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HEMATOPOIESE

HEMATOPOIESE Alexandra Mota S erv i ço de H ema tol og ia Hospital Geral de

Alexandra Mota

Serviço de Hematologia

Hospital Geral de Santo Annio Porto

Locais da Hematopoiese

Locais da Hematopoiese

Aspirado Medular

Aspirado Medular

Biopsia de medula óssea

Biopsia de med u la óssea

Biópsia de medula óssea (HE)

Biópsia de med u la óssea (HE)

CFU-S assay

CFU -S assa y
CFU -S assa y

Ensaios Clonogénicos

• CFU-S

(Unidade formadora de colónias- baço) Till and Mc Cullough(1961)

CFU- GM (Unidade formadora de colónias -granulomonocíticas )

– Pluznick and Sachs

(1965)

Bradley and Metcalf

Sistemas in vitro para o estudo da hematopoiése e dos factores que a regulam

Sistemas in vitro que suportam o desenvolvimento de células

- da linha milóide

- da linha linfóide

de células - da linha milóide - da linha linfóide células imobilizadas podem ser isoladas analizadas
de células - da linha milóide - da linha linfóide células imobilizadas podem ser isoladas analizadas
de células - da linha milóide - da linha linfóide células imobilizadas podem ser isoladas analizadas

células imobilizadas podem ser isoladas

da linha linfóide células imobilizadas podem ser isoladas analizadas repicadas • células HSC podem ser usadas

analizadas

células imobilizadas podem ser isoladas analizadas repicadas • células HSC podem ser usadas para estabelecer

repicadas

• células HSC podem ser usadas para estabelecer colónias mistas

células progenitoras podem ser usadas para estabeleciento de linhagens restrictas

• Necessidade de factores de crescimento solúveis (citocinas) :

sobrevivência

proliferação

diferenciação

maturação

Ensaios Clonogénicos

Ensaios Clonogénicos
Ensaios Clonogénicos

Stem cell assays

In vitro LTBMC(Long term bone marrow cultures)

In vivo Marrow repopulating assays (NOD / SCID mouse )

Culturas Celulares

• Culturas tipo DEXTER (1977)

Culturas dependentes do estroma

– Papel do microambiente hematopoiético

J.Clin. Invest.116:1195-1201(2006)
J.Clin. Invest.116:1195-1201(2006)

J.Clin. Invest.116:1195-1201(2006)

Estrutura Hierárquica do Tecido Hematopoiético

• Células Stem

• Células Progenitoras (CFU) – unidade formadora de

colónias

• Células Precursoras

Células Maduras

Características das células stem hematopoiéticas

• Células pluripotenciais

• Capacidade de auto-renovação

• Capacidade de reconstituição hematopotica

Fase Go

• CD34 positivas

• HLA DR -

Características das células progenitoras

• Sem capacidade de auto-renovação

• Capacidade de diferenciação limitada e irreversível

• Potencial proliferativo baixo

• Em ciclo celular

Diferenciação Hematopoiética

Diferenciação Hematopoiética

Microambiente Hematopoiético

• Regulação da migração das células para o exterior

• Suporte da Hematopoiese

Regulação na produção de Factores de Crescimento Hematopoiético

Microambiente Hematopoiético

• Células do estroma

• Componentes da matrix extracelular

Citocinas

Estroma Medular

• Células de origem mesenquimatosa

Células endoteliais

– Fibroblastos

Adipócitos

– Osteoblastos

• Macrófagos

Componentes da Matrix Extracelular

• Colagéneo

Laminina

• Trombospondina

• Fibronectina

– Produzida por fibroblastos e cél. endoteliais

Regulação da Hematopoiese

• Interacção das células hematopoiéticas

– componentes da matrix extracelular

– células do estroma

Regulação da Hematopoiese

Receptores de citocinas

Receptores de moléculas de adesão

Modulação da resposta da HSC aos factores extracelulares Indução ou inibição da proliferação e diferenciação celulares

Regulação da Hematopoiese

Moléculas de adesão

– Integrinas (beta1)

Adesão dos neutrófilos ao endotélio

• Activação / Interacção com a matrix extracelular

• Envio de “sinais” para diferenciação celular

– Superfamília das Igs

Receptores de antigénios

• Receptores de FCH

Factores de Crescimento Angiogénico

• VEGF

- factor de crescimento endotelial e vascular

Família das Angiopoietinas

Promovem a migração e proliferão das células endoteliais durante a formação da vasos sanguíneos

– Modulam o crescimento e diferenciação das células hematopoiéticqs e a sua mobilização.

FACTORES REGULADORES DA HEMATOPOIESE

Interleucinas (IL-1 ,IL-2, IL-3,

IL-18)

• Factores de Crescimento Hematopoiético CSF- colony stimulating factors

• Inibidores da Hematopoiese

Interleucinas

Glicoproteínas

– Hematopoiese

Resposta Imune

Resposta à infec ão

INTERLEUCINAS

Interleucina

Síntese

Células Alvo

Cromossoma

IL-3

Linfócitos T

Progenitores

5q23-31

multipotentes

IL-5

Linfócitos T

Eosinófilos

5q23-31

IL-6

Fibroblastos Linfócitos T

Megacariócitos

7p21-14

IL-11

Macrofagos

Megacariócitos

19q13-13.4

Progenitores

 

multipotentes

 

Factores de Crescimento Hematopoiético

Glicoproteínas

• Actuam sobre diferentes linhas celulares

• Efeito sobre a proliferação e diferenciação

• Acção sobre o funcionalismo celular:

Adesão

– Fagocitose

– Metabolismo celular

Citotoxicidade

Metcalf, D. Blood 2008;111:485-491

Metcalf, D. Blood 2008;111:485-491

Metcalf, D. Blood 2008;111:485-491

Metcalf, D. Blood 2008;111:485-491

Factores de Crescimento

FCH

Síntese

Células Alvo

Cromossoma

G-CSF

Células do estroma Macrofagos

CFU-G

 

17q11-22

F

ã /Nú

 

unç o

mero

GM-CSF

Células do estroma Linfócitos T

CFU-GM

 

5q31-32

Progenitores

   

multipotentes

 

Cél dendríticas(IL-4)

Eritropoietina

Rim

BFU-e

 

7pterq22

gado

CFU-e

Trombopoietina

Fígado

Megacariócitos Stem cells BFU-e

3q26-27

Rim

Inibidores da Hematopoiese

• MIP-1 (Proteina Inflamatória Macrofágica)

• Interferons

TNF (Factor de Necrose Tumoral)

Metcalf, D. Blood 2008;111:485-491

Metcalf, D. Blood 2008;111:485-491

Metcalf, D. Blood 2008;111:485-491

Metcalf, D. Blood 2008;111:485-491

TROMBOCITOPOIESE

TROMBOCITOPOIESE
TROMBOCITOPOIESE

ERITROPOIESE

ERITROPOIESE

ERITROPOIESE

ERITROPOIESE

FCH- Redundância ou Subtileza?

FCH - Red undânc i a ou Su btil eza ?

Uso clínico dos FCH

• Objectivos

– Tratar anemia

– Acelerar granulopoiese

– Mobilização celular

• Factores

– Eritropoietina

– G-CSF, GM-CSF

– G-CSF

Metcalf, D. Blood 2008;111:485-491

Metcalf, D. Blood 2008;111:485-491

FCH e terapêutica da LMA

FCH e terapê utica da LMA

Mobilização e” Homing”

Mobili z ação e ” Homing” J.Clin. Invest.116:1195-1201(2006)

J.Clin. Invest.116:1195-1201(2006)

The stem cell niches

“ The stem cell niches ” J.Clin. Invest.116:1195-1201(2006)

J.Clin. Invest.116:1195-1201(2006)

International Society for Cellular Therapy position statement

• – – CD105+ – CD75+ – CD90+ – CD45- – CD34- – CD14-
CD105+
CD75+
CD90+
CD45-
CD34-
CD14-

CD115-

– CD45- – CD34- – CD14- – C D 1 1 5 - Minimal Criteria for
– CD45- – CD34- – CD14- – C D 1 1 5 - Minimal Criteria for

Minimal Criteria for defining Multipotent Mesenchymal Stromal Cells

Plastic adherent when maintained in standard culture conditions

Cytotherapy.2006;8:315-317

Nauta, A. J. et al. Blood 2007;110:3499-3506

Nauta, A. J. et al. Blood 2007;110:3499-3506

Visão esquemática da Hematopoiese

Visão esquemática da Hematopoiese
Visão esquemática da Hematopoiese