Le dveloppement embryonnaire des amphibiens.

I Les ufs.
Comme chez tous les vertbrs, lorganogense est un phnomne discontinue. Aprs une phase de multiplication, les ovogonies deviennent des ovocytes primaires restant bloqus en prophase miotique. Viennent ensuite les ovocytes secondaires qui, une fois librs de lovule, sont capts par loviducte. Il y a lors fcondation. La rupture de lovaire et la fcondation, rgulent lovogense. En trois ans, lovocyte primaire augmente de taille : elle passe de cinquante micromtres 2 millimtres. Ces ovocytes permettent le stockage de matriaux dans les ovaires. Les matriaux stocks sont de 2 types :

nutritifs (vitellus). endognes (ARN messagers, transcrits), ils permettent une multiplication nuclaire. Ils permettent aussi la transition blastulenne par une traduction en protines.

La transition blastulenne : tous ces lments sont traduits en protines et il aura ensuite dveloppement de luf. Dans lovaire, lovocyte primaire augmente considrablement de taille durant trois ans chez Rana esculenta, avant la ponte ovulaire. Le noyau constitue la vsicule germinative : le noyau est bloqu en prophase 1 de miose. Dans lovocyte primaire, il y a stockage de matriaux nutritionnels dorigine exogne apports par la circulation maternelle. Il y a des protines, des vitellognines qui sont synthtises par le foie de la mre et captes par les cellules folliculaires entourant lovocyte puis, transformes par lovocyte aprs dshydratation en complexes

phosphoglycolipoprotiques. Les phosphoglycolipoprotines sont appeles plaquettes vitellines. Lovocyte primaire stocke aussi du matriel dorigine endogne permettant lexpression de linformation gntique. Il sagit de ribosomes : on parle damplification de cistrons ribosomiques.

A maturit, cet ovocyte primaire a un noyau volumineux excentr vers le ct. Il se diffrencie en 2 hmisphres : un pigment qui reprsente le ple animal et un autre, dpigment qui reprsente le ple vgtatif.

Lovocyte va stocker des matriaux exognes. Le prcurseur est la vitellognine (470 kDa). Celle-ci est synthtise par le foie de la femelle, elle circule dans le sang et va tre internalise dans des endosomes puis dans des lysosomes et, elle sera enfin dgrade en phosphovitine et lipovitelline qui vont tre dshydrates et qui vont donner les plaquettes vitellines (structure cristalline). Elles sont stockes en rserve puis dgrades par des enzymes le moment venu. Au ple vgtatif : les grosses plaquettes vitellines vont rester sur place. Au ple animal, les petites plaquettes vitellines vont tre transportes par des filaments dactine vers le centre de la cellule : on obtient un gradient vitellin. On a alors une distribution symtrique des molcules. Les matriaux endognes : ont trouve du glycogne stock autour des noyaux, des ribosomes, du rticulum endoplasmique et des lipides (tous sont rpartis autour du noyau). On trouve de lARN de tous types qui est rparti dune certaine manire. LARN est plus riche vers le ple animal que vers le ple ventral.

LARN messager Vg va coder pour la synthse de facteurs de dveloppement du ple ventral dans linduction du msoderme. Dautres ARNm vont coder pour la synthse de molcules adhsives, de catine qui entrane une localisation prfrentielle des ARN au ple animal ou ventral. Sous la membrane plasmique, il y a des granules pigmentaires qui confrent une couleur luf : on parle de calotte pigmentaire dans le cytoplasme cortical qui contient beaucoup de vitellus, de mitochondries, de granules corticaux. La taille de lovocyte I est comprise entre 5 m et 2 mm. Cet ovocyte se libre de lovaire et sera mis dans loviducte femelle. Il y a alors reprise de la premire division miotique, mtaphase I, avec production dun globule polaire qui donnera un ovocyte II qui restera en mtaphase II dans loviducte. Il sera ensuite mis dans leau puis, fcond par le mle. Au moment o lovocyte I est mis, il achve sa premire (sinse) division miotique et rejette le globule polaire qui se manifeste au ple animal par une rgion dpigmente : la tache de maturation.

Cet ovocyte sentoure dune gangue glycoprotique (muqueuse) qui est scrte durant le transport dans loviducte. Elle a pour fonction de crer des conditions favorables pour la fcondation. Elle apporte des ions comme Ca2+ et Mg2+. Elle a aussi un rle protecteur en empchant les ufs de se dshydrater quand ils sont mis hors du cloaque. Cette gangue fait adhrer les cellules entre elles : ensemble cohsif.

II La fcondation.
Celle-ci est variable chez les amphibiens. On distingue deux types distincts : la fcondation des anoures et des urodles.

A Les anoures. Exemple : le Xnope.

La fcondation est externe. Le mle va chevaucher la femelle en rpandant son sperme au moment o les ufs sont pondus. La fcondation doit avoir lieu ds lmission des ovocytes par la femelle. La gangue, hydrophile, gonfle au contact de leau et devient rapidement un obstacle la pntration des spermatozodes (fcondation).

B Les urodles. Exemple le Triton (pleurodle).

La fcondation a lieu au niveau du cloaque de la femelle ; il ny a pas dorgane copulateur. Le mle met un spermatophore (formation mucilagineuse) au niveau duquel sont agglutins les spermatozodes. Ce spermatophore va adhrer au substrat (caillou). La fcondation est dite interne et se produit au niveau du cloaque (canal mixte urognital et dont les lvres viennent enserrer le spermatophore). La pntration des spermatozodes a lieu gnralement au niveau du ple animal car cest l o il y a le moins dencombrement. Il y a monospermie chez les anoures (un seul spermatozode rentre) mais polyspermie chez les urodles (5 ou 6 spermatozodes rentrent mais un seul va fconder le noyau). La fcondation va entraner une activation dans lovocyte : deux types dactivation (interne et externe). Dans le cas dune activation interne, il y a reprise de la deuxime division miotique avec mission dun second globule polaire et la formation dun pronuclus femelle. Le spermatozode perd son flagelle. Lacrosome vient se fixer sur un rcepteur, traverse la membrane vitelline et, au contact de la membrane plasmique, va produire une dpolarisation de la membrane en modifiant le potentiel de celle-ci. Cette dpolarisation de quelques minutes est suivie dune repolarisation. Ce phnomne entrane une libration de Ca2+ (Ca qui provient du rticulum endoplasmique lisse et des mitochondries) dans la rgion corticale de luf. Ca permet la polymrisation des filaments dactine (allongement de la cellule), ce qui a pour effet damener la surface des granules corticaux. Ces granules librent leur contenu en faisant fusionner leur membrane (exocytose). Ces granules corticaux contiennent trois composants :

mucopolysaccharides qui vont tre mis entre la membrane plasmique et la membrane de fcondation (vitelline), constituant ainsi un gel hydrophile amenant de leau entre ces membranes et les dcollant. participant la dsolidarisation des 2 membranes. Glycoprotines paississant la membrane vitelline (de fcondation) qui se dcolle.

Le gel form dans lespace privitellin permet la rotation de luf dans la demi-heure : cest le premier phnomne dactivation externe. On trouve la rotation dquilibre. Les ufs vont tourner selon la gravit ; on aura un quilibre selon laxe ple animal/ple ventral. Remarque : les granules corticaux nexistent que chez les anoures. Aprs un temps variable (de une quatre heures) et selon les espces, on assiste un mouvement de bascule de la calotte pigmentaire dun angle denviron 30.

Il va ainsi librer une rgion lgrement dpigmente, le croissant gris, qui donnera la future rgion dorsale de lembryon.

Remarque : chez les Urodles, il y a un matriel visqueux entre la membrane plasmique et la paroi vitelline. La rgion oppose au croissant gris donnera la rgion ventrale. Le ple animal et le ple vgtatif donnent respectivement la tte et la queue en formant laxe antropostrieur qui permettra la mise en place de laxe dorso-ventral. Cette rotation est appele rotation de symtrisation et montre que lembryon a dlimit ses rgions. Seule la rgion cytoplasmique tourne. Lorsque la fcondation est monospermique, le croissant gris apparat toujours diamtralement oppos au point de pntration du spermatozode. Quand la fcondation est polyspermique, le croissant gris apparat partout avec les mmes potentialits.

La future face dorsale nest pas une rgion trs dtermine. Elle correspond lapparition dune dissymtrie molculaire qui entrane une diffrence en un certain nombre dacides nucliques cause de la rotation. Le dcollement de la membrane empche la polyspermie. Le dplacement des molcules suppose linitiation dun mouvement et lutilisation dun support. Au cours de la rotation de symtrisation, on constate la formation dun rseau de microtubules orientes paralllement

la surface de luf et servant de support au dplacement des dterminants molculaires. Il y a aussi des molcules fournissant de lnergie. Tout ceci plaide en faveur dune localisation molculaire diffrentielle dterminant la future face dorsale de lembryon. Du cytoplasme de la rgion du croissant gris qui est inject sur la face ventrale dun autre embryon va induire un deuxime embryon (siamois). Rciproquement, si lon injecte du cytoplasme de la face ventrale, il ne se passe rien.

III La segmentation.
Cest une phase de divisions cellulaires : on passe dun uf unicellulaire une blastula (6 10000 cellules). Cette segmentation implique de nombreux facteurs qui vont orienter les fuseaux. Le premier plan de division passe par laxe ple animal/ple vgtatif, dit mridien et donne 2 blastomres gaux. Ce plan peut couper, ou non, le croissant gris. Le deuxime plan de clivage est parallle au premier et donne 2 mridiens gaux.

La segmentation est totale, et, pendant les deux premires divisions, elle est gale. Au cours du troisime cycle cellulaire, la segmentation devient ingale (subquatoriale) et donne 4 micromres au ple animal et 4 macromres au ple vgtatif.

Les cycles cellulaires se poursuivent rapidement, sont synchrones jusqu la 10me ou 12me division puis, deviennent asynchrones. Ce cycle qui fait passer de la division synchrone la division asynchrone est appel transition blastulenne. Les cycles sont rapides jusqu la mi-blastula (pas de phase G1 ni G2). Il y a une expression maternelle des gnes : toutes les protines synthtises le sont partir dARN maternel stock. Aprs la transition blastulenne, les cycles sallongent et apparaissent les phases G1 et G2 (G1, S, G2, M). On a lapparition dun asynchronisme des divisions cellulaires. Cest une expression zygotique des gnes. Au dpart, on a un stade morula. Les cellules deviennent de plus en plus petites et vers la misegmentation, on aura le stade blastula.

Il y a apparition dune cavit de segmentation. Le stade blastula prsente une cavit excentre vers le ple animal : cest le blastocle. On a trois populations cellulaires qui se mettent en place pendant la gastrulation. Cette blastula va synthtiser des molcules. A la fin de la segmentation, les micromres (du ple animal) vont former la matrice extracellulaire qui permettra la suite des vnements. Un des composants principaux est la fibronectine qui rendra possible la migration des cellules au cours de la gastrulation.

IV La gastrulation.

Il y a mise en place de trois feuillets :

ectoblaste msoblaste endoblaste

Ces trois feuillets vont migrer et semboter pour former lectoderme, le msoderme et lendoderme. Ces formations sont ralises grce des migrations cellulaires appeles mouvements morphogntiques.

A Les phnomnes externes de la gastrulation.

Il y a apparition dune encoche blastoporale sous lemplacement du croissant gris. Cette encoche rsulte dune invagination des cellules mdiodorsales : cest le stade grand bouchon vitellin. Au stade petit bouchon vitellin, le blastopore devient petit. A la fin de la gastrulation, il ne persiste quune fente : lanus.

B Les phnomnes internes de la gastrulation.

Lanalyse des mouvements morphogntiques de la gastrulation a t rendue possible par lutilisation de marqueurs colors (ex : VOGT) : cest laboutissement la carte des territoires prsomptifs.

Les marques 1 4 : elles sont rparties dans la partie ventrale du systme nerveux La marque 5 est dans le msoderme caudal. La marque 6 est dans la corde dorsale. La marque 7 est dans le msoderme prcordal. Les marques 8 11 sont localises dans la paroi ventrale du tube digestif.

Les mouvements de convergence, dinvagination, les mouvements cellulaires dextension forment le processus dpibolie. Le msoblaste donnera la musculature, la corde et des feuillets qui participent lemballage.

C Les mouvements morphogntiques de la gastrulation.

A la partie infrieure mdiane du croissant gris, un mouvement dinvagination se constitue, provoquant lapparition dune nouvelle cavit : larchantron. Le blastocle disparat la fin de la gastrulation. Cette invagination intresse un peu dendoblaste, la plaque prcordale (pharynx) puis le cordomsoblaste ainsi que le msoblaste somitique et latral. En fin de gastrulation, le blastocoele a compltement disparu et il est remplac par larchantron qui est la future lumire du tube digestif.

Quand la gastrulation est termine, les lames msodermiques droite et gauche ne se sont pas encore rejointes. Elles ne le feront quau cours de la neuralation. Dun germe deux ensembles cellulaires (ple animal et ple vgtatif), on passe progressivement, au cours de la gastrulation, trois ensembles cellulaires qui sembotent les uns dans les autres pour donner trois feuillets fondamentaux. En raison de la position respective de ces trois feuillets, on parlera dectoblaste lextrieur, de msoblaste en position intermdiaire et dendoblaste lintrieur. On a diffrents types de mouvements :

pibolie allongement de convergence divergence des lames latrales dpibolie de lectoblaste pour compenser linvagination du msoblaste et de lendoblaste dextension au niveau du msoderme somitique.

Tous ces mouvements entranent les mouvements morphogntiques de la gastrulation. Lembryon, la fin de la gastrulation, a toujours une forme cylindrique et le blastopore constituera toujours lanus.

V La neurulation (mise en place de la plaque neurale).

Le processus dinduction neurale se fait lors de la gastrulation. Le cordomsoblaste vient au contact de lectoderme et induit celui-ci en plaque neurale (neurectoderme). Le cordomsoblaste va librer des molcules qui permettent la diffrenciation et lactivation des gnes.

Lectoblaste est comptent pour capter les signaux (molculaires), mais cette comptence est transitoire.

Au dbut de la neurulation, il y a mise en place de la plaque neurale. On assiste en premier des mouvements pigmentaires sur la face dorsale qui dessinent une aire en forme de raquette. Ces tranes pigmentaires sont dues un paississement du neurectoderme en plaques neurales. Des bourrelets neuraux vont spaissir, se soulever puis se souder pour former le tube neural. La fermeture se fait dabord dans la rgion du tronc puis dans celle de la queue (rgion caudale) et enfin, dans la rgion antrieure. Ce tube nerveux donnera lencphale et la moelle pinire. Ces cellules des crtes neurales ont des capacits de migration importante grce la synthse de matrice extracellulaire sur laquelle elles migrent. Ces cellules qui vont migrer vont diffuser dans tout le corps et donner, des mlanophores (cellules scrtant des pigments) qui donneront sa couleur a lembryon, les ganglions spinaux (ou rachidiens), les systmes sympathiques, les glandes endocrines (mdullo-surrnales). Pendant que se droule la neurulation, on assiste une rgionalisation du msoblaste en lame cellulaire pleine formant la vote et les parois latrales de larchantron. Alors que les lames latrales se rejoignent ventralement, le msoderme dorsal sindividualise, la corde sisole et le msoderme dorsal se mtamrise en somites (blocs mtamriss). La rgion dorsale externe va donner le dermatome (derme de la peau). La rgion suprieure interne va donner le myotome (muscle stri), la partie infrieure interne donnera le sclrotome (les vertbres). La rgion intermdiaire donnera les gonades et les reins.

Les rgions latrales et la rgion ventrale du msoderme ne se mtamrisent pas et se dlaminent en deux feuillets : - le plus externe, le somatopleure, donnera le squelette des membres, le pricarde et les muscles viscraux - la splanchnopleure va donner le cur, les premires cellules sanguines, la paroi endothliale des vaisseaux sanguins. Ces deux feuillets vont constituer une cavit clomique (cavit gnrale du cur).

VI La formation du tube digestif.

A la fin de la gastrulation, la masse dendoblaste constitue le plancher de larchantron. Pendant la neurulation, les bords latraux de lendoblaste se soulvent et viennent se souder dorsalement dans un mouvement inverse celui du msoblaste latral. Lendoblaste donnera lpithlium du tube digestif, de lappareil urinaire et pulmonaire. Celui-ci est troite association avec le msoderme splanchnique. Lendoblaste donnera des glandes annexes comme le foie, le pancras. Au cours de la neurulation, le germe sallonge dans le sens antropostrieur. A la fin de cette neurulation, on distingue la tte et la queue : cest le stade du bourgeon caudal. Divers organes apparaissent dans la rgion antrieure comme les yeux, les branchies, les ventouses adhsives pour les anoures ou le balancier pour les urodles.

On assiste une rgionalisation du systme nerveux donnant lencphale et la moelle pinire. Cet encphale va devenir inducteur vis vis de lectoblaste. Cest ainsi que le proencphale induit la placode (vsicules) olfactive.

Le diencphale va former 2 invaginations latrales constituant la rtine qui induit la formation du cristallin qui induira, lui-mme, la formation de la corne (cascade dinductions). Le rhombencphale induit la placode auditive ou otique. Les tissus et les organes se mettent tous en place.