RPR-Carbn

Ensayo de aglutinacin en porta. Slo para uso "in vitro". Conservar de 2 a 8 C. INTRODUCCIN La sfilis es una enfermedad de transmisin sexual causada por Treponema pallidum. Los tipos principales de ensayos que se usan en el diagnstico de la sfilis son: floculacin o aglutinacin, ensayo de anticuerpos fluorescentes y ensayos de hemaglutinacin. APLICACIN PROPUESTA El presente mtodo se emplea en la determinacin de reaginas plasmticas en suero humano. MATERIAL NECESARIO Micropipetas. FUNDAMENTO DEL MTODO El mtodo se fundamenta en una reaccin de floculacin de una suspensin estabilizada de cristales de colesterol, cardiolipina, lecitina y partculas de carbn para facilitar la lectura de la reaccin. Este reactivo acta como antgeno frente a unos anticuerpos presentes en los enfermos de sfilis. Dichos anticuerpos reciben el nombre de reaginas luticas y su deteccin forma parte de la serologa lutica no treponmica. CONTENIDO R1 Suspensin Tapa blanca Suspensin de RPR-Carbn Tampn fosfato 10 mmol/L Azida sdica 0,95 g/L Cd. 1200401: 1 x 3 mL Cd. 1200402: 2 x 5 mL Suero humano con un ttulo de reaginas 1/2. Azida sdica 0,95 g/L. Suero animal. zida sdica 0,95 g/L. Cd. 1200401: 18 paq. x 8 Cd. 1200402: 54 paq. x 8 Cd. 1200401: 6 paq. x 25 Cd. 1200402: 20 paq. x 25 1 Los reactivos se deben conservar de 2 a 8 oC, no deben congelarse. En estas condiciones los componentes mantendrn su funcionalidad hasta la fecha de vencimiento sealada en la etiqueta. MUESTRA Utilizar suero. Los sueros mantienen su actividad durante 7 das conservados de 2 a 8 C 3 meses conservados a -20 C. No utilizar sueros hemolizados ni contaminados. No utilizar sueros altamente lipmicos pues podran dar una aglutinacin no especfica. Las muestras con restos de fibrina deben ser centrifugadas antes del ensayo. TCNICA Mtodo cualitativo 1.-Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas. 2.-Depositar 50 L de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de los controles positivo y negativo, sobre crculos distintos de un porta. 3.-Homogeneizar el reactivo R1 con agitacin suave. Invertir el frasco dispensador y presionar ligeramente para eliminar las burbujas de aire. 4.-Situar la micropipeta en posicin vertical y perpendicular al porta y dispensar una gota (20 L) de la suspensin de carbn junto a cada una de las gotas anteriores. 5.-Mezclar las gotas mediante agitacin con un palillo y extenderlas por toda la superficie interior del crculo. Emplear palillos distintos para cada muestra. 6.-Colocar el porta en el agitador rotatorio (80-100 r.p.m.) durante 8 minutos. El exceso de tiempo de reaccin puede dar lugar a la aparicin de falsos positivos. Mtodo semicuantitativo 1.- Realizar diluciones dobles de la muestra en solucin salina 9 g/L. 2.- Procesar para cada dilucin como en la prueba cualitativa. LECTURA E INTERPRETACIN Examinar microscpicamente la presencia o ausencia de aglutinacin inmediatamente despus de retirar el porta del agitador. Interpretacin Tipo de aglutinacin Agregados grandes o medianos Agregados pequeos Ningn agregado o ligera rugosidad

R2 Control positivo Tapa roja R3 Control negativo Tapa azul Portas Palillos Frasco y aguja dispensadora

Lectura R D N

Resultado Reactivo Reactivo dbil No reactivo

CALIBRACIN La sensibilidad del reactivo es trazable al material de Referencia Reference Human Ferum de CDC (Centre for Diseases Control) y comparable al reactivo RPR-card test reagent de CDC. PREPARACIN Y ESTABILIDAD El reactivo R1 es una suspensin de partculas de carbn, debe homogeneizarse, con una suave agitacin, antes de ser utilizado, pues tiende a sedimentar en reposo. Para la utilizacin del R1, se deben dispensar 20 L en cada pocillo. Para ello puede utilizarse una micropipeta ajustada a este volumen o bien dispensarse a travs de la aguja suministrada que se adapta a la botella de plstico. El trasvase del reactivo a la botella de plstico se puede realizar mediante aspiracin con la aguja. Cualquier alteracin en el volumen del reactivo podra afectar el resultado.

En el mtodo semicuantitativo se define el ttulo como la dilucin mayor que da resultado positivo. CONTROL DE CALIDAD Se recomienda utilizar el control positivo y negativo para controlar la funcionalidad del reactivo, as como modelo de comparacin para la interpretacin de los resultados. CARACTERSTICAS FUNCIONALES Umbral de deteccin: 1/16 Valor de prozona: negativo hasta 1/128

Ed. 2002 CENTIS DIAGNOSTICOS. Ave. Monumental y Carretera La Rada, km 3 1/2, Guanabacoa, C. Habana, Cuba Telfonos: (53-7) 579563 al 70, (53-7) 579524, Fax: (53-7) 339821, e-mail: comercial@centis.edu.cu
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RPR-Carbn
Sensibilidad diagnstica: 86 % en sfilis primaria y 100 % en sfilis secundaria. Especificidad diagnstica: 98 % Interferencias: Interfiere el factor reumatoideo a partir de 300 UI/mL. No interfieren: Bilirrubina hasta 342 moles/L Hemoglobina hasta 10 g/L Lpidos hasta 10 g/L LIMITACIONES DEL METODO La prueba de RPR-Carbn no es especfica para el diagnstico de sfilis. Se recomienda el ensayo de todas las muestras reactivas con mtodos treponmicos tales como el TPHA y FTA-Abs para la confirmacin de los resultados. Un resultado negativo no excluye el diagnstico de la sfilis. Pueden aparecer falsos resultados positivos en otras enfermedades tales como la mononucleosis infecciosa, neumona viral, toxoplasmosis, embarazo y enfermedades autoinmunes. PRECAUCIONES El Control positivo es un suero humano. Aunque no se ha detectado la presencia de antgeno HBs, ni anticuerpos anti-HIV, debe ser manipulado con la misma precaucin que un suero muestra. Contiene pequeas cantidades de azida sdica. Evtese el contacto con la piel daada y las mucosas. ADVERTENCIA Temperaturas elevadas del medio ambiente pueden provocar la desecacin de la muestra de reaccin sobre el porta dando lugar a un aspecto de aglutinacin que puede confundirse con un falso positivo. Se recomienda realizar el ensayo dentro de una cmara hmeda. BIBLIOGRAFA George P. Schimid. Current Opinin in Infectious Diseases 1994; 7: 34-40. Sandra A Larsen et. al. Clinical Microbiology Reviews 1995; 8 (1): 121. Sandra A Larsen et. al. A Manual of Test for Syphilis American Public Heslth 4, Association 1990: 1-192. Young. DS. Effects of drugs on clinical laboratory test, 4th ed. AACC Press, 1995. PRESENTACIN Cd.: 1200401 150 Det.: 3 mL Suspensin : 0,8 mL Control positivo : 0,8 mL Control negativo : 18 x 8 portas. : Frasco y aguja Cd.: 1200402 500 Det.: 2 x 5 mL Suspensin : 0,8 mL Control positivo : 0,8 mL Control negativo : 54 x 8 portas. : Frasco y aguja dispensadora. : Palillos.

Ed. 2002 CENTIS DIAGNOSTICOS. Ave. Monumental y Carretera La Rada, km 3 1/2, Guanabacoa, C. Habana, Cuba Telfonos: (53-7) 579563 al 70, (53-7) 579524, Fax: (53-7) 339821, e-mail: comercial@centis.edu.cu
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