x 160 ml 30 2 x 160 ml 2 x 250 ml 31 10 x 3 ml 32 3 x 120 4 x 30 6 x 100 5 x 120 ml ml ml ml 33 5 x 5 ml 10 x 10 ml 1x 5m 34 2 x 160 ml 3 x 1000 ml 2 x 500 ml 35 2 x 500 5 x 200 6 x 500 4 x 100 3 x 1000 ml ml ml ml ml 36 450 ml 1000 ml 37 2 x 120 ml 4 x 30 ml 5 x 120 ml 38 2 x 200 ml 1 x 500 ml 2 x 500 ml 39 4 x 50 ml 9 x 50 ml
Biomaghreb
PRESENTATION
Ref. 20091, (375 Tests) R1 : 3 x 125 ml R : 3 flacons (Iyoph) R3 : 1 x 6 ml Rf 20092, (120 Tests) Rl : 4 x 30 ml R2 : 4 flacons (Iyoph) R3 : 1 x 4 ml Rf 20095, (240 Tests) R1 : 2 x 120 ml R2 : 2 flacons (Iyoph) R3 : 1 x 5ml Rf 20096, (600 Tests) Rl : 5 x 120 ml R2 : 5 flacons (Iyoph) R3 : 2 x 6 ml
ACIDE URIQUE
Test colorimtrique Uricase-PAP
CALCUL
D.O. Echantillon Acide urique = D.O. Standard xn
2H202 + Amino-4-antipyrine
Proxydase
REACTIFS
Ractif 1 Solution tampon Ractif 2 Enzymes Ractif 3 Standard Tampon phosphate pH 7.4 Dichloro 2-4 Phnolsulfonate Uricase Peroxydase Amino-4-Antipyrine Acide urique 50mmol/l 4 mmol/l 70 U/l 660 U/l 1 mmol/l 6 mg/dl 60 mg/l 357 mol/l
LINEARITE
La mthode est linaire jusqu 250 mg/l (25 mg/dl = 1487,5 mol/l). Si la concentration en acide urique est suprieure 250 mg/l, recommencer le test sur un chantillon dilu au 1/2 avec une solution de NaCI 9 g/l. Multiplier le rsultat par 2.
VALEURS USUELLES
Srum ou plasma Femmes 2.5 - 6.0 mg/dl 25 - 60 mg/l 148 - 357 mol/l 3.4 - 7.0 mg/dl 34 - 70 mg/l 200 - 416 mol/l 250 - 750 mg/24 h
PREPARATION ET STABILITE
Dissoudre le Iyophilisat R2 avec le contenu dun flacon Tampon R1 Rf (20091), (20092), (20095), (20096). Le ractif de travail est stable : 7 jours 20-25C 3 semaines 2-8C
Hommes
ECHANTILLONS
Srum, plasma recueilli sur hparine Urine dilue au 1/10 dans leau distille.
Urine
MODE OPERATOIRE
Longueur donde :.........................510 nm (490-550) Temprature :................................20-25C ou 37C Cuve :............................................1 cm dpaisseur Ajuster le zro du spectrophotomtre sur le blanc ractif.
Si les urines sont troubles, les chauffer 60C pendant 10 mn afin de dissoudre lacide urique.
BIBLIOGRAPHIE
Barham et Trinder, Analyst 97, 142 (1972) Fossati et Principe, Clin. Chem. 28, 227 (1980)
Mlanger, lire les DO aprs une incubation de 5 min. 37 C ou de 10 min. 20 - 25C. La coloration est stable 30 minutes.
FT Fr 16
Dc 2007
26
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf : 20094; (500 Tests) R1 : 4 x 250 ml R2 : 2 x 3 ml
ALBUMINE
Test colorimtrique Mthode BCG
PRINCIPE
Dosage colorimtrique de lalbumine srique avec le vert de bromo-crsol.
CALCUL
D.O chantillon D.O Etalon xn
REACTIFS
Ractif R1: Ractif de coloration Ractif R2: Etalon Vert de Bromo-crsol Tampon succinate Brij Albumine bovine 0,14 g/l 75 mmo/l 7 ml /l 50 g / l 724 mol/l g/I : n = 50 mol/l : n = 724,5
NOTES
Les ractifs doivent tre ramens la temprature ambiante avant leur utilisation.
LINEARITE STABILITE
Conserver les ractifs entre 2-8C jusqu la date de premption indique sur le coffret. La mthode est linaire jusqu 1000 mol/l (69g/l).
VALEURS USUELLES
Srum 550-780 mol/l 38-54g/I
ECHANTILLONS
Plasmas, srums, recueillis sur hparine.
MODE OPERATOIRE
Longueur donde ..........................................628 nm Tmprature ................................................. 20-25C Cuve..................................................1 cm dpaisseur Ajuster le zro du spectrophotomtre sur le blanc ractif. Blanc ractif Echantillon Etalon (R2) Ractif (R1) 2 ml Etalon Echantillon
BIBLIOGRAPHIE
Doumas B et al. Clin. Chim Acta 31, 87 (1971). Drupt, F. Pharm. Biol 9,777 (1974).
10 l 2 ml
10 l 2 ml
Mlanger. Lire les DO aprs une incubation de 5 mn 20-25C. La coloration est stable 30 mn.
27
FT Fr 17
Dc 2007
Biomaghreb
PRESENTATION Rf. 20102, (160 Tests) R2 : 4 x 80 ml R3 : 1 x 15 ml R4 : 1 x 3 ml (Lyoph)
Etalon R4 Echantillon Ractif R2 Solution de travail (B.D) 1 ml
BILIRUBINE DIRECTE
Etalon Blanc Dosage
50 l 50 l 50 l 1 ml 50 l
PRINCIPE
Lacide sulfanilique ragit avec le nitrite de sodium pour donner de lacide sulfanilique diazot. En labsence de dimethyl sulfoxyde seule la bilirubine directe se couple avec lacide sulfanique diazot pour donner lazobilirubine.
REACTIFS
Rsctif 2 Acide sulfanilique Acide Chlorhydrique Nitrite de sodium 30 mmol/I 150 mmol/l 20 mmol/l
1 ml
1 ml
Mlanger et incuber exactement 5 minutes 37C lire Iabsorbance (A) de ltalon et lchantillon contre leurs blancs.
Ractif 3 Ractif 4
CALCUL (B.D)
[Bilirubine Directe]= Asb(A)chantillon x [Conc.talon] Asb(A) talon
ECHANTILLON
Srum ou plasma recueilli sur EDTA hparine, citrate ou florure et conserv labri de la lumire. LHmolyse est gnante.
NOTE
mol / l 0,585 mg/l 1,710
MODE OPERATOIRE
Prparation de lEtalon (R4) Reconstituer le Iyophilisat R4 avec exactement 3ml deau distille. Attendre 15 minutes. Complter la dissolution du Iyophilisat par retournements successifs du flacon. La stabilit lobscurit aprs reconstitution est de: - 2 Jours 20-25C - 4 Jours 2-8C - 6 semaines -20C Il est indispensable dtablir un facteur de calibration dans les conditions du laboratoire ds la reconstitution de ltalon R4. F= (Conc. Bilirubine Direct) talon Abs (talon) - Abs (Blanc talon) 555 nm (546 Hg) 37C 1 cm dpaisseur Blanc talon ou Blanc chantillon
LINEARIT
10 mg/dl ; 100 mg/l (170 mol/l).
VALEURS USUELLES
0,0 - 0.2 mg/dl; 0,0-2 mg/l (0,0-3,4 mol/l)
BIBLIOGRAPHIE
Hijmans Van den Bergh A.A., Muller P., Biochem, 77, 90 (1916). Walters M.l., Gerarde R.W., Microchem.15, 231 (1970).
Solution de travail (B.D) Mlanger 20 vol R2 avec 1 vol. R3 Stabilit lobscurit 6H 20 - 25C / 2 Jours 2-8C FT Fr 18 Dc 2007 28
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 20103, (160 Tests) R1 : 4 x 80 ml R3 : 1 x 15 ml R4 : 1 x 3 ml (Lyoph)
BILIRUBINE TOTALE
PRINCIPE
Lacide sulfanilique ragit avec le nitrite de sodium pour donner de lacide sulfanilique diazot. En prsence de dimthyl sulfoxyde (DMSO), la bilirubine totale se couple avec lacide sulfanilique diazot pour donner lazobilirubine. Etalon Echantillon Blanc Dosage Blanc Dosage
Etalon R4 Echantillon Ractif R1 Solution de travail (B.T) 1 ml 50 l 50 l 50 l 1 ml 50 l
REACTIFS
Rsctif 1 Acide sulfanilique Acide Chlorhydrique Dimthylsulfoxyde Nitrite de sodium 30 mmol/I 150 mmol/l 7 mmol/l 20 mmol/l
1 ml
1 ml
Ractif 3 Ractif 4
Mlanger et incuber exactement 5 minutes 37C lire Iabsorbance (A) de ltalon et lchantillon contre leurs blancs.
ECHANTILLON
Srum ou plasma recueilli sur EDTA hparine, citrate ou florure et conserv labri de la lumire.
CALCUL (B.T)
[BilirubineTotale]= Abs (A)chantillon x [Conc.talon] Abs (A) talon
MODE OPERATOIRE
Prparation de lEtalon (R4) Reconstituer le Iyophilisat R4 avec exactement 3ml deau distille. Attendre 15 minutes. Complter la dissolution du Iyophilisat par retournements successifs du flacon. Les concentrations exacts sont indiqus sur chaque flacon La stabilit lobscurit aprs reconstitution est de : - 2 Jours 20-25C - 4 Jours 2-8C - 6 semaines -20C Il est indispensable dtablir un facteur de calibration dans les conditions du laboratoire ds la reconstitution de ltalon R4. F= (Conc. Bilirubine Total) talon Abs (talon) - Abs (Blanc talon)
NOTE
mol / l 0,585 mg/l 1,710
LINEARIT
20 mg/dl ; 200 mg/l ( 340 mol).
VALEURS USUELLES
0,2 - 1.0 mg/dl ; 2 - 10 mg / I (3.4 -17 mol/l)
BIBLIOGRAPHIE
Hijmans Van den Bergh A.A., Muller P., Biochem, 77, 90 (1916). Walters M.l., Gerarde R.W., Microchem.15, 231 (1970).
LECTURE
Longueur donde : Temprature : Cuve : Zro de lappareil : 555 mn (546 Hg) 37C 1 cm dpaisseur Blanc talon ou Blanc chantillon
Solution de travail (B.T) Mlanger 20 vol R1 avec 1 vol. R3 Stabilit lobscurit 6H 20 - 25C / 2 Jours 2-8C 29 FT Fr 19 Juin 2008
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 20101, (160 Test) R1 : 2x 80 ml R2 : 2 x 80 ml R3 : 1 x 15 ml R4 : 1 x 3 ml (Lyoph) Rf 20105, (250 Tests) R1 : 2 x 125 ml R2 : 2 x 125 ml R3 : 1 x 20 ml R4 : 2 x 3 ml (Lyoph)
PRINCIPE
Lacide sulfanilique ragit avec le nitrite de sodium pour donner de lacide sulfanilique diazot. En prsence de dimthyl sulfoxyde (DMSO), la bilirubine totale se couple avec lacide sulfanique diazot pour donner lazobilirubine. Le dosage de la bilirubine directe se fait en labsence de DMSO.
REACTIFS
Ractif 1 Acide sulfanilique 30 mmol/I Acide Chlorhydrique 150 mmol/l Dimthylsulfoxyde 7 mmol/l Acide sulfanilique 30 mmol/l Acide chlorhydrique 150 mmol/l Nitrite de sodium 20 mmol/l Etalon Voir prparation de ltalon
Mlanger et incuber exactement 5 minutes 37C lire Iabsorbance (A) de ltalon et lchantillon contre leurs blancs. N.B : Diluer les chantillons de nouveau-ns ou trs ictriques au 1/5 dans une solution de NaCl 9g/l
BILIRUBINE DIRECTE
ECHANTILLON
Srum ou plasma recueilli sur EDTA hparine, citrate ou florure et conserv labri de la lumire. Hmolyse gnante pour la Bilirubine.
Solution de travail (B.D) Mlanger 20 vol R2 avec 1 vol R3, Stabilit lobscurit 6 H 20 - 25 / 2 Jours 2 - 8C
Etalon Blanc Dosage Etalon R4 Echantillon Ractif R2 Solution de travail (B.D) 1 ml 1 ml 50 I 50 I 50 I 1 ml 1 ml 50 l Echantillon Blanc Dosage
MODE OPERATOIRE
Prparation de ltalon (R4) Reconstituer le Iyophilisat R4 avec exactement 3 ml deau distille. Attendre 15 minutes. Complter la dissolution du Iyophilisat par retournement successifs du flacon. Les concentrations exacts sont indiqus sur chaque flacon. La stabilit lobscurit aprs reconstitution est de: - 2 jours 20 - 25C - 4 jours 2 - 8C - 6 semaines - 20C Il est indispensable dtablir un facteur de calibration dans les conditions du laboratoire ds la reconstitution de ltalon R4. F = (Conc. Bilirubine Totale ou Directe) talon Abs (talon) - Abs (BIanc talon)
Mlanger et incuber exactement 5 minutes 37C lire Iabsorbance (A) de ltalon et lchantillon contre leurs blancs.
NOTE
mol / I 0.585 mg/l 1.710
LECTURE
Longueur donde : Temprature: Cuve: Zro de lappareil: 555 nm (546 Hg) 37C 1 cm dpaisseur Blanc talon ou blanc chantillon
LINEARITE
VALEURS USUELLES
Bilirubine totale 0.2-1.0 mg/dl; 2-10 mg/l (3.4 - 17mol/l) Bilirubine Directe 0.0 - 0.2 mg /dl ; 0.0 - 2 mg/l (0.0 - 3.4 mol/l)
BILIRUBINE TOTALE
Solution de travail (BT) (Mlanger 20 Vol R1 avec 1 vol R3 Stabilit lobscurit 6H 20 -25C /2 Jours 2-8C FT Fr 20 Juin 2008 30
BIBLIOGRAPHIE
Hijmans Van den Bergh A.A., Muller P., Biochem, 77, 90 (1916). Walters M.l., Gerarde R.W., Microchem 15, 231 (1970).
Biomaghreb
CALIBRATEUR BILIRUBINE TOTALE ET DIRECTE CALIBRATOR FOR TOTAL AND DIRECT BILIRUBIN
PRESENTATION
Ref. 201010 10 x 3 ml (Iypoph)
PRESENTATION
Ref. 201010 10 x 3 ml (Iypoph)
Le calibrateur est constitu de bilirubine conjugue et de bilirubine non conjugue dans une matrice dalbumine bovine. Les concentrations exactes sont indique sur chaque flacon.
The calibrator containing conjugated and unconjugated bilirubin in a matrix of bovin albumin. The exact concentrations are given on each vial.
UTILISATION
Calibrage du dosage de la bilirubine totale et directe pour les techniques - Bilirubine totale (Rf: 20 103) - Bilirubine directe (Rf: 20102) - Bilirubine totale et directe (Rf: 20101) Reconstitution Ouvrir avec prcaution un flacon sans perte de Iyophilisat, le reprendre exactement par 3 ml deau distille. Attendre 15 minutes, completer la dissolution par retournement successifs de flacon (ne pas agiter).
USE
Calibrator of the determination of total and direct biliru bin of the following technique: - Total Bilirubin (Ref: 20103) - Direct Bilirubin (Ref : 20102) - Total and direct Bilirubin (Ref: 20 101)
Reconstitution
Open a vial carefully, avoinding any loss of the Iypophilized material. Reconstitute with exactly 3 ml of distilled water. Let stand for 15 minutes and then dissolve the contents completely by gently inverting the vial (do not shake).
PRECAUTION DUTILISATION
Aucune des mthodes danalyse actuellement connues ne peut garantir de faon absolue que les produits ne contiennent aucun agent pathogne transmissible.ll est recommand de les manipuler avec les prcautions dusage relatives au produit potentiellement infectieux.
PRECAUTIONS
No known analysis method can totally guarantee the absence of transmissible pathogenic agents. It is therefore recommended that these products be treated as potentially infections, and handied observing the usual safety precaution.
STABILITE
Forme Iyophilise Ce produit est stable 2-8c jusqu la date de premptions indique sur chaque conditionnement.
STABI LITY
Lyophilized form Stable at 2-8c until expiration date given on the packaging.
31
FT Fr 21
Dc 2007
Biomaghreb
PRESENTATION
Rl. 20111, (360 Tests) R1: 3 x 120 ml R2: 3 flacons (Iyoph) R3: 1 x 5 ml Ref. 20115,(600 Tests) R1 : 6 x100 ml R2 : 6 flacons (Iyoph) R3 : 2 x 5 ml Rf. 20112 (120 Tests) R1 : 4 x 30 ml R2 : 4 flacons (Iyoph) R3 : 1x 4ml Rf. 20118 (600 Tests) R1 : 5 x 120 ml R2 : 5 flacons (Iyoph) R3 : 2x 5ml
CHOLESTEROL
Test enzymatic colorimetrique (CHOD- PAP)
PRINCIPE Le cholesterol est mesur aprs hydrolyse enzymatique puis oxydation. Lindicateur quinoneimine est form partir du peroxyde dhydrogne et du amino 4 antipyrine en prsence de phenol et de peroxydase. Dtermination suivantes : enzymatique selon les ractions
Standard 10 l -1 ml
Echantillon -10 l 1 ml
Cholestrol estrase Esters de cholestrol + H2O >Cholestrol+Acides gras Cholestrol oxydase Cholestrol + O2 ->Cholestne- 4-one - 3 + H2O2 Proxydase H2O2 + Phnol + Amino- 4 - antipyrine> Quinoneimine rose
Mlanger, lire les densits optiques aprs une incu bation de 5 min. 37 C. La coloration est stable 30 minutes.
CALCUL
D.O. Echantillon Cholesterol = D.O. Standard mg/dl : g/l : mmol/l : n = 200 n=2 n = 5,17 xn
REACTIFS LINARIT
Ractif 1 Solution tampon Ractif 2 Pipes pH 6.9 Phenol Cholesterol oxydase Peroxydase Cholesterol esterase Amino-4-antipyrine 90 mmol/l 26 mmol/l 300 U/l 1250 U/l 300 U/l 0.4 mmol/l 200 mg/dl 2 g/l 5.1 7 mmol/l
La mthode est linaire jusqu 6 g/l (600 mg/dl - 15.4 mmol/l). Si la concentration en cholesterol est suprieure 6 g/l, diluer lchantillon au 1/2 avec une solution de NaCI 9 g/l et refaire le test. Multiplier le rsultat par 2.
VALEURS USUELLES
Srum, plasma 3,6 5,7 mmol/l 1,4 2,2 g/l 140 220 mg/dl
Ractif 3 Standard
PREPARATION ET STABILITE
Dissoudre le contenu dun flacon de R2 avec un flacon de tampon R1. Le ractif de travail est stable : 1 mois 20 - 25C 4 mois 2 - 8C BIBLIOGRAPHIE Trinder P., Ann. Clin. Biochem. 6, 24 (1969) Richmond, Clin. Chem. 19, 1350 (1973) Fasce C.F., Clin. Chem. 18901 (1982)
ECHANTILLONS
Srum Plasma recueilli sur hparine
MODE OPERATOIRE
Longueur donde :....................505 nm (500 - 550) Temprature :...........................37C Cuve :.......................................1 cm dpaisseur Ajuster le zro du spectrophotomtre sur le blanc ractif.
FT Fr 22
Dc 2007
32
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 20113, Kit pour 500 Tests, 5 x 5 ml Rf. 200112, Kit pour 100 Tests, 1 x 5 ml Rf. 200113, Kit pour 2000 Tests, 10 x 10 ml Kit complmentaire Rf : Rf : Rf : 20111 20112 20115 Eau distille Etalon Cholestrol 2g/l Surnageant Ractif Cholestrol enzymatique
CHOLESTEROL HDL
Blanc ractif 10l 1 ml Etalon 10 l 1 ml Dosage 10 l 1 ml
PRINCIPE
Les chylomicrons et les lipoproteines de trs faible densit (VLDL) et de faible densit (LDL) contenus dans lhantillon sont prcipits par addition dacide phosphotungstique en prsence dions magnsium. Le surnagent obtenu aprs centrifugation contient les lipoproteines de haute densit (HDL) dont le cholestrol est dos par le ractif cholestrol enzymatique (Ref: 20111 ou 20112).
Calcul
DO dosage [HDL-Cholestrol] = DO talon xn
REACTIFS
Ractif prcipitant Acide phosphotungstique 13,9 mmol/l MgCl2 6H2O 490mmol/l pH 6,2
STABILITE
Conservation 2-8C La date limite dutilisation est indique sur chaque conditionnement. Si le ractif est trouble ou color, il doit tre rejet.
n = 5,17 mmol/l n = 2 g/l Multiplier le rsultat obtenu par 1. 1 pour tenir compte de la dilution effectue lors de la prcipitation : on obtient la concentration du cholestrol li aux HDL. N.B : Une fois le flacon du ractif HDL est entam il ya possibilit de formation des cristaux brillants au fond du flacon qui nont pas dinfluence sur la qualit du produit
ECHANTILLONS
Srum ou plasma recueilli sur EDTA.
MODE OPERATOIRE
Prcipitation Diluer, dans une solution de NaCI 9 g/l, les srums dont le taux est suprieur 3,5 mmol/l de triglycrides. Srum....................................................500 l Ractif prcipitant ...................................50 l Bien mlanger, attendre 10 min. Centrifuger 15 min 5000 t/min
Risque modr si HDL cholestrol < 0,35 g/I < 0,9 mmol/l Risque lev, en particulier si :
BIBLIOGRAPHIE
1. BURSTEIN M. et al. Lipid Res.11. 583.(1970) 2. Study Group, European Atherosclerosis Society, European Heart Journal,, 9, 571 (1988) 3- ARCOL, ISB, 1989, 15, 121 -124.
33
FT Fr 23
Janvier 2008
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 20151, (320Tests) Rf. 20152, (3000Tests) Rf. 20153, (1000Tests) R1 : 1 x 500 ml R1: 2 x 80 ml R1 : 3 x 500 ml R2 : 2 x 80 ml R2 : 3 x 500 ml R2 : 1 x 500 ml R3 : 3 x 50 ml R2 : 2 x 25 ml R3 : 1 x 15 ml
CREATININE
Mthode cintique colorimtrique sans dproteinisation
CALCUL
Calculer DO = DO2 - DO1 pour le standard et les chantillons. D O Echantillon Cratinine = xn D O Standard mg/dl: mg/l: mol/l: n=2 n = 20 n = 176.8
PRINCIPE
La cratinine forme en milieu alcalin un complexe color avec lacide picrique. La vitesse de formation de ce complexe est proportionnelle la concentration de cratinine. Ractif 1 Ractif 2 Ractif 3 Standard Hydroxyde de sodium Acide picrique cratinine 1.6 mol/l 17.5 mmol/l 2 mg/dl 20 mg/l 176,8 mol/l
LINEARITE
La mthode est linaire jusqu 150 mg/l (15 mg/dl 1326 mol/l). Si la concentration en cratinine est suprieure 150 mg/l, diluer lchantillon au 1/2 avec une solution de NaCI 9 g/l et recommencer le test. Multiplier le rsultat par 2.
PREPARATION ET STABILITE
Les ractifs sont prts lemploi, stables temprature ambiante jusqu la date indique sur ltiquette. Ractif de travail: mlanger parts gales R1 et R2 Stabilit : 1 mois 20-25C.
VALEURS USUELLES
Srum 0.7 - 1.4 mg/dl 7-14 mg/l 61.8 -132.6 mol/l 15-25 mg/kg/24h
ECHANTILLONS
Srum, plasma recueilli sur hparine Urine dilue au 1/20 dans leau distille (tenir compte de la dilution pour le calcul).
MODE OPERATOIRE
Longueur donde: .............................492 nm (490 - 510) Temprature:.....................................25 - 30 ou 37 C Cuve:.................................................1 cm dpaisseur Ajuster le zro du spectrophotomtre sur lair ou leau distille.
Urine
BIBLIOGRAPHIE
Henry J.B., Clinical Diagnosis and management 17th dition, Sauders Publisher 1984. Larsen K., Clin. Chim. Acta 66, 209 (1972).
Echantillon -100 l 1 ml
Mlanger et lire les densits optiques DO1 aprs 30 sec. Lire ensuite DO2 exactement 1 minute aprs.
FT Fr 24
Dc 2007
34
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 20121, (1000 Tests ) R1 : 2 x 500 ml R2 : 2 flacons (Iyoph) R3 : 2 x 6 ml Rf 20122, (3000 Tests) R1 : 3 x 1000 ml R2 : 3 flacons (Iyoph) R3 : 3 x 11 ml Rf 20124, (3000 Tests) R1 : 6 x 500 m R2 : 6 flacons (Iyoph) R3 : 3 x 11 ml Rf 20126, (1000 Tests) R1 : 5 x 200 ml R2 : 5 flacons (Iyoph) R3 : 2 x 6 ml Rf 20127, (400 Tests) R1 : 4 x 100 ml R2 : 4 flacons (Iyoph) R3 : 1 x 5 ml
GLUCOSE
Mthode enzymatique (GOD - PAP)
CALCUL
D.O Echantillon
PRINCIPE
Dtermination enzymatique du glucose selon les ractions suivantes :
Glucose oxydase
x n
Glucose + O2 +H2O
2 H2O2+Phnol+4-Amino-antipyrine
Acide gluconique + H2 O2
Proxydase
Quinoneimine rose + 4H2O
LINARIT
La mthode est linaire jusqu 5 g/l (500 mg/dl27,8 mmol/l). Si la concentration en glucose est suprieure 5 g/l, recommencer le dosage sur lchantillon dilu au 1/2 avec une solution de NaCI 9 g/l. Multiplier le rsultat par 2.
REACTIFS
Ractif 1 Solution tampon Ractif 2 Enzymes Ractif 3 Standard Tampon Tris pH= 7 Phnol Glucose oxydase Proxydase Amino 4 -Antipyrine Glucose 100 mmol/l 0,3 mmol/l 10 000 U/l 1000 U/l 2,6 mmol/l 100 mg/dl 1g/I 5,56 mmol/l
VALEURS USUELLES
Srum, plasma 70 - 105 mg/dl 0,70 - 1,05 g/l 3,89 - 5,84 mmol/l 50 - 70 mg/dl 0,50 - 0,70 g/l 2,78 - 3,89 mmol/l
PREPARATION ET STABILITE Dissoudre le Iyophilisat R2 dans le tampon R1. Protger de la lumire. Stabilit du ractif de travail - 8 semaines 20 - 25C - 8 mois 2 - 8C ECHANTILLONS Srum (non hmolys) Plasma recueilli sur fluorure-hparine ou hparine-iodactate (non hmolys) Liquide Cphalo-rachidien. MODE OPERATOIRE Longueur donde : 505 nm (492-550) Temprature : 37 C (20-25C) Cuve : 1 cm dpaisseur Ajuster le zro du spectrophotomtre sur le blanc ractif. Blanc Standard Echantillon Ractif de travail --1 ml Standard 10 I -1 ml Echantillon -10 l 1 ml
NOTES
Les substances suivantes ninterfrent pas : Hmoglobine (jusqu 4 g/l), Bilirubine (jusqu 200 mg/l), cratinine (jusqu 100 mg/l), Galactose (jusqu 1 g/l) et EDTA (jusqu 2 g/l).
BIBLIOGRAPHIE
Dingeon B., Ann. Biol. Clin. 33,3 (1975) Lott J.A. Clin. Chem. 21. 1754 (1975) Trinder P.n Ann. Clin. Biochem 6,24 (1969)
Mlanger, lire les DO aprs une incubation de 10 minutes 37 C ou 30 mn 20-25 C. La coloration est stable 30 minutes. 35 FT Fr 25 Juin 2008
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 20161, 450 Tests R1 : 3 x 147ml R2 : 1 x 11 ml R3 : 1 x 4,5 ml Rf. 20162, 1000 Tests R1 : 4 x 245 ml R2 : 1 x 25 ml
PROTEINES TOTALES
Mthode colorimtrique au Biuret
R3 : 2 x 4 ml
PRINCIPE Les protines sriques forment un complexe bleu-violet avec les sels de cuivre en milieu alcalin. (raction du type BIURET). REACTIFS
Ractif 1 Ractif alcalin Ractif 2 Ractif de coloration Ractif 3 Etalon Tartrate de Sodium Potassium Hydroxyde de sodium lodure de potassium Sulfate de cuivre NOCIF 31.9 mmo/l 0.6 mol/l 30 mmol/l 0.6 mol/l
LINEARITE
La mthode est linaire jusqu 150 g/l
CALCUL
D.O. Echantillon Protines totales = D.O. Etalon n = 50 g/l n = 5 g/dl xn
VALEURS USUELLES
Albumine bovine 50 g/l 5g/dl
Nouveaux-ns
52-91 g/l 5.2 - 9.1 g/dl 54 - 87 g/l 5.4 - 8.7 g/dl 67 - 87 g/l 6.7 - 8.7 g/dl
PREPARATION ET STABILITE Ractif de travail Ajouter 3 ml de R2 1 flacon R1 Rf. 20161 Ajouter 5 ml de R2 1 flacon R1: Rf 20162 Stabilit de ractif de travail: 6 mois 2-8C. ECHANTILLONS Srum ou plasma heparin. MODE OPERATOIRE Longueur donde : Temprature : Cuve : 546 nm T laboratoire 1 cm dpaisseur
Enfants
Adultes
BIBLIOGRAPHIE - A. Gornall et al- J. Biol-Chem 177,751 (1949) - Henry R.J., Annal. Chem. 92, 1491 (1957) - Peter T.J. Clin. Chem. 14, 1147 (1968) - T.E. Weichselbaum: Am. J. Clin. Pathol. 16 Sect. 10-40 (1946).
1 ml
Mlanger et lire les densits optiques aprs une incubation de 5 minutes temprature ambiante.
FT Fr 26
Dc 2007
36
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf 201 31, (240 Tests) R1 : 2 x 120 ml R2 : 2 flacons (Iyoph) R3 :1 x 4 ml Rf : 20138, (600 Tests) R1 : 5 x 120 ml R2 : 5 flacons (lyoph) R3 : 2 x 5 ml Rf 20132, (120 Tests) R1 : 4 x 30 ml R2 : 4 flacons (Iyoph) R3 : 1 x 3 ml
TRIGLYCERIDES
Mthode colorimtrique enzymatique (GPO- PAP)
BLanc
Standard 10 l 1 ml
Echantillon 10 l 1ml
PRINCIPE
Les triglycrides sont dtermins selon les ractions suivantes :
Lipoprotine lipase Triglycrides > Glycrol + Acides gras
1 ml
Glycrokinase, Mg ++ Gylcrol + ATP > Glycrol -3-P + ADP Glycrol-3- Phosphate oxydase > H2O2+ Dihydroxyactone-P Glycrol-3-Phosphate + O2 Proxydase H2O2 + Amino-4-Antipyrine + chloro-4-phnol > Quinone rose +H2O
Mlanger et lire les DO aprs incubation de 5 min 37C ou de 10 min 20-25C. La coloration est stable 30 minutes.
CALCUL
D.O. Echantillon Triglycrides = D.O. Standard xn
REACTIFS
Ractif 1 Tampon pipes pH 7,2 Solution tampon Chloro-4-phnol Ractif 2 enzymes Lipoproteine lipase Glycrokinase Glycrol 3-P-Oxydase Proxydase Amino-4-antipyrine ATP Standard glycrol (en trioline) 50 mmol/l 2 mmol/l 150000 U/l 800 U/l 4000 U/l 440 U/l 0,7 mmo/l 0,3 mmol/l 200 mg/dl 2 g/l 2,28 mmol/l
LINARIT
La mthode est linaire jusqu 10 g/l (1000 mg/dl -11,4 mmol/l). Si la concentration est plus importante, diluer Ichantillon au 1/10 avec une solution de NaCI 9 g/l et refaire le dosage. Multiplier le rsultat par 10.
Ractif 3 Standard
VALEURS USUELLES
Femmes 40 - 140 mg/dl 0,40 - 1,40 g/l 0,46 - 1,60 mmol/l 60 - 165 mg/dl 0,60 - 1,65 g/l 0,68 - 1,88 mmol/l
PREPARATION ET STABILITE
Dissoudre le Iyophilisat R2 avec un flacon de tampon R1. Stabilit du ractif de travail : 1 semaine 20-25C 4 semaines 2-8C.
Hommes
NOTE
MODE OPERATOIRE Longueur donde :.............................505 nm (490-550) Temprature :....................................37C Cuve :................................................1 cm dpaisseur Ajuster le zro du spectrophotomtre sur le blanc ractif. Les triglycrides sont stables dans le srum 3 jours 2 - 8C
BIBLIOGRAPHIE
Fossati P., Prencipe I., Clin. Chem. 28, 2077 (1982) Young D., Pestaner L., Clin. Chem., 21,5 (1975)
37
FT Fr 27
Juin 2008
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 201 41, (200 Tests) R1 : 2 x 100 ml R2 : 2 flacons (Iyoph) R3 : 1 x 4ml R4 : 2 x 10 ml (10 x conc) Rf. 20146, (500 Tests) R1 : 1 x 500 ml R2 : 1 flacons (Iyoph) R3 : 1 x 5 ml R4 : 1 x 50 ml (10 x conc) Rf. 20148, (1000 Tests) R1 : 2 x 500 ml R2 : 2 flacons (Iyoph) R3 : 2 x 5 ml R4 : 2 x 50 ml (10 x conc)
UREE COLOR
Mthode Berthelot modifie
PRINCIPE
Lure est dose en cintique selon la raction suivante : Urase >
Etalon Echantillon Blanc Etalon Echantillon
Ure + H2O
2NH3 + CO2
1 ml
10 l 1 ml
10 l 1 ml
Les ions ammonium, en prsence de salicylate et dhypochlorite de sodium ragissent en formant un compos de couleur verte (Dicarboxylindophenol) dont lintensit est proportionnelle la concentration en ure.
Ractif de travail A
REACTIFS
Ractif 1 Tampon Ractif 2 EDTA Salicylate de sodium Nitroprussiate de sodium Urase Phosphate pH 6,7 2 mmol/l 60 mmol/l 32 mmol/l 30000 U/l 60 mmol/l 0,50 g/l 8,325 mmol/l 40 mmol/l 150 mmol/l
Ractif 4
1 ml
1 ml
1 ml
Mlanger, incuber 5 min, 37C ou 10 min. 20 - 25C. Lire contre le blanc. Stabilit de la coloration 2 heures labri de la lumire
CALCUL
D.O. Echantillon Ure = D.O. Etalon g/l : mmol/l : n = 0,50 n = 8,325 xn
Ractif 4 10 x [ ]
PREPARATION ET STABILITE
Le ractif 4 est complter avec 90 ml deau distille : Rf. 20141, 450 ml deau distille Rf. 20146 ou Rf. 20148 Dissoudre le flacon R2 dans le tampon R1 : ractif A. Les ractifs de travail sont stables : 6 mois 2-8C, 14 Jours 20-25C
LINEARITE
La mthode est linaire jusqu 4 g/l (66,6 mmol/l) Dans les urines, la mthode est linaire jusqu 100 g/l .
VALEURS USUELLES
Srum, plasma 15 - 40 mg /dl 0,15 - 0,40 g/l 2,49 - 6,66 mmol/l 20-35 g/24h
ECHANTILLONS
Srum, plasma recueilli sur hparine. Urine dilue au 1/50 avec de leau distille.
MODE OPERATOIRE
Longueur donde : 590 nm (578 Hg) Temprature : 25-30-37C Cuve : 1 cm dpaisseur Ajuster le zro du spectrophotomtre sur le blanc ractif.
Urine
BIBLIOGRAPHIE
Balleter, W.G., Bushaman, C.S., Tidwell, P.W., Anal. Chim. 33,59 Berthelot, M.P.E., Report Chim. Appl. 284 (1859) Mac Key, E.M., Rackeyll, J. Clin. Invest, J. Clin.Invest. 4, 295 (1927)
FT Fr 28
Juin 2008
38
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf 20143, (200 tests) R1 : 4 x 50 ml R2 : 4 flacons (Iyoph) R3 : 1 x 4 ml Rf. 20147, (450 Tests) R1 : 9 x 50 ml R2 : 9 flacons (Iyoph) R3 : 2 x 5 ml
UREE UV
Mthode cintique
CALCUL PRINCIPE
Lure est dose en cintique selon les ractions suivantes:
Urase Ure + H2O - > 2NH3 + CO2 GLDH + 2NH4 + Oxo-2-glutarate+NADH ~> L-Glutamate + NAD+ + 2H2O
. D.O. Echantillon Ure = . D.O. Standard mg/dl : n = 50 g/l : n = 0,50 mmol/l : n = 8,325 xn
LINEARITE
La mthode est linaire jusqu 2 g/l (200 mg/dl-33.3 mmol/l).
REACTIFS
Ractif 1 Tampon Ractif 2 Enzymes Tampon Tris pH 8,0 Urase GLDH NADH oxo-2 glutarate Standard ure 80 mmol/l
VALEURS USUELLES
Srum, plasma > 10 000 U/L 16 000 U/L 0,30 mmo/l 15 mmol/l 50 mg/dl 8,325 mmol/l 15 - 40 mg/dl 0,15 - 0,40 g/l 2,49 - 7,47 mmo/l 20-35 g/24 h
Urine
Ractif 3 Standard
NOTES
Ne pas utiliser danticoagulant contenant des ions fluorures ou ammonium.
PREPARATION ET STABILITE
Dissoudre un flacon de R2 dans un flacon de R1. Le ractif de travail est stable: 5 jours 20-25C 3 semaines 2-8C
BIBLIOGRAPHIE
Chaney, A. Clin. 8, 130 (1962) Fawcett J.K., J. Clin. Path.13, 15 (1960)
ECHANTILLONS
Srum, plasma recueilli sur hparine Urine dilue au 1/100 avec de leau distille.
MODE OPERATOIRE
Longueur donde : 340 nm Temprature : 25-30-37C Cuve : 1 cm dpaisseur Ajuster le zro du spectrophotomtre sur lair ou leau distille. Etalon Solution de travail 1 ml Dosage 1 ml
39
Biomaghreb
HEMATOLOGIE HEMOSTASES
Page
AUTO FIBRI 1
Rf. 30033 10 x 4 ml
42
AUTO FIBRI 2
Rf. 30034 10 x 4 ml
43
CEPHALINE-KAOLIN
Rf. 30021 Rf. 30051 6 x 3 ml 8 x 2 ml
44
CHLORURE DE CALCIUM
Rf. 30051 5 x 20 ml
44 45
FIBRINOGENE
Rf. 30031 Rf. 30032 Rf. 30035 10 x 2 ml 10 x 4 ml 5 x 10 ml
HEMOGLOBINE
Rf. 30041 Rf. 30042 Rf. 30043 50 ml 100 ml 500 ml
46
THROMBOPLASTINE CALCIQUE
Rf. 30011 Rf. 30012 12 x 4 ml 8 x 4 ml
47
41
Biomaghreb
PRESENTATION Rf. 30033, (400 Tests) R1 : 10 x 4 ml (Iyoph) R2 : 1 x 150 ml
AUTO FIBRI 1
Dtermination du fibrinogne par les automates dtection lectro-magntique
Technique automatique Diluer le plasma dans le tampon R2 Fibrnimie Faible Normale Eleve Dilutions 1: 5 1: 10 1: 20 Plasma (ml) 0.1 0.1 0.1 Ractif R2 0.4 0.9 1.9
PRINCIPE
Adaptation de la dtermination du fibrinogne au mode de dtection des appareils automatiques. En prsence dun excs de thrombine, le temps de coagulation dun plasma pralablement dilu est inversement proportionnel la quantit de fibrinogne plasmatique.
REACTIFS
Ractif 1 Ractif 2 Thrombine bovine Tampon veronal pH = 7,35
Dans la cuve de lappareil distribuer Plasma dilu 200 l Incuber 2 min 37C R1 non incub 100 l Noter le temps de coagulation Faire une double dtermination par dosage
RECONSTITUTION ET STABILITE
Reprendre le flacon R1 par le volume deau distille de
prfrence strile indique sur le flacon. Laisser la solution se stabiliser 20 minutes temprature ambiante. Stabilit aprs reconstitution : 8 h 20 - 25C 48h 2 - 8C 1 mois - 20C (Congeler par petite fraction en tube plastique).
RESULTAT
Pour chaque temps de coagulation se reporter au tableau joint dans le kit, la concentration de fibrinogne correspondante au temps de coagulation doit tre corrige comme suit: - Hmatocrite normal : (50 %) multiplier par 1,2 le rsultat obtenu sur le tableau pour tenir compte de la dilution de lanticoagulation liquide, cette majoration de 20 % est compatible avec la prcision de la mthode. - Hmatocrite anormale: Le taux de fibrinogne est obtenu en multipliant le rsulat trouv sur le tableau par : 10 - (9 Hte*) * Hte = Hmatocrite 9 - (9 Hte)
PRELEVEMENT
Le sang est prlev par ponction veineuse franche sur citrate trisodique liquide 0,11 molaires. (1 volume de citrate pour 9 volumes du sang).
Centrifuger 10 min 2500 g (4000 tr/mn) ou laisser sdimenter.
MODE OPERATOIRE
Technique manuelle Diluer le plasma au 1/10 dans le tampon R2. Cette dilution permet dobtenir habituellement un temps de coagulation compris entre 8 et 25 secondes.(fibrinmie comprise entre 1,5 et 4g/l) Si le temps de coagulation est infrieur 8 secondes rpter le teste sur une dilution au 1/20 ou ventuellement au 1/30. Dans ces derniers cas le rsultat obtenu sera multipli par 2 ou 3 respectivement. Si le temps est suprieur 25 secondes refaire le test sur une dilution au 1/5 ou ventuellement au 1/2. Dans ces derniers cas les rsultats obtenus sont diviss par 2 ou 5 respectivement. Toute dtermination doit tre faite en double Dans un tube hmolyse introduire : Plasma dilu 200 l Incuber 2 mn 37C 200 l R1 incub 37 C Dclencher simultanment le chronomtre, plonger rgulirement le crochet au milieu du tube jusqu apparition dun mince filament de fibrine et noter le temps de coagulation. FT Fr 30 Dc 2007 42
VALEURS USUELLES
Entre 2,5 et 4 g/l
BIBLIOGRAPHIE
1- Claussa : Acta Haematol 17, 137 (1957) 2- Caen J. Larrieu M.J. Sammama M. Lexpansion scientifique Paris 1975. 3- Andrew M. et al. Blood 70, 165 (1987).
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 30034, (200 - 400 Tests) R1 : 10 x 4 ml (lyoph) R2 : 1 x 150 ml
AUTO FIBRI 2
Dtermination du fibrinogne par les automates dtection optique
Dclencher simultanment le chronomtre, plonger rgulirement le crochet au milieu du tube jusqu apparition dun mince filament de fibrine et noter le temps de coagulation. Technique automatique Diluer le plasma dans le tampon R2 Fibrnimie Dilutions 1 : 10 1 : 20 1 : 40 Plasma(ml) 0,1 0,05 0,05 Ractif R2 0,9 0,95 1,95
PRINCIPE
Adaptation de la dtermination du fibrinogne au mode de dtection des appareils automatiques. En prsence dun excs de thrombine, le temps de coagulation dun plasma pralablement dilu est inversement proportionnel la quantit de fibrinogne plasmatique.
REACTIFS
Ractif 1 Thrombines Ractif 2 Diluent Thrombine bovine + Kaolin Tampon veronal pH = 7,35 Faible Normale Eleve
Dans la cuve de lappareil distribuer Plasma dilu Incuber 2 min 37C R1 non incub 200 l 100 l
RECONSTITUTION ET STABILITE
Reprendre le flacon R1 par le volume deau distille de prfrence strile indique sur le flacon. Laisser la solution se stabilise 20 minutes temprature ambiante. Stabilit aprs reconstitution: 8 h 20 - 25C 48h 2 - 8C 1 mois -20C (Congeler par petite fraction en tube plastique).
RESULTAT
Pour chaque temps de coagulation se reporter au tableau joint dans le kit, la concentration de fibrinogne correspondante au temps de coagulation doit tre corrige comme suit: - Hmatocrite normal: (50 %) multiplier par 1,2 le rsultat obtenu sur le tableau pour tenir compte de la dilution de lanticoagulation liquide, cette majoration de 20 % est compatible avec la prcision de la mthode. - Hmatocrite anormale: Le taux de fibrinogne est obtenu en multipliant le rsulat trouv sur le tableau par: 10- (9 Hte*) * Hte = Hmatocrite 9 - (9 Hte)
PRELEVEMENT
Le sang est prlev par ponction veineuse franche sur citrate trisodique liquide 0,11 M. (1 volume de citrate pour 9 volumes du sang). Centrifuger (10 minutes 2500 g (4000 tr/mn) ou laisser sdimenter. Raliser le test de prfrence dans les 6h qui suivent le prlvement.
MODE OPERATOIRE
Technique manuelle Diluer le plasma au 1/10 dans le tampon R2. Cette dilution permet dobtenir habituellement un temps de coagulation compris entre 8 et 25 secondes. (Fibrinmie comprise entre 1,5 et 4 g/l). Si le temps de coagulation est infrieur 8 secondes rpter le test sur une dilution au 1/20 ou ventuellement au 1/30. Dans ces derniers cas le rsultat obtenu sera multipli par 2 ou 3 respectivement. Si le temps est suprieur 25 secondes refaire le test sur une dilution au 1/5 ou ventuellement au 1/2. Dans ces derniers cas les rsultats obtenus sont diviss par 2 ou 5 respectivement. Dans un tube hmolyse introduire: Plasma dilu Incuber 2 mn 37C R1 incub 37 C 200 l 200 l
VALEURS USUELLES
Entre 2,5 et 4 g/l
BIBLIOGRAPHIE
1- Claussa: Acta Haematol 17, 137 (1957) 2- Caenj. Larrieu M.J, Sammama M. Lexpansion scientifique Paris (1975). 3- Andrew M. et al. Blood 70, 165 (1987).
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FT Fr 31
Dc 2007
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 30021, (180 Tests) 6 flacons (Lyoph) Ractif complmentaire Rf 30051, (1000 Tests) 5 flacons de 20 ml CaCI2 0,025 M prt lemploi
CEPHALINE - KAOLIN
Temps de Cphaline active
RESULTATS
Noter les temps de coagulation du tmoin et des plasmas tests. Le temps normal est compris entre 30 et 40 secondes. Une augmentation suprieure 8 secondes par rapport aux tmoins doit inciter procder une exploration approfondie. Lors dun examen pr-opratoire, une atteinte vasculaire ou plaquettaire, un temps de Cphaline Kaolin normal semble mettre labri dun saignement incontrolable. La zone thrapeutique du temps de Cphaline-Kaolin sous hparine se situe gnralement entre 1,5 et 2 fois le temps du tmoin.
PRINCIPE
La Cphaline, extrait de lipides crbraux, utilise comme substitut des facteurs plaquettaires, permet de mesurer globalement les dficits en facteurs plasmatiques de la thromboplastino-formation endogne. Le Kaolin est employ comme activateur des facteurs de la phase contact.
REACTIFS
Cphaline Kaolin: Reprendre le flacon par 3 ml deau distille. Laisser 15 minutes la temprature ambiante (20-25C). Agiter frquemment avant toute utilisation. Chlorure de Calcium 0,025 M (Rf. 30051) ; prt lemploi.
CONSERVATION
- Lyophilis: 3 ans + 4C. - Reconstitu: 4 semaines + 4C.
PRELEVEMENT
Prlever le sang sur citrate de sodium: 9 volumes de sang pour 1 volume danticoagulant (solution 3,8 % de citrate de sodium cristallis 5,5 H2O), centrifuger 4000 tours/minute (2500g) pendant 20 mn au moins. Le test devra tre effectu dans un dlai nexcdant pas 4 heures aprs le prlvement. On prlvera, galement dans le mme temps, deux tubes de sang tmoins qui seront traits comme celui du malade.
REACTIF AUXILIAIRE
MODE OPERATOIRE
Toute dtermination doit tre faite en double Dans un tube plac au bain marie 37C mettre successivement. Plasma du malade ou plasma tmoin Cphaline-Kaolin Aprs incubation de 3 mn, ajouter en dclanchant simultanment le chronomtre. Ca Cl2 0.025 M pr-incub 37C Noter le temps de coagulation. 0,1 ml 0,1 ml
0,1 ml
FT Fr 32
Juin 2008
44
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf 30031, (100-200 Tests) Rf 30032, (200-400 Tests) R1: 10 x 2 ml (Iyoph) R2 : 1 x 100 ml R1: 10 x 4 ml (Lyoph) R2 :1 x 150 ml Rf 30035, (250-500Tests) R1: 5 x 10 ml (Iyoph) R2 :1 x 150 ml
FIBRINOGENE
3-TECHNIQUE AUTOMATIQUE : detection electro-magntique Diluer le plasma dans le tampon R2
Fibrnimie Faible Normale Eleve Dilutions 1: 5 1:10 1: 20 Plasma (ml) 0.1 0.1 0.1
Automate
PRINCIPE
En prsence dun excs de thrombine, le temps de coagulation dun plasma pralablement dilu est inversement proportionnel la quantit de fibrinogne plasmatique.
REACTIFS
Ractif 1 Thrombine Ractif 2 Diluent Thrombine bovine Tampon veronal pH = 7,35
RECONSTITUTION ET STABILITE
Reprendre le flacon R1 par le volume deau distille de prfrence strile indique sur ltiquette. Laisser la solution se stabiliser 20 min temprature ambiante (20-25C). Stabilit aprs reconstitution : 8 h 20 - 25C / 48 h 2 - 8C 1 mois - 20C
MODE OPERATOIRE
Diluer le plasma au 1/10 dans le tampon R2. Cette dilution permet dobtenir habituellement un temps de coagulation compris entre 8 et 25 secondes. (fibrinmie comprise entre 1,5 et 4 g/l). Si le temps de coagulation est infrieur 8 secondes rpter le test sur une dilution au 1/20 ou ventuellement au 1/30. Dans ces derniers cas le rsultat obtenu sera multipli par 2 ou 3 respectivement. Si le temps est suprieur 25 secondes refaire le test sur une dilution au 1/5 ou ventuellement au 1/2. Dans ces derniers cas les rsultats obtenus sont diviss par 2 ou 5 respectivement.
N.B : Pour amliorer la dtection optique de la coagulation il faut utiliser le kaolin 10% (rprendre le flaon de lyophilisat par 2 ml deau distill (pour la rf 30031) et ajouter 10 ul de solution de Kaolin 10% dans ce flacon : cest le ractif de travail) * Le Kaolin est fournit la demande.
RESULTAT
Pour chaque temps de coagulation se reporter au tableau joint dans le kit, la concentration de fibrinogne correspondant au temps de coagulation doit tre corrige comme suit : - Hmatocrite normal : (50%) multiplier par 1,2 le rsultat obtenu sur le tableau pour tenir compte de la dilution de lanticoagulant liquide ; cette majoration de 20 % est compatible avec la prcision de la mthode. Hmatocrite anormal : Le taux de fibrinogne est obtenu en multipliant le rsultat trouv sur le tableau
1- TECHNIQUE MANUELLE
Dans un tube hmolyse introduire : Plasma dilu Incuber 2 mn 37C R1 pr-incub 37C 200 l 200 l
Dclencher simultanment le chronomtre, plonger rgulirement le crochet au milieu du tube jusqu apparition dun mince filament de fibrine et noter le temps de coagulation.
* Hte = Hmatocrite
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FT Fr 33
Fvrier 2009
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 30041 (500 tests) R1 : 1 x 50 ml Rf. 30042 (1000 tests) R1 : 1 x 100 ml Rf. 30043 (5000 tests) R1 : 4 x 125 ml
HEMOGLOBINE
Mthode colorimtrique
Stabilit de la coloration : 1 heure (viter dexposer le milieu ractionnel une lumire trop vive). CALCUL [Hemoglobine] g/l = DO
PRINCIPE Dosage de lhmoglobine par transformation en cyanmthmoglobine sous laction du ferricyanure de potassium et de cyanure de potassium. REACTIFS Ractif 1 de Drabkin 50 fois concentr Ferricyanure de potassium 30 mmol/l Cyanure de potassium 38 mmol/l phosphore monopotassique 50 mmol/l Strox 25 ml/l
chantillon
x 376
VALEURS USUELLES (Biochemists Handbook 1961) Nouveaux-ns : Enfants de 1 an : Enfants de 10 ans : Hommes : Femmes : 195 50 g/l (12 mmol/l) 112 g/l (6,95 mmol/l) 129 g/l (8 mmol/l) 160 20 g/l (9,9 mmol/l) 140 20 g/l (8,7 mmol/l)
ECHANTILLON
Sang total recueilli sur EDTA
BIBLIOGRAPHIE
Drabkin D.L. et al. - J. Biol. Chem. 1932, 98, 719. Zijlstra N.C - Clin. Chim. Acta 1960, 5, 719. INTERNATIONALCOMMITTEE FOR STANDARDI SATION HEMATOLOGY. Brit. J. Haemat. 1967, 13,71.
MODE OPERATOIRE
Solution de travail: Ractif concentr de Drabkin R1.....................1 volume Eau distille................................................. 49 volumes Stabilit 1 mois 20-25 (ne pas placer au rfrigrateur). Longueur donde : Zro de lappareil : 540nm (Hg 546) Solution de travail Dosage Echantillon Solution de travail de Drabkin Homogniser et photomtrer. 20 l 5 ml
FT Fr 34
Dc 2007
46
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 30011, (240 Tests); 12 x 4 ml (Lyoph) Rf. 30012, (160 Tests); 8 x 4 ml (Lyoph)
THROMBOPLASTINE CALCIQUE
Dtermination du taux de prothrombine (TP)
REMARQUE Un papier spcial est fourni avec chaque kit cette fin. EXECUTION DU TEST Toute dtermination doit tre faite en double. Porter pralablement la thromboplastine 37 C. Dans un tube hmolyse en verre mettre : Plasma 100 l Maintenir 2 mn 37 Thrombaplastine princub 37C 200 I - Dclencher simultanment le chronomtre - Agiter en remuant le tube - Noter le temps de coagulation - A laide de la droite de THIVOLLE convertir les temps obtenus en taux de prothrombine. - Dans le cas du traitement aux anticoagulants oraux (AVK), les rsultats peuvent tre exprims en INR (International Normalized Ratio) ainsi dfini: INR =
PRINCIPE
Le temps de Quick est un test global qui explore la coagulation extrinsque (facteurs II, Vll, V et X). Il consiste comparer les temps de coagulation dun plasma tudier par rapport un tmoin normal servant de rfrence en prsence dun excs de thromboplastine tissulaire et de calcium.
REACTIF
- Reprendre chaque flacon de Iyophilisat par le solvant, agiter dlicatement jusqu obtention dune suspension homogne. - Incuber 30 minutes 37 C avant utilisation
Conservation et stabilit:
* Lyophilis: entre 2-8C, jusqu la date limite indique sur le coffret. * Reconstitu : 30 jours + 4C 8h 37C
PRELEVEMENT
- Prlvement par ponction veineuse franche - Eviter la stase veineuse et le prlvement la seringue. - Prlvement sur citrate trisodique : un volume danticoagulant pour 9 volumes de sang. - Centrifuger pendant 15 minutes 4000 tr/min (2500 g) ou laisser sdimenter (indiffremment PRP ou PPP) - Lexamen sera pratiqu 6h au plus tard aprs le prlvement.
ISI : Index de Sensibilit International, dtermin vis-vis de la thromboplastine de rfrence de lOMS LISI est dtermin pour chaque lot de Thromboplastine calcique et il est indiqu sur le tableau de correspondance joint chaque coffret. VALEURS USUELLES - Chez un sujet normal : 70 100 % - Les taux suprieurs 100 % nont pas de signification pathologique. - Chez un sujet trait par les AVK la zone thrapeutique recherche est entre 20 % et 30 %.
ETALONNAGE
Cest la conversion du temps de Quick en secondes en taux de prothrombine exprim en % par rapport la normale (Droite de THIVOLLE). Un pool de plasmas humains normaux est dilu au 1/2, 1/3, 1/4, 1/8 dans le tampon de MICHAELIS.
1/1 100
1/3 0,5 1 33
Tracer la droite de THIOVOLLE sur papier din-verses. Temps en secondes fonction de linverse des dilutions.
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FT Fr 35
Juin 2008
Biomaghreb
HEMATOLOGIE IMMUNOHEMATOLOGIE
Page
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ANTIGLOBULINE POLYVALENTE
Rf. 30181 Rf. 30182 10 ml 5 ml
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Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 30111, flacons compte goutte (100 - 400 tests) Rf. 30112, flacons compte goutte (1000 - 4000 tests)
REACTIF
Anticorps monoclonal dorigine murine.
CONSERVATION
A + 4C Jusqu la date de premption indique. Agent conservateur : Azide de Sodium 1 Strictement rserv lusage in vitro.
PRELEVEMENT
Prlever le sang de prfrence sur anticoagulant. Sur tube sec, bien dissocier le caillot. Conserver + 4C le sang qui ne peut tre examin rapidement (aucune hmolyse ne doit tre observe).
physiologique. - Dposer dans un puit de la microplaque 25 I du ractif et 25 I de la suspension dhmaties. - Agiter lgrement la plaque sur un agitateur adapt pour homogniser le mlange. - Incuber 10 minutes + 20C. - Centrifuger 1 minute 200 - 300 g. - Agiter la plaque sur lagitateur jusqu remise en suspension complte du tmoin ngatif (25 l de ractif remplacs par 25 l deau physiologique). - Lire loeil nu.
TECHNIQUES DUTILISATION
Sur plaque non chauffe ( + 20C) * Sang total non lav - Dposer cte cte 2 gouttes de ractif et 1 goutte de sang non lav. - Mlanger laide dun agitateur par un mouvement spiral centrifuge pour former une raction circulaire de 2 cm de diamtre. - Basculer plusieurs fois la plaque pour homogniser le mlange. Lire lil nu au bout de 3 minutes. * Hmaties non laves en suspension 10% en eau physiologique - Dposer cte cte 2 gouttes du ractif et 2 gouttes de la suspension dhmaties (non laves) 10% en eau physiologique. - Mlanger laide dun agitateur par un mouvement spiral centrifuge pour former une raction circulaire de 2 cm de diamtre. - Basculer plusieurs fois la plaque pour homogniser le mlange - Lire lil nu au bout de 3 minutes.
En tubes.
- Laver 3 fois les hmaties en eau physiologique - Prparer une suspension des hmaties 5% en eau physiologique - Mlanger dans un tube, 2 gouttes du ractif et 2 gouttes de la suspension dhmaties - Centrifuger 1 minute 500 g. - Dcoller les hmaties par agitation douce des tubes - Lire lil nu
EXIGENCES PARTICULIERES
Le ractif anti-A agglutine de faon visible les globules rouges A3.
En microplaque
- Laver 3 fois les hmaties en eau physiologique. - Prparer une suspension des hmaties 5% en eau
FT Fr 36
Dc 2007
50
Biomaghreb
PRESENTATION Rf. 30131, flacons compte goutte (100 - 400 tests) Rf. 30132, flacons compte goutte (1000 - 4000 tests)
REACTIF Anticorps monoclonal dorigine murine. CONSERVATION A + 4C jusqu la date de premption indique sur tiquette. Agent conservateur: Azide de sodium 1. Strictement rserv lusage in vitro. PRELEVEMENT Prlever le sang de prfrence sur anticoagulant. Sur tube sec, bien dissocier le caillot. Conserver + 4 C le sang qui ne peut tre examin rapidement (aucune hmolyse ne doit tre observe).
- Prparer une suspension des hmaties 5 % en eau physiologique. - Dposer dans un puit de la micro plaque 25 l de la suspension dhmaties. - Agiter lgrement la plaque sur un agitateur adapt pour homogniser le mlange. - Incuber 10 minute + 20C. - Centrifuger 1 minute 200 - 300 g. - Agiter la plaque sur lagitateur jusqu remise en suspension complte du tmoin ngatif (25 l de ractif remplacs par 25 l deau physiologique). - Lire lil nu.
TECHNIQUES DUTILISATION
Sur plaque non chauffe ( + 20C) *Sang total non lav - Dposer cte cte 2 gouttes de ractif et 1 goutte de sang total non lav. - Mlanger laide dun agitateur par un mouvement spiral centrifuge pour former une raction circulaire de 2 cm de diamtre. - Basculer plusieurs fois la plaque pour homogniser le mlange. - Lire lil nu au bout de 3 minutes. *Hmaties non laves en suspension 10 % en eau physiologique: - Dposer cte cte 2 gouttes du ractif et 2 gouttes de la suspension dhmaties (non laves) 10 % en eau physiologique. - Mlanger laide dun agitateur par un mouvement spiral centrifuge pour former une raction circulaire de 2 cm de diamtre. - Basculer plusieurs fois la plaque pour homogniser le mlange. - Lire lil nu au bout de 3 minutes.
En tube
- Laver 3 fois les hmaties en eau physiologique. - prparer une suspension des hmaties 5% en eau physiologique. - Mlanger dans un tube, 2 gouttes du ractif et 2 gouttes de la suspension dhmaties. - Centrifuger 1 minute 500 g. - Dcoller les hmaties par agitation douce des tubes. - Lire lil nu. EXIGENCES PARTICULIERES Le ractif anti-A agglutine de faon visible les globules rouges Ax.
En micro plaque
- Laver 3 fois les hmaties en eau physiologique.
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FT Fr 37
Dc 2007
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 30121, flacons compte goutte (100 - 400 tests) Rf. 30122, flacons compte goutte (1000 - 4000 tests)
REACTIF
Anticorps monoclonal dorigine murine. - Prparer une suspension des hmaties 5 % en eau physiologique. - Dposer dans un puit de la micro plaque 25 l de la suspension dhmaties. - Agiter lgrement la plaque sur un agitateur adapt pour homogniser le mlange. - Incuber 10 minute + 20C. - Centrifuger 1 minute 200 - 300 g. - Agiter la plaque sur lagitateur jusqu remise en suspension complte du tmoin ngatif (25 l de ractif remplacs par 25 l deau physiologique). - Lire loeil nu.
CONSERVATION
A + 4C jusqu la date de premption indique sur ltiquette. Agent conservateur : Azide de sodium 1. Strictement rserv lusage in vitro.
PRELEVEMENT
Prlever le sang de prfrence sur anticoagulant. Sur tube sec, bien dissocier le caillot. Conserver + 4 C le sang qui ne peut tre examin rapidement ( aucune hmolyse ne doit tre observe).
TECHNIQUES DUTILISATION
Sur plaque non chauffe ( + 20C) *Sang total non lav - Dposer cte cte 2 gouttes de ractif et 1 goutte de sang total non lav. - Mlanger laide dun agitateur par un mouvement spiral centrifuge pour former une raction circulaire de 2 cm de diamtre. - Basculer plusieurs fois la plaque pour homogniser le mlange. - Lire lil nu au bout de 3 minutes. * Hmaties non laves en suspension 10 % en eau physiologique : - Dposer cte cte 2 gouttes du ractif et 2 gouttes de la suspension dhmaties (non laves) 10 % en eau physiologique. - Mlanger laide dun agitateur par un mouvement spiral centrifuge pour former une raction circulaire de 2 cm de diamtre. - Basculer plusieurs fois la plaque pour homogniser le mlange. - Lire lil nu au bout de 3 minutes.
En tube
- Laver 3 fois les hmaties en eau physiologique. - prparer une suspension des hmaties 5% en eau physiologique. - Mlanger dans un tube, 2 gouttes du ractif et 2 gouttes de la suspension dhmaties. - Centrifuger 1 minute 500 g. - Dcoller les hmaties par agitation douce des tubes. - Lire lil nu.
EXIGENCES PARTICULIERES
Le ractif anti-B agglutine de faon visible les globules rouges B3.
En micro plaque
- Laver 3 fois les hmaties en eau physiologique.
FT Fr 38
Dc 2007
52
Biomaghreb
PRESENTATION Rf. 30141, flacons compte goutte (100 - 400 tests) Rf. 30142, flacons compte goutte (1000 - 4000 tests)
CONSERVATION
A + 4C jusqu la date de premption indique sur tiquette. Agent conservateur : Azide de sodium 1 . Strictement rserv lusage in vitro.
PRELEVEMENT
Prlever le sang sur anticoagulant. Conserver + 4C le sang qui ne peut tre examin rapidement (aucune hmolyse ne doit tre observe).
TECHNIQUES DUTILISATION
Sur plaque chauffante + 40C ( Rhsuscope ): - Dposer cte cte 1 goutte de ractif et 1 goutte de sang total non lav. - Mlanger laide dun agitateur par un mouvement spiral centrifuge pour former une raction circulaire de 2 cm diamtre. - Basculer plusieurs fois le rhsuscope pour homogniser le mlange. - Lire lil nu au bout de 3 minutes.
EXIGENCES PARTICULIERES
Le ractif anti-D monoclonal albumineux est capable dagglutiner les chantillons D faibles en technique de Coombs indirect (Standard ou Basse Force Ionique). Pour chaque chantillon, il convient dutiliser en parallle un tmoin ngatif albumineux pour ractifs monoclonaux albumineux anti-Rhsus. Labsence dagglutination avec le tmoin permet daffirmer la spcificit dune raction positive avec lanti-D.
53
FT Fr 39
Dc 2007
Biomaghreb
PRESENTATION
Rt. 30181, flacons compte goutte (100 Tests) Rf. 30182, flacons compte goutte (50 Tests)
ANTIGLOBULINE POLYVALENTE
Ractif pour Test de Coombs
REACTIF
Srum dorigine animale.
CONSERVATION
A + 4C jusqu la date de premption indique sur ltiquette. Agent conservateur : Azide de sodium 1 Strictement rserv lusage in vitro.
TECHNIQUES DUTILISATION
- Test de Coombs indirect standard . Prparer une suspension 5% en eau physiologique des hmaties pralablement laves 3 fois en eau physiologique. . Mlanger dans un tube 2 gouttes de srum ou de ractif et 2 gouttes de la suspension dhmaties 5%. . Incuber 45 mn + 37C. . Laver 3 fois en eau physiologique (bien essorer aprs le dernier lavage). . Ajouter une goutte dantiglobuline polyvalente. . Centrifuger 1 mn 500 g. . Lire lagglutination macroscopiquement aprs une lgre agitation ou au microscope (x100) aprs talement sur lame. - Test de Coombs Indirect en Basse Force lonique (Tampon LISS) Technique identique mais en utilisant des hmaties laves et remises en suspension 3% en milieu BFI. Incuber 15 mn + 37C. - Test de Coombs direct Technique identique en supprimant ltape sensibilisation des hmaties.
de
INTERPRETATION
Il est recommand de raliser les tmoins suivants :
FT Fr 40
Dc 2007
54
Biomaghreb
ASO LATEX
Rf. 40037 Rf. 40023 50 tests 100 tests
56
CRP LATEX
Rf. 40034 Rf. 40043 50 tests 100 tests
57
58
STREPTOLYSINE ETALONNE
Rf. 40021 Rf. 40022 6 X 3 doses 10 x 3 doses
59
TPHA
Rf. 40011 Rf. 40012 100 test 300 test
61
UCG 25
Rf. 40032 Rf. 40033 Rf. 40034 20 bandelettes 100 bandelettes 40 bandelettes
62
55
Biomaghreb
PRESENTATION Rf. 40037 (50 tests) Rf. 40023 (100 tests)
ASO LATEX
Dtection srologique sur particules de latex danticorps antistreptolysine
PRINCIPE
Mise en vidence des anticorps antistreptolysine O (ASO) par raction dagglutination sur carte de particules de latex sensibilises par de la streptolysine O stabilise. Le ractif est standardis par rapport ltalon de lO.M.S.
LECTURE
Raction positive (agglutination) : prsence danticorps antistreptolysine O un taux suprieur 200 Ul/ml (seuil pathologique). Raction ngative (suspension homogne) : absence danticorps antistreptolysine O ou prsence un taux infrieur 200 Ul/ml.
REACTIFS
Latex ASO Homogniser soigneusement avant utilisation Flacon compte-gouttes Prt lemploi Flacon compte-gouttes Prt lemploi Cartes pour ralisation du test
Contrle positif
Contrle ngatif
Cartes Agitateurs
INTERPRETATION
Agitateurs usage unique pour mlange ractifs-chantillons et Les infections dues aux streptocoques du groupe A peuvent tre suivies de nombreuses et svres complications dont le rhumatisme articulaire aigu et la glomrulonphrite aigu. Le diagnostic biologique dune streptococcie rcente ou en cours est essentiellement dordre immunologique, notamment au moment o le germe responsable ne peut tre retrouv bactriologiquement. Les antistreptolysines O sont les anticorps les plus couramment recherchs. Dans 80 % des infections streptococciques, le taux en ASO slve au-del de 200 Ul/ml, valeur dfinie comme limite pathologique. Il est recommand de confirmer le diagnostic en rptant les tests sur un srum prlev 15 jours plus tard.
ECHANTILLONS
Srums frais ou conservs -20C , prsentant une coagulation complte. Rejeter tout srum lipmique ou contamin. Ne pas utiliser de plasma.
MODE OPERATOIRE
Ramener les ractifs et les srums tester temprature ambiante (18-25C).
TEST QUALITATIF
Dpose successivement sur la carte : -1 goutte du contrle positif -1 goutte du contrle ngatif -1 goutte des srums tester - A ct de chaque dpt, ajouter, laide du compte gouttes tenu verticalement 1 goutte de ractif latex ASO bien homognis. - Mlanger laide dun agitateur. - Imprimer la carte un lent mouvement de rotation. Noter lapparition dune agglutination en 3 minutes exactement. FT Fr 41 Dc 2007
BIBLIOGRAPHIE
Alouf, J.E. and Raymond, M. Biochimie, 56 (1973). Bach, G. Wiatr, R.A., Anderson, T.O. and Chealte, E.: Amer, J.Clin. Path., 52 (1969). Halbert, S.P.: Ann. N.Y. Acad. Sci. 103 (1963) Klein. G.C, Baker C.N. and Jones. W.L. Appl. Microblol., 21, 999 (1979). Klein, G.C, Manual of Clin. Immunology, Ame, Soc. Microbiol, p. 264 (1976) Schimidt, K., Mueller-Eckardt, Ch. and Beckmann, A : Rheumatol, 29 (1970).
56
Biomaghreb
PRESENTATION Rf. 40034 (50 Tests) Rf. 40043 (100 Tests)
CRP LATEX
Dtection srologique sur particules de Latex de la protene C Ractive
PRINCIPE
Le CRP LATEX est un test rapide au latex pour la recherche de la Protine C Ractive (CRP). Les particules de latex, sensibilises avec des anticorps spcifiques de la CRP humaine, sont agglutines en prsence de srum de patient contenant la CRP.
LECTURE
Raction ngative : La suspension reste homogne Raction positive : agglutination nette en 2 minutes. La sensibilit du test CRP LATEX tant de 6 mg/l. Les srums donnant une raction positive ont une concentration suprieure 6mg/l de CRP.
REACTIFS
Latex anti-CRP Suspension aqueuse de particules de latex sensibilises Flacon compte-gouttes (1 goutte = 50 l) Homogneiser avant utilisation Flacon compte-gouttes (1 goutte = 50 l) Flacon compte-gouttes (1 goutte = 50 l) Cartes pour ralisation du test Agitateurs usage unique pour mlange ractifs-chantillons
Contrle positif
INTERPRETATION
Taux normal adulte 6 mg/l La concentration en CRP augmente en cas de maladies inflammatoires aigus et de tumeurs malignes. Le suivi continu des patients prsentant une concentration leve en CRP donne une bonne indication de la rponse thrapeutique de ces malades.
Contrle ngatif
Cartes Agitateurs
BIBLIOGRAPHIE
Hind. C.R.K. and M.B. Pepys nt. Med. 5-151 (1984). Singer, J.M. et al. Amer. J. Clin. Path. 28.611 (1957)
ECHANTILLONS
Srums frais ou conservs -20C depuis au moins un mois, prsentant une coagulation complte. Eliminer les srums fortement lipmiques.
MODE OPERATOIRE
Ramener les ractifs et les srums tester temprature ambiante (1 8-25C).
TEST QUALITATIF
Dposer successivement sur la carte: -1 goutte du contrle positif -1 goutte du contrle ngatif -1 goutte (50 I) de srum tester. - Placer ct de chaque dpt 1 goutte de Latex antiCRP bien homognis. - Mlanger les 2 gouttes laide dun agitateur et les taler. - Imprimer la carte un mouvement de rotation et observer lapparition ventuelle dune agglutination en 3 minutes. FT Fr 42 Dc 2007
57
Biomaghreb
PRESENTATION Rf. 40036 (50 Tests) Rf. 40024 (100 Tests)
PRINCIPE
Raction dagglutination sur carte, des particules de latex sensibilises par des gamma globulines humaines, en prsence de facteurs rhumatodes
REACTIFS
Ractif latex
Suspension aqueuse de particules
de latex sensibilises Flacon compte-gouttes (1 goutte 50 I). Bien agiter avant utilisation. Contrle positif Flacon compte-gouttes (1 goutte = 50 I) Flacon compte gouttes (1 goutte = 50 I) Cartes pour ralisation du test Agitateurs usage unique
Pour mlange ractifs chantillons
TEST SEMI-QUANTITATIF
En cas de raction positive, titrer le srum par une srie de dilutions de raison 2 en solution saline 9 g/I. Tester chaque dilution selon le protocole dcrit prcdemment. Le titre du srum en facteurs rhumatodes, exprim en Ul/ml est obtenu en multipliant linverse de la dernire dilution donnant une raction faiblement positive, par le seuil de sensibilit de la technique (6UI/ml).
Contrle ngatif
Cartes Agitateurs
INTERPRETATION
Dans le cas de polyarthrite rhumatode suspecte cliniquement, les facteurs rhumatodes sont dtects dans 80% des srums de patients. Les formes sropositives sont gnralement plus graves que les formes srongatives. En cas de positivit du test du latex, il est conseill de confirmer le rsultat par une raction de type Waaler Rose. En dehors de la polyarthrite rhumatode, des facteurs rhumatodes peuvent tre retrouvs chez 4 % des sujets atteints de lupus rythmateux dissmin, dhpatite, de cirrhose du foie, de syphilis. Dans ces cas, le taux de facteurs rhumatodes est en gnral plus faible que dans une polyarthrite rhumatode.
ECHANTILLON
Srum frais ou conservs -20C, prsentant une coagulation complte. Rejeter tout srum lipmique ou contamin.
MODE OPERATOIRE
Ramener les ractifs et les srums tester temprature ambiante (18-25C).
BIBLIOGRAPHIE
Ball, J. and Lawrence, J.S.: Ann. Rheum. Dis. 22,311 (1963) Jones, W.L. and Wiggins, G.L.: Amer. J. Clin. Path. 60, 603 (1973) Singer, J.M. and Plotz, G.M.: Am. J. Med. 21, 888, (1956) Singer, J.M. and Plotz, G.M.: JAMA, 168, 180 (1958) Waaler, S.G. Bentzon, M.W., Houba, V. and Krag, P.: Bull. Wld. Hth. Org. 42, 311 (1970).
TEST QUALITATIF
Dposer successivement sur la carte : - 1 goutte du contrle positif - 1 goutte du contrle ngatif - 1 goutte (50 I) des srums tester A ct de chaque dpt, ajouter 1 goutte de ractif Latex bien homognis. Mlanger laide dun agitateur. Imprimer la carte un lent mouvement de rotation. Noter lapparition dune agglutination en 2 minutes.
FT Fr 43
Dc 2007
58
Biomaghreb
PRESENTATION Rf. 40021 Rf. 40022 6 x 3 doses 10 x 3 doses
STREPTOLYSINE ETALONNEE
Dosage des antistresptolysines
CONSERVATION
- Lyophilise : notre streptolysine se conserve environ 3 ans + 4 C. - Reconstitue: elle doit tre utilise dans les 5 heures.
PRINCIPE
Les streptocoques hmolytiques des groupes A, C, G secrtent une enzyme: la streptolysine O prsentant une activit hmolytique sous sa forme rduite. Cette streptolysine O provoque la formation dans lorganisme danticorps ASO rvls par une raction de neutralisation de lactivit hmolytique de cette enzyme vis--vis de globules rouges de lapin.
MACROMETHODE ECHANTILLONS
- Les srums examiner ne doivent pas prsenter dhmolyse. Ils doivent tre inactivs par chauffage 56C pendant 30 minutes (Dans le cas o lon utilise des srums inactivs depuis plus de 24 heures, il est recommand de les placer nouveau au bain-marie 56C pendant 10 minutes.
REACTIFS
- Lyophilisat de streptolysine - Tampon streptolysine sous forme 10 fois concentr : Il est diluer pour lemploi : 1 partie de tampon pour 9 parties deau distille, en cas de cristallisation, rechauffer 37C pour remettre les cristaux en solution. - On utilise classiquement une suspension dhmatie de lapin 1 % dans le tampon streptolysine 1x. Toutefois le titre lev de la Streptolysine utilise permet dobtenir des rsultats identiques avec des hmaties humaines du groupe O trs soigneusement laves : 3 lavages en eau physiologique. Le dernier culot est repris dans le tampon streptolysine 1x. - Reconstitution de la Streptolysine titre : enfoncer une aiguille creuse travers le bouchon de caoutchouc de manire remplir dair le flacon sans risquer de perdre une partie de Iyophilisat. Dcapsuler et dboucher le flacon pour y introduire exactement 8 ml de solution isotonique tamponne. Reboucher et favoriser la mise en solution par une agitation modre. La Streptolysine est alors sous sa forme active. Tubes n
Dilutions Solution isotonique tampon Dilution A (srum 1/5) Dilution B (srum 1/15) Strepto reconstitue Suspension dhmatites 1% 0,25 0,25
MODE OPERATOIRE (voir Tableau) Dilutions-mres : Dans 2 tubes hmolyse A et B, introduire 2 ml de solution isotonique tamponne, Ajouter 0,5 ml de srum tudier dans le tube A (dilution ralise 1/5). Mlanger et reporter 1 ml du tube A dans le tube B (dilution ralise 1/15). Prparation des dilutions de titrage des srums examiner. Pour chaque srum, prparer 2 sries de tubes numrots 1-2-4-6-8-10 pour la dilution-mre A de srum (au 1/5) et 3-5-7-9 pour la dilution-mre B de srum (au 1/15) et deux tubes 11 et 12 pour les tmoins hmaties et streptolysine. Procder suivant le tableau en progression gomtrique. Rpartir les volumes indiqus en ml.
8
1/80 0,25 0,25
1
1/5
2
1/10 0,25 0,25
4
1/20 0,25 0,25
6
1/40 0,25 0,25
10
1/160 0,25 0,25
3
1/15
5
1/30 0,25
7
1/60 0,25
9
1/120 0,25
11
12
0,5
0,25
0,25
0,25
0,25 0,25
0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 Agiter et laisser 10 mn la temprature du laboratoire 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25
0,25
0,25
0,25
0,25
0,25
laisser 10 mn la temprature du laboratoire puis 20 mn au B.M 37C, centrifuger 3 mn 1500 tr/mn Taux dAslo en fonction du dernier tube non hmolys
50
100
200
400
800
1600
150
300
600
1200
Les taux normaux obtenus sont infrieurs 200 U.A.S. Un chiffre de 200 units ou au-dessus doit tre considr comme pathologique
59
FT Fr 44
Fv 2009
Biomaghreb
- Dilution 1/5 : 0,1 ml de srum + 0,4 ml de tampon - Dilution 1/15 : 0,1 ml de srum + 1,4 ml de tampon Rpartir sur microplaque (en ml)
1re RANGE N DES CUPULES Dillution de srum Solution Isotonique tamponne Dilution du srum 1/5 Dilution du srum 1/15 Mlange prcdent Streptolysine reconstitue
-->
1 1/5
1/10 1/20 1/40 1/80 1/60 1/15 1/30 1/60 1/120 1/240 Hmatie Strepto 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,10 0,05
0,05
--> 0,05-> 0,05- > 0,05- >
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05 0,05
0,05
0,05
0,05 0,05
0,05
Laisser 10 minutes la temprature du laboratoire puis 20 minutes 37C Centrifuger la plaque 2 minutes 500 g ou laisser sdimenter 18-25
Taux dantistreptolysine du srum tudi en fonction du dernier tube non hmolys
50
100
200
400
800
1600 150
300
600
1200 2400
Les taux normaux obtenus sont infrieurs 100 UAS. Un chiffre de 200 units ou au dessus doit tre considr comme pathologique.
60
Biomaghreb
PRESENTATION Rf. 40011 Rf. 40012 (100 Tests) (300 Tests)
TPHA
Test dhmagglutination de la syphilis
PRINCIPE
Des hmaties aviaires fixes sont sensibilises par un extrait de treponema pallidum (S. Nichols). Si lchantillon tester contient des anticorps spcifiques ceux-ci forment un agglutinat avec les rythrocytes sensibilises. Les chantillons ngatifs donnent un bouton dhmaties bien dfini au fond de la cupule. Les ractions non spcifiques sont dpistes par les cellules de contrles (hmaties non sensibilises).
4+ : Voile homogne de cellules couvrant la totalit du puits, quelquefois avec des bords replis. 3+ : Voile homogne de cellules couvrant partiellement le fond du puits 2+: Voile de cellules entour par un cercle de cellules 1+ : Voile de cellules entour par un cercle plus pais de cellules Bouton de cellules avec une petite ouverture centrale
REACTIFS
- Cellules-test : hmaties de poules sensibilises avec lantigne trponmique 1 flacon de 7,5 ml - Cellules de contrle : hmaties de poule non sensibilises 1 flacon de 7,5 ml - Tampon : pour diluer le srum 1 flacon de 20 ml - Srum positif : pr-dilu au 1/20 1 flacon de 1 ml - Srum ngatif : pr-dilue au 1/20 1 flacon de 1 ml - Microplaques U en polystyrne 3 plaques fournies *Srum : Srum frais, le serum peut tre conserv 2 - 8C pendant 5 jours, pour des priodes plus longues, les srums doivent tre congels (-20 C) *Plasma : Des chantillons de plasma EDTA peuvent tre utilis pour screening dans les banques de sang.
-: Bouton de cellules avec, ou sans, une trs petite ouverture centrale Positif : de (4+) (1+) Douteux : Ngatif : Pour linterprtation des rsultats il est imperatif de les comparer avec les agglutinats des srums de contrle. Une agglutination dans la cupule 2 du test de dpistage indique la prsence dagglutination non spcifique. Dans ce cas traiter le srum de la faon suivante : 100 l de srum ajouter 400 l de cellules de contrle, agiter, et attendre 1h la temprature du laboratoire, centrifuger 5 mn 1000 trs/mn ; recommencer le test avec le surnageant, sans oublier que le srum se trouve dilu au 1/5 par ce traitement (le rediluer au 1/4 pour obtenir lquivalent de la cupule 1). Le contrle ngatif doit donner un rsultat ngatif Le contrle positif doit donner un rsultat positif dans le test qualitatif et raction positive jusqu le titre indiqu sur ltiquette du faon une double dilution, dans le test quantitatif Test qualitatif : Un rsultat positif indique la prsence danticorps anti T pallidum rsultant dune infection passe ou prsente. Un rsultat ngatif indique labsence danticorps anti-T pallidum (voir limites de la mthode). Un rsultat douteux dans le test qualitatif peut correspondre a un taux bas danticorps dans les stades prcoces de syhilis ou un taux rsiduel danticorps dans les syphilis traites. Dans ce cas, une nouvelle chantillon supplmentaire pourra tre test pour dmontrer une possible augmentation du titre des anticorps. Test quantitatif : Le titre approximatif correspondra la dernire dilution donnant une raction.
MODE OPERATOIRE
TEST QUALITATIF:
- Cupule n 1 : ajouter 10 I de srum tester 190 I de tampon on obtient une dilution au 1/20. - Mlanger soigneusement : distribuer 25 I de cette dilution dans les cupules 2 et 3. - Cupule n 2 : ajouter 75 I de cellules de contrle - Cupule n 3 : ajouter 75 I de cellules test. - Mlanger, couvrir la plaque, attendre 45 mn temprature ambiante, labri de toute source de chaleur et de toute vibration. Attention : Les srums de contrle positif et ngatif, qui doivent tre introduits dans chaque srie, sont prdilus au 1/20 : ne faire que les cupules 2 et 3.
TEST QUANTITATIF
Cupule Tampon Srum au 1/20 provenant de la cupule 1 (l) Cellules test (l) Dilution 1/N 25 75 80 25 75 160 75 75 75 75 75 75 320 640 1280 2560 5120 10240 A B 25 25 C 25 25 D 25 E 25 25 25 F 25 25 G 25 25 H 25 25
Limites du test
*Bien que le srum est lchantillon type pour tous les tests de syphilis, des chantillons de plasma EDTA peuvent tre utiliss pour screening dans les banques de sang. Cependant, certaines ractions peuvent savrer faussement positives. Dans ce cas, on devra renouveller lexprience avec du srum sur tous les tests initialement positifs ou douteux. *Les anticorps spcifiques peuvent persister pendant une longue priode, mme aprs un traitemenl russi de la maladie. Afin destimer la rponse au traitement, Iemploi dun test ragine (RPR reditest) est recommand. *La technique TPHA peut donner des ractions croises avec dautres formes dinfections a trponmes et des ractions faussement positives avec des chantillons de patients atteints de la mononuclose infectieuse, de la lpre, toxicomanes ou de maladies autoimmunes Occasionnellement, dans certains cas de syphilis primaires prcoces, les anticoprs spcifiques ne pourront pas tre dtects par la technique TPHA.
* Homognise, couvrir la plaque, et attendre 45 minutes minimum temprature ambiante labri de toutes sources de chaleur et de toutes vibrations.
61
FT Fr 45
Juin 2008
Biomaghreb
PRESENTATION
Rf. 40032 Rf. 40033 Rf. 40034 (20 Tests) (100 Tests) (40 Tests)
UCG 25
BANDELETTES
- Lchantillon urinaire peut se conserver 2 jours 4C. Dans ce cas ramener lurine la temprature du laboratoire avant essai. - Si lessai doit tre diffr plus de 24 h lchantillon doit tre congel. Avant lessai ramener lchantillon la temprature du laboratoire.
Cest un test rapide par chromatographie en une seule tape pour la recherche de lhormone chorionique gonadotrophine dans le srum et lurine.
PRINCIPE
La technique de ce test utilise la mthodologie CICA (concured Immunochromatography Assay). Elle combine dune part un anticorps monoclonal anti HCG li des particules colores contenu dans du papier absorbant fix sur la bandelette (Phase mobile). Dautre part un anticorps polyclonal anti HCG fix sur une membrane (phase stationnaire) elle mme fixe sur la bandelette. Aprs que la bandelette ait t trempe dans lchantillon, 1- Prsence dHCG LHCG prsente se lie au anticorps monoclonal anti HCG et migre sur la membrane. Le complexe AntigneAnticorps se fixe alors sur lanticorps polyclonal anti HCG greff sur la membrane de la phase stationnaire pour former un trait de couleur rose-violet dans la zone de raction. Le mlange ractionnel continuant de migrer, teinte alors une bande rose-violet dans la zone de contrle assurant que la raction sest droule correctement. 2- En absence dHCG Seule la bande suprieure de la zone de contrle apparait montrant que la raction sest droule correctement.
MODE OPERATOIRE ( voir shma au verso ) - Sortir autant de bandelettes que dchantillons tester et refermer la boite. - Plonger la bandelette dans le tube chantilion. Le niveau du srum ou de lurine ne doit pas dpasser la bande rouge sur la bandelette. - Maintenir la bandelette plonge pendant une dizaine de secondes. - Retirer la bandelette et la placer sur une surface plane.
- Lire aprs 5 10 min.
LECTURE
1- Test ngatif Seule la bande colore correspondant au contrle apparat dans la partie haute de la membrane montrant que lessai sest bien droul. 2- Test positif En plus de la bande contrle une 2me bande apparat dans la partie basse de la membrane. 3- Test douteux Un test sera douteux si aucune bande colore napparait. ll est donc recommand de repter le test ou de le renouveler sur un chantillon frais. Caractristiques du test Les concentrations suivantes dhormones ne gnrent aucune raction croise : h ISH 1 00 mUI/ml 500 mU/ml h LH 1 000 mU/ml h FSH
SENSIBILITE
UCG 25 dtecte en 5 minutes des concentrations de 25 U/ml de HCG (OMS 3me STANDARD). Des chantillons contenant des concentrations de 200 000 mU/ml ont t tests et ont toujours donn des rsultats positifs.
STOCKAGE ET STABILITE
UCG 25 bandelette doit tre conserv la temprature du laboratoire : 20 25 C. l'abri de l'humidit. Ne pas congeler.
BIBLIOGRAPHIE
1. Braunstein, G.D., Rasor J., Adler, D., Danzer H, and Wade M.E. Am. J. Obstet. Gynecol., 126, 678681 11976). 2. Braunstein, G.D., waitukaitis, J.L., Carbone, P.P., and Ross G.T., Ann. Inter. Med., 78, 39-45. (1973). 3. Morgan, F.J., Canfield, R.E., Vaitukaitis, J.L., and Ross, G.T. Endocrinology,94, 1601-1606 (1974). 4.Kohler, G. and Milstein, C., Nature, 256, 495- 497 (1975). 5.Tompson, R.J., Jackson, A.P., and langlois, N., Clin Chem., 32, 476-481 (1986). 6. Engvall, E., Methods in Enzymology, 70, 419-439 (1980). 7. Rasor, J.L., and Braunstein, G.D. Obstet. Gynecol., 50, 553-558 (1977). 8.Lenton, E.A. Neal, L.M., and Sulaiman R., Fertility and Sterility, 37, 773-778 (1982).
Biomaghreb
CONTROLE 5 minutes
SERUM OU URINE
Plonger la bandelette pendant environ 10 secondes comme indiqu ci-dessus puis la dposer sur la paillasse
NEGATIVE
POSITIVE
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