APROVECHAMIENTO DEL ALMIDN DEL JUGO DE PSEUDOTALLO DEL PLTANO DOMINICO HARTN EN EL ESTUDIO DE LA HIDRLISIS CIDA ASISTIDA POR

MICROONDAS

ANDRS FELIPE MARMOLEJO VALENCIA

UNIVERSIDAD DEL QUINDO FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS Y TECNOLOGAS PROGRAMA DE QUMICA ARMENIA QUINDO 2012

APROVECHAMIENTO DEL ALMIDN DEL JUGO DE PSEUDOTALLO DEL PLTANO DOMINICO HARTN EN EL ESTUDIO DE LA HIDRLISIS CIDA ASISTIDA POR MICROONDAS

ANDRS FELIPE MARMOLEJO VALENCIA

Trabajo de grado presentado como requisito parcial para optar el ttulo de Qumico.

Directores: ANDERSON GUARNIZO FRANCO, Qco, M.Sc., profesor Universidad del Tolima. PEDRO NEL MARTINEZ YEPES, Ing.Q., M.Sc., Ph.D., profesor Titular del Programa de Qumica

UNIVERSIDAD DEL QUINDIO FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS Y TECNOLOGAS PROGRAMA DE QUMICA ARMENIA QUINDO 2012

DEDICATORIA

Este trabajo de grado es dedicado para todos los que estuvieron al pendiente de su desarrollo y culminacin, a la misma Universidad del Quindo por acogerme tan especialmente, a Natalia Rendn Londoo por brindarme muchos nimos en la terminacin del proyecto y en especial a toda mi familia, principalmente a mi padre y a mi madre, los cuales, desde el inicio de la carrera confiaron en mis capacidades y cuidaron de mi bienestar.

AGRADECIMIENTOS

Quiero agradecer a mis compaeros Miyer Alejandro Ladino Cardona y Juan David Cceres Sierra, por el trabajo conjunto realizado y los momentos que se vivieron realizndolo.

Le doy las gracias a mis directores Pedro Nel Martnez Yepes y Anderson Guarnizo Franco por acogerme en el grupo Qumico de Investigacin y Desarrollo Ambiental.

Por ltimo doy las gracias a Luis Alfonso Salazar, encargado del laboratorio de instrumental del laboratorio de qumica, al profesor Diego Arias del programa de Fsica por la colaboracin en anlisis requeridos, al laboratorio de Fsica de Plasma de la Universidad Nacional sede Manizales y el Instituto Interdisciplinario de las Ciencias de la Universidad del Quindo por la facilidad en la realizacin de los anlisis de microscopia electrnica de barrido en el ambiente y rayos X, respectivamente.

TABLA DE CONTENIDO Pgina INTRODUCCIN .................................................................................................... 1 1. MARCO TERICO Y REFERENCIAL ................................................................ 4 1.1 PLTANO CLON DOMINICO HARTN. ....................................................... 4 1.1.1 Clasificacin taxonmica ......................................................................... 4 1.1.2 Descripcin botnica................................................................................ 4 1.1.3 Destronque de la planta de pltano. ........................................................... 5 1.2 APROVECHAMIENTO DE RESIDUOS DEL PLTANO DOMINICO HARTN (MUSA AAB SIMMONDS) EN EL EJE CAFETERO. ........................... 6 1.2.1 Obtencin de papel a partir del pseudotallo. ............................................ 8 1.2.2 Jugo del pseudotallo del pltano Dominico Hartn. ................................. 9 1.2.3 Obtencin de almidn a partir de segundas y terceras generaciones del pltano verde clon Dominico Hartn. ................................................................ 9 1.4 CALENTAMIENTO POR MICROONDAS .................................................... 12 1.4.1 Proceso del calentamiento inducido por microondas ............................. 13 1.4.2 Horno microondas domstico en reacciones qumicas. ......................... 15 1.4.3 Tiempo y potencia en radiacin por microondas. .................................. 17 1.4.4 Influencia de las microondas sobre una reaccin .................................. 18 1.5 HIDRLISIS CIDA DE ALMIDN ASISTIDA POR MICROONDAS. ......... 19 1.5.1 Almidn. ................................................................................................. 19 1.5.2 Hidrlisis cida del almidn. .................................................................. 20 1.5.5 Hidrlisis enzimtica del almidn del fruto del pltano........................... 22 1.5.5 Radiacin microondas en la hidrlisis cida de almidones. ................... 23 1.6 ALGUNOS USOS DE LOS HIDROLIZADOS............................................... 27 1.7 CARACTERSTICAS DE ALMIDONES. ...................................................... 29 1.7.1 Cristalinidad por difraccin de rayos X (RX) y Espectroscopia Infrarroja con Transformada de Fourier (FTIR) y Reflectancia Total Atenuada (ATR). .. 29 1.7.2 Amilosa aparente. .................................................................................. 31 1.7.3 Energa de activacin por dinmica de anlisis termogravimtrico........ 33 1.7.4 Morfologa del grnulo de almidn por Microscopia Electrnica de Barrido en Ambiente (E-SEM) y por Microscopia ptica (MO). ...................... 35 1.7.5 Grado de ramificacin y longitud promedio de los residuos en la cadena de la amilopectina. .......................................................................................... 37 I

2. OBJETIVOS ...................................................................................................... 40 2.1 OBJETIVO GENERAL ................................................................................. 40 2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS ........................................................................ 40 3. METODOLOGA ............................................................................................... 41 3.1 CUANTIFICACIN DEL ALMIDN DEL PSEUDOTALLO DE PLTANO DOMINICO HARTN......................................................................................... 41 3.1.1 Recoleccin del material vegetal. .......................................................... 41 3.1.2 Cuantificacin del almidn en el pseudotallo. ........................................ 44 3.1.3 Humedad y materia seca en el pseudotallo. .......................................... 45 3.1.4 Mtodo de antrona modificado .............................................................. 45 3.2 OBTENCIN DE ALMIDN DESDE JUGO DE PSEUDOTALLO DE PLTANO DOMINICO HARTN POR VA HMEDA. ...................................... 46 3.2.1 Preparacin del jugo de pseudotallo. ..................................................... 46 3.2.2 Precipitacin y purificacin del almidn. ................................................ 46 3.2.3 Rendimiento del aislamiento. ................................................................. 47 3.3 HIDRLISIS CIDA DEL ALMIDN DEL PSEUDOTALLO. ....................... 47 3.3.1 Hidrlisis cida asistida por microondas ................................................ 47 3.3.2 Hidrlisis cida del almidn por incubacin ........................................... 49 3.3.3 Azcares Reductores Totales (ART) ..................................................... 50 3.3.4 Anlisis de HidroxiMetilFurfural (HMF). ................................................. 51 3.3.5 Glucosa por mtodo Glucosa Oxidasa-Peroxidasa (GOD-PAD). .......... 52 3.4 COMPARACIN ENTRE LA HIDRLISIS ASISTIDA POR MICROONDAS Y LA HIDRLISIS POR CONVECCIN. .............................................................. 53 3.5 CARACTERIZACIN DEL ALMIDN. ......................................................... 53 3.5.1 Pureza ................................................................................................... 53 3.5.2 Difraccin de Rayos X. .......................................................................... 54 3.5.3 Espectroscopia de Infrarrojo con Transformada de Fourier (FTIR) y Accesorio de Reflectancia Total Atenuada (ATR). .......................................... 54 3.5.4 Amilosa aparente. ................................................................................. 55 3.5.5 Estudio cintico de anlisis termogravimtrico para almidones. ........... 56 3.5.6 Microscopia Electrnica de Barrido en el Ambiente (E-SEM) ............... 57 3.5.7 Microscopia ptica (MO). ..................................................................... 57 3.5.8 Grado de ramificacin y longitud promedio de residuos de la amilopectina.................................................................................................... 57

II

4. ANLISIS DE RESULTADOS. ......................................................................... 60 4.1 CUANTIFICACIN DEL ALMIDN DEL PSEUDOTALLO DE PLTANO DOMINICO HARTN......................................................................................... 60 4.2 OBTENCIN DE ALMIDN DESDE EL JUGO DE PSEUDOTALLO DE PLTANO DOMINICO HARTN POR VA HMEDA. ...................................... 63 4.3 HIDRLISIS CIDA DEL ALMIDN DEL PSEUDOTALLO. ....................... 65 4.3.1 Hidrlisis cida asistida por microondas ................................................ 65 4.3.2 Hidrlisis cida del almidn por incubacin. .......................................... 69 4.3.3 Glucosa por mtodo Glucosa Oxidasa-Peroxidasa (GOD-PAD). .......... 72 4.4 COMPARACIN ENTRE LA HIDRLISIS ASISTIDA POR MICROONDAS Y LA HIDRLISIS POR CONVECCIN. .............................................................. 73 4.5 CARACTERIZACIN DEL ALMIDN. ......................................................... 76 4.5.2 Amilosa aparente. ................................................................................. 77 4.5.3 Difraccin de Rayos X. .......................................................................... 79 4.5.4 Espectroscopia de Infrarrojo con Transformada de Fourier (FTIR) y accesorio de reflectancia total atenuada (ATR). ............................................. 80 4.5.5 Cintica de anlisis termo-gravimtrico. ............................................... 82 4.5.6 Grado de ramificacin y longitud promedio de residuos de la amilopectina.................................................................................................... 87 4.5.7 Microscopia Electrnica de Barrido en el Ambiente (E-SEM) y Microscopia ptica (MO). ............................................................................... 88 CONCLUSIONES ................................................................................................. 90 RECOMENDACIONES ......................................................................................... 93 BIBLIOGRAFA .................................................................................................... 94 ANEXO A ............................................................................................................ 105 ANEXO B ............................................................................................................ 106 ANEXO C ............................................................................................................ 110 ANEXO D ............................................................................................................ 111 ANEXO E ............................................................................................................ 117

III

TABLA DE FIGURAS Pagina Figura 1. Partes importantes a tener en cuenta de la planta de pltano (Silva, C.; 2010). ...................................................................................................................... 5 Figura 2. (A) Destino del pseudotallo. (B) Destino de las segundas y terceras generaciones del fruto. (C) Destino del raquis. (D) Destino residuos foliares. (E) Destino cscara del fruto (Mazzeo, M.; et al.; 2010). ............................................. 7 Figura 3. Papel obtenido de las fibras del Pseudotallo de pltano (Mazzeo, M., et al.; 2010). ................................................................................................................ 8 Figura 4. Interaccin dipolar en molculas producida por radiacin de microondas (Carballido, M. R.; 2007). ...................................................................................... 13 Figura 5. Conduccin Inica generada por la radiacin microondas (Carballido, M. R.; 2007)................................................................................................................ 14 Figura 6. Transferencia de calor en el calentamiento convencional y microondas (Carballido, M. R.; 2007). ...................................................................................... 15 Figura 7. Perfil energtico de una reaccin (Carballido, M. R.; 2007). ................. 18 Figura 8. A) Fragmento de amilosa. B) Fragmento de amilopectina. ................... 20 Figura 9. Reaccin de la hidrlisis de un fragmento de amilosa catalizada por cido (Garca, G.; et al.; 2004). ............................................................................. 20 Figura 10. Formacin del hidroximetilfurfural desde glucosa por la accin de cidos (Dergal, B.; 1990). ...................................................................................... 21 Figura 11. Anlisis HPLC de los hidrolizados de la solucin de almidn despus de la irradiacin de microondas o termo-hidrlisis en suspensin cida. 1 Es el perfil de HPLC de dextrano (peso molecular 40 000); 2 es dextrano (PM 8800); 3 es la glucosa; 4, 5, 6, y 7 representan suspensiones de almidn que se incubaron a 100 C durante 5, 10, 20, o 60 min, respectivamente; 8, 9 y 10 representan las suspensiones de almidn sometidos a irradiacin de microondas a 30 % de la potencia total de 3, 4, o 5 min, respectivamente (Yu, H.; et al.; 1996). ................. 25 Figura 12. Medicin de la absorbancia (395-500 nm, absorcin del hidroximetilfurfural y sustancias colorantes) del hidrolizado de almidn despus de la irradiacin de microondas durante 5 minutos (curva 2) o despus de la incubacin a 100 C durante 5 min (curva 1), 30 min (curva 3) , 1 h (curva 4), 8 h (curva 5), y 24 h (curva 6). La escala de la columna vertical de la curva 6 se representa a la derecha y todos los dems estn a la izquierda (Yu, H.; et al.; 1996). .................................................................................................................... 25 Figura 13. Patrones de difraccin de Rayos X de distintos almidones (de la Rosa, J.; 2009). ............................................................................................................... 30 Figura 14. Micrografas por E-SEM de A) almidn de maz 5000x. B) almidn de yuca 500x. C) almidn de papa 1500x. D) almidn del fruto de pltano 500x (Han, Z.; et al.; 2009) (Nwokocha, L.; et al.; 2009) (Sujka, M. et al.; 2009) (Guerra, D.; et al.; 2008). .............................................................................................................. 37 Figura 15. Micrografas por MO de A) almidn de maz 400x. B) almidn de yuca 400x. C) almidn de papa 400x (Medina, J.; et al.; 2008) y D) almidn del fruto de pltano 100x (Zhang, P.; et al.; 2005). .................................................................. 37 Figura 16. Sitio de recoleccin del material (Google maps. 2012). ...................... 42 IV

Figura 17. Nombres y ubicacin de las partes analizadas en el pseudotallo del pltano. ................................................................................................................. 43 Figura 18. Muestra en cada trozo de pseudotallo desechado para cuantificacin de almidn. ............................................................................................................ 43 Figura 19. Microondas domestico marca LG HM 1449C de 2.45GHz y 1000W de potencia de salida. ................................................................................................ 48 Figura 20. Horno de recirculacin Binder serie ED............................................... 49 Figura 21. Regresin lineal para el rendimiento del aislamiento. ......................... 64 Figura 22. Medias estadsticas Factor vs %ART en sus diferentes niveles, para la hidrlisis por microondas. ...................................................................................... 66 Figura 23. %ART para cada combinacin concentracin de almidn y concentracin de cido en sus diferentes tiempos para la hidrlisis asistida por microondas. ........................................................................................................... 68 Figura 24. HMF para cada combinacin concentracin de almidn y concentracin de cido en sus diferentes tiempos para la hidrlisis asistida por microondas...... 68 Figura 25. Medias estadsticas para Factor vs %ART en sus diferentes niveles, para la hidrlisis por incubacin. ........................................................................... 70 Figura 26. %ART para cada combinacin concentracin de almidn y concentracin de cido en sus diferentes tiempos para en la hidrlisis por incubacin. ............................................................................................................ 71 Figura 27. HMF para cada combinacin concentracin de almidn y concentracin de cido en sus diferentes tiempos para en la hidrlisis por incubacin. .............. 71 Figura 28. A) Grfico de las medias para el factor mtodo. B) Grfico del comportamiento de cada mtodo (ART y GOD-PAD) en los 8 experimentos. ...... 73 Figura 29. Comparacin de los %ART entre todas las condiciones de las hidrlisis cidas realizadas. Barras azules: Microondas 200W. Barras roja: Incubacin 100C. ................................................................................................................... 74 Figura 30. Almidn aislado del pseudotallo. ......................................................... 77 Figura 31. Amilosa aparente en el almidn del pseudotallo de pltano. ............... 78 Figura 32. Patrn de difraccin del almidn aislado del pseudotallo y sus parmetros para hallar su ndice de cristalinidad. ................................................. 79 Figura 33. Espectro infrarrojo con reflectancia total atenuada (ATR) del almidn del pseudotallo desde los 700 cm-1 hasta los 1400 cm-1. ...................................... 81 Figura 34. Curvas del anlisis termo-gravimtrico (TG) del almidn de pseudotallo a diferentes velocidades de calentamiento. .......................................................... 83 Figura 35. Curvas de las derivadas del anlisis termo-gravimtrico (DTG) para las distintas velocidades de calentamiento del almidn del pseudotallo. .................... 83 Figura 36. Diagrama de la energa de activacin por cada mtodo empleado para su clculo. ............................................................................................................. 86 Figura 37. Imgenes de E-SEM para el almidn aislado con aumentos de 2000x, 1000x y 500x. ........................................................................................................ 89 Figura 38. Imagen en microscopia ptica del almidn obtenido con aumento de 100x. ..................................................................................................................... 89

TABLA DE TABLAS Pgina Tabla 1. Caractersticas fisicoqumicas de los subproductos del pltano. .............. 6 Tabla 2. % de almidn despus de decantado del jugo del pseudotallo. ................ 9 Tabla 3. Composicin en porcentaje base seca del fruto de pltano verde Dominico Hartn.................................................................................................... 10 Tabla 4. Aislamiento del almidn desde el fruto de pltano va mtodo seco. ...... 10 Tabla 5. Aislamiento del almidn desde el fruto de pltano va mtodo hmedo. 11 Tabla 6. ndices de cristalinidad por difraccin de rayos X y espectroscopia infrarroja. ............................................................................................................... 31 Tabla 7. Porcentaje de amilosa en algunos almidones nativos comunes. ............ 32 Tabla 8. Datos de energa de activacin por dinmica de descomposicin de distintos almidones. ............................................................................................... 33 Tabla 9. Mtodos cinticos para evaluacin de la energa de activacin por TGA. .............................................................................................................................. 35 Tabla 10. Promedio de la longitud de la cadena de la amilopectina para algunos almidones. ............................................................................................................. 38 Tabla 11. Preparacin de la curva estndar de amilosa. ...................................... 55 Tabla 12. Contenido de almidn por ubicacin y por planta. ................................ 61 Tabla 13. Humedad y materia seca en el pseudotallo. ......................................... 62 Tabla 14. Peso del pseudotallo total y desechado. ............................................... 62 Tabla 15. Rendimiento en el aislamiento de almidn del pesudotallo va hmeda. .............................................................................................................................. 63 Tabla 16. Resultados de azcares reductores totales (ART) e hidroximetilfurfural (HMF) para la hidrlisis cida asistida por microondas del almidn aislado desde pseudotallo. ........................................................................................................... 67 Tabla 17. Resultados de Azcares Reductores Totales (ART) e hidroximetilfurfural (HMF) para la hidrlisis por incubacin del almidn del pseudotallo. .................... 69 Tabla 18. Comparacin de los resultados entre el mtodo ART y el mtodo GODPAD. ...................................................................................................................... 72 Tabla 19. Pureza del almidn aislado. .................................................................. 77 Tabla 20. Cristalinidad del almidn por Rayos X por Hermans y Weidinger. ........ 80 Tabla 21. Cristalinidad del almidn por IR-ATR. ................................................... 81 Tabla 22. Temperatura donde se halla el mximo de la descomposicin del almidn para cada velocidad de calentamiento..................................................... 82 Tabla 23. Energa de activacin de la descomposicin del almidn del pseudotallo. .............................................................................................................................. 86 Tabla 24. Grado de ramificacin y longitud promedio de sus residuos de la amilopectina del almidn obtenido. ....................................................................... 87

VI

TABLA DE ANEXOS Pgina Figura A-1. Material vegetal guardado en el Herbario de la Universidad del Quindo. ............................................................................................................... 105 Tabla B-1. Material vegetal y peso aproximado del pseudotallo total y desechado. ............................................................................................................................ 106 Tabla B-2. Datos obtenidos del contenido de almidn en el pseudotallo. ........... 107 Figura B-1. Curva de calibracin para el mtodo Antrona-cido sulfrico Modificado. .......................................................................................................... 107 Tabla B-3. Kruskal-Wallis Test for %starch by ubication. ................................... 108 Figura B-2. Medias del contenido de almidn en cada ubicacin....................... 108 Tabla B-4. Kruskal-Wallis Test for %starch by Pseudostem. .............................. 109 Figura B-3. Medias del contenido de almidn por planta. .................................. 109 Tabla C-1. Datos aislamiento del almidn va hmeda. ..................................... 110 Tabla D-1. Analysis of Variance for %ART total by microwave - Type III Sums of Squares. .............................................................................................................. 111 Tabla D-2. Multiple Range Tests for %ART total vs %starch by microwave. ...... 111 Tabla D-3. Multiple Range Tests for %ART total vs time [min] by microwave..... 111 Tabla D-4. Multiple Range Tests for %ART total vs [M] acid by microwave. ...... 112 Tabla D-5. Analysis of Variance for %ART total by Incubation - Type III Sums of Squares. .............................................................................................................. 112 Tabla D-6. Multiple Range Tests for %ARTtotal vs %starch by Incubation. ........ 112 Tabla D-7. Multiple Range Tests for %ARTtotal vs time [h] by Incubation. ......... 113 Tabla D-8. Multiple Range Tests for %ART total vs [M]acid by Incubation. ........ 113 Tabla D-9. Analysis of Variance for %ART o %Glucose - Type III Sums of Squares. .............................................................................................................. 113 Tabla D-10. Multiple Range Tests for %ART o %glucose by method. ................ 114 Tabla D-11. ANOVA Table for %ARTtotal by experiments. ................................ 114 Tabla D-12. Multiple Range Tests for %ART total by experiments...................... 115 Figura D-1 Curva de calibracin para el mtodo de azcares reductores totales (ART) ................................................................................................................... 116 Figura D-2. Curva de calibracin para el mtodo GOD-PAD para determinacin de glucosa. ............................................................................................................... 116 Figura E-1. Curva de calibracin de la amilosa aparente por el mtodo del valor azul. ..................................................................................................................... 117 VII

Figura E-2. Curvas de los anlisis termo-gravimtricos (TG) para diferentes concentraciones de amilosa para el clculo de la amilosa aparente por el mtodo termo-gravimtrico y cuerva de la muestra de almidn aislado desde el pseudotallo. ......................................................................................................... 117 Figura E-3. Curva de calibracin de la amilosa aparente por anlisis termogravimtrico. ........................................................................................................ 118 Figura E-4. Mtodo de Friedman para el clculo de la energa de activacin de la descomposicin del almidn aislado del pseudotallo. Cada punto, en cada representa los parmetros de las velocidades de calentamiento () iguales a 2, 5, 15, 20, 25 y 30 C/min, de abajo a arriba. ........................................................... 118 Figura E-5. Mtodo de Kissinger para el clculo de la energa de activacin de la descomposicin del almidn aislado del pseudotallo. Cada punto representa los parmetros de las velocidades de calentamiento () iguales a 2, 5, 15, 20, 25 y 30 C/min de abajo a arriba. ..................................................................................... 119 Figura E-6. Mtodo de Flyn-Wall-Ozawa para el clculo de la energa de descomposicin. Todo punto, en cada representa los parmetros de las velocidades de calentamiento () iguales a 2, 5, 15, 20, 25 y 30 C/min, de abajo a arriba. .................................................................................................................. 119 Figura E-7. Mtodo de Coats-Redfen (modificado) para el clculo de la energa de descomposicin. Todo punto, en cada representa los parmetros de las velocidades de calentamiento () iguales a 2, 5, 15, 20, 25 y 30 C/min, se observan de abajo hacia arriba. .......................................................................... 120 Tabla E-1. Regresiones lineales para los mtodos de clculo de la energa de activacin. ........................................................................................................... 120

VIII

INTRODUCCIN

El almidn es uno de los polisacridos ms abundantes y por sus caractersticas nutricionales para los seres humanos y su potencial en la industria de polmeros est entre los principales desde un punto de vista comercial. Fabricado naturalmente, por el reino vegetal, ya que les sirve como una reserva de glucosa la cual se convertir en energa posteriormente y se encuentra en corpsculos discretos llamados grnulos, los cuales son diferenciados dependiendo de cada especie botnica (Dergal, B.; 1990). Constituido por una mezcla de dos polisacridos la amilosa y la amilopectina, con proporcin variable segn el tipo de planta, en donde, la amilopectina se puede encontrar en mayores proporciones con valores que oscilan el 70 %. Los almidones comerciales son almidones nativos y almidones modificados, la diferencia es que en el almidn modificado, los dos polisacridos han sufrido modificaciones qumicas en sus cadenas. Adems, la calidad del almidn est relacionada con el producto final y cuanto ms cuidadoso y limpio sea el proceso de la produccin del polmero natural, mayor su valor y mayores usos. Como lo sera, su transformacin en glucosa, derivados modificados, produccin alcohol, etc. Y no solo se puede hablar de productos alimenticios ya que est puede llegar a ser usado tambin en la industria textil, industria del papel, industria de polmeros y hasta la industria de explosivos (Alarcn, F.; et al.; 1998).

Las principales fuentes comerciales de almidn son el maz, yuca, papa, arroz, trigo y sorgo (Dergal, B.; 1990), tratar de extraerlo o modificarlo desde su origen, genera aumento en los costos de estos productos cultivados. Sumado a esto en las ltimas dcadas, algunos cultivos de yuca y maz han sido aprovechados para la generacin de biocombustibles, alejndose un poco de la industria alimentaria, esto ha trado beneficios y consecuencias; porque las partes involucradas en la produccin son la raz y el fruto, respectivamente, partes que compiten a la vez por el consumo en la dieta humana. Otro ejemplo, se ve en la caa de azcar, la 1

cual ha dejado de cultivarse para la obtencin de sacarosa llevada al consumo humano, porque, parte de sus productos son dispuestos para la produccin de alcohol carburante. Mostrando entonces incrementos econmicos de los productos azucarados (Afanador, A.; 2005).

Ahora bien para la produccin de los hidrolizados de almidn, usados en la industria alimenticia o produccin de alcohol, se requiere un gasto energtico y de tiempo, ya sea por va hidrlisis cida o enzimtica. Una fuente que se ha venido aplicando en los ltimos aos en la generacin de productos alimenticios es la energa de radiacin de las microondas, un campo electromagntico que trabaja a 2.5 GHz, comnmente para sistemas de laboratorio u hornos caseros. Esta radiacin es eficazmente convertida a energa trmica a travs de polarizacin dipolar y conduccin inica, lo cual hace que llegue ms rpidamente a la barrera de energa de activacin de una reaccin y en algunos casos, sta, puede ser disminuida trayendo consigo el ahorro de tiempo y consumo energtico de hasta un 50% menos comparado con un mtodo normal de calentamiento por conveccin (Carballido, R.; 2007) (Miranda, J.; et al.; 2002).

En Colombia, el pltano es uno de los principales frutos cultivados, alcanzando un 43 % del producido y un rea sembrada del 66 % respecto al global de los

frutales. Cultivado en un nmero cercano a los 28 departamentos, destacndose, al departamento del Quindo con cerca de 17.545 has (algunas, intercaladas con caf), entre los dos primeros puestos de produccin nacional en los ltimos aos, con cerca de las 300.000 toneladas/ao de pltano; encontrndose como variedad predominante el clon Dominico Hartn (Musa AAB Simmonds) (Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural, 2002).

Luego de la cosecha del pltano se puede generar un 70 % de desechos como hojas, raquis, pseudotallo, etc (Aristizbal, M.; et al.; 1994); que pueden llegar a causar un desequilibrio ambiental. Un incremento en la produccin, aumenta, directamente la cantidad de desechos orgnicos que se generarn. Y en el 2

departamento del Quindo se observ un incremento del 5,37 % desde 1998 hasta 2002, con respecto de la primera produccin en el ao 1998, hoy da, se esperan incrementos mayores e iguales a stos (Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural, 2002).

El pseudotallo constituye ms de un 54 % de los residuos en base seca (Cayn, D.; 2004). En donde el abono y la alimentacin animal son las disposiciones que los cultivadores le dan a este residuo, en el departamento del Quindo. Otros usos que se le puede dar al pseudotallo desechado son en la industria textil, industria del papel y hasta en alimentacin humana con el procesado de harinas (Vidal, F.I.; et al.; 2001) (Mazzeo, M.; et al.; 2010). Y se habla de que podra aprovecharse sus jugos como una fuente de almidn, indicado en investigaciones del lquido filtrado realizadas en el grupo QIDEA1 de la Universidad del Quindo, ya que este jugo contiene entre el 4 % y 5 % de almidn (Vargas, L.; 2010).

Por qu no estudiar la obtencin del almidn desde el pseudotallo de pltano Dominico Hartn sin poner en peligro la seguridad alimentaria con aumentos en el precio del fruto y transformarlo para obtener un producto de valor agregado, con herramientas industriales y tecnolgicas novedosas?

Por tanto el trabajo se enfoc en la variedad Dominico Hartn y en su residuo de pseudotallo, en donde, se observ y cuantific la disponibilidad y la extraccin del almidn contenido, al no encontrarse reportes. Al igual, se estudi la transformacin del almidn del pseudotallo en azcares simples en medio cido por calentamiento asistido por microondas. Con estos resultados se puede obtener valiosa informacin para mejores hidrlisis cidas que puedan aportar a la difcil hidrlisis total de este almidn, adems del posterior uso industrial del almidn nativo y de sus hidrolizados glucosados, los cuales pueden ser un paso previo en la generacin de etanol.

QIDEA: Grupo Qumico de Investigacin y Desarrollo Ambiental

1. MARCO TERICO Y REFERENCIAL

1.1 PLTANO CLON DOMINICO HARTN. 1.1.1 Clasificacin taxonmica Clase: Angiosperma Subclase: Monocotilednea Orden: Escitamineas Familia: Musceas Gnero: Musa Especie: Musa sp (AAB) Coleccin nmero 34329 del Herbario de la Universidad del Quindo (anexo A).

1.1.2 Descripcin botnica. Las Musa sp son hierbas grandes paquicaules, rizomatosas, glabras, los brotes (pseudotallos) principalmente formados por las bases envainadoras de las hojas; plantas monoicas. Hojas arregladas en espiral, simples, enteras, ampliamente elpticas, nervadura paralelipinnada. Inflorescencias espiciformes que crecen desde el cormo a travs del pseudotallo y parecen terminales, flores en cimas a lo largo del eje principal, abrazadas por brcteas grandes, las flores masculinas distales en el eje; tpalos 6, connados en un tubo excepto por el tpalo adaxial interno; anteras 56; pistilo 3-locular. Fruto una baya carnosa, alargada; semillas pocas a numerosas (figura 1) (Jussieu, A. L.; 1789).

Rodrguez, C.; Cayn, G. et al. (2006) comentan que el pseudotallo de est formado por la unin apretada y enrollada de las vainas de las hojas, soportando en su interior el tallo areo que conduce la inflorescencia hacia el pice. Las vainas son circulares e inicialmente cubren por completo el tallo areo, pero, ms tarde, los mrgenes libres de las vainas son forzados a separarse por el crecimiento de nuevas hojas dentro del pseudotallo (Stover y Simmonds, 1987). La funcin del tallo areo es proveer conexin vascular entre las hojas, las races 4

y los frutos, soporte al sistema foliar, el tallo areo y la inflorescencia (Stover y Simmonds, 1987; Belalczar et al., 1991) y, adems, sirve de reservorio de agua, carbohidratos y nutrimentos a la planta (Simmonds, 1962).

Figura 1. Partes importantes a tener en cuenta de la planta de pltano (Silva, C.; 2010).

1.1.3 Destronque de la planta de pltano.

La prctica de destronque o eliminacin del pseudotallo de la planta madre recin cosechada est dirigida, principalmente, al manejo de plagas y enfermedades. El corte gradual permite que los restos del pseudotallo sirvan como reserva de agua y minerales para los hijos de sucesin en desarrollo, pero ms tarde, al descomponerse, podran actuar como atrayentes de plagas y enfermedades de importancia econmica. Si se hace una eliminacin inmediata del pseudotallo, aunque evita la incidencia de plagas y patgenos, se descarta la recirculacin de agua y nutrimentos de la planta cosechada a los hijos del siguiente ciclo de produccin (Rodrguez, C.; et al.; 2006) (Belalczar et al., 1998).

1.2 APROVECHAMIENTO DE RESIDUOS DEL PLTANO DOMINICO HARTN (MUSA AAB SIMMONDS) EN EL EJE CAFETERO.

Un diagnstico de los residuos de la cosecha y postcosecha del pltano Dominico Hartn, en el departamento de Caldas, Colombia, del cual puede extrapolarse su informacin a todo el eje cafetero. Determin el destino de los pseudotallos,

raquis, residuos foliares, cscaras del fruto (luego del consumo o uso de la pulpa) y de las segundas y terceras generaciones del fruto (estos generados por daos mecnicos o patolgicos del mal manejo del fruto verde). Los resultados muestran que los pseudotallos (79 %, figura 2-A), residuos foliares (87 %, figura 2-D) se dejan en la plantacin, el raquis (65 %, figura 2-C) permanece en el lugar de expendio del pltano. Este gran volumen de residuos en la plantacin sin tratamiento alguno genera problemas para la plantas por ser hospedero de plagas e insectos (Mazzeo, M.; et al.; 2010). Adems se puede encontrar una base referente para la composicin de estos residuos (tabla 1), resaltando que el pseudotallo posee una gran cantidad de agua y su fin industrial se ve disminuido por esta caracterstica (Botero, L., et al.; 2009), aun as se ha estudiado la extraccin de fibras, produccin de papel y aprovechamiento del lquido contenido en este tallo, todo para darle un prospecto industrial al residuo.

Tabla 1. Caractersticas fisicoqumicas de los subproductos del pltano.

Hojas % Humedad % Materia seca % Grasa % Nitrgeno % Protena % Cenizas % Fibra 81.4 18.6 1.12 1.18 7.38 0.92 6.2 Raquis 68.5 31.5 0.1 1.29 8.06 3.42 23.7 Pseudotallo 92 8 0 0.33 2.06 0.49 6.7 Cscara (verde) 58.1 41.9 0.1 1.41 8.81 2.23 7.7

Referencia: Botero, L., et al. (2009).

7% 6%

2%

1%

5%

Deja en la plantacin Desecha en lugar alejado Alimento para animales Industrializa

22% 8%

14%

4%

Consumo productores Alimento para animeles Sitio de expendio Industrializa

79%
Vende o regala Abono

52%

Vende o regala

B
0% 6% 8%
Deja en la plantacin

1% 4% 6% 10% 65% 6%

Deja en el expendio

1% 0%
Deja en la plantacin Desecha en lugar alejado Alimento para animales Industrializa

5%
Desecha en lugar alejado Alimentacin animal Industrializa Vende o regala

88%
Vende o regala Abono

Abono

2% 7% 1% 7%

5%
Sitio de Consumo Deja en plantacin Desecha lugar alejado Alimentacin animal

78%

Industrializa Vende o regala

E
Figura 2. (A) Destino del pseudotallo. (B) Destino de las segundas y terceras generaciones del fruto. (C) Destino del raquis. (D) Destino residuos foliares. (E) Destino cscara del fruto (Mazzeo, M.; et al.; 2010).

1.2.1 Obtencin de papel a partir del pseudotallo.

Se ha encontrado que ensayaron dos mtodos de elaboracin de papel en forma exploratoria: uno artesanal (Figura 3, muestra 1) y otro qumico, este ltimo con dos variantes de reactivos en el blanqueo, agua oxigenada concentrada (Figura 3, muestra 2) e hipoclorito concentrado (Figura 3, muestra 3), todo, para comparar la calidad de la fibra extrada. Los mtodos consistieron en procesos de pesado, troceado, extraccin de la fibra (mtodo qumico con soda caustica), filtrado, blanqueado (el artesanal con hipoclorito diluido, y el qumico con sus respectivos reactivos), filtrado, compactacin de la fibra (realizado solo para el mtodo qumico), moldeado y secado (Mazzeo, M., et al.; 2010).

El rendimiento obtenido de fibra fue ms alto para las extracciones por los mtodos qumicos: 80 % y 81 % para las muestras 2 y 3, respectivamente. La muestra 3 fue la de calidad, presenta una mayor despigmentacin de las fibras blanqueada con hipoclorito de sodio (Mazzeo, M., et al.; 2010). Este es un proceso que tiene que ser paralelo a la utilizacin del jugo de pseudotallo y su extraccin del almidn.

Figura 3. Papel obtenido de las fibras del Pseudotallo de pltano (Mazzeo, M., et al.; 2010).

1.2.2 Jugo del pseudotallo del pltano Dominico Hartn. En investigaciones del grupo Qumico de Investigacin y Desarrollo Ambiental de la Universidad del Quindo, obtuvieron licor tnico de pseudotallo de pltano clon Dominico Hartn. El proceso consisti en la trituracin de este falso tallo, sin la adicin de agua, en un molino de cuchillas, para luego decantar y filtrar el lquido, que finalmente se refriger a 4 C para los anlisis que le realizaron.

Los resultados muestran la presencia de almidn en el jugo del pseudotallo, el cual puede llegar a estar cerca del 4 % a 5 % (p/v), luego el lquido se sediment a temperatura ambiente y se decant, obteniendo en promedio de 3,54 % de almidn en el jugo luego de hacer la primera decantacin. Por ltimo se dej sedimentar el licor por segunda vez obtenindose 1,12 % de almidn disuelto (tabla 2).
Tabla 2. % de almidn despus de decantado del jugo del pseudotallo.

Referencia: Vargas, L. (2010).

1.2.3 Obtencin de almidn a partir de segundas y terceras generaciones del pltano verde clon Dominico Hartn.

Los frutos verdes son ricos en almidn y su pulpa puede estar constituida por un 70 % en base seca de almidn, incluso la cscara del fruto puede contener cerca de un 50 % de almidn en base seca (tabla 3) (Arcila, M.; et al.; 1997), muchos de estos frutos (10 %) sufren daos mecnicos en los sitios de comercializacin y patolgicos producidos por la mala manipulacin desde la recoleccin hasta la 9

distribucin, a stos se les conoce como segundas y terceras generaciones del pltano verde (Duque, A.; et al.; 2000).

Tabla 3. Composicin en porcentaje base seca del fruto de pltano verde Dominico Hartn.
Componente Fibra Azcares totales Almidn Cscara verde 8.6 6 52 Pulpa verde 0.4 5 68

Referencia: Arcila, M.; et al. (1997).

El aislamiento de almidn desde la pulpa del fruto de estas generaciones, ha sido llevado a cabo a escala de planta piloto siguiendo dos mtodos de extraccin, uno en seco y otro en hmedo; los cuales fueron revisados para la obtencin del polisacrido desde el pseudotallo del pltano (Mazzeo, M.; et al.; 2008).

El mtodo de aislamiento va en seco utilizado consta de las etapas de seleccin y pesado de pltanos sanos, lavado con agua e hipoclorito, pelado en donde se separ la pulpa de la cscara, tratamiento qumico con cido ctrico como antioxidante, rebanado de un tamao especfico, secado con aire caliente, molido y tamizado con un molino de cuchillas y tamices de malla No. 20 y 40. Sus resultados dan un promedio del rendimiento del aislamiento de 49.62 % respecto al almidn inicial (tabla 4) (Mazzeo, M.; et al.; 2008).

Tabla 4. Aislamiento del almidn desde el fruto de pltano va mtodo seco.

Muestra 1 2 3 4 5 Peso inicial pulpa (g) 12200 11400 11800 11900 12100 Almidn en pulpa (g) 2800 2400 2700 2600 2600 Almidn extrado (g) 1500 1150 1300 1250 1300 promedio Rendimiento de almidn respecto al total (%) 53.57 47.92 48.15 48.08 50.00 49.62

Referencia: Mazzeo, M., et al. (2008)

10

Para el mtodo hmedo de aislamiento, se tritur la pulpa del fruto y se retir en medio lquido los componentes que son relativamente ms grandes, como fibra y protena, usando tamices de distintos calibres, eliminacin de agua por decantacin, limpieza del sedimento de almidn y finalmente secado. Se usaron etapas de separacin y pesado del fruto sano, de lavado con agua e hipoclorito, de pelado en donde se separ la pulpa de la cscara, de rebanado de la pulpa en tamaos especficos, de tratamiento qumico con cido ctrico como antioxidante, maceracin y trituracin con molino de cuchillas, tamizado de la lechada pasndose por mallas No. 20, 40 y 60, decantacin para la precipitacin del almidn, de purificacin repitiendo el paso del tamizado y decantacin y por ltimo un paso de secado del almidn sedimentado y afinacin del mismo pasndolo por los tamices. Para este proceso el promedio de rendimiento de aislamiento fue de 56.762 % (tabla 5) (Mazzeo, M.; et al.; 2008).

La

comparacin

de

los

dos

mtodos

de

aislamiento

dio

diferencia

estadsticamente significativa confirmada por un anlisis de varianza de un solo factor, colocando al mtodo hmedo como el ms eficiente, aunque se recomend disminuir el consumo de agua, ya que esto puede causar un gran impacto ambiental y problemas con los costos econmicos (Mazzeo, M.; et al.; 2008).

Tabla 5. Aislamiento del almidn desde el fruto de pltano va mtodo hmedo.

Muestra 1 2 3 4 5 Peso inicial pulpa (g) 13600 12400 13000 13300 13400 Almidn en pulpa (g) 2992 2728 2860 2926 2948 Almidn extrado (g) 1720 1600 1640 1660 1580 Promedio % rendimiento de almidn respecto al total 57.49 58.65 57.34 56.73 53.6 56.762

Referencia: Mazzeo, M., et al. (2008)

11

1.4 CALENTAMIENTO POR MICROONDAS El calentamiento por microondas o calentamiento dielctrico, es una alternativa al calentamiento por conduccin/conveccin convencional, que permite aprovechar las propiedades de algunos compuestos (lquidos o slidos) de transformar la energa electromagntica en calor. Este modo de conversin de energa in situ es muy atractivo para aplicaciones en qumica y en procesado de materiales.

La radiacin microonda, como cualquier radiacin electromagntica, est constituida por un campo elctrico y un campo magntico, aunque slo el campo elctrico transfiere la energa que conduce al calentamiento de las sustancias.

Para evitar interferencias con las telecomunicaciones en las aplicaciones de calentamiento se usan las bandas de frecuencias industriales cientficas y mdicas, las cuales son 27,12 MHz, 915 MHz y 2,45 GHz, con longitudes de onda 11,05 m, 37,24 cm y 12,24 cm, respectivamente. Los hornos microondas y los sistemas de laboratorio generalmente trabajan a 2,45 GHz, ya que con frecuencias menores de 915 MHz se tienen menores energa de calentamiento (Carballido, M. R.; 2007).

La radiacin ultravioleta-visible que excita los electrones de la capa de valencia se puede usar para iniciar reacciones qumicas (fotoqumica). A su vez la radiacin infrarroja excita las vibraciones de los enlaces, mientras que las microondas excitan las rotaciones moleculares.

El fotn de microondas (0.00096 KJ/mol) no es lo suficientemente energtico como para romper enlaces de hidrgeno (3.8-42 KJ/mol). Esta energa es adems, mucho ms pequea que la del movimiento Browniano (1.64 KJ/mol), y obviamente no puede inducir reacciones qumicas. Entonces, si no rompe enlaces la pregunta es cmo puede influir la absorcin directa de la energa microonda? Los factores a considerar son los efectos de la orientacin en presencia de un campo elctrico, la prdida dielctrica, la transferencia entre los estados 12

rotacionales y vibratorios en fase condensada, y los efectos termodinmicos del campo elctrico en el equilibrio qumico (Carballido, M. R.; 2007).

1.4.1 Proceso del calentamiento inducido por microondas Los dos mecanismos que describen la interaccin que se produce entre los materiales y las microondas son:

La interaccin dipolar. Se produce en presencia de molculas polares. La rotacin dipolar es una interaccin que induce a las molculas polares a alinearse con el campo elctrico rpidamente cambiante de las microondas . El movimiento rotacional de las molculas al intentar orientarse con el campo produce fricciones y colisiones responsables del calentamiento. La habilidad para acoplarse por este mecanismo est relacionada con la polaridad de las molculas y su habilidad para alinearse con el campo elctrico (figura 4) (Carballido, M. R.; 2007).

Figura 4. Interaccin dipolar en molculas producida por radiacin de microondas (Carballido, M. R.; 2007).

La conduccin inica. La segunda forma de transferencia de energa es la conduccin inica, que tiene lugar si hay iones libres o especies inicas presentes en la sustancia. Segn este mecanismo el calor se genera a travs de prdidas por friccin, que resultan de la migracin de iones disueltos cuando sobre ellos acta un campo electromagntico. Las prdidas dependen del tamao, carga, 13

conductividad de los iones disueltos e interaccin de estos ltimos con el disolvente. La temperatura de la sustancia tambin afecta a la conduccin inica, cuanto mayor sea la temperatura ms eficiente ser la transferencia de energa (figura 5) (Carballido, M. R.; 2007).

Figura 5. Conduccin Inica generada por la radiacin microondas (Carballido, M. R.; 2007).

Estos mecanismos necesitan que el acoplamiento entre las componentes del material irradiado y el campo elctrico de las microondas sea efectivo. Ambos estn influenciados por varios factores: Longitud de onda de la radiacin. Propiedades fsicas de la sustancia: Constante dielctrica, polaridad, temperatura, viscosidad, y capacidad trmica. Caractersticas del ion: Tamao, concentracin, carga y movilidad.

El calentamiento por microondas es un proceso muy diferente al calentamiento convencional por conduccin/conveccin. Las microondas se acoplan

directamente con las molculas polares (principalmente agua) que estn presentes en la mezcla de reaccin, el resultado es un instantneo y localizado calentamiento de cualquier sustancia que reaccione ante la polarizacin dipolar y/o la conduccin inica permitiendo una rpida elevacin de la temperatura. Lo que hace que el mecanismo no dependa de la conductividad trmica de los materiales de los recipientes, mientras que el calentamiento

conduccin/conveccin si depende (Carballido, M. R.; 2007). 14

En el calentamiento convencional el calor se transmite a la sustancia pasando primero a travs de las paredes del recipiente para posteriormente alcanzar al disolvente y a los reactivos (figura 6). Este es un mtodo lento de transferir energa al sistema ya que depende de la conductividad de los materiales que deben ser atravesados. El resultado es que la temperatura del recipiente siempre es mayor que el de la mezcla de reaccin mientras no transcurra el tiempo suficiente para que el contenedor y el contenido alcancen un equilibrio trmico (Carballido, M. R.; 2007).

Figura 6. Transferencia de calor en el calentamiento convencional y microondas (Carballido, M. R.; 2007).

1.4.2 Horno microondas domstico en reacciones qumicas. Un horno microondas est compuesto principalmente por un generador de alta potencia y una cavidad de paredes metlicas. Los hornos de microondas tienen un rendimiento alrededor del 50% comparado con un clsico calentamiento convencional. En un horno microondas casero, hecho principalmente para calentar el alimento, se est actuando directamente en el interior de estos y el calentamiento se produce por las prdidas dielctricas (baja la resistividad del dielctrico), en sntesis, es hacer que el alimento se vuelva conductor ( Miranda, J.; et al.; 2002).

La mayora de las reacciones desarrolladas con microondas han sido realizadas con hornos domsticos multimodo, en estas cavidades se busca producir el mayor caos posible en el interior de la cavidad, mientras la principal caracterstica de las otras cavidades, llamadas monomodo, es la creacin de un patrn de onda 15

esttica. Como consecuencia en las cavidades multimodo las muestras se pueden colocar en cualquier parte de la cavidad para que los reactivos absorban las microondas, el campo es homogneo en todas las direcciones. El calentamiento de las muestras no vendr influenciado por el tamao o la forma de los objetos, lo que adems implica que en la cavidad se pueden colocar ms de un objeto y la eficacia del proceso ser la misma que si dentro de la cavidad solo hubiera uno. Y finalmente permite un fcil escalado de los procesos, para producir a niveles de plantas piloto (Carballido, M. R.; 2007).

En estos hornos, a pesar de que el nivel de potencia normalmente flucta debido a los ciclos de apagado y encendido y a que la energa es heterognea, hay otros problemas relacionados con la seguridad. El calentamiento de disolventes orgnicos en recipientes abiertos puede conducir a violentas explosiones inducidas por los arcos elctricos dentro de la cavidad o a chispas debido al encendido y apagado del magnetrn. Los reflujos empleados en la qumica tradicional se podran emplear si el refrigerante se sita fuera de la cavidad. En este caso, es necesario emplear un dispositivo que una el recipiente de reaccin y el refrigerante con unas medidas de seguridad que eviten las fugas de microondas. Mingos, M.; et al. (1991) describen esta clase de hornos domsticos modificados para operar en condiciones de presin atmosfrica.

En la actualidad el empleo de hornos microondas domsticos en investigacin est decayendo frente a la aparicin en el mercado de equipos diseados especialmente para sntesis orgnica con sistemas de seguridad, controladores de presin y temperatura, para la monitorizacin del proceso y que permiten realizar reacciones con disolventes acoplando refrigerantes u otros equipos desde el exterior (Carballido, M. R.; 2007).

16

1.4.3 Tiempo y potencia en radiacin por microondas. Para decidir el tiempo de irradiacin habr que tener en cuenta el tipo de reaccin, entonces, para el caso de reacciones bajo presin un buen punto de partida es un intervalo de tiempo que vaya de los 5 a los 10 min tanto si se realiza la reaccin en presencia o ausencia de un disolvente. Este mismo intervalo de tiempo es aplicable para el caso de reacciones hechas sobre soporte slido. Si la reaccin se desarrolla a presin atmosfrica existen referencias orientativas que relacionan tiempos de calentamiento convencional con tiempos en microondas, por ejemplo 4h de calentamiento convencional son equiparables a 10 min de calentamiento con microondas (Carballido, M. R.; 2007).

La potencia de irradiacin es una de las variables ms importantes cuando se trabaja con microondas. Obviamente, el trabajar a potencias de irradiacin bajas puede no conducir a rendimientos satisfactorios. Sin embargo, trabajar a la mxima potencia tampoco es siempre necesario, hay que tener en cuenta que los reactivos y catalizadores que se emplean en las reacciones orgnicas pueden ser causantes de un elevado aumento de la eficacia de acoplamiento con las microondas. Esto provocara que las sustancias sensibles a la temperatura se descompusiesen.

La seleccin de un valor de potencia de irradiacin ms baja y una ampliacin en el tiempo de exposicin a las microondas puede ser una opcin ms favorable. Algunas reacciones requieren el empleo de programas de irradiacin, en los que se desarrollan periodos de irradiacin a distintas potencias buscando mejorar los rendimientos frente a un nico calentamiento prolongado a una nica potencia (Carballido, M. R.; 2007).

17

1.4.4 Influencia de las microondas sobre una reaccin En una tpica reaccin en la que se combinan dos reactivos A y B (figura 7) con un nivel de energa ER. stos deben colisionar en la correcta orientacin geomtrica para ser activados hasta un nivel de energa que se denomina estado de transicin (ET). La diferencia ente la ER y la ET es la energa de activacin Ea, es decir, la energa que el sistema debe absorber de su entorno para reaccionar. Una vez se ha absorbido suficiente energa, los reactivos pasan rpidamente a productos y en el caso de una reaccin exotrmica a un estado de menor energa (EP), siendo el producto de la reaccin A-B. No hay evidencias concluyentes de que la radiacin microonda afecte a la energa de activacin, pero si est aceptado que la energa necesaria para vencer esa barrera y completar la reaccin, es suministrada ms rpidamente que con el mtodo de calentamiento convencional.

Figura 7. Perfil energtico de una reaccin (Carballido, M. R.; 2007).

Hay dos tipos de reacciones, las que ocurren bajo control cintico y las que ocurren bajo control termodinmico. Muchas reacciones qumicas se realizan en condiciones suaves y por tanto bajo control cintico. En este caso un intermedio tomara el camino ms fcil, el de menor energa de activacin, hacia productos. Las otras son las reacciones que ocurren a travs de control termodinmico, las cuales tienen energas de activacin mucho ms elevadas y requieren condiciones ms drsticas para completarse. En las reacciones conducidas en presencia de energa microonda, a las molculas se les suministra gran cantidad de energa instantneamente, lo que les permite alcanzar los niveles de energa de activacin 18

ms elevados y dirigirse a los productos termodinmicos. Por tanto, el calentamiento por microondas es extremadamente til en reacciones lentas donde se necesitan alcanzar elevadas energas de activacin para hacer diversas transformaciones. Por tanto, la energa de microondas da la posibilidad de usar reacciones bajo control termodinmico (Carballido, M. R.; 2007).

1.5 HIDRLISIS CIDA DE ALMIDN ASISTIDA POR MICROONDAS.

1.5.1 Almidn. El almidn es un polisacrido que est organizado en partculas discretas o grnulos, encontradas dentro de los cloroplastos de las plantas superiores y evolucionadas, son cubiertas con una vaina proteica que incluye las enzimas necesarias para su formacin y degradacin, ste, es similar a las partculas de glucgeno animal pero mucho ms complejo, son ms grandes, y con formas y estriaciones caractersticas de la planta en donde se encuentren. La gran diferencia con respecto al glucgeno es que contiene dos tipos de polmeros de glucosa. Del 10 al 30 por ciento del almidn est compuesto por largas cadenas de amilosa (figura 8) de varias cientos unidades de glucopiranosas con enlaces 1-4, que a su vez le dan una configuracin helicoidal. El otro polmero de glucosa es la amilopectina (figura 8), la cual posee configuraciones ramificadas similares a las del glucgeno, en las que se encuentran entre un 4 % y 5 % de enlaces 1-6 entre los monmeros de glucosa, extensiones que finalizan con grupos no reductores y tiene en promedio alrededor de 20 residuos de glucopiranosa de longitud entre dos puntos de ramificacin (McGilvery, W.; 1977) (BeMiller, J. y Hubert, K.; 2007).

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Figura 8. A) Fragmento de amilosa. B) Fragmento de amilopectina. (McMurry, J.; 2008)

1.5.2 Hidrlisis cida del almidn.

Figura 9. Reaccin de la hidrlisis de un fragmento de amilosa catalizada por cido (Garca, G.; et al.; 2004).

La hidrlisis del almidn se da por el rompimiento del agua y el acoplamiento de esta en l, actuando sobre los enlaces O-glucosdicos generando por cada molcula de agua segmentos de sacridos. La hidrlisis puede darse por va qumica (cidos o bases) y por enzimas (amilasas). En el ejemplo de la figura 9, se muestra la ruptura de un fragmento de amilosa y una de las posibles vas que podra tomar la hidrlisis llevada en medio cido, esta vez con la generacin de glucosa y un polmero con una unidad menos (Garca, G.; et al.; 2004).

La hidrlisis cida del almidn a glucosa es una tcnica que tiene algunas desventajas como: formacin de productos no deseables y flexibilidad muy pobre (el producto final slo se puede modificar cambiando el grado de hidrlisis), por ltimo es necesaria que el equipo resista el cido y las temperaturas requeridas durante el este proceso. Mientras que la enzimtica aunque ms selectiva, requiere de condiciones controladas para su funcionamiento que no son tan 20

drsticas, y puede tardarse puede tardarse poco de ms tiempo (Mera, I.; et al.; 2005).

Los monosacridos por poseer grupos funcionales como aldehdos, cetonas y alcoholes pueden sufrir distintas reacciones dependiendo el medio y sus condiciones. Por ejemplo, en esta investigacin se tendr un medio cido y temperaturas moderadamente altas. Por tanto pude ocurrir que los monosacridos se deshidraten por presencia de cidos y acelerada por la temperatura, en donde, los cidos inorgnicos producen molculas cclicas de estos azcares: con las hexosas hidroximetilfurfural y en las pentosas 2-furfuraldehdo (figura 10) (Dergal, B.; 1990).
H H HO H H O H OH H OH OH CH2OH D-Glucosa HO H H OH OH H OH OH CH2OH 1,2-enol H H -H2O H O H OH H OH H OH H CH2OH OH CH2OH 3-Desoxiosulosa -H2O OH reacomodo H O H O

H H HO H H H O H O -H2O ciclacin H H H

O O

hidroximetilfurfural

OH CH2OH

Figura 10. Formacin del hidroximetilfurfural desde glucosa por la accin de cidos (Dergal, B.; 1990).

Productos que se pueden formar en la hidrlisis cida son dextrinas formadas por el tratamiento con HCl o H2SO4 diluidos que modifican superficialmente haciendo grnulos de estructuras debilitadas. La modificacin cida del almidn deja dextrinas de baja viscosidad y solubilidad aumentada. Aunque es un proceso que se busca dependiendo del tiempo, la concentracin del cido, temperatura y dems condiciones (Jury, A.; et al.; 1994).

21

Para la caracterizacin de los hidrolizados del almidn se emplea un parmetro que define el grado de hidrlisis denominado Equivalente de Dextrosa (ED), y est definido como unidades de masa de glucosa pura requerida para reducir la misma cantidad de reactivo de Fehling que 100 unidades masa de hidrolizado seco. Una forma de observar mucho ms fcil la cantidad hidrolizada de glucosa, es teniendo en cuenta el peso de la glucosa obtenida respecto con el almidn adicionado, en donde la hidrlisis total de 100 partes en peso de almidn resulta en unas 111 partes en peso de glucosa, dada la incorporacin del agua en la hidrlisis ( Garca, G.; et al.; 2004).

1.5.5 Hidrlisis enzimtica del almidn del fruto del pltano. Un estudio reciente mostr que hay cantidad de almidn de pltano no hidrolizado por un mtodo de licuefaccin/sacarificacin. La licuefaccin fue realizada calentando previamente a 80 C y a un pH cercano a 7, 12,5 % muestra de pulpa de pltano (que contena 70,86 % de almidn), dejndola reaccionar por 90 minutos con -amilasa al 0.04 % a 70 C, obteniendo un valor de dextrosa equivalente (DE) cerca de 25 % para los lquidos filtrados y de los 8.75 gramos calculados de almidn adicionados, en el residuo del filtrado se obtuvo 6.25 gramos de almidn. Lo que indico que solo se hidroliz el 28 % del almidn agregado. Luego al lquido del hidrolizado se le realiz una sacarificacin se le realiz al hidrolizado obtenido, a una temperatura de 60 C, pH de 4.5, por 24 horas con la enzima amiloglucosidasa al 0.05 %, que obtuvo un jarabe de glucosa de 68.38 como valor DE, por lo que se recomienda hidrlisis cido-enzimtica para la pulpa y el almidn del fruto del pltano, y lo sustentan en que (Aguilar, A.; 2008).

Para almidn de pltano purificado y suspendido al 20 % con condiciones iguales de licuefaccin/sacarificacin, variando solo el tiempo final de la licuefaccin a 3 horas se obtienen hidrolizados con 27 % de DE, a los cuales con la sacarificacin

22

a iguales condiciones que las mencionadas en el prrafo anterior, se lleva hasta concentraciones finales de 64 % como valor de DE (Flores, E.; 2003).

Valores menores cercanos a 38 % como DE han sido reportados para el almidn de pltano. Solo que en la licuefaccin se utiliz concentraciones de 0.01 % de amilasa y 15 minutos de reaccin, lo que arrojaron valores bajos de 9 % de DE, lo que hizo que la sacarificacin a iguales condiciones no fueran las ms adecuadas (Bello, L. A.; et al.; 2002).

Cabe recordar que la dextrosa equivalente DE son los gramos de glucosa que puede contener 100 gramos de slidos en el hidrolizado obtenido ( Bello, L. A.; et al.; 2002)

1.5.5 Radiacin microondas en la hidrlisis cida de almidones. En estudios se hidrolizaron suspensiones de almidn de arroz, maz, trigo y yuca, todas al 10 % en peso por volumen de cido clorhdrico 0.5 M, con volumen final de 1 mL y colocadas en vasos de reaccin e irradiadas por 3.0, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5 y 6.0 minutos en un microondas casero de 2.45 GHz, con pulsos de 10s y potencia de 20-40 %. Cada hidrolizado fue analizado por cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC) comparndose con patrones de dextrano de pesos moleculares de 40000 y 8800 y glucosa, para seguir el progreso de la hidrlisis (figura 11) (Yu, H.; et al.; 1996).

Como modo de comparacin los mismos cuatro almidones se suspendieron al 10% en peso por volumen de cido clorhdrico 0.5 M, con volumen final de 4 mL y puestos en tubos de ensayo sellados, purgados con nitrgeno y calentados a 100 C. Tomndose alcuotas de 10 L para 5, 10, 20 y 60 minutos; analizadas de igual forma por HPLC (ver figura 10) (Yu, H.; et al.; 1996).

23

Se encontr que despus de 60 minutos, en calentamiento tradicional, todo el almidn soluble fue convertido a glucosa y la cantidad de almidn retrogradado en la suspensin fue de 5.1 %, 6.6 %, 9.8 % y 2.5 % respectivamente para los almidones antes mencionados. Mientras que despus de 5 minutos, por irradiacin con microondas, no se encontr almidn retrogradado remanente en suspensin, y dejan la hiptesis de que la -estructura del almidn retrogradado fue deformada por esta irradiacin, hacindola soluble en la mezcla y entonces sujeta a hidrlisis. Hiptesis que fue comprobada re-suspendiendo el almidn retrogradado de los ensayos por calentamiento tradicional (25 mg/mL) en cido clorhdrico 0.5 M y agua, irradiados por 5 minutos en cada caso. Mostrando que el almidn retrogradado fue soluble en agua e hidrolizado completamente por el cido diluido, demostrado por HPLC (Yu, H.; et al.; 1996).

Adems, se realiz una medicin de la densidad ptica (entre 395 nm y 500 nm) de soluciones hidrolizadas en las mismas condiciones de suspensin de almidn por calentamiento tradicional a 5 minutos, 30 minutos, 1 hora, 8 horas y 24 horas. Hidrolizados por irradiacin microondas a 5 minutos, en las mismas condiciones de suspensin de almidn. Los resultados dejan ver que a los 5 minutos para radiacin microondas y calentamiento tradicional, la densidad ptica es cerca a cero, mientras que para los dems tiempos de calentamiento tradicional va aumentando proporcionalmente (figura 12). Aun as y despus de 7 das de calentamiento tradicional se encontr almidn retrogradado (Yu, H.; et al.; 1996).

24

Figura 11. Anlisis HPLC de los hidrolizados de la solucin de almidn despus de la irradiacin de microondas o termo-hidrlisis en suspensin cida. 1 Es el perfil de HPLC de dextrano (peso molecular 40 000); 2 es dextrano (PM 8800); 3 es la glucosa; 4, 5, 6, y 7 representan suspensiones de almidn que se incubaron a 100 C durante 5, 10, 20, o 60 min, respectivamente; 8, 9 y 10 representan las suspensiones de almidn sometidos a irradiacin de microondas a 30 % de la potencia total de 3, 4, o 5 min, respectivamente (Yu, H.; et al.; 1996).

Figura

12. Medicin de la absorbancia (395-500 nm, absorcin del hidroximetilfurfural y sustancias colorantes) del hidrolizado de almidn despus de la irradiacin de microondas durante 5 minutos (curva 2) o despus de la incubacin a 100 C durante 5 min (curva 1), 30 min (curva 3) , 1 h (curva 4), 8 h (curva 5), y 24 h (curva 6). La escala de la columna vertical de la curva 6 se representa a la derecha y todos los dems estn a la izquierda (Yu, H.; et al.; 1996).

25

Igualmente, en una investigacin realizada por Palav, et al. (2007), se indag sobre los cambios de las propiedades de suspensiones de almidn en agua, calentadas por radiacin microondas, mostrando que los geles resultantes formados calentando las mezclas de almidn mediante el uso de la energa de microondas tenan propiedades significativamente diferentes de los calentados mediante la conduccin de calor. Estos cambios en las propiedades son un reflejo de las diferencias en la transferencia de calor y masa debido a los diferentes modos de calefaccin. Y proponen que: los grnulos de almidn durante el calentamiento por microondas pierden birrefringencia (perdida de la cristalinidad) mucho antes que la temperatura de gelatinizacin, debido al movimiento de vibracin de las molculas polares del agua. El movimiento vibratorio y el rpido aumento de la temperatura resultan en la ruptura del grnulo. Por tanto se asume que se incluye el movimiento vibracional, adems del calentamiento, comparado con la conduccin del calor, capacidad que pudiese facilitar la reaccin de hidrlisis.

Tambin, Yu, H.; et al. (2010) comentan que el calentamiento por microondas implica la absorcin directa de energa por parte de grupos funcionales que tienen conductividad inica o un efecto de rotacin del dipolo, y estas energas se liberan en los alrededores de la solucin. Esta absorcin de energa hace que los grupos funcionales implicados tengan una mayor reactividad con reactivos alrededor, que cuando simplemente se calentaron con los reactivos a la misma temperatura a condiciones convencionales. Ellos quisieron estudiar un poco ms sobre los efectos no trmicos de la irradiacin con microondas sobre la hidrlisis cida del almidn, concluyendo que: la irradiacin de microondas no slo puede aumentar la tasa de transferencia de energa para acelerar el tiempo de reaccin, sino tambin cambiar la estructura (o conformacin) del reactivo para facilitar la reaccin, aadiendo que la -estructura del almidn retrogradado puede ser disuelta e hidrolizada por radiacin microondas.

26

Por ltimo en el proceso de hidrlisis asistida por microondas realizado por Kunlan, L.; et al. (2001) en recipientes cerrados que soportan 1.2 Mpa (11.84 atm) y suspendiendo en ellos almidn (200 mg) en 2 mL de HCl al 0.05 % y 1 mL de sales de [Cl-] o [SO42-] a 0.15 mol/L, en un horno de microondas domstico de 2,45 GHz. Se encontr que el almidn puede ser hidrolizado a D-glucosa completamente en un corto perodo de tiempo mediante la adicin de haluros metlicos. El rendimiento mximo de D-glucosa alcanz 111 %2 en peso con el uso de los haluros metlicos, LiCl, BaCl2 y FeCl3, con 120-180 segundos de irradiacin de microondas, mientras que con sales de sulfatos los rendimientos llegaron hasta cerca de 30%. La diferencia entre haluros metlicos y sales de sulfato ilustra que las propiedades de las sales afectan la reaccin de hidrlisis en un campo irradiado por de microondas.

1.6 ALGUNOS USOS DE LOS HIDROLIZADOS. Del almidn se pueden obtener glucosa, dextrinas y almidones modificados usados en la industria de alimentos y en muchas otras. La glucosa se fabrica por la hidrlisis completa del almidn por la accin de cidos diluidos y posteriormente el uso de enzimas amilolticas. El jarabe se decolora por centrifugacin, carbn activado y concentrado. De acuerdo con la temperatura del proceso final se obtiene una alfa-D-glucosa monohidratada a temperaturas menores de 50 C, alfaD-glucosa anhidra a temperaturas ms alta de los 115 C y ms baja que 115 C se obtiene la beta-D-glucosa anhidra, que es muy soluble en agua y muy usada en bebidas. La conversin del almidn a glucosa se mide en trminos de equivalentes de dextrosa. Las dextrinas se obtienen de la hidrlisis parcial del almidn con rangos que van desde los 95C hasta los 200 C, concentraciones menores de cidos usados para el comienzo de la hidrlisis de la glucosa tiempos de calentamiento entre 7 a 12 horas en condiciones de calentamiento normales. Otros procesos que se le realizan al almidn que lo modifican son la

Por incorporacin de las molculas de agua en los enlaces O-glucosidicos en el almidn que dan ms peso este, relacin 1mg almidn = 1.11 mg de glucosa en hidrlisis completa.

27

gelatinizacin, fluidizacin, eterificacin, esterificacin, enlaces cruzados y oxidacin (Dergal, B.; 1990).

El jarabe de glucosa se pueden fabricar jarabes concentrados en fructosa como explican Hernndez, J.; et al. (2008) en una de sus citas agregando que la fructosa tiene un poder edulcorante dos veces mayor que la sacarosa, y que es reconocida como un edulcorante seguro y alternativo a otros azcares, siendo recomendado su consumo por pacientes que sufren de Diabetes mellitus tipo I y II.

Las dextrinas derivado de una hidrlisis a condiciones moderadas, son utilizadas como agentes espesantes y estabilizantes, ya que no cristalizan y son solubles en agua. Adems podemos encontrar con hidrlisis aun menos agresivas almidones fluidizados, los cuales forman pastas que en caliente tiene poca viscosidad y sus geles son dbiles, usados principalmente en la industria del caramelo cuando se requieren texturas gomosas (Dergal, B.; 1990).

Salcedo, J.; et al. (2010) explican la que creciente demanda de etanol para la produccin de combustibles y el montaje de plantas productoras de alcohol anhidro a partir de caa y maz, han producido un alza de los precios del maz, principal materia prima para la produccin de fructosa. Y que en consecuencia, es preciso buscar nuevas alternativas para la obtencin de edulcorantes, uno de ellos basados en la fructosa, porque sta ofrece ventajas como edulcorante por sus propiedades sensoriales y nutricionales, pero para llegar a esta es necesario obtener jarabes de glucosa. O por el otro lado buscar una alternativa de la obtencin de azcares para satisfacer la demanda del etanol, como lo podra ser el jugo del pseudotallo. Donde un ejemplo a seguir, es el mayor productor del mundo, Brasil, pionero en la produccin de etanol a gran escala, a travs de la fermentacin de la melaza de caa de azcar por levaduras, alcanzando una produccin en el ao 2009 alrededor de 6577.89 millones de galones de etanol (RFA, 2010), la mayora de los cuales se fermenta con hexosas presentes en el jarabe de caa (Monte Alegre, R.; et al., 2003). 28

1.7 CARACTERSTICAS DE ALMIDONES. 1.7.1 Cristalinidad por difraccin de rayos X (RX) y Espectroscopia Infrarroja con Transformada de Fourier (FTIR) y Reflectancia Total Atenuada (ATR). La difractometra de rayos X constituye un mtodo de identificar sustancias. Este mtodo, que deriva del descubrimiento efectuado por Von Laue, de que la longitud de onda de los rayos X es del mismo orden que la de los espacios entre los tomos de un cristal, y que por lo tanto los cristales pueden actuar como redes de difraccin de rayos X. A partir de entonces, la difraccin de rayos X ha servido como instrumento valiossimo para determinar las estructuras tridimensionales de muchas sustancias (Hart, F.; et al.; 1971).

Los grnulos de almidn nativo muestran dos tipos de patrones de difraccin de rayos X, el del polimorfismo tipo A para el almidn de cereales (empaquetamiento de las dobles hlices de la amilopectina en forma monoclnica y con 3-4 molculas de agua) y el del polimorfismo tipo B para almidones de tubrculos o de

almidones de alta amilosa (empaquetamiento de la doble hlice de la amilopectina en forma hexagonal y 36 molculas de agua). Se ha encontrado que el patrn tipo C son una mezcla de los patrones A y B los cuales se pueden encontrar en almidones de leguminosas, y tambin de algunos tipos de almidones que crecieron bajo condiciones de humedad y temperatura especifica. Hay una forma cristalina V, la cual es tpica de los complejos de amilosa presente en el grnulo de almidn acomplejada con cidos grasos o mono acilglicridos, la cual aparece durante la gelatinizacin del almidn y es muy rara detectarla en almidones nativos (figura 13). (Biliaderis, C. G.; 1991) (Colonna, P. et al.; 1985) (Katz, F. R.; et al.; 1993) (Buleon, A.; et al.; 1998).

29

Figura 13. Patrones de difraccin de Rayos X de distintos almidones (de la Rosa, J.; 2009).

Hermans y Weidinger, establecieron en 1948 un mtodo para cuantificar la cristalinidad en un difractograma de rayos X, el cual ha sido ampliamente utilizado, en ste propusieron una integracin de reas de los picos cristalinos y el rea total de la muestra, lo nico difcil es hallar la regin amorfa en el difractograma. Pero se encontr una manera ms sencilla para el clculo, integrando la regin total del difractograma obteniendo el rea total y restando el rea resultante de la integracin de la regin amorfa, la cual es como la lnea base de los picos cristalinos (que pueden variar dependiendo el polimorfismo del almidn, ver figura 12), se obtiene rpidamente el rea cristalina. La ecuacin para calcular el ndice de cristalinidad se muestra en la ecuacin 1.1 (de la Rosa, J.; 2009). Se muestran algunos resultados como ejemplo y comparacin en la tabla 6.

(1.1)

Donde %Xc = porcentaje de cristalinidad. Ac = rea cristalina en el difractograma. Aa = rea amorfa en el difractograma.

30

Tabla 6. ndices de cristalinidad por difraccin de rayos X y espectroscopia infrarroja.

Almidn Porcentaje de Cristalinidad (reas RX) pltano yuca papa maz 19.4% (1) 35.8% (2) 29.8% (2) 31% (2) Patrn de rayos X (2) C A B B ndice cristalinidad (R1047/1022 en IR) --0.91 (4) 0.44 (3) 0.75 (5)

Referencias: (1) Rivas, M.; et al. (2008). (2) Srichuwong, S.; et al. (2005). (3) Miao, M.; et al. (2012). (4) Mina, J.; et al. (2009). (5) Liu, T.; et al. (2011).

Para los anlisis de infrarrojo con reflectancia total atenuada (ATR), se encuentra que las bandas de 1047, 1022 y 861 cm -1 son sensibles a cambios en la cristalinidad. La banda de los 1022 cm-1 incrementa cuando decrece la

cristalinidad y se relaciona con la parte amorfa de los almidones. La banda 1047 cm-1 aparece posiblemente por el solapamiento de dos bandas 1040 y 1053 cm -1. Ahora bien, la banda de los 1047 cm-1 es relacionada con la cristalinidad de almidones porque la banda incrementa cuando la cristalinidad aumenta. Se puede relacionar el ordenamiento cristalino usando las intensidades de estas dos bandas como un radio R (1047/1022) (Van Soest, J.; et al.; 1995).

1.7.2 Amilosa aparente. El mtodo ms importante para calcular la proporcin de componentes amilosa y amilopectina en el almidn es el mtodo de valor azul. Este mtodo aprovecha las diferencias en la creacin de complejos de yodo. El complejo amilosa-yodo es azul, y amilopectina-yodo es rojo. Medidas espectrofotomtricas o colorimtricas de la intensidad del valor azul puede llevar a calcular el contenido de amilosa. La reaccin de yodo se ha propuesto para cuantificar el contenido de amilosa en almidones utilizando las mediciones realizadas en una longitud de onda cerca de los 600 nm.

Un mtodo comparativo y confirmativo realizado para este trabajo es el termogravimtrico (TG). En el cual se mide las resistencias que son causadas por las 31

estructuras de la amilosa y amilopectina. As, usando la temperatura de la prdida de masa del 50 % para los termogramas de las mezclas conocidas entre los polisacridos del almidn, es posible determinar la proporcin de ambos componentes en un almidn. Los valores de factor de R2 en las curvas de calibracin del mtodo TG y el mtodo de valor de azul son casi los mismos.

Existen otros mtodos para la determinacin de los componentes del almidn como: el mtodo enzimtico, resonancia magntica nuclear
13

C en amilosa y

amilopectina, infrarrojo cercano con graficas de absorbancias de longitud de onda frente concentracin (difciles de construir), la tcnica de cromatografa de alto rendimiento de exclusin por tamao y en la literatura, se encuentran dependencias entre el contenido de amilosa y temperaturas de fusin de las muestras, el grado de cristalinidad y la entalpa de calorimetra diferencial de barrido se conocen. Sin embargo, estas dependencias no estn bien correlacionadas (Stawski, D.; 2008).

Se ha reportado un contenido de amilosa de 16 a 19.5 % para la variedad de pltano Cavendish y un 40.7 % para la variedad Valery ( Zhang, P.; et al.; 2005). Algunos promedios de almidones para especies botnicas comunes se reportan en la tabla 7.

Tabla 7. Porcentaje de amilosa en algunos almidones nativos comunes.

Procedencia Maz Papa Pltano Trigo Yuca Mtodo Colorimtrico 23.86 % (4) 26% (2) 37% (3) 18.1% (2) 29.29% (1) Mtodo enzimtico --26.3% (2) --23.4% (2) --Mtodo Termogravimtrico --26.9% (2) --20.9% (2) --Mtodo por DSC 28% (5) 15% (5) -----14% (5)

Referencias: (1) Nwokocha, L.; et al. (2009). (2) Stawski, D. (2008). (3) Bello, L.; et al. (2006). (4) Lpez, M.; et al. (2009). (5) Guinesi, L., et al. (2006).

32

1.7.3 Energa de activacin por dinmica de anlisis termogravimtrico. Las tcnicas convencionales en las industrias de procesado de alimento y preparacin de termoplsticos, en donde, se incluyan almidones son llevadas a temperaturas relativamente altas. Lo que juega un papel importante en la degradacin de la estructura molecular de los almidones. Que esta resisita depende hasta que temperatura se lleve y el tiempo empleado. Por tanto es importante conocer el comportamiento de la degradacin de los almidones.

Almidones de diversos orgenes botnicos como maz, arroz, papa y yuca, fueron estudiados por cintica de descomposicin trmica hallndose las curvas TG / DTG de cada uno llevndose a cabo bajo una atmsfera de nitrgeno (20 mL/min1

), crisol de platino, una masa de muestra alrededor de 7 mg y velocidades de

calentamiento de 5, 10, 15 y 20 C/min-1 desde 25 a 800 C. Con estos resultados, utilizando el mtodo propuesto por WallFlynnOzawa sobre las curvas, encontraron la energa de activacin promedio de la descomposicin para de cada almidn ( fraccin descompuesta). Las energas de

activacin obtenidas para cada almidn se muestran en la tabla 8, los cuales podrn ser un punto de comparacin con dems almidones (Guinesi, L.; et al.; 2006).
Tabla 8. Datos de energa de activacin por dinmica de descomposicin de distintos almidones.

Almidn Maz Arroz Papa Yuca

Ea (KJ/mol) 144.19.8 171.614.6 158.37.4 159.415.0

Referencia: Guinesi, L.; et al. (2006)

Los clculos de la energa de activacin de la descomposicin, tiene como base la ecuacin fundamental de la velocidad, utilizada en todos los estudios cinticos. Que se describe generalmente como:

33

(1.2)

Donde

es la constante de velocidad y

es el modelo de reaccin, una

funcin que depende del mecanismo de reaccin. La ecuacin (1.2) expresa la velocidad de conversin, como , en una determinada temperatura para una

funcin de la perdida de concentracin de los reactivos y a velocidad constante. En esta la tasa de conversin es definida como:

(1.3)

Donde

son pesos para el tiempo t, inicial y final de la muestra

respectivamente. La constante de velocidad k es generalmente dada por la ecuacin de Arrhenius:

(1.4)

Donde E es la energa de activacin aparente (kJ/mol), R es la constante de los gases (8.314 J/K*mol), A es el factor pre-exponencial (min-1), T es la temperatura absoluta (K). la combinacin de las ecuaciones (1.2) y (1.4) da la siguiente relacin:

(1.5)

Para un proceso dinmico de TGA, introduciendo la velocidad de calentamiento, dentro de la ecuacin (1.5) se obtiene (1.6):

( )

(1.6)

Las ecuaciones (1.5) y (1.6) son las expresiones fundamentales de mtodos analticos para calcular los parmetros cinticos con base en los datos del TGA. Los modelos ms comunes estn en la tabla 9. 34

El mtodo de Friedman es el mtodo iso-conversional, que conduce directamente a la para un valor dado por la grafica frente . Para el

mtodo de Kissinger se utiliza el pico de temperatura

obtenido de la curva de

DTG. El mtodo Coats-Redfern modificado consiste en que el trazado de la mano izquierda de su ecuacin para cada velocidad de calentamiento frente a 1 / T da una familia de lneas rectas de pendientes . La solucin completa se va a

hacer iterativamente, primero suponiendo un valor de Ea y luego volver a calcular el lado izquierdo hasta que se produce la convergencia. Aqu, una solucin rpida, sin embargo, tambin est disponible moviendo suponiendo que es una constante (Yao, F.; et al.; 2008). en la interseccin y

Tabla 9. Mtodos cinticos para evaluacin de la energa de activacin por TGA.

Mtodo Friedman Kissinger Flynn-WallOzawa Coats-Redfen (modificado) [ [ ] Expresin [ ] [ ] [ ] ] ( ) ( Grafica ) Pendiente

Referencia: Yao, F.; et al. (2008)

1.7.4 Morfologa del grnulo de almidn por Microscopia Electrnica de Barrido en Ambiente (E-SEM) y por Microscopia ptica (MO). En el microscopio electrnico de barrido se construyen imgenes y contraste aprovechando la emisin de electrones (electrones secundarios) de una muestra, cuando sobre ella incide un haz enfocado de electrones de alta energa. La muestra tambin emite rayos X, los cuales pueden ser analizados para obtener informacin sobre la composicin del material. Los electrones emitidos por la interaccin del haz incidente y la muestra son colectados por los correspondientes detectores para producir una seal elctricas que posteriormente son analizadas.

Los microscopios pticos son unos de los ms usados a nivel de laboratorio, en este la luz visible atraviesa la muestra preparada y los lentes de aumento de 35

vidrio. Los lentes refractan (desva) la luz de manera que la imagen se magnifican cuando se proyecta hacia el ojo. Con sus diferentes aumentos se alcanza a detallar la estructura granular del almidn y distinguir algunos aspectos como forma y tamao, aunque no ms detallados que con la microscopia de barrido electrnico.

Algunas observaciones realizadas por estos dos mtodos para almidones de distintas especies (figuras 14 y 15) son las siguientes:

Maz: Las formas son aproximadamente irregulares, poligonales en el plano y se asumen polidricas irregulares en el espacio. El tamao de grnulo de almidn de maz es de 12.7 m y desviacin estndar de 5.61 m (Medina, J.; et al.; 2008).

Yuca: La forma general del grnulo de almidn nativo de yuca se aproxima a elipses y/o esferas, en ocasiones truncadas, como si hubiese recibido cortes en direcciones aleatorias. Tamao de grnulo con media 10.4 m y desviacin estndar 4.74 m (Medina, J.; et al.; 2008).

Papa: Formas circulares para los tamaos pequeos y elpticas para los tamaos grandes. Las superficies son suaves y homogneas; menos accidentadas que las dos fuentes agrcolas previas. Tamao de grnulo con media de 15.2 m y desviacin estndar de 10.6 m (Medina, J.; et al.; 2008).

Pltano: Los grnulos de almidn de pltano presentan forma de oval a elipsoidal, con un tamao de 20 a 50 m (Nuez, M.; et al.; 2004).

36

Figura 14. Micrografas por E-SEM de A) almidn de maz 5000x. B) almidn de yuca 500x. C) almidn de papa 1500x. D) almidn del fruto de pltano 500x (Han, Z.; et al.; 2009) (Nwokocha, L.; et al.; 2009) (Sujka, M. et al.; 2009) (Guerra, D.; et al.; 2008).

Figura 15. Micrografas por MO de A) almidn de maz 400x. B) almidn de yuca 400x. C) almidn de papa 400x (Medina, J.; et al.; 2008) y D) almidn del fruto de pltano 100x (Zhang, P.; et al.; 2005).

1.7.5 Grado de ramificacin y longitud promedio de los residuos en la cadena de la amilopectina. El 5% de los monmeros de la amilopectina tienen ramificaciones, lo cual, produce importantes diferencias en su comportamiento fsico, qumico y biolgico, comparado con la amilosa. Las ramificaciones presentes en la amilopectina se pueden clasificar en tres grupos denominados como A, B y C. Las cadenas tipo A 37

son cadenas cortas con un grado de polimerizacin entre 12 y 20, no llevan otras cadenas. Las cadenas tipo B, se conocen como cadenas largas tal que el grado de polimerizacin (DP) se encuentra entre 30 y 45, llevan entre una o ms cadenas. Finalmente las cadenas tipo C, son cadenas muy largas cuyo grado de polimerizacin es mayor a 60, es la cadena original que lleva el fin de la molcula (FAO/OMS; 1997).
Tabla 10. Promedio de la longitud de la cadena de la amilopectina para algunos almidones.
Almidn Longitud promedio entre ramificaciones de la amilipectina (N de molculas de glucosa) 22 20 20 22 22 Grado de ramificacin (% molar)

Banana Maize Potato Rice Tapioca

4.54 5 5 4.54 4.54

Referencia: Wolfrom, M. (1956).

Varios mtodos son usados para el estudio estructural del almidn y sus molculas que lo componen. Uno de ellos es la oxidacin con peryodato para identificar el grado de ramificacin de amilopectina, clculo de la longitud promedio de los residuos en la amilopectina y masa molecular de sta. El mtodo consiste en titular con hidrxido de sodio estndar el cido frmico producido por los grupos terminales de la amilopectina. En teora solo hay un grupo terminal reductor que genera 2 moles de cido frmico y el resto son grupos terminales no reductores que generan 1 mol del cido, por tanto, se puede suponer todos los grupos terminales como grupos no reductores, los cuales, indican la presencia de una ramificacin en la amilopectina. (Hew, C.; 1966). Durante la titulacin del cido frmico liberado con hidrxido de sodio, en presencia de productos de la oxidacin, el punto de equivalencia se encuentra a pH de 6.25 (Wolfrom, M.; 1956). El mtodo es sencillo de aplicar, aunque algunos datos de referencias que se encuentran para los almidones son de aos no muy recientes (tabla 10). Los valores reportados por este mtodo se pueden suponer como un promedio de las 38

ramificaciones tipo A, tipo B y tipo C encontradas en aos posteriores. En donde, la ramificacin tipo C es dada por el nico extremo reductor de la amilopectina, la B por ramificaciones con extremos no reductores que a su vez tienen una o ms ramificaciones a lo largo de su residuo y la tipo A ramificaciones con extremos no reductores sin ramificaciones en toda su longitud (Franco, M.L.; et al.; 2006).

39

2. OBJETIVOS

2.1 OBJETIVO GENERAL Obtener hidrolizados de almidn del jugo de pseudotallo del pltano Dominico Hartn por hidrlisis cida asistida por microondas.

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS Obtener almidn desde el jugo de pseudotallo de pltano Dominico Hartn. Cuantificar la cantidad de almidn. Determinar condiciones de pH, temperatura, tiempo de reaccin y concentracin de almidn, para la hidrlisis cida asistida y no asistida por microondas. Realizar una comparacin en la produccin de azcares reductores entre el proceso asistido por microondas y el realizado por calentamiento por conveccin.

40

3. METODOLOGA

3.1 CUANTIFICACIN DEL ALMIDN DEL PSEUDOTALLO DE PLTANO DOMINICO HARTN.

3.1.1 Recoleccin del material vegetal. Los pseudotallo del pltano Dominico Hartn se recolectaron en la hacienda Villa de Mara (figura 16) con ubicacin latitud 4.529506 y longitud -75.726512 a 2.7 Km sobre la va Armenia-Montenegro en el departamento del Quindo, Colombia. Se escogieron las plantas que se encontraron cerca a un trazado en forma de M en todo el cultivo. Se esper los tiempos de cosecha del pltano para el corte, y se cortaron 8 pseudotallos desechados, 4 colectados el 14 de marzo y 4 colectados el 10 de Abril de 2012, recolectados en horas de la tarde, aprovechndose que en el da se sintetiza glucosa y almidn en la fase oscura de la fotosntesis, adems de que el calor del da hace que la planta pierda agua (Curtis, H.; 2008) (figura 17). Se medi la altura total del pseudotallo y el dimetro superior e inferior. De igual forma se tom la altura del pseudotallo a desechar y el dimetro de la parte superior e inferior (volumen de un cono, ecuacin 3.1). Se hizo cortes con forma de cilindro en la parte de arriba (90 % altura), parte media (50 % altura) y parte baja (10 % altura), en el pseudotallo desechado; a cada corte se le tom su dimetro y altura para hallar los volmenes respectivos (volumen de un cilindro, ecuacin 3.2). Se marcaron con el nmero de la planta (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8) y la parte de sta de la cual se cort (arriba, abajo y medio). Se tom una muestra de 2 g de la parte transversal (figura 18) de cada uno de estos tres trozos, para la cuantificacin de almidn. Los tres cortes del pseudotallo se unieron y mezclaron y se prosigui con el estudio de la obtencin de almidn y el clculo del rendimiento de extraccin tem 3.2. ste fue un trabajo conjunto con los investigadores Ladino, M. A. y Cceres, J. D. (2012), integrantes del grupo Qumico de Investigacin y Desarrollo ambiental (QIDEA) de la Universidad del Quindo. 41

(( )

( )

(3.1)

(3.2)

En donde: Vcono = Volumen de un cono (m). Vcilindro = Volumen de un cilindro (m). D = dimetro (m). Di = dimetro inferior (m). L = altura (m). Ds = dimetro superior (m).

Figura 16. Sitio de recoleccin del material (Google maps. 2012).

42

Figura 17. Nombres y ubicacin de las partes analizadas en el pseudotallo del pltano.

Figura 18. Muestra en cada trozo de pseudotallo desechado para

cuantificacin de almidn.

I.

Anlisis estadstico.

Se realizaron anlisis por triplicado para los trozos arriba, medio y bajo del pseudotallo desechado. La cantidad de almidn en un pseudotallo desechado fue el promedio de las tres ubicaciones.

Se realiz prueba de Kruskal-Wallis entre factor ubicacin, con los niveles arriba, medio y bajo, como variable respuesta el porcentaje de almidn en el pseudotallo en el software Statgrapichs 5.0. Se tom como hiptesis nula: las medias de las ubicaciones son iguales y como hiptesis alterna: las medias son diferentes. Se 43

rechaza la hiptesis nula si Pvalor<0.05 con 95.0 % de confianza. Este anlisis fue realizado por no ser paramtrico y no poseer supuestos de distribucin normal e igualdad de varianza (Daz, A.; 2009).

Tambin, se realiz la prueba de Kruskal-Wallis entre factor N de pseudotallo desechado, con ocho niveles, uno por cada peudotallo representados por los nmeros del 1 al 8, en el software Statgraphics 5.0. Se tom como variable respuesta el porcentaje de almidn en el pseudotallo. Se asumi como hiptesis nula: las medias de los pseudotallos desechados son iguales y como hiptesis alterna: las medias son diferentes. Se rechaza la hiptesis nula si P valor<0.05 con 95.0 % de confianza. Se aprovecha que el anlisis no necesita supuestos y parmetros para interpretar los resultados (Daz, A.; 2009).

3.1.2 Cuantificacin del almidn en el pseudotallo. Los 2 g de muestra de la parte trasversal de cada corte del pseudotallo desechado dispuestos para la cuantificacin de almidn, siguieron el mtodo de la antrona modificado explicado en el tem 3.1.4. Este mtodo tiene como principio la extraccin de grasas con ter de petrleo y azcares reductores con alcohol etlico anhidro a ebullicin, permaneciendo el almidn. El residuo de almidn se solubiliza con cido perclrico diluido y se mide, a 630 nm, la cantidad del complejo desarrollado al calentarlo con el reactivo antrona-cido sulfrico (Lpez, C.; Ramrez, G.; Meja, A. y Jimnez, G.; 1992). Se determin el porcentaje de almidn en cada corte del tallo, usando la ecuacin 3.3:

(3.3)

44

3.1.3 Humedad y materia seca en el pseudotallo. Se tomaron y pesaron tres muestras, parte de arriba, media y baja de un pseudotallo desechado. Y se lleg a humedad en equilibrio a 60C en un horno de recirculacin Binder serie ED.

3.1.4 Mtodo de antrona modificado Cerca de 2 g de muestra de cada uno de los trozos de pseudotallo se pas a un mortero, al cual se le agregaron 25 mL de una disolucin alcohol-ter, se tritur la muestra, se agit y se dej en reposo de 3 a 4 minutos. Luego se decant el sobrenadante y al residuo se le agregaron 10 mL de alcohol etlico en caliente al 99.9%, se agit, se dej en repos y decant, nuevamente. Al residuo se le trat con 5 mL de agua destilada, se macer y se le adicionaron 6,5 mL de cido perclrico al 52%, se dej reaccionar por 15 minutos y posteriormente se aadieron 20 mL agua destilada y el sobrenadante fue llevado a un baln aforado de 50 mL. Nuevamente al residuo se le trat con 5 mL de agua destilada, se macer, adicion cido perclrico al 52% dejando reposar por 30 minutos y todo el contenido fue llevado al matraz aforado anterior. A continuacin se filtr y se desech los primeros 5 mL de la solucin aforada. Luego 5 mL se diluyeron a 100 mL. Finalmente se toma una alcuota de 2 mL de la disolucin anterior a un tubo y se aade 5 mL de reactivo de antrona (0.2 g de antrona en 100 mL de H 2SO4 9697%), se mezcl y se calent durante 10 minutos a bao mara a ebullicin, se enfr a temperatura ambiente y se determin la absorbancia a 625 nm en un espectrofotmetro ultravioleta visible marca HP-8453, frente a un blanco con agua y reactivo teniendo la curva de calibracin que se realiz con diferentes porcentajes de glucosa, la cual se observa en la figura B-1 del anexo B (Lpez, C.; Ramrez, G.; Meja, A. y Jimnez, G.; 1992).

45

3.2 OBTENCIN DE ALMIDN DESDE JUGO DE PSEUDOTALLO DE PLTANO DOMINICO HARTN POR VA HMEDA.

3.2.1 Preparacin del jugo de pseudotallo. Se mezclaron los tres trozos de pseudotallo que se obtienen al final de la recoleccin tem 3.1.1 (suman entre 1 Kg y 4 Kg), picndose en partes ms pequeas antes de ser llevadas a un molino de cuchillas industrial. Se adicionaron 2 L de agua para facilitar el tratamiento de molienda. Se proces alrededor de 1 minuto y el jugo obtenido se filtr a travs de una tela de nylon (tamao de poro: 400 m2), para permitir el paso del almidn. Luego cada jugo fue nombrado con el nmero de la planta (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8). Se realizaron 8 experimentos. Trabajo conjunto con los investigadores Ladino, M. A. y Cceres, J. D. (2012), integrantes del grupo Qumico de Investigacin y Desarrollo ambiental de la Universidad del Quindo.

3.2.2 Precipitacin y purificacin del almidn.

Luego de la preparacin del jugo, ste se sediment por un da a 10 C, el lquido sobrenadante se decant y se obtuvo una pasta del almidn impuro. Se adicion este lquido sobrenadante a la pasta (proporcin 10 mL por 1 mL de pasta), se agit, se filtr 2 veces a travs de la tela de nylon y se sediment por 2 horas a 10 C, se retir la mitad del sobrenadante, se dispers nuevamente, se dej reposar por 30 minutos a 10 C y se retir el resto del lquido. El proceso realizado a la pasta de almidn se repiti 2 veces, con agua potable (Mazzeo, M.; et al.; 2008) (Mazzeo, M., et al.; 2010). Despus, la pasta pura de almidn obtenida, se sec a condiciones ambientales, se macer y se llev a 60C por una noche hasta humedad constante. Por ltimo se registr su peso y se midi su pureza como se explica en el tem 3.5.1. Investigacin conjunta con los investigadores Ladino, M. A. y Cceres, J. D. (2012), integrantes del grupo QIDEA de la Universidad del Quindo.

46

3.2.3 Rendimiento del aislamiento. Para el clculo de extraccin se calcula el almidn contenido en el peso del pseudotallo, conociendo el porcentaje de almidn presente en este (hallado en el tem 3.1), la cantidad de almidn final obtenida y su pureza, tem 3.2.2. Los clculos para cada ensayo se muestran en la ecuacin 3.4:

(3.4)

I.

Anlisis estadstico.

Se realiz una regresin lineal simple, por correlacin entre la variable almidn contenido y la variable almidn aislado. Se verific el rechazo de datos para obtener un coeficiente de correlacin cercano a 1, por recomendacin del grupo en asesora estadstica de la Universidad del Quindo, usando el software Origin Pro 8.

3.3 HIDRLISIS CIDA DEL ALMIDN DEL PSEUDOTALLO.

3.3.1 Hidrlisis cida asistida por microondas Se realiz un procedimiento similar usado por Yu, H.; et al. (1996). Se suspendi 0.3243 y 0.1630 gramos de almidn obtenido (4 y 8 %p/v, respectivamente) en un volumen de 4 mL de cido sulfrico concentraciones de 0.2288 M y 0.5001 M, dentro de un recipiente cerrado capaz de soportar 3.5 atm de presin (las suspensiones de almidn equivalen al 4% y 8% en p/v, ya que, generalmente se realizan cerca del 10 % y adems el jugo de pseudotallo posee concentraciones similares a estas, lo que hara a que este estudio sirviese de informacin en hidrlisis posteriores del almidn directamente en los jugos). Se irradi en un horno microondas convencional marca LG HM 1449C de 2.45GHz y 1000 W de potencia de salida (figura 19), con tiempos de irradiacin de 1, 2 3, 6 y 8 minutos (para alcanzar valores asintticos, omitiendo los valores de 4, 5 y 7 minutos al 47

observar poca variabilidad en los resultados desde 3 a 8 minutos) al 20% de su potencia (para un bajo consumo energtico), enfriando los recipientes con bao de agua a temperatura ambiente por 3 segundos cada 30 segundos de reaccin. Luego se neutraliz con hidrxido de sodio diluido, se llev a un volumen de 25 mL y se refriger a 10C. Se us el mtodo 3.3.3 para la determinacin de azcares reductores y el mtodo 3.3.4 para determinar la cantidad de HidroxiMetilFurfural (HMF).

Figura 19. Microondas domestico marca LG HM 1449C de 2.45GHz y 1000W de potencia de salida.

I.

Anlisis estadstico.

Cada experimento fue realizado por triplicado y a estos se les aplic un anlisis de varianza (ANOVA) de tres factores con dos interacciones usando el software Statgraphics 5.0. Tomando como factores la suspensin de almidn con los niveles 4 % y 8 %, concentracin de cido con los niveles 0.2288 M y 0.5001 M y tiempo de reaccin con los niveles 1, 2, 3, 6 y 8 minutos. Sobre la variable respuesta porcentaje de azcares reductores respecto al almidn (%ART). Si el Pvalor< 0.5, se encuentra que el factor tiene efecto sobre la variable respuesta con un nivel de confianza del 95.0 %. Existe interaccin entre dos factores cuando el efecto de un factor sobre la variable respuesta depende de cul sea el nivel del otro factor, para esto Pvalor<0.05 a igual nivel de confianza. 48

Para observar la diferencias estadsticas significativas entre los niveles de cada factor se hizo la prueba de rangos mltiples de Duncan al 95.0 % de confianza (Daz, A.; 2009) con el software Statgraphics 5.0.

3.3.2 Hidrlisis cida del almidn por incubacin Se suspendi 0.1630 g y 0.08150 g de almidn purificado (4 y 8 %, respectivamente) en 2 mL de cido sulfrico 0.2288 M y 0.5001 M, dentro de tubos de ensayo tapados. Se incubaron en un horno de recirculacin Binder serie ED (figura 20) por 1, 3 y 5 horas calentado a 110C. Por ltimo se llev hasta pH 7 con hidrxido de sodio, y se llevaron a un volumen de 25 mL, refrigerndose a 10C. Se sigui el mtodo 6.3.3 para la determinacin de azcares reductores y el mtodo 6.3.4 para determinar HMF.

Figura 20. Horno de recirculacin Binder serie ED.

I.

Anlisis estadstico.

Cada experimento fue realizado por triplicado e igualmente que para la hidrlisis por microondas, se emple un ANOVA de tres factores con dos interacciones, usando el software Statgraphics 5.0. Se tom como factores la suspensin de 49

almidn con los niveles 4 % y 8 %, concentracin de cido con los niveles 0.2288 M y 0.5001 M y tiempo de reaccin con los niveles 1, 3 y 5 horas. Sobre la variable respuesta porcentaje de azcares reductores respecto al almidn (%ART). Si el Pvalor< 0.5, se encuentra que el factor tiene efecto sobre la variable respuesta con un nivel de confianza del 95.0 %. Existe interaccin entre dos factores cuando el efecto de un factor sobre la variable respuesta depende de cul sea el nivel del otro factor, para esto Pvalor<0.05 a igual nivel de confianza. Para observar la diferencias estadsticas significativas entre los niveles de cada factor se hizo la prueba de rangos mltiples de Duncan al 95.0 % de confianza, usando el software Statgraphics 5.0 (Daz, A.; 2009).

3.3.3 Azcares Reductores Totales (ART) El contenido de azcares reductores se determin por el mtodo fotocolorimtrico del cido 3,5-dinitrosalicilico (DNS) indicado por Miller (1959), mediante una curva de calibracin con glucosa, en un espectrofotmetro ultravioleta visible. Para la preparacin del reactivo DNS, se mezclaron y se disolvieron en 250 mL de agua destilada, 8 g de NaOH y 150 g de tartrato de sodio y potasio. Posteriormente se agregaron 5 g de cido dinitrosacilico (DNS) bajo calentamiento y oscuridad. Se dej enfriar para aforar a 500 mL con agua destilada y se almacen a 4 C protegido de la luz. En la preparacin de las soluciones patrn para la curva de calibracin: se prepar una solucin madre de glucosa grado analtico con una concentracin de 1000 ppm, por dilucin de sta se prepararon soluciones de concentraciones 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 ppm

respectivamente. Para la obtencin de datos de la curva de calibracin de glucosa, se mezclaron 1 mL de solucin de glucosa con 1 mL de reactivo DNS y 2 mL de agua destilada. Se coloc a reaccionar en un bao mara por 10 minutos, la reaccin se detuvo introduciendo el tubo de ensayo en un bao de hielo durante 10 min. Posteriormente se agregaron 8 mL de agua destilada y dej reposar por 5 min. Se ley la absorbancia a 540 nm en un espectrofotmetro UV-Vis marca HP50

8453. El blanco utilizado se prepar de igual forma pero se agreg agua destilada en lugar de solucin de glucosa. Luego se le realiz el mismo tratamiento a cada muestra hidrolizada. La curva de calibracin se muestra en la figura C-1 del anexo C.

Estos valores fueron expresados en el porcentaje de azcares reductores totales formados por el peso de almidn suspendido, la ecuacin 3.5 lo indica.

(3.5)

En donde %ART = 111 %, significa una hidrlisis completa del almidn, por la incorporacin del agua en la glucosa que puede formarse.

3.3.4 Anlisis de HidroxiMetilFurfural (HMF). Para cuantificar el contenido de HMF, se sigui el mtodo de White (1979), modificado. Se llevaron 20 mL de la solucin del hidrolizado a un baln aforado de 25 mL y se agreg 0,25 mL de solucin Carrez I (K4Fe(CN)6x3H2O, 15 % p/v), seguidamente 0.625 mL de solucin Carrez II (Zn(CH3CO2)2x2H2O,30 % p/v). Se llev a volumen final de 25 mL con agua destilada y se mezcl. La solucin se filtr con papel Whatman N 2, eliminando los primeros 10 mL del filtrado. Se tom dos tubos de ensayo y se colocaron 4 mL de filtrado en cada uno. En un tubo se agreg 4 mL de agua destilada (muestra) y en el otro 4 mL de solucin de NaHSO3 0,2 % w/v (el cual sirve de blanco de referencia). Se mezcl bien y se midi la densidad ptica de la muestra contra la referencia a 284 nm y 336 nm en un espectrofotmetro UV-Vis marca HP-8453. La concentracin de HMF, en mg/L hidrolizado, se calcul con la formula modificada 3.6 para la hidrlisis por microondas, ya que el volumen final fue de 4 mL y la ecuacin 3.7 para la hidrlisis por incubacin, porque el volumen final fue de 2 mL:

51

(3.6) Para hidrolizados por microondas.

(3.7) Para hidrolizados por incubacin.

3.3.5 Glucosa por mtodo Glucosa Oxidasa-Peroxidasa (GOD-PAD). Se escogieron 4 experimentos con sus triplicados del mtodo de hidrlisis por incubacin y 4 experimentos con sus triplicados de la hidrlisis cida asistida por microondas. As, observar si hay una diferencia estadsticamente significativa entre los resultados obtenidos por este mtodo contra los obtenidos por el mtodo de ART del tem 3.3.3.

El mtodo se bas en la determinacin enzimtica de glucosa en suero, plasma y otros fluidos biolgicos, en el cual 0.01 mL de solucin patrn de D-glucosa (1000 mg /L) o de muestra de hidrolizados fueron puestas a reaccionar con 1 mL de reactivo enzimtico (75mM de Buffer fosfato pH 7.0, glucosa oxidasa 15000U/L, peroxidasa 2000 U/L, 0.5 mM de 4-aminoantipirina, 10 mM cido phidroxibenzoico y 0.1 g/dL azida sdica), en un bao a 37C por 10 minutos y fue medida su absorbancia a 505 nm sobre un blanco de 0.01 mL de agua y 1 mL de reactivo enzimtico en un equipo fotomtrico Humanlizer 3000. La curva de calibracin se observa en la figura C-2 del anexo C. La ecuacin 3.8 representa el clculo de la concentracin de glucosa para los hidrolizados:

(3.8) (3.9) I. Anlisis estadstico.

Para la comparacin entre el mtodo de ART y GOD-PAD, se realizaron ensayos por triplicado y a estos se les aplic un ANOVA de dos factores y dos 52

interacciones. Teniendo como factores el Mtodo con los niveles ART y GOD-PAD y N de experimento con los niveles del 1 al 8 de los ocho experimentos, dejando como variable respuesta %ART o %Glucosa. Habiendo interaccin si para que un factor influencia la variable respuesta, dependa del nivel del factor restante. Si el Pvalor< 0.5, se encuentra que el factor tiene efecto sobre la variable respuesta con un nivel de confianza del 95.0 %.

Se emple, adems una prueba de rangos mltiples de Duncan al 95 % de confianza para observar los niveles del factor Mtodo (Daz, A.; 2009).

3.4 COMPARACIN ENTRE LA HIDRLISIS ASISTIDA POR MICROONDAS Y LA HIDRLISIS POR CONVECCIN. Se realiz un ANOVA de un solo factor con 95.0 % de confianza, nombrado Experimento (mezcl todos los resultados de los ensayos por microondas e incubacin), con variable respuesta el porcentaje de azcares reductores dependiendo del almidn (%ART). Por ltimo se realiz una prueba de rangos mltiples de Duncan con 95.0 % de confianza, para ver diferencias entre los experimentos (Daz, A.; 2009). Esto con el software Statgraphics 5.0.

3.5 CARACTERIZACIN DEL ALMIDN. La caracterizacin fue una investigacin conjunta con los investigadores Ladino, M. A. y Cceres, J. D. (2012), integrantes del grupo QIDEA de la Universidad del Quindo.

3.5.1 Pureza Para la determinacin se pes una muestra de aproximadamente de 100 mg de almidn seco a 60C, se adicion 50 mL de agua, se calent y agit por 30 minutos a 80C. Se llev a un volumen de 100 mL, se afor y se tom una alcuota de 2 mL para diluirse en 50 mL de con agua destilada. Luego se sigui el final del 53

mtodo de antrona modificado (tem 3.1.4) para hallar la cantidad de glucosa generada y se us la ecuacin 3.10.

(3.10)

3.5.2 Difraccin de Rayos X. Se analizaron las muestras en un difractmetro marca Bruker D8 Advance con ctodo de Cu y detector de centelleo3, utilizando un barrido 2 entre 5 y 40 con una velocidad de paso de 0,01/s. Luego se propuso una lnea base para el difractograma y se establecieron los picos cristalinos para el clculo de las areas amorfas y cristalinas. Por ltimo se calcul el porcentaje de cristalinidad de la muestra con el mtodo Hermans y Weidinger (de la Rosa, J.; 2009), con la ecuacin 3.11. (3.11)
Donde %Xc = porcentaje de cristalinidad Ac = rea cristalina en el difractograma Aa = rea amorfa en el difractograma

3.5.3 Espectroscopia de Infrarrojo con Transformada de Fourier (FTIR) y Accesorio de Reflectancia Total Atenuada (ATR). Para estudiar mejor la cristalinidad del almidn nativo fue empleado un espectrofotmetro Thermo Nicolet Avatar 320 equipado con un accesorio de refletancia total atenuada ATR tipo IIA con cristal de diamante, a una resolucin de 4cm-1 y 32 barridos para muestra. Luego se calcul el radio R (1047/1022) con las intensidades de los respectivos nmeros de onda (Van Soest, J.; 1995).

Instituto Interdisciplinario de las Ciencias. Universidad del Quindo.

54

3.5.4 Amilosa aparente. I. Mtodo del valor azul. Se pesaron 100 mg de muestra de amilosa y 100 mg de amilopectina puras de maz en frascos volumtricos de 100 mL. Se agreg a cada frasco 1 mL de etanol al 95 % y 9 mL de hidrxido de sodio 1 N, se tap y se dej a temperatura ambiente entre 18-24 horas. Se complet hasta 100 mL con agua destilada. Se prepar la curva estndar de acuerdo a los valores de la tabla 11.

Por ltimo en un baln volumtrico de 100 mL que contena 50 mL de agua destilada, se agreg una alcuota de 5 mL de cada punto de la curva estndar, 1 mL de cido actico 1 N y 2 mL de solucin de yodo al 0.2 % disueltos en KI al 2 %, se mezcl bien y se complet el volumen con agua destilada. Se almacen los frascos bajo oscuridad durante 20 minutos y ley la densidad ptica a una longitud de onda de 620 nm en un espectrofotmetro UV-Vis marca HP-8453. La curva de calibracin se observa en el anexo E, figura E-1.
Tabla 11. Preparacin de la curva estndar de amilosa.

Amilosa (%) 0 10 20 25 30 40

Solucin amilosa (mL) 0 2 4 5 6 8

Solucin amilopectina (mL) 18 16 14 13 12 10

NaOH 0.09N (mL) 2 2 2 2 2 2

La muestra de almidn purificada y seca a 60C, se prepar de la misma forma que las soluciones patrones de amilosa y amilopectina, y para su anlisis se trat como si fuese la solucin de 0% de amilosa, mostrada en la tabla 11 usando como blanco la solucin de 0% de amilosa (Aristizbal, J.; et al.; 2007).

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II. Mtodo termogravimtrico. Se realizaron mezclas desde amilosa y amilopectina puras de maz para obtener porcentajes de amilosa de 0, 35, 50, 75 y 100 %. El anlisis trmico de todas las muestras se llev a cabo en un analizador trmico TG 209 F1 IRIS, dentro de un crisol de Al2O3. Las mediciones se realizaron en una atmsfera de nitrgeno (con caudal del gas de 20 mL/min), llevando una velocidad de calentamiento 15 C/min. Se pes cerca de 5 mg de mezcla o muestra, secas a 60C, y se calent hasta 650C, comenzando desde la temperatura ambiente. Para cada mezcla la temperatura del 50% de prdida de masa fue determinada y se traz una curva de calibracin (figura E-3, en el anexo E). Luego por interpolacin fue hallada el porcentaje de amilosa de la muestra (Stawski, D.; 2008).

3.5.5 Estudio cintico de anlisis termogravimtrico para almidones. Las curvas termo-gravimtricas (TG) y las curvas de la derivadas termogravimtricas (DTG) del almidn nativo se llevaron a cabo en un analizador trmico TG 209 F1 IRIS, bajo una atmsfera de flujo de nitrgeno (N2, 20 mL/min), en un crisol de Al2O3, con un masa de alrededor de 6 mg de muestra seca a 60C y con tasas de calentamiento de 2, 5, 15, 20 y 30 C/min -1, desde temperatura ambiente hasta 700 C y finalizando con una isoterma de 700C por 30 minutos. Para el clculo de la energa de activacin se realizaron cuatro mtodos el de Friedman, el de Flyn-Wall-Ozawa y Coats-Redfen (modificado) y el de Kissinger. La fraccin de masa que se volatiliz () fue asumida como 0, cuando la curva del DTG se hizo igual a 0 despus de la prdida del agua contenida, solo en los mtodos de Friedman, Flyn-Wall-Ozawa y Coats-Redfen (modificado) (Guinesi, L., et al.; 2006).

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3.5.6 Microscopia Electrnica de Barrido en el Ambiente (E-SEM) El grnulo del almidn nativo aislado del pseudotallo del pltano y purificado fue examinado morfolgicamente y fotografiado en un microscopio electrnico de barrido, modelo XL 30 TMP marca FIE-Philips4 en el ambiente, en donde una muestra fue observada en una aceleracin de voltaje de 20.0 Kv, un vaco de 0.9 torr y con aumentos de 500x, 1000x y 2000x.

3.5.7 Microscopia ptica (MO). Para la caracterizacin microgrfica se emple un microscopio ptico Nikon Eclipse C-200 con una cmara digital Canon PowerShot A620 de 7.1 megapixeles. Se prepar una suspensin de almidn en exceso de agua. La cual se llev a un portaobjetos, cubierto por otro, y enseguida, al microscopio con un aumento de 100x (Patel, B. y Seetharaman, K.; 2006).

3.5.8 Grado de ramificacin y longitud promedio de residuos de la amilopectina. I. Fraccionamiento del almidn y purificacin de la amilopectina. El fraccionamiento se realiz modificando el mtodo de Lansky et al. (1949). Se suspendieron 5 g de almidn nativo en 250 mL de agua, se ajust el pH en 6.4 con un buffer de fosfato y luego se coloc en reflujo a ebullicin durante 2 horas, con agitacin constante. Pasado este tiempo se aadi 50 mL de una mezcla de n-butanol/alcohol amlico en relacin 1:1, y se calent a ebullicin, con agitacin constante por 1 hora. La solucin se dej enfriar a temperatura ambiente y a 10C durante la noche.

La solucin fue decantada y centrifugada, en donde el sobrenadante contena la amilopectina y los complejos amilosa/n-butanol y amilosa-alcohol amlico se
4

Laboratorio de Fsica de Plasma. Universidad Nacional de Colombia. Sede Manizales.

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encontraban en el precipitado. A esta solucin se le aadi una cantidad de metanol equivalente a 1/3 del volumen de la solucin a precipitar. La amilopectina obtenida se separ por sedimentacin y decantacin, se dej secar a medio ambiente y luego a 40C. De esta forma la amilopectina era prcticamente pura.

II. Oxidacin con peryodato. Se pes una muestra cerca de 80 mg de amilopectina previamente extrada y fue llevada a un baln aforado de 50 mL, se adicionaron 20 mL de agua destilada, se calent lentamente con agitacin constante a 80 C, hasta que se logr la disolucin completa de la amilopectina, se agreg una alcuota de 10.0 mL de solucin de NaIO4 0.35 M y se complet el volumen del baln con agua destilada. Se prepar un blanco de igual forma pero sin amilopectina. Se envolvieron los balones en papel aluminio, y se incubaron en un bao de agua a 50 C durante 1 hora. Se agitaron los dos balones ocasionalmente.

Se midieron tres alcuotas de 10 mL de la solucin almidn-peryodato y se procedi de igual forma con el blanco. Se agregaron a cada alcuota 3 gotas de etilenglicol y dej en la oscuridad durante 15 minutos (Redley, J.; 1976). Se titul el cido frmico producido a cada muestra con una disolucin de NaOH 0.004994 M, hasta pH 6.4. La cantidad de cido se calcul con la ecuacin 3.11

(3.11)

III. Glucosa en la amilopectina. Para conocer la cantidad de glucosa en la amilopectina usada, se pes cerca de 8 mg de sta y se llevaron a un baln aforado de 250 mL con 20 mL de NaOH 0.5 N y 1 mL de alcohol 95 %. Se dej en reposo hasta que se disolvi por completo la amilopectina. Posteriormente se complet el volumen y se mezcl la solucin. Por ltimo se sigui el final del mtodo de antrona modificado explicado en el tem

58

3.1.4 y la cantidad fue expresada como lo indica la ecuacin 3.12 (Redley, J.; 1976). (3.12)

Finalmente para conocer el grado de ramificacin molar y la longitud promedio de los residuos de la amilopectina se emple la ecuacin 3.13 y 3.14 respectivamente.

(3.13)

(3.14)

59

4. ANLISIS DE RESULTADOS.

4.1 CUANTIFICACIN DEL ALMIDN DEL PSEUDOTALLO DE PLTANO DOMINICO HARTN. Los resultados del contenido de almidn para cada pseudotallo desechado y ubicacin se encuentran en la tabla B-1 y B-2 en el anexo B y un resumen se muestra en la tabla 12.

Para el anlisis de los resultados se realiz la prueba de Kruskal-Wallis, ya que no se encontr una distribucin normal en los datos y esta prueba estadstica no necesita este parmetro para el anlisis (Daz, A.; 2009) (tabla B-3 del anexo B), para observar si el contenido de almidn tiene diferencia significativa entre los niveles del factor ubicacin en el pseudotallo desechado. El resultado fue que el contenido de almidn no tena diferencias estadsticamente significativas entre las tres ubicaciones (arriba, medio y bajo) en los 8 pseudotallos desechados (Pvalor> 0.05, para la prueba de Kruskal-Wallis). Por tanto se puede generalizar que el contenido de almidn para un pseudotallo desechado ser el promedio de sus tres ubicaciones.

La prueba de Kruskal-Wallis (Daz, A.; 2009) entre la variable respuesta contenido de almidn contra el factor pseudotallo desechado con sus 8 niveles (plantas), tambin fue realizada, porque, igualmente los datos no mostraban distribucin normal. Se encuentra una diferencia estadsticamente significativa (tabla B-4, Pvalor< 0.05 para la prueba), lo que indica que cada planta posee un contenido de almidn en su peudotallo desechado, diferente de la otra. El promedio de almidn para las 8 pseudotallos desechados se puede decir es de 1.020.55 % con base en el peso hmedo de las muestras.

60

Tabla 12. Contenido de almidn por ubicacin y por planta.

% almidn (%) Ubicacin Arriba Medio Bajo N pseudotallo desechado 1 2 3 4 5 6 7 8 Media Desviacin Estndar Media 0.982 0.930 1.041 Media 0.586 0.486 0.774 0.944 1.716 1.790 1.452 0.449 1.025 0.552 Desviacin Estndar 0.784 0.440 0.720 Desviacin Estndar 0.024 0.167 0.244 0.155 0.866 0.774 0.329 0.013

Trabajo conjunto con los investigadores Ladino, M. A. y Cceres, J. D. (2012)

Por otra parte para el factor nmero de planta, los resultados de la tabla 12 muestran una alta variabilidad entre las medias de las plantas, lo que puede deberse a errores de mtodo, diferencias en los tiempos de cosecha y posibles enfermedades en las plantas, haciendo entonces que la distribucin no sea

normal y que la varianza no sea significativamente igual en todas las medias. El porcentaje de materia seca encontrado de 6.31 % (tabla 13) es cercano al reportado en la literatura, el cual es de 8 % (Botero, L.; et al.; 2009) (tabla 1). Por tanto, el almidn puede estar alrededor del 16.23 % en la materia seca del pseudotallo, lo que indica que si se usa este almidn se aprovechara mejor la materia seca del residuo.

61

Tabla 13. Humedad y materia seca en el pseudotallo.

Parte Pseudotallo Arriba Medio Bajo Peso muestra (g) 60.9925 102.6696 93.3322 Peso seco (g) 4.4509 6.1554 5.2654 Media Desviacin Estndar Humedad (%) 92.7025 94.0047 94.3584 93.6885 0.8720 Materia seca (%) 7.2975 5.9953 5.6416 6.3115 0.8720

Trabajo conjunto con los investigadores Ladino, M. A. y Cceres, J. D. (2012)

El peso aproximado del pseudotallo desechado y el pseudotallo total de cada planta de pltano, se determin multiplicando el volumen del pseudotallo desechado o el total (volmenes de un cono) por la densidad promedio de las tres ubicaciones (arriba, medio y abajo) de cada planta. Se realiz de esta manera porque se dificultaba el pesaje del material, ya que parte de este tallo no poda ser cortado despus del destronque porque previene plagas a la planta nueva (Belalczar, S.; et al.; 1996). Los resultados (resumen en tabla 14 y tabla B-1, datos totales) muestran un peso para el pseudotallo total de 42.507.65 Kg y un peso de 26.096.39 Kg para el pseudotallo desechado.
Tabla 14. Peso del pseudotallo total y desechado.
Planta 1 2 3 4 5 6 7 8 densidad (g/m3) 532272.76 392420.739 540602.3746 516120.656 691624.5684 769288.7314 597999.0425 638524.8276 volumen pseudotallo desechado (m3) 0.0447 0.0482 0.0591 0.0756 0.0338 0.0288 0.0414 0.0388 volumen pseudotallo total (m3) 0.0712 0.0861 0.0914 0.1116 0.0564 0.0493 0.0729 0.0638 Media Desviacin Estndar Peso pseudotallo desechado (g) 23802.5108 18896.9127 31955.0448 39039.4113 23356.2706 22125.6083 24783.8247 24749.0582 26088.5802 6389.1984 Peso pseudotallo total (g) 37920.7229 33789.2364 49421.4194 57575.6665 39022.0330 37938.8223 43604.7809 40740.0385 42501.5900 7646.1711

62

4.2 OBTENCIN DE ALMIDN DESDE EL JUGO DE PSEUDOTALLO DE PLTANO DOMINICO HARTN POR VA HMEDA. Se realizaron 8 experimentos con las partes de los 8 pseudotallos anteriores, a los que ya se les haba cuantificado el contenido de almidn. Para el experimento 6 (pseudotallo 6), el valor del rendimiento fue rechazado, por la tcnica de deteccin de valores atpicos de la regresin lineal simple entre las variables almidn calculado y almidn aislado, buscando la mejor correlacin lineal (Uribe, I.; 2010) (figura 21). Se realiz de esta manera porque la variable Rendimiento no posee distribucin normal. Los datos y los resultados se resumen en la tabla 15 y en la tabla C-1, del Anexo C.

Tabla 15. Rendimiento en el aislamiento de almidn del pesudotallo va hmeda.

Experimento 1 2 3 4 5 7 8 Pseudotallo (g) 2946.7357 1861.0274 5233.7536 2958.8754 1167.2036 1052.3043 737.2169 Almidn calculado (g) 17.1511 9.9691 40.0510 28.3228 20.0563 15.7722 3.3004 Almidn aislado (g) 8.4484 3.1866 25.8604 20.8581 12.2610 9.0386 2.0157 Pureza (%) 84.7678 97.5927 97.5421 88.3067 96.6875 97.4713 93.6753 Rendimiento* (%) 41.7555 31.1954 62.9815 65.0329 59.1079 55.8579 57.2115

Trabajo conjunto con los investigadores Ladino, M. A. y Cceres, J. D. (2012) (* )

El rendimiento en el aislamiento del almidn para estos 7 ensayos es de 53.3112.31 % si se realiza el clculo del promedio, pero el valor no puede generalizarse, solo es determinante para estas 7 muestras, adems, la desviacin estndar indica que el valor es poco confiable y no se encuentra una distribucin normal. Por lo tanto, para poder generalizar el valor del rendimiento se hizo una regresin lineal simple, donde se tom como variable dependiente el peso de almidn puro aislado (y) y como variable independiente la cantidad calculada de almidn de la muestra (x), para esto se supone la ecuacin 63 . Por tanto la

pendiente

es la razn del aislamiento de almidn con respecto al almidn

calculado, lo que indica, el rendimiento en el aislamiento. Segn la regresin lineal (figura 21) se obtuvo la ecuacin 4.1:

(4.1)

Donde: [ Derivando: ] [ ]

Figura 21. Regresin lineal para el rendimiento del aislamiento. Trabajo conjunto con los investigadores Ladino, M. A. y Cceres, J. D. (2012)

Por tanto, se puede generalizar que para cualquier nmero de muestras, el mtodo hmedo usado de obtencin de almidn tiene un rendimiento de extraccin de 59.76 3.25 % (pendiente), con una certeza del 97.965 % (definido por el coeficiente de correlacin al cuadrado). Adems, el resultado es mucho mejor que para el mtodo hmedo usado para el aislamiento de almidn desde el fruto del pltano Dominico Hartn por Mazzeo, M.; et al. (2008), el cual es de 56,762 1,899 % de extraccin. 64

4.3 HIDRLISIS CIDA DEL ALMIDN DEL PSEUDOTALLO. 4.3.1 Hidrlisis cida asistida por microondas Se realiz una ANOVA de tres factores y dos interacciones (Daz, A.; 2009), para los valores mostrados en la tabla 16, en donde, la variable respuesta o dependiente fue la cantidad de azcares reductores formados respecto a la cantidad de almidn, tomada como un porcentaje (%ART5) y los factores fueron el tiempo con 5 niveles (1, 2, 3, 6 y 8 minutos). La concentracin de almidn con dos niveles (4 y 8 % en suspensin cida) y la concentracin de cido sulfrico con dos niveles (0.2288 y 0.5001 M). (Anexo D en la tabla D-1).

Los resultados arrojados indican que cada factor tiene efecto sobre la cantidad de azcares reductores formados (todos los factores con Pvalor<0.05), lo que produce que las interacciones entre dos factores tambin estn influenciando el resultado final y que un factor cualquiera dependa de los dems (todas la combinaciones con Pvalor<0.05). Adems se realiz pruebas comparativas de rangos mltiples de Duncan (Daz, A.; 2009) para observar, s se encontraba una diferencia estadsticamente significativa entre los niveles de cada factor con respecto %ART (Anexo D, tablas D-2, D-3 y D-4). Encontrndose que para la concentracin de almidn hay diferencia entre la suspensin de 4 % y la de 8 % de almidn en cido sulfrico, donde la concentracin media de %ART ms alta se encontr para las muestras con 8% en suspensin, lo que puede deberse a que posiblemente las concentraciones altas de almidn hagan que se atrape ms agua, de la que la radiacin de microondas, pueda evaporar y que tiende a no reaccionar con el almidn. Para el tiempo de reaccin se hall diferencias estadsticamente significativas entre todos stos, excepto entre las muestras con tiempos 3, 6 y 8 minutos, ya que en estos tiempos se encuentran concentraciones asintticas; en

65

este factor los %ART mayores fueron para estos anteriores y el menor en el tiempo de 1 minuto. Por ltimo para el factor concentracin de cido tambin se encontr diferencia significativa entre las concentraciones de 0.2288 M y 0.5001 M, en esta ltima concentracin se obtuvo la mayor concentracin de azcares reductores, esto debido a que se tiene ms concentracin de iones hidronio en la muestra lo que facilita la incorporacin del agua en los enlaces O-glucosdicos (figura 22).
Means and 95.0 Percent LSD Intervals
27

Means and 95.0 Percent LSD Intervals

26 25 24 23 22 21

%ARTtotal

25 23 21 19 4 8

%ARTtotal

20 0.2288 0.5001

%almidon almidn (%)

40

de cido (mol/L) Means and 95.0 Percentconcentracin LSD Intervals

[M]acido

%ARTtotal

30 20 10 0 1 2 3 6 8

tiempo[min] tiempo (h)

Figura 22. Medias estadsticas Factor vs %ART en sus diferentes niveles, para la hidrlisis por microondas.

Se observa que para una concentracin de almidn de 4 % y de una concentracin de cido de 0.5001 M, se obtienen cantidades apreciables de hidroximetilfurfural luego de los 6 minutos y a los 8 minutos para suspensiones de almidn del 8 % y la misma concentracin de cido (figura 24), posiblemente sea una concentracin demasiado elevada de cido para esta cantidad de almidn, haciendo que la glucosa formada, comience a formar este subproducto ayudado tambin a que la reaccin se hace constante luego de los 3 minutos con respecto 66

a las azcares reductores (figura 23). Esto indica trabajar con tiempos de 3 minutos de reaccin.

Los resultados indicaron que la mejor condicin para la hidrlisis asistida por microondas realizada a 200 W de potencia, est compuesta por la mezcla de los niveles 8 % en suspensin cida de almidn, 0.5001 M en la concentracin de cido y 3 minutos para el tiempo de reaccin, escogido por ser el menor de los tres tiempos asintticos y porque despus de estos 3 minutos se encuentra una produccin de hidroximetilfurfural para los ensayos que usan concentraciones de cido de 0.5001 M (figuras 23 y 24).
Tabla 16. Resultados de azcares reductores totales (ART) e hidroximetilfurfural (HMF) para la hidrlisis cida asistida por microondas del almidn aislado desde pseudotallo.
% almidn (%p/v) 8 8 8 8 8 4 4 4 4 4 8 8 8 8 8 4 4 4 4 4 H2SO4 [M] 0.2288 0.2288 0.2288 0.2288 0.2288 0.2288 0.2288 0.2288 0.2288 0.2288 0.5001 0.5001 0.5001 0.5001 0.5001 0.5001 0.5001 0.5001 0.5001 0.5001 Potencia (%) 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 Tiempo (min) 8 6 3 2 1 8 6 3 2 1 8 6 3 2 1 8 6 3 2 1 % ART (%p/p) 40.1454 37.3739 33.3326 1.7949 1.0242 33.3305 35.1221 24.8491 7.7832 0.5312 33.2368 37.5357 39.8826 27.4875 0.1695 23.4529 28.9473 33.8417 14.4964 3.8323 Desviacin estndar 1.0681 0.9106 2.3363 0.3935 0.0963 0.9265 1.2018 1.3274 1.7532 0.1849 2.1469 0.6148 2.2242 2.3211 0.0541 0.9965 1.3466 2.4104 1.2074 0.3578 HMF (mg/L) 8.3017 7.0695 7.5451 0.8717 0.0000 21.8827 16.1257 8.7783 2.1486 0.6888 103.7628 16.9790 15.3587 7.4409 2.3947 106.0218 106.0093 8.1962 4.1583 1.3889 Desviacin estndar 2.5935 1.1824 3.1234 1.5098 0.0000 3.1829 1.6527 5.0381 1.5798 0.6894 4.3776 4.5032 8.0095 1.4504 1.9682 6.1301 4.4944 4.7803 2.1742 2.4057

67

Figura 23. %ART para cada combinacin concentracin de almidn y concentracin de cido en sus diferentes tiempos para la hidrlisis asistida por microondas.

Figura 24. HMF para cada combinacin concentracin de almidn y concentracin de cido en sus diferentes tiempos para la hidrlisis asistida por microondas.

68

4.3.2 Hidrlisis cida del almidn por incubacin. Se realiz una ANOVA multifactorial con tres factores y dos interacciones (Daz, A.; 2009), para los datos de la tabla 17, en la cual, la variable respuesta o variable dependiente igualmente son los azcares reductores respecto al almidn adicionado y los factores son el tiempo con tres niveles (1, 3 y 5 horas), la concentracin de almidn con dos niveles (4 % y 8 %) y la concentracin de cido sulfrico con dos niveles (0.2288 y 0.5001 M) (Anexo D, tabla D-5).

Se encuentra que la concentracin de la suspensin de almidn no influencia el resultado final en cualquiera de los experimentos (Pvalor>0.05) y que la combinacin concentracin de almidn y concentracin de cido, cuando el tiempo es una constante, tampoco lo hace (Pvalor>0.05). Por tanto los experimentos se ven influenciados por el tiempo de reaccin (Pvalor<0.05).
Tabla 17. Resultados de Azcares Reductores Totales (ART) e hidroximetilfurfural (HMF) para la hidrlisis por incubacin del almidn del pseudotallo.
% almidn (%p/v) 8 8 8 4 4 4 8 8 8 4 4 4 H2SO4 [M] 0.2288 0.2288 0.2288 0.2288 0.2288 0.2288 0.5001 0.5001 0.5001 0.5001 0.5001 0.5001 T (C) 110 110 110 110 110 110 110 110 110 110 110 110 Tiempo (h) 5 3 1 5 3 1 5 3 1 5 3 1 %ART (%p/p) 40.8531 37.6142 9.0302 38.0216 32.7453 25.2885 40.7999 44.3711 47.8224 39.4099 51.5335 47.0342 Desviacin Estndar 1.3598 1.4237 3.0563 1.5986 2.2856 2.4749 2.0424 1.2367 0.5815 2.4921 3.9181 3.4346 HMF (mg/L) 13.5018 3.7207 0.0000 96.7625 56.5470 5.9420 95.4150 64.1764 23.8641 143.8692 64.1764 23.8641 Desviacin estndar 5.5983 1.0779 0.0000 20.6173 13.3912 0.8687 2.8968 21.8863 14.9288 6.3619 21.8863 14.9288

Las pruebas del rango mltiples de Duncan (Daz, A.; 2009) (anexo D, tablas D-6, D-7 y D-8) nos indican una diferencia estadstica entre los niveles para el factor concentracin de cido con respecto a las concentraciones de azcares reductores formados, siendo 0.5001 M ms ptimos en los resultados para 69

azcares reductores pero no en cantidad de hidroximetilfurfural. Para el factor concentracin de almidn en suspensin cida, de 8 y 4 %, no se ve una diferencia estadsticamente significativa, aunque es levemente mayor para la del 4 %, lo que es un resultado muy probable al suponer de que el almidn pueda ser atacado mucho mas por los reactivos que estn en exceso. Por ltimo, para el factor tiempo de reaccin no se encuentra diferencia estadstica entre 3 y 5 horas, ya que el resultado es asinttico (figura 25).
Means and 95.0 Percent LSD Intervals Means and 95.0 Percent LSD Intervals
41
47

%ARTtotal

40 39 38 37 36 35 4 8

%ARTtotal

44 41 38 35 32 29 0.2288 0.5001

%almidn [M]acido Means and 95.0 Percent LSD Intervals

45

%ARTtotal

42 39 36 33 30 1 3 5

tiempo[h] Tiempo (h)

Figura 25. Medias estadsticas para Factor vs %ART en sus diferentes niveles, para la hidrlisis por incubacin.

Puede tomarse como mejor condicin en la hidrlisis por incubacin a 110 C la concentracin de cido sulfrico de 0.5001 M, con 3 horas de reaccin y 4 % en suspensin cida de almidn. Estos dos ltimos parmetros escogidos no solo por ser el menor tiempo y en donde se encuentra mayor produccin de azcares reductores, sino porque se observa produccin de hidroximetilfurfural despus de 3 horas de reaccin en todos los ensayos excepto en la combinacin 8 % suspensin con 0.2288 M cido (figura 26 y 27). 70

Figura 26. %ART para cada combinacin concentracin de almidn y concentracin de cido en sus diferentes tiempos para en la hidrlisis por incubacin.

Figura 27. HMF para cada combinacin concentracin de almidn y concentracin de cido en sus diferentes tiempos para en la hidrlisis por incubacin.

71

4.3.3 Glucosa por mtodo Glucosa Oxidasa-Peroxidasa (GOD-PAD). Este mtodo GOD-PAD es especfico para glucosa y posee pocas interferencias. Para este mtodo se tomaron 4 hidrolizados y sus triplicados del mtodo de incubacin a 110 C y 4 hidrolizados del mtodo por microondas a 200 W de potencia, los cuales para la incubacin fueron 8%-0.5001M-3horas (1), 8%-

0.5001M-1hora (2), 4%-0.5001M-3horas (3) y 4%-0.5001M-1hora (4). Y para el de microondas se tomaron 8%-0.2288M-8minutos (5), 4%-0.2288M-6minutos (6),

8%-0.5001M-8minutos (7) y 4%-0.5001M-6minutos (8) (tabla 18).

Tabla 18. Comparacin de los resultados entre el mtodo ART y el mtodo GODPAD.
Experimento 1 1 2 2 3 3 4 4 5 5 6 6 7 7 8 8 Mtodo ART GOD-PAD ART GOD-PAD ART GOD-PAD ART GOD-PAD ART GOD-PAD ART GOD-PAD ART GOD-PAD ART GOD-PAD % ART o % glucosa (%p/p) 44.3711 45.1323 47.8224 46.8589 39.4099 32.8824 51.5335 48.2304 40.1454 42.0709 35.1221 38.5634 33.2368 31.4357 28.9473 27.6987 Desviacin estndar 1.2367 3.1020 0.5815 1.4871 2.4921 3.0150 3.9181 2.6743 1.0681 3.5899 1.2018 2.5286 2.1469 2.4880 1.3466 3.4448

Se midi los azcares reductores totales y se expresaron con respecto a la cantidad inicial de almidn para el mtodo ART y la glucosa respecto a la cantidad inicial de almidn para el mtodo GOD-PAD (curvas de calibracin para ART y GOD-PAD, (figuras D-1 y D-2, en anexo D). Se compar la cantidad de azcares reductores producidos con respecto a la cantidad de almidn inicial, contra los valores obtenidos por el mtodo GOD-PAD, todo, para cada experimento en una 72

ANOVA de dos factores con interaccin y en una prueba de rangos mltiples de Duncan (Daz, A.; 2009) (Anexo D, Tabla D-9 y D-10). Encontrndose que no hay ninguna diferencia estadstica significativa entre los valores entre de mtodos ART y GOD-PAD (por la prueba de Duncan). Lo que indica que todos los valores medidos por ART podrn representar la cantidad de glucosa aproximada en todos los hidrolizados (figura 28).
Means and 95.0 Percent LSD Intervals

Interaction Plot

%ART o %Glucosa

%ARTo%glucosa

41 40.5 40 39.5 39 38.5 38 ART GOD-PAD

52 47 42 37 32 27 1 2 3 4 5 6 7 8

metodo ART GOD-PAD

mtodo
A.

Experimento
B.

Figura 28. A) Grfico de las medias para el factor mtodo. B) Grfico del comportamiento de cada mtodo (ART y GOD-PAD) en los 8 experimentos.

4.4 COMPARACIN ENTRE LA HIDRLISIS ASISTIDA POR MICROONDAS Y LA HIDRLISIS POR CONVECCIN. Se realiz una ANOVA de un solo factor (Daz, A.; 2009), en donde la variable respuesta fue %ART y el factor fue cada uno de los experimentos de las hidrlisis por microondas e incubacin. Indicando diferencia estadsticamente significativa para los experimentos (Pvalor<0.05). Luego, para conocer qu experimentos son distintos de otros, se hizo una prueba de rangos mltiples de Duncan (Daz, A.; 2009) (ver anexo D, tablas D-11 y D-12). Observndose, que las mejores condiciones para la hidrlisis microondas, a 200W de potencia, son 8%-0.2288M6minutos, 8%-0.2288M-8minutos, 8%-0.5001M-3minutos y 8%-0.5001M-6minutos, todas con igual grado de significancia estadstica (figura 29). Estas condiciones solo son superadas con diferencia estadsticamente significativa (por prueba de rangos mltiples de Duncan) por las condiciones de incubacin a 110 C de 8%0.5001M-3horas, 4%-0.5001M-1hora, 8%-0.5001M-1hora y 4%-0.5001M-3horas. 73

60 50 40 30 20 10 0

Figura 29. Comparacin de los %ART entre todas las condiciones de las hidrlisis cidas realizadas. Barras azules: Microondas 200W. Barras roja: Incubacin 100C.

El mtodo de microondas es eficiente porque solo es superado en el %ART significativamente por mtodos de incubacin con el 4 % (aportan menos reductores a la solucin) y 8 % de almidn en suspensin (con ms cantidad de hidroximetilfurfural), con tiempos entre 1 y 3 horas y concentraciones de cido al 0.5001 M. Mientras, ste mtodo es mejor a suspensiones de 8 % de almidn (aportan ms reductores a la solucin), concentracin de cido similares a 0,5001 M y hasta algunas de 0,2288 M y con menores tiempos de reaccin, 3 y 6 minutos para la hidrlisis. Adems de que se tienen niveles no mayores a 17 ppm de hidroximetilfurfural para microondas mientras que para la incubacin se tuvieron concentraciones entre 23 y 64 ppm.

Se puede agregar tambin que para el microondas no depende mucho del cido como catalizador, como se puede observar para la incubacin. Esto visto en la diferencia en los azcares reductores entre las medias de la concentracin 0,5001 M y 0,2288 M en ambos mtodos (figuras 22 y 25). En donde, la incubacin tiene 74

8%, 0.5001M, 1 min 4%, 0.2288M, 1min 8%, 0.2288M, 1min 8%, 0.2288M, 2min 4%, 0.5001M, 1min 4%, 0.2288M, 2min 8%, 0.2288M, 1 hora 4%, 0.5001M, 2min 4%, 0.5001M, 8min 4%, 0.2288M, 3min 4%, 0.2288M, 1 hora 8%, 0.5001M, 2 min 4%, 0.5001M, 6 min 4%, 0.2288M, 3 hora 8%, 0.5001M, 8 min 4%, 0.2288M, 8 min 8%, 0.2288M, 3 min 4%, 0.5001M, 3 min 4%, 0.2288M, 6 min 8%, 0.2288M, 6 min 8%, 0.5001M, 6 min 8%, 0.2288M, 3 horas 4%, 0.2288M, 5 horas 4%, 0.5001M, 5 horas 8%, 0.5001M, 3 min 8%, 0.2288M, 8 min 8%, 0.5001M, 5 horas 8%, 0.2288M, 5 horas 8%, 0.5001M, 3 horas 4%, 0.5001M, 1 hora 8%, 0.5001M, 1 hora 4%, 0.5001M, 3 horas

una diferencia cercana a 15 unidades de porcentaje entre las dos concentraciones de cido y el microondas solo de 3 unidades de porcentaje.

Al alcanzar valores cerca de los 40 % para hidrlisis del almidn total por microondas y 47 % para hidrlisis por incubacin (el porcentaje representa el peso de azcares reductores sobre el peso de almidn adicionado), y sabiendo que estos azcares reductores estn representando la cantidad de almidn que se convirti en glucosa; puede hacerse una comparacin con ensayos con hidrlisis enzimtica, en donde, solo se hidroliz el 28 % de almidn (Aguilar, A.; 2008), que expresados como %ART, seran el 29.68 %, que tericamente sera la cantidad de glucosa producida del almidn hidrolizado. As pues tericamente, tanto el mtodo de hidrlisis por incubacin, como el asistido por microondas, estn hidrolizando mejor el almidn a glucosa que el mtodo enzimtico de licuefaccin/sacarificacin enzimtica con -amilasa y amiloglucosidasa usado por Aguilar, A.; (2008).

Por ltimo, se observa niveles bajos de azcares reductores en los ensayos asistidos por microondas respecto a los realizados a almidones de papa del 111 % como %ART, reportados por Kunlan, L.; et al. (2001), debido al tipo de almidn usado, ya que el almidn de pseudotallo posee mayores niveles de amilosa que los dems almidones comunes, con cerca de 37.45 % (tem 4.5.2), lo que incrementara la energa de activacin de la hidrlisis, como ocurre con la energa de activacin de la descomposicin en el tem 4.5.5. Esto es debido, a la gran cantidad de puentes de hidrgeno que realiza una molcula de amilosa con otra (Aristizbal, J.; et al.; 2007). Tambin podra explicarse el por qu no se alcanzaron niveles altos de hidrlisis respecto a esas investigaciones, debido a los recipientes que usaron, los cuales soportaban cerca de 11.84 atm (Kunlan, L.; et al.; 2001), este factor puede influenciar ms que los otros, ya que permite que la temperatura final llegue a ms de los 300 C en muy poco tiempo, mientras que con la metodologa realizada no se alcanzaban temperaturas mayores a los 140C. Se puede agregar, aunque sea poco probable, que en ciertos instantes el H2SO4 agregado genere una cantidad pequea de sales y las sales del anin 75

SO42-, se encuentran que tienen ms bajos rendimientos en hidrlisis cida asistida por microondas, que las sales del anin Cl-, en concentraciones de 0.15 mol/L (Kunlan, L.; et al.; 2001).

Sin embargo, el calentamiento por microondas, no deja de ser una buena tecnologa en la produccin de hidrolizados de glucosa desde almidn aislado o en la hidrlisis del mismo almidn en el jugo de pseudotallo para la posterior produccin de alcohol etlico.

4.5 CARACTERIZACIN DEL ALMIDN.

4.5.1 Pureza. La tabla 19 muestra los resultados de la pureza de del almidn obtenido en los 7 experimentos realizados para aislar el polmero por va desde el pseudotallo. Se encuentra que el menor valor de pureza es de 84.7678 % y el mayor valor de 97.59%, con promedio de 93.725.19 %, donde el resto del contenido ser humedad (contenida entre 3.18 % y 4.77 % resultados basados en la cintica de anlisis termo-gravimtrico de muestras de almidones ms puros), fibra, protena, grasas y lpidos. La figura 30 es la imagen del producto final de almidn aislado desde el pseudotallo del pltano.

76

Tabla 19. Pureza del almidn aislado.

Experimento 1 2 3 4 5 7 8 Media Desviacin estndar Pureza (%) 84.7678 97.5927 97.5421 88.3067 96.6875 97.4713 93.6753 93.7205 5.1951

Trabajo conjunto con los investigadores Ladino, M. A. y Cceres, J. D. (2012)

Figura 30. Almidn aislado del pseudotallo.

4.5.2 Amilosa aparente. Los resultados de 37.450.24 % para el mtodo espectrofotomtrico del valor azul y de 34.003.48 % por anlisis termo-gravimtrico (figura 31), no poseen igual desviacin estndar pero el rango del mtodo termogravimtrico alcanza a cubrir los valores del mtodo colorimtrico del valor azul, lo que indica que el valor para la amilosa se encuentra en el rango superpuesto de los dos mtodos. Indicando que el valor de la amilosa es de 37.450.24 % hallado por el valor azul (en este caso ms preciso por su desviacin) y confirmado por el mtodo

termogravimtrico. 77

En general el almidn aislado presenta mucho ms amilosa que los almidones comunes de maz 23.86 %, yuca 29.29 %, papa 26 % y trigo 18.1 % (por el mtodo del valor azul). Adems de un valor similar al promedio del fruto del pltano, el cual es 37% (Nwokocha, L.; et al.; 2009. Stawski, D.; 2008. Bello, L.; et al.; 2006. Lpez, M.; et al.; 2009).

Figura 31. Amilosa aparente en el almidn del pseudotallo de pltano.

Este contenido mayor de amilosa hace que las propiedades del almidn cambien, por tanto, se puede responder el por qu se obtienen menores grados de hidrlisis cida, asistida y no asistida por microondas, para el almidn del pseudotallo de pltano, comparado con otros almidones comunes reportados en la literatura, ya que habr ms puentes de hidrgeno que romper entre molculas de amilosa y una mayor energa de activacin para la hidrlisis. Entonces, esto hace que mientras se intenta romper enlaces de hidrgeno entre amilosas en el grnulo, la glucosa que se ha venido formando por la degradacin de los polisacridos ya separados comience a ser trasformada a hidriximetilfurfural.

Tambin se puede esperar que este almidn posea una mayor temperatura de gelatinizacin del grnulo, una baja digestibilidad en el organismo humano por 78

menor rea de ataque enzimtico al ser la amilosa tan compacta, lo que estara aceptable en dietas que usen harinas con bajo ndice glucmico. La amilopectina al estar cercana al 62.55 %, puede hacer que aumente la solubilidad de este almidn en el agua. Y adems, se puede esperar un grado de retrogradacin alto, ya que entre ms amilosa se permiten muchos ms sitios de enlaces entre molculas, lo que dara como resultado geles fuertes y opacos (Aristizbal, J.; et al.; 2007) (Huergo, M.; 2002).

4.5.3 Difraccin de Rayos X. Se observa el patrn caracterstico del polimorfismo tipo C, ya que se puede observar la mezcla del polimorfismo A y B, observando los valores de 2 de 6 a 7, donde se encuentra un pico cristalino que corresponde al tipo B y los valores entre 22 y 25 en el cual se observa aparentemente un solo pico del patrn tipo A, aunque en esta zona tambin se podra estar confundiendo la cantidad de picos, porque hay uno de mayor intensidad, ste, muy posiblemente sea producto del ruido del equipo o de alguna pequea impureza (figura 32).

Figura 32. Patrn de difraccin del almidn aislado del pseudotallo y sus parmetros para hallar su ndice de cristalinidad. Trabajo conjunto con los investigadores Ladino, M. A. y Cceres, J. D. (2012)

79

Tabla 20. Cristalinidad del almidn por Rayos X por Hermans y Weidinger.
rea Amorfa 850.039 rea total 998.19 ndice de cristalinidad (%) 14.84

Trabajo conjunto con los investigadores Ladino, M. A. y Cceres, J. D. (2012)

Para el ndice de cristalinidad por el mtodo Hermans y Weidinger, se us el software origin pro 8 dibujando el patrn de difraccin con los datos arrojados por el equipo (lnea negra, figura 32) y realizando un anlisis espectroscpico, trazando una lnea base en el difractograma desde 7.14 hasta 28.34, usando el mtodo Use Data Points Outside Windows, con un tipo de conexin polinomial y 3 picos cristalinos en ese intervalo (15, 17 y 23), por ltimo, manualmente se insertaron las coordenadas desde 5 hasta 7.14 y desde 28.34 hasta 40 como lneas rectas, para completar la lnea base, que corresponde al rea amorfa del difractograma (lnea azul, figura 32). Para finalizar se calcul el rea total y el rea amorfa utilizando la integracin definida de 5 hasta 40, por suma de Riemann (tabla 20). Se encuentra que el valor de 14.84 % para la cristalinidad, es mucho ms bajo que los almidones comunes de yuca (35,8 %), pap (29,8 %) y maz (31 %) (Rivas, M.; et al.; 2008. Srichuwong, S.; et al.; 2005) y cercana a la cristalinidad para el almidn del fruto de este pltano (19,4 %) (Rivas, M.; et al.; 2008). Aun as, es el ms amorfo porque posiblemente el contenido de amilosa, que es superior al de los dems, hace que el grnulo sea compacto, sin dejar pasar la radiacin incidente.

4.5.4 Espectroscopia de Infrarrojo con Transformada de Fourier (FTIR) y accesorio de reflectancia total atenuada (ATR). El rango corto para los almidones en el espectro Infrarrojo es de importancia porque es el que mejor representa la conformacin estructural de la cadena y as poder medir propiedades fsicas como cristalinidad, helicidad, cambios por retrogradacin o por algn tipo de reaccin o hasta el contenido de agua presente. 80

Por esta razn se analiza este espectro FTIR-ATR entre las bandas de los 700 y 1400 cm-1. Observando el espectro obtenido (figura 33) se encuentran bandas en 1148.32 cm-1 que representa los estiramiento C-O, C-C y algunas contribuciones C-O-H, las bandas 1077.32, 1014.67, 1040.62 y 995.79 cm -1 que representan flexiones de enlaces C-O-H y modos relacionados de CH2 y la banda 859.41 cm-1 del alargamiento simtrico C-O-C y deformaciones C-H (Van Soest, J.; et al.; 1995).

Figura 33. Espectro infrarrojo con reflectancia total atenuada (ATR) del almidn del pseudotallo desde los 700 cm-1 hasta los 1400 cm-1.

Se encontr tambin, que los bandas tericas de 1047 (cristalinidad) y 1022 cm-1 (zona amorfa) se hallaban desplazados hacia la derecha aproximadamente 7 y 8 cm-1, valor respectivo para cada banda.
Tabla 21. Cristalinidad del almidn por IR-ATR.
Intensidad banda cristalina -1 (1047 cm ) 0.0995 Intensidad banda amorfa -1 (1022cm ) 0.1400 ndice cristalinidad R(1047/1022) 0.7110

El valor del ndice de cristalinidad por infrarrojo (tabla 21), se esperaba siguiese la tendencia de la cristalinidad por rayos X y que el almidn aislado fuese el mas amorfo en el infrarrojo. Pero el valor del ndice de 0,711 hallado est mucho ms cercano a los de los almidones de papa (0,44), maz (0,75) y yuca (0,91) (Miao, 81

M.; et al. 2012. Liu, T.; et al.; 2011. Mina, J.; et al.; 2009). Y supera en cristalinidad en el infrarrojo al almidn de papa. Esta diferencia puede deberse a sensibilidad de la tcnica, ya que la de infrarrojo mide el ordenamiento de corto alcance (a nivel de los enlaces) en la estructura de los almidones y la de rayos X es de largo alcance (ordenamiento de las cadenas de la amilopectina) (Van Soest, J.; et al.; 1995). Lo que indica que se deje pasar ms radiacin por contener menos amilopectina, que es la que aporta el enlace (1-6) O-glucosdico de la ramificacin, el cual absorbera ms radiacin infrarroja para el grnulo de almin (McMurry, J.; 2008).

4.5.5 Cintica de anlisis termo-gravimtrico. Con la cintica termo-gravimtrica, se representa la descomposicin del almidn dependiendo de la velocidad de calentamiento, a velocidades de calentamiento lentas el almidn tendr temperaturas pico de descomposiciones bajas y a velocidades rpidas las temperaturas sern altas (tabla 22 y figura 34). Adems, la derivada de la degradacin de la masa respecto al tiempo ( temperatura ( o a la

), cambian proporcional a la velocidad de calentamiento (figura su

35). Esto es aprovechado para clculos cinticos en la determinacin de

energa de activacin de su descomposicin. Esta parte se enfocar solo en los resultados obtenidos, las grficas de los mtodos y las regresiones lineales se encuentran en el anexo E.
Tabla 22. Temperatura donde se halla el mximo de la descomposicin del almidn para cada velocidad de calentamiento.

Velocidad de calentamiento (C/min) 2 5 15 20 25 30 T inicial (C) 288.39 285.17 304.87 310.35 311.02 314.78 Tp (C) 287.37 300.58 314.74 321.28 322.4 325.53 T final (C) 306.465 318.53 333.88 337.7 342.2 346.97

82

Figura 34. Curvas del anlisis termo-gravimtrico (TG) del almidn de pseudotallo a diferentes velocidades de calentamiento.

Figura 35. Curvas de las derivadas del anlisis termo-gravimtrico (DTG) para las distintas velocidades de calentamiento del almidn del pseudotallo.

83

Para el clculo de esta energa de activacin existen modelos matemticos, que la calculan grficamente como es el caso del mtodo de Friedman, Kissinger, Flyn Wall-Ozawa y Coats-Redfen (modificado) (Yao, F.; et al.; 2008). Para calcularla por el mtodo de Friedman, Flyn Wall-Ozawa y Coats-Redfen (modificado), se necesita establecer (la prdida de masa por volatilizacin del almidn), en este caso para todos cuando es 0.20, 0.30, 0.45, 0.40, 0.45, 0.50 y 0.60. Ahora bien, la masa inicial para la prdida de masa se tom cuando la masa se hizo constante luego de la prdida del agua, cerca de los 150 C (figura 34) y adems cuando la derivada del termograma se hizo igual a 0, despus de la perdida de agua (figura 34). As, como cada velocidad de calentamiento (2, 5, 15, 20, 25 y 30 C/min) tiene un termograma, existe por ejemplo, un = 0.2 para cada velocidad o un = 0.6 para cada velocidad, por lo tanto cada , est conformada por 6 puntos grficos (6 velocidades de calentamiento). Continuando, para el mtodo de Friedman en cada , de calentamiento, hay un

cada velocidad de

y una temperatura (T) que le corresponde, estos vs 1/T. Ahora a cada se le realiz una

fueron extrados y graficados como

regresin lineal simple, y as conocer la pendiente, que implcitamente trae el valor de la energa de activacin. Por ltimo se hizo un promedio de la energa de activacin de las siete perdidas de masa () (Yao, F.; et al.; 2008). Luego para el mtodo de Flyn-Wall-Ozawa en cada velocidad de calentamiento () existe una temperatura (T) en cada , estos valores fueron graficados como log () vs 1/T. Obtenindose la energa de activacin por el promedio de las pendientes de las regresiones lineales realizada a cada (Yao, F.; et al.; 2008).

El mtodo de Coats-Redfen (modificado), indica que en cada velocidad de calentamiento () existe una temperatura (T) en cada . Luego graficando Ln(/ (T2[1-2RT/Ea) vs 1/T, y suponiendo por tanteo la energa de activacin (Ea) en cada , se obtiene Ea cuando la energa supuesta es igual a la mostrada por la

84

pendiente de la grfica. Por ltimo se hace un promedio de la energa de activacin de las siete perdidas de masa () (Yao, F.; et al.; 2008). Por el contrario el mtodo de Kissinger no necesita de , la energa de activacin hallada es tomado de la pendiente de una solo lnea recta formada con los datos de la velocidad de calentamiento () y por la temperatura pico (Tp) de la derivada de cada termograma. Aqu, error estndar ser el error de la pendiente (Yao, F.; et al.; 2008).

Para los resultados de las energas de activacin (Ea) se observa que los mtodos de clculo descritos por Flyn-Wall-Ozawa y Coats-Redfen tienen valores y desviacin estndar muy similares (figura 36), adems de coeficientes de correlacin altos para las regresiones lineales simples de cada (tabla 23), lo que hace que la pendiente de cada lnea recta que contiene intrnsecamente el valor de la energa de activacin sea ms veraz. Tambin, se observa que los coeficientes obtenidos por el mtodo de Friedman son bajos y que la variacin estndar de la energa es grande, lo cual no hace confiable su resultado por este mtodo. El mtodo de Kissinger da valores similares a los dos primeros mtodos mencionados, buen coeficiente de correlacin y buena desviacin estndar; pero no involucra a , que es como el seguimiento de la descomposicin del almidn, cosa que si hacen los tres mtodos anteriores. Por lo tanto, se puede decir que la energa de activacin de la descomposicin del almidn del pseudotallo se encuentra entre 175.16 y 173.56 KJ /mol.

85

Tabla 23. Energa de activacin de la descomposicin del almidn del pseudotallo.

Mtodo Grado de conversin () Friedman Flyn-Wall-Ozawa Coats-Redfen (modificado) Kissinger

0.2 0.3 0.35 0.4 0.45 0.5 0.6

186.8125 201.1998 201.1045 203.3773 199.0242 215.7847 241.3838 206.9553 17.3785

0.9791 0.9958 0.9958 0.9951 0.9935 0.9904 0.9649

163.0664 170.1671 173.1888 175.8636 176.0424 178.3924 189.3768 175.1568 8.0509

0.9962 0.9973 0.9981 0.9984 0.9974 0.9970 0.9939

161.9917 166.2982 170.1164 172.8989 175.7255 178.1624 189.7558 173.5641 9.0095

0.9956 0.9952 0.9968 0.9971 0.9971 0.9967 0.9935 186.4882 7.1192 0.9956

Trabajo conjunto con los investigadores Ladino, M. A. y Cceres, J. D. (2012)

Figura 36. Diagrama de la energa de activacin por cada mtodo empleado para su clculo.

El valor de la energa hallado por el mtodo de Flyn-Wall-Ozawa puede compararse con los valores reportados para almidones de maz (144.1 9.8 KJ/mol), arroz (171.6 14.6 KJ/mol), papa (158.3 7.4 KJ/mol) y yuca (159.4 15.0 KJ/mol) (Guinesi, L.; et al.; 2006). Se encontr que el almidn aislado desde el pseudotallo del pltano posee una energa de activacin de descomposicin similar a la del almidn de arroz y una mayor comparada con la del almidn de 86

maz, papa y yuca. Esto puede deberse a la cantidad mayor de amilosa para este almidn aislado, comparada con la cantidad de los otros almidones mencionados. Y una conclusin importante puede ser que, as, como aumenta la energa de activacin de la descomposicin, tambin podra aumentar la energa de activacin de la hidrlisis cida del almidn.

4.5.6 Grado de ramificacin y longitud promedio de residuos de la amilopectina. El grado de ramificacin y la longitud promedio de los residuos de la amilopectina del almidn del pseudotallo, de 4.68 y 21.36 (tabla 24), son cercanos a los reportados para el almidn del fruto del pltano (%GR de 4.54 y 22 para Longitud promedio de residuo entre ramificaciones) (Wolfrom, M.; 1956). Adems, al no ser tan ramificada permite mejor acomodo de las molculas lineales de amilosa, limitando la hidrlisis cida. Tambin se predice que es menos susceptible a la hidrlisis por enzimas, que el almidn de maz y de papa (con %GR = 5) (Wolfrom, M.; 1956), porque entre ms ramificaciones en este polmero, se tiene un rea ms grande para el ataque enzimtico (Aristizbal, J.; et al.; 2007).

Tabla 24. Grado de ramificacin y longitud promedio de sus residuos de la amilopectina del almidn obtenido.
Datos y resultados % Ramificacin (%mol/mol) Longitud de residuos entre ramificaciones (unidades de glucosa)

Glucosa en la amilopectina Amilopectina (mg) Glucosa (mmol) mmol Glucosa/mg Amilopectina 7.84 30.9627

0.0039493 Oxidacin con periodato Amilopectina (mg) 40.51 Glucosa (mmol) 0.159987 0.0029963

4.680.78

21.3583

Promedio de HCOOH (mmol)

87

4.5.7 Microscopia Electrnica de Barrido en el Ambiente (E-SEM) y Microscopia ptica (MO). Como se observa en las figura 37 y 38, se encontraron formas

predominantemente elpticas en grnulos pequeos los cuales miden entre 51.3 20.1 m de largo y entre 12.7 - 8.12 m de ancho y formas ovaladas y planas en grnulos ms grandes con tamaos de dimetro cerca a los 51 39 m, estos ltimos pueden ser una aglomeracin de dos o ms grnulos pequeos que de alguna manera natural se unieron. En estos grnulos adems no se encuentran rupturas como en el almidn de yuca y poseen menos rugosidades y superficie ms homognea que el almidn aislado del fruto del pltano, del que se habl anteriormente en las figuras 16 y 17. Solo se observa algunas interferencias en la muestra en forma de filamento, que pueden ser producto de la fibra contenida.

88

Figura 37. Imgenes de E-SEM para el almidn aislado con aumentos de 2000x, 1000x y 500x. Trabajo conjunto con los investigadores Ladino, M. A. y Cceres, J. D. (2012)

Figura 38. Imagen en microscopia ptica del almidn obtenido con aumento de 100x. Trabajo conjunto con los investigadores Ladino, M. A. y Cceres, J. D. (2012)

89

CONCLUSIONES

El almidn se puede encontrar en 1.020.55 %, con base en peso hmedo, en el pseudotallo desechado, el cual puede tener un peso aproximado de 26.096.39Kg con un porcentaje de materia seca del 6.310.87 %, en donde, el almidn puede estar cerca de un 16.23 % en esta materia seca. Lo que indica un mejor aprovechamiento de toda la materia seca si se utiliza el almidn.

El rendimiento de extraccin de 59.763.25 % de almidn aislado respecto al calculado, se encuentra mayor que para el mtodo hmedo usado en el aislamiento de almidn del fruto del pltano, reportado como 56,761,90 %. Teniendo una certeza de un 97.96 % de que el rendimiento no variar y que la pureza del almidn estar en un 93.725.19 % respecto al secado a 60C. Resultado que puede dejar la opcin para hidrolizar el almidn directamente en los jugos del pseudotallo o despus de su aislamiento.

La hidrlisis cida por microondas a 200 W de potencia tiene dependencia estadstica en los resultados por los tres factores: concentracin de almidn, concentracin de cido y tiempo de reaccin. Mientras que en la incubacin a 110 C el resultado es influenciado fuertemente por los factores tiempo de reaccin y la concentracin de cido.

Todos los valores de azcares reductores medidos pueden relacionarse con la transformacin del almidn a D-glucosa, ya que no se encontr diferencia estadsticamente significativa para el mtodo Glucosa Oxidasa Peroxidasa, especfico para glucosa y el mtodo de azcares reductores totales.

La hidrlisis cida de almidn asistida por microondas es eficiente porque solo es superado en el %ART significativamente por mtodos de incubacin 90

con el 4 % (aportan menos reductores a la solucin) y 8 % de almidn en suspensin, que tienen tiempos entre 1 y 3 horas y concentraciones de cido al 0.5001 M. Mientras que ste es mejor a suspensiones solo de 8% de almidn (aportan ms reductores a la solucin), concentracin de cido similares a 0,5001 M y hasta algunas de 0,2288 M y con menores tiempos de reaccin, 3 y 6 minutos para la hidrlisis. Adems de que se tienen niveles ms bajos de hidroximetilfurfural. El mejor parmetro de hidrlisis es el asistido por microondas con un mximo 3 minutos de reaccin, 0.5001 M de cido sulfrico y 8 %p/v en suspensin de almidn, 200 W de potencia y a 3.5 atm de presin, con cerca de un 40 % de hidrlisis del almidn a glucosa.

Los valores del cerca del 40 % de almidn convertido a glucosa para la hidrlisis por microondas superan, a los valores reportados del cerca de 30% de conversin de mtodos enzimtico licuefaccin/sacarificacin que se han usado en la literatura con -amilasa y amiloglucosidasa sobre almidn de pltano.

Se observa niveles bajos de azcares reductores en los ensayos asistidos por microondas, que pueden deberse que la energa de activacin de la reaccin sea ms elevada que con otros almidones, recipientes que soportan poca presin o rendimientos bajos por el anin SO42-.

Se aisl un almidn con polimorfismo tipo C encontrado por difraccin por rayos X, con una concentracin de amilosa aparente del 37.450.24 % por el mtodo del valor azul, un grado de ramificacin de su amilopectina de 4.68 % relacin mol y un promedio de longitud de los residuos de amilopectina de 21.36 segn el mtodo de oxidacin con peryodato de sodio. Caractersticas que por el compactamiento de la amilosa y los arreglos de la amilopectina pueden influenciar el ndice de cristalinidad en el 91

infrarrojo con valores intermedios entre el polimorfismo tipo A y tipo B, en su baja cristalinidad en los rayos X con respecto a otros almidones, en mayores energas de activacin en su descomposicin proporcional a los enlaces que hay entre molculas de amilosa, en dar forma y tamao a los grnulos de almidn observados. Prediciendo entonces un almidn con energas de activacin altas en cualquier proceso de calentamiento (explicando los rendimientos de los hidrolizados obtenidos), mayor retrogradacin, mayor punto de gelatinizacin y menor ataque enzimtico en la digestin respecto a otros almidones.

92

RECOMENDACIONES

Realizar un muestreo mucho ms grande en las plantaciones de pltano y en distintos tiempos de cosecha, para establecer un perfil de concentracin promedio ms amplio de almidn en el pseudotallo desechado.

Observar rendimientos en el aislamiento del almidn desde el pseudotallo del pltano a travs del mtodo hmedo sin el uso de agua en la trituracin o usar un proceso de prensado por rodillos para la parte inicial, adems implementar diferentes tamaos de mallas para la filtracin.

Se podra ensayar el aislamiento del almidn del pseudotallo a travs de un mtodo en seco, similar al realizado en la extraccin de almidn de las segundas y terceras generaciones del fruto verde del pltano comentado en los antecedentes, y as comparar rendimientos obtenidos con respecto al mtodo hmedo usado.

Realizar un estudio econmico del proceso como una combinacin de la produccin de un subproducto de la fibra del pseudotallo y el aislamiento de su almidn.

Medir los hidrolizados como dextrosa equivalente (DE) para hacer una mejor comparacin con la hidrlisis enzimtica.

Variar la potencia usada en la hidrlisis asistida por microondas, y usar recipientes que resistan ms de 3.5 atm de presin.

Realizar hidrlisis cido-enzimtica, para mejorar la conversin de almidn a glucosa, para el almidn de pseudtollo de pltano.

Aplicar el mtodo de hidrlisis cida asistida por microondas sobre el jugo de pseudotallo como va inicial en la produccin de etanol. 93

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104

ANEXO A

Figura A-1. Material vegetal guardado en el Herbario de la Universidad del Quindo.

105

ANEXO B
Tabla B-1. Material vegetal y peso aproximado del pseudotallo total y desechado.
N planta 1 Peso Corte (g) 697.5465 946.8734 1302.3158 338.673 625.5679 896.7865 1098.4687 1814.3978 2320.8871 797.6754 1256.1208 905.0792 228.57 434.3636 504.27 287.1726 233.5369 416.4834 279.3715 339.6906 433.2422 186.2674 250.2643 300.6852 Volumen Corte (m3) 0.001212 0.001792 0.002642 0.000901 0.001546 0.002261 0.002124 0.003422 0.004041 0.001586 0.002459 0.001693 0.000390 0.000513 0.000787 0.000323 0.000343 0.000564 0.000465 0.000537 0.000774 0.000263 0.000393 0.000526 Media Desviacin Estndar 26088.5802 6389.1984 Media Desviacin Estndar 42501.5900 7646.1711 0.0388 24749.0582 0.0638 40740.0385 0.0414 24783.8247 0.0729 43604.7809 0.0288 22125.6083 0.0493 37938.8223 0.0338 23356.2706 0.0564 39022.0330 0.0756 39039.4113 0.1116 57575.6665 0.0591 31955.0448 0.0914 49421.4194 0.0482 18896.9127 0.0861 33789.2364 0.0447 23802.5108 0.0712 37920.7229 Volumen Peso pseudotallo pseudotallo desechado desechado (m3) (g) Volumen pseudotallo total (m3) Peso pseudotallo total (g)

corte Arriba Medio Bajo

Arriba Medio Bajo

Arriba Medio Bajo

Arriba Medio Bajo

Arriba Medio Bajo

Arriba Medio Bajo

Arriba Medio Bajo

Arriba Medio Bajo

106

Tabla B-2. Datos obtenidos del contenido de almidn en el pseudotallo.

% almidn (%) 0.5905 0.6065 0.5597 0.3208 0.4825 0.6540 0.6972 1.0464 0.5776 0.9902 1.0701 0.7715 1.9508 0.7573 2.4408 2.6012 1.7103 1.0593 1.2214 1.3060 1.8290 0.4531 0.4590 0.4349 Almidn en el pseudotallo (%)

Pseudotallo

Parte Arriba

S 0.0041 0.0024 0.0073 0.0018 0.0012 0.0588 0.0059 0.0093 0.0076 0.0518 0.0114 0.0018 0.0653 0.0403 0.0385 0.1549 0.0498 0.0263 0.0235 0.0126 0.0088 0.0221 0.0041 0.0292

Medio Bajo Arriba Medio Bajo Arriba Medio Bajo Arriba Medio Bajo Arriba Medio Bajo Arriba Medio Bajo Arriba

1.02460.5518

Medio Bajo Arriba Medio Bajo

Figura B-1. Curva de calibracin para el mtodo Antrona-cido sulfrico Modificado.

107

Tabla B-3. Kruskal-Wallis Test for %starch by ubication.

Ubicacin Abajo Arriba Medio

Sample size 24 24 24

Average Rank 35.9167 36.7083 36.875

Test statistic = 0.0287291 P-Value = 0.985738 Hiptesis nula: Las medias son iguales. Hiptesis alterna: las medias son diferentes. Se rechaza la hiptesis nula si Pvalor<0.05 Pvalor>0.05, por tanto no hay diferencia significativa entre las medias de las tres ubicaciones.

Means and 95.0 Percent LSD Intervals

1.34 1.24 1.14 1.04 0.94 0.84 0.74 abajo arriba medio

% almidn

ubicacin
Figura B-2. Medias del contenido de almidn en cada ubicacin.

108

Tabla B-4. Kruskal-Wallis Test for %starch by Pseudostem.

N Pseudotallo 1 2 3 4 5 6 7 8

Sample size 9 9 9 9 9 9 9 9

Average Rank 22.4444 14.8889 32.0 42.2222 56.5556 58.8889 57.0 8.0

Test statistic = 58.6362 P-Value = 2.82419E-10 Hiptesis nula: Las medias son iguales. Hiptesis alterna: las medias son diferentes. Se rechaza la hiptesis nula si Pvalor<0.05 Pvalor<0.5, por tanto hay diferencia significativa entre las medias de las de los 8 pseudotallos.

Means and 95.0 Percent LSD Intervals

2 1.6 1.2 0.8 0.4 0 1 2 3 4 5 6 7 8

% almidn

Pseudtotallo
Figura B-3. Medias del contenido de almidn por planta.

109

ANEXO C
Tabla C-1. Datos aislamiento del almidn va hmeda.
Peso licuado (g) 697.5465 946.8734 1302.3158 total 2 2946.7357 338.673 625.5679 896.7865 total 3 1861.0274 1098.4687 1814.3978 2320.8871 total 4 5233.7536 797.6754 1256.1208 905.0792 total 5 2958.8754 228.57 434.3636 504.27 total 6 1167.2036 287.1726 233.5369 416.4834 total 7 937.1929 279.3715 339.6906 433.2422 total 8 1052.3043 186.2674 250.2643 300.6852 total 737.2169 Almidn calculado (g) 4.1190 5.7431 7.2890 17.1511 1.0864 3.0181 5.8646 9.9691 7.6586 18.9859 13.4065 40.0510 7.8984 13.4419 6.9825 28.3228 4.4590 3.2892 12.3082 20.0563 7.4699 3.9943 4.4117 15.8759 3.4123 4.4362 7.9238 15.7722 0.8440 1.1486 1.3078 3.3004 2.0157 93.6753
Media Desviacin Estndar

Pseudotallo 1

Almidn aislado (g) 8.4484 8.4484 3.1866 3.1866 25.8604 25.8604 20.8581 20.8581 12.2610 12.2610 1.3732 1.3732 9.0386 9.0386 2.0157

Pureza almidn aislado (%)

Rendimiento del aislamiento (%)

84.7678

41.7555

97.5927

31.1954

97.5421

62.9815

88.3067

65.0329

96.6875

59.1079

96.9957

8.3895

97.4713

55.8579

57.2115 53.3061 12.3076

110

ANEXO D Hidrlisis del almidn por microondas.

Tabla D-1. Analysis of Variance for %ART total by microwave - Type III Sums of Squares. Source MAIN EFECTS A:%almidn B:tiempo(min) C:[M]cido INTERACTIONS AB AC BC RESIDUAL TOTAL (CORRECTED) Sum of Squares 314.598 10772.3 114.226 Df Mean Squares 314.598 2693.07 114.226 F-Ratio P-Valvue

1 4 1

41.40 354.40 15.03

0.0000 0.0000 0.0003

182.709 70.5466 1097.49 334.354 12886.2

4 1 4 44 59

45.6772 70.5466 274.372 7.59895

6.01 9.28 36.11

0.0006 0.0039 0.0000

All F-ratios are based on the residual mean square error. The P-values test the statistical significance of each of the factors. Since 6 P-values are less than 0.05, these factors have a statistically significant effect on %ARTtotal at the 95.0% confidence level.

Tabla D-2. Multiple Range Tests for %ART total vs %starch by microwave. Method: 95.0 percent Duncan %almidn Count LS Mean 4 8 30 30 20.6187 25.1983 LS Sigma 0.0 0.0 Homogeneous Groups X X

Tabla D-3. Multiple Range Tests for %ART total vs time [min] by microwave. Method: 95.0 percent Duncan timepo (min) Count LS Mean 1 2 8 3 6 12 12 12 12 12 1.38929 12.8905 32.5414 32.9765 34.7448 LS Sigma 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 Homogeneous Groups X X X X X

111

Tabla D-4. Multiple Range Tests for %ART total vs [M] acid by microwave. Method: 95.0 percent Duncan [M] cido Count LS Mean 0.2288 0.5001 30 30 21.5287 24.2883

LS Sigma 0.0 0.0

Homogeneous Groups X X

Hidrolisis de almidn por conveccin.

Tabla D-5. Analysis of Variance for %ART total by Incubation - Type III Sums of Squares. Source MAIN EFECTS A:%almidn B:tiempo(h) C:[M]cido INTERACTIONS AB AC BC RESIDUAL TOTAL (CORRECTED) Sum of Squares 45.8459 580.421 1910.48 Df Mean Squares 45.8459 290.21 1910.48 F-Ratio P-Valvue

1 2 1

2.60 16.48 108.48

0.1187 0.0000 0.0000

150.957 3.19279 1328.9 457.906 4477.7

2 1 2 26 35

45.6772 70.5466 274.372 7.59895

4.29 0.18 37.73

0.0246 0.6738 0.0000

All F-ratios are based on the residual mean square error. P-values test the statistical significance of each of the factors. Since 4 P-values are less than 0.05, these factors have a statistically significant effect on %ARTtotal at the 95.0% confidence level.
Tabla D-6. Multiple Range Tests for %ARTtotal vs %starch by Incubation. Method: 95.0 percent Duncan %almidn Count LS Mean 8 4 18 18 36.7485 39.0055

LS Sigma 0.0 0.0

Homogeneous Groups X X

112

Tabla D-7. Multiple Range Tests for %ARTtotal vs time [h] by Incubation. Method: 95.0 percent Duncan tiempo (h) Count LS Mean 1 5 3 12 12 12 32.2938 39.7711 41.566

LS Sigma 0.0 0.0 0.0

Homogeneous Groups X X X

Tabla D-8. Multiple Range Tests for %ART total vs [M]acid by Incubation. Method: 95.0 percent Duncan [M] cido Count LS Mean 0.2288 0.5001 18 18 30.5922 45.1618

LS Sigma 0.0 0.0

Homogeneous Groups X X

Mtodo GOD-PAD.

Tabla D-9. Analysis of Variance for %ART o %Glucose - Type III Sums of Squares. Source MAIN EFECTS A: Experimento B:mtodo INTERACTIONS AB RESIDUAL TOTAL (CORRECTED) Sum of Squares 2363.5 11.163 Df Mean Squares 337.642 11.163 F-Ratio P-Valvue

7 1

55.21 1.83

0.0000 0.1862

101.905 195.703 2672.27

7 32 47

14.5579 6.11571

2.38

0.0445

All F-ratios are based on the residual mean square error. The P-values test the statistical significance of each of the factors. Since 2 P-values are less than 0.05, these factors have a statistically significant effect on %ART o %Glucose at the 95.0% confidence level.

113

Tabla D-10. Multiple Range Tests for %ART o %glucose by method. Method: 95.0 percent Duncan Mtodo Count LS Mean GOD-PAD ART 24 24 39.1091 40.0736

LS Sigma 0.0 0.0

Homogeneous Groups X X

Comparacin hidrlisis convencional.

por

microondas

por

calentamiento

Tabla D-11. ANOVA Table for %ARTtotal by experiments. Source Between groups Within groups Total (corr.) Sum of Squares 22191.6 2363.5 213.622 Df 31 64 95 Mean F-Ratio Squares 715.857 214.47 3.33784 P-Valvue 0.0000

Since the P-value of the F-test is less than 0.05, there is a statistically significant difference between the mean %ART total from one level of method to another at the 95.0% confidence level. To determine which means are significantly different from which others, select Multiple Range Tests from the list of Tabular Options.

Para la tabla D-12 se abrevio la nomenclatura de los experimentos de la siguiente manera:

114

Tabla D-12. Multiple Range Tests for %ART total by experiments.

Experiments M3,1 M2,1 M1,1 M1,2 M4,1 M2,2 I1,1 M4,2 M4,8 M2,3 I2,1 M3,2 M4,6 I2,3 M3,8 M2,8 M1,3 M4,3 M2,6 M1,6 M3,6 I1,3 I2,5 I4,5 M3,3 M1,8 I3,5 I1,5 I3,3 I4,1 I3,1 I4,3 Count 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Mean 0.169494 0.531227 1.0242 1.79494 3.83225 7.78321 9.03022 14.4964 23.4529 24.8491 25.2885 27.4875 28.9473 32.7453 33.2368 33.3305 33.3326 33.8417 35.1221 37.3739 37.5357 37.6142 38.0216 39.4099 39.8826 40.1454 40.7999 40.8531 44.3711 47.0342 47.8224 51.5335 X X XX XX X X X X X XX XX X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X Homogeneous group

115

Azcares reductores totales y glucosa.

Figura D-1 Curva de calibracin para el mtodo de azcares reductores totales (ART)

Figura D-2. Curva de calibracin para el mtodo GOD-PAD para determinacin de glucosa.

116

ANEXO E Amilosa aparente.

Figura E-1. Curva de calibracin de la amilosa aparente por el mtodo del valor azul.

Figura E-2. Curvas de los anlisis termo-gravimtricos (TG) para diferentes concentraciones de amilosa para el clculo de la amilosa aparente por el mtodo termo-gravimtrico y cuerva de la muestra de almidn aislado desde el pseudotallo.

117

Figura E-3. Curva de calibracin de la amilosa aparente por anlisis termogravimtrico.

Calculo de la energa de activacin de descomposicin por TGA.

Figura E-4. Mtodo de Friedman para el clculo de la energa de activacin de la descomposicin del almidn aislado del pseudotallo. Cada punto, en cada representa los parmetros de las velocidades de calentamiento () iguales a 2, 5, 15, 20, 25 y 30 C/min, de abajo a arriba.

118

Figura E-5. Mtodo de Kissinger para el clculo de la energa de activacin de la descomposicin del almidn aislado del pseudotallo. Cada punto representa los parmetros de las velocidades de calentamiento () iguales a 2, 5, 15, 20, 25 y 30 C/min de abajo a arriba.

Figura E-6. Mtodo de Flyn-Wall-Ozawa para el clculo de la energa de descomposicin. Todo punto, en cada representa los parmetros de las velocidades de calentamiento () iguales a 2, 5, 15, 20, 25 y 30 C/min, de abajo a arriba.

119

Figura E-7. Mtodo de Coats-Redfen (modificado) para el clculo de la energa de descomposicin. Todo punto, en cada representa los parmetros de las velocidades de calentamiento () iguales a 2, 5, 15, 20, 25 y 30 C/min, se observan de abajo hacia arriba.

Tabla E-1. Regresiones lineales para los mtodos de clculo de la energa de activacin.
Mtodo Alfa 0.2 0.3 0.35 0.4 0.45 0.5 0.6 0.2 0.3 0.35 0.4 0.45 0.5 0.6 0.2 0.3 0.35 0.4 0.45 0.5 0.6 --b -8957.47425 -9347.52618 -9513.50776 -9660.43863 -9670.26065 -9799.35399 -10402.7392 -22469.6268 -24200.1186 -24188.6637 -24462.0264 -23938.4432 -25954.3732 -29033.4149 -19484.2085 -20002.1851 -20461.4403 -20796.1148 -21136.0993 -21429.2066 -22823.6621 -22430.6231856.29249 a 16.54617 17.10448 17.33965 17.54167 17.51529 17.68481 18.58018 39.28738 42.2824 42.15504 42.30209 41.58764 44.70723 49.27605 23.45509 24.11699 24.78716 25.24649 25.71104 26.09349 28.16305 28.047571.45962 R2 0.99624 0.99727 0.9981 0.99844 0.99742 0.99702 0.99395 0.97906 0.99577 0.99585 0.99512 0.99349 0.99041 0.96487 0.99567 0.99519 0.99679 0.99715 0.99712 0.99667 0.99352 0.99564

Flyn-Wall-Ozawa

Friedman

Coats-Redfen (modificado) Kissinger

Donde a y b vienen dados por y = a + bx 120