ENSAYO DE AMINOCIDOS POR EL MTODO COLORIMTRICO DE LA NINHIDRINA Preparado por Nam Sun Wang Departamento de Qumica e ingeniera Biomolecular

Universidad de Maryland

MTODO La reaccin entre el alfa amino cido y la nin idrina involucra el desarrollo de color! este mecanismo se descri"e por los siguientes cinco pasos# $aso %&' es una reaccin de desaminacin o(idativa )ue elimina dos de idrgeno del alfa*aminocido para producir un alfa*imino cido+ Simultneamente! la nin idrina original se reduce y pierde un tomo de o(geno con la formacin de una mol,cula de agua+ -n el paso %.'! el grupo N/ en el alfa*imino cido es rpidamente idroli0ado para formar un alfa*ceto cido con la produccin de una mol,cula de amonaco+ -ste alfa*ceto cido se somete a una reaccin posterior de descar"o(ilacin en la -tapa %1' "a2o una condicin de calentamiento para formar un alde do )ue tiene un tomo de car"ono menos )ue el aminocido original+ Una mol,cula de di(ido de car"ono es producida a)u+ -stos tres primeros pasos producen la reduccin de la nin idrina y amonaco )ue se re)uieren para la produccin de color en los dos 3ltimos pasos %4' y %5'+ La reaccin general para las reacciones anteriores es simplemente %ligeramente imprecisa' e(presado de la siguiente manera# cido alfa* amino 6 . nin idrina ***7 89. 6 6 alde do comple2o final % a0ul' 6 1/.9 -n resumen! la nin idrina! )ue es de color amarillo en un principio! reacciona con los aminocidos y se vuelve p3rpura profundo+ -s este color p3rpura el )ue se detecta en este m,todo+ :s! tericamente slo los aminocidos conducirn al desarrollo del color+ Sin em"argo! siempre se de"e revisar la posi"le interferencia de los p,ptidos y protenas mediante la reali0acin de prue"as de "lancos! especialmente cuando este tipo de soluciones se pueden conseguir fcilmente+ ;enga en cuenta )ue! dado )ue la nin idrina es un fuerte agente o(idante! se de"e tener la proteccin adecuada al mane2ar este compuesto+ -s especialmente potente a temperaturas elevadas "a2o las

cuales se lleva a ca"o la reaccin+ -l reactivo de nin idrina manc a la piel de color a0ul y no se puede lavar de inmediato por completo si entra en contacto con la piel+ Sin em"argo! como en cual)uier otra manc a en la piel! el color se "orrar gradualmente al ca"o de un da+

LISTA DE LOS REACTIVOS Y EQUIPO A. Equipos

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;u"os de ensayo $ipetas -spectrofotmetro

B. Rea !i"os

Solucin de Nin idrina

o o

Nin idrina# <+15 g :=adir etanol# &<< ml+ >so*propanol o una me0cla &#& de acetona?"utanol puede ser utili0ados en lugar de etanol en la preparacin del reactivo de nin idrina+

PROCEDIMIENTOS :=adir & mL de la solucin de nin idrina a 5 mL de muestra+ 8u"rir el tu"o de ensayo con un tro0o de pelcula de parafina para evitar la p,rdida de disolvente de"ido a la evaporacin+ Un tu"o de ensayo tapado tam"i,n se puede utili0ar en su lugar+ 8on agitacin suave! reaccionar a @<*&<<A8 por 4*B minutos+ Si un gran "a=o de agua caliente se utili0a para toda la clase y si no ay una "uena disposicin para los tu"os de ensayo en el "a=o de agua caliente! el tu"o de ensayo puede mantenerse con un tro0o de alam"re y colgar en el lado del contenedor de agua+ Una a"ra0adera por lo general no funciona demasiado "ien+ Despu,s de enfriar a temperatura am"iente en un "a=o de agua fra! registrar la a"sor"ancia con un espectrofotmetro+ %C8mo encontrar la me2or longitud de onda )ue se utili0ar para este propsitoD Sugerencia# el comple2o de color p3rpura definitiva de nin idrina a"sor"e la mayor cantidad de lu0 en la longitud de onda de 5B< nm+' Euente# ttp#??FFF+eng+umd+edu?GnsF?enc 4@5?la"1a+ tm