ETEC - Jlio de Mesquita

Curso Tcnico: Meio Ambiente e Qumica

Microbiologia

Prof !enoilson de "rito Al#es

$ "re#e %ist&rico sobre a Microbiologia $ $ Cientistas

'obert %oo(e )$**+,

- Microscpio simples - material: fatia de cortia - pequenas caixas clulas - Incio da teoria celular

Antoni -an .eeu/en0oe( )$*12 3 $124,

- Escreveu cartas !o"al #ociet" of $ondon descrevendo os anim%lculos - &so de um microscpio monocular - &tili'ou amostras de %(ua da c)uva* lquidos onde )aviam (r+os de pimenta e material removido de seus dentes,

$ 2 !era56o Es7ont8nea
-t a metade do sculo .I. acreditava-se que a vida poderia sur(ir espontaneamente da matria viva ou inanimada, -creditavam que sapos* co/ras e camundon(os poderiam sur(ir a partir de solos 0midos e que larvas sur(iam atravs de transforma1es da matria em decomposi+o, $ 2 $ E#id9ncias Pr& e Contra :rancesco 'edi )$**;, - &tili'ando um experimento /em simples demonstrou que a matria em decomposi+o n+o era capa' de (erar larvas* mas* o contado de insetos como as moscas na matria em decomposi+o, !edi enc)eu tr2s 3arras com carne em decomposi+o e lacrou-as fortemente* fe' o mesmo com outras tr2s 3arras semel)antes* deixando-as a/ertas, -s larvas apareceram nas 3arras a/ertas* aps moscas entrarem nessas 3arras e depositarem seus ovos* mas o conte0do das 3arras lacradas n+o apresentou sinal de vida al(um,

Jo0n <eed0am )$1=+, 3 4esco/riu que mesmo aps aquecer caldos nutrientes 5(alin)a ou mil)o6 antes de coloc%-los em frascos co/ertos* a solu+o resfriada era lo(o a/undantemente ocupada por micror(anismos, 7eed)am considerou que os micror(anismos desenvolviam-se espontaneamente a partir dos fludos, .a>>aro ?7allan>ani )2@ anos de7ois, 3 #u(eriu que os micror(anismos do ar teriam provavelmente entrado nas solu1es de 7eed)am* aps a fervura, #pallan'ani demonstrou que fluidos nutrientes aquecidos* aps terem sido previamente lacrados em um frasco* n+o desenvolviam nen)um tido de crescimento micro/iano,

<eed0am res7ondeu que a fora vital* necess%ria para a (era+o espont8nea tin)a sido destruda pelo calor e foi mantida fora dos frascos pelos lacres, Essa fora vital ima(in%ria rece/eu mais crdito quando .aurent .a#oisier mostrou a import8ncia do oxi(2nio para a vida,

$ 4 Teoria da "iog9nese
'udolf -irc0o/ )$;+;, 3 desafiou a teoria da (era+o espont8nea com o conceito de biog9nese* que preconi'ava que clulas vivas poderiam sur(ir somente a partir de clulas vivas preexistentes, 9s ar(umentos so/re a (era+o espont8nea continuaram at :;<:* quando =asteur resolveu a quest+o, .ouis Pasteur )$;*$, 3 =asteur demonstrou que os micror(anismos estavam presentes no ar e podiam contaminar solu1es aparentemente estreis, =asteur colocou meio de cultura em frascos com a extremidade da a/ertura no formato da letra #, 9 conte0do dos frascos foi fervido e resfriado* n+o apresentando sinal de apodrecimento ou de vida* mesmo aps meses de espera, 9 desen)o de =asteur permitia que o ar passasse para dentro do frasco* mas o pescoo curvado da vidraria prendia qualquer micror(anismo presente no ar,

=asteur demonstrou que os micror(anismos estavam presentes na matria n+oviva* so/re slidos* dentro de lquidos e no ar* alm disso* demonstrou que os micror(anismos poderiam ser destrudos pelo calor e que mtodos para elimin%-los

poderiam ser formulados, Essas desco/ertas formam a /ase das tcnicas de asse7sia que atualmente s+o pr%ticas rotineiras nos la/oratrios e procedimentos )ospitalares,

$ = :ermenta56o e Pasteuri>a56o
&ma das etapas fundamentais* que esta/eleceu a rela+o entre micror(anismos e doenas* ocorreu quando mercadores franceses pediram que =asteur desco/risse porque os vin)os e as cerve3as a'edavam, Esperavam que ele desenvolvesse um mtodo que impedisse o estra(o das /e/idas* quando enviadas a (randes dist8ncias* na poca* muitos cientistas acreditavam que o ar convertia os aucares desses fludos em %lcool, =asteur desco/riu que micror(anismos 5leveduras6 convertiam os aucares para %lcool na aus2ncia de ar* esse processo denominado fermenta56o* utili'ada para produ+o de vin)os e cerve3as, 9 a'edamento causado pelas /actrias que na presena do ar transformam o %lcool das /e/idas em vina(re, - solu+o de =asteur para o pro/lema da danifica+o foi aquecer a cerve3a e o vin)o o suficiente para matar a maioria das /actrias que causavam o estra(o> o processo c)amado de 7asteuri>a56o a(ora rotineiramente utili'ado para matar /actrias potencialmente nocivas no leite e em /e/idas alcolicas, - demonstra+o da rela+o entre danifica+o de comidas e micror(anismos foi o passo mais importante para o esta/elecimento da rela+o entre doenas e micror(anismos,

$ +Teoria do !erme da Aoen5a

- teoria do (erme foi um conceito difcil para muitas pessoas aceitarem naquela poca* porque durante sculos acreditava-se que a doena era uma puni+o para crimes ou pecados individuais, ?uando os )a/itantes de uma vila inteira ficavam doentes atri/uam a culpa odores ftidos dos detritos ou nos vapores venenosos dos p8ntanos, Em :;<@* Jose70 .ister um cirur(i+o europeu* aplicou a teoria do (erme da doena para procedimentos mdicos, $ister sa/ia que* em :;A@* o mdico )0n(aro Bgna> ?emmel/eis )avia mostrado que (inecolo(istas e parteiras* que passavam de uma paciente para outra sem desinfetarem suas m+os* transmitiam fe/re s crianas recm-nascidas, Ele con)ecia os tra/al)os de =asteur* naquela poca n+o con)eciam os desinfetantes mas $ister sa/ia que o fenol 5%cido car/lico6 matava as /actrias* dessa forma ele comeou a tratar ferimentos cir0r(icos com uma solu+o de fenol, Esta pr%tica redu'iu de tal forma a incid2ncia de infec1es e mortes que outros cirur(i1es adotaramna rapidamente, 'obert Coc0 - primeira prova de que as /actrias realmente causam doenas veio em :;B< com !o/ert Coc)* um mdico alem+o rival direto de =asteur na disputa para desco/rir a causa do -ntra'* uma doena que estava destruindo os re/an)os de (ados e ovel)as da Europa, Coc) desco/riu uma /actria em forma de /ast+o* )o3e con)ecida como Bacillus anthracis, no san(ue do (ado que morrera de antra'* ele cultivou a /actria em meio nutriente e* aps* in3etou amostras da cultura em animais sadios* quando esses animais ficaram doentes e morreram* Coc) isolou a /actria de seus san(ues e comparou essas novas /actrias com aquelas isoladas ori(inalmente* ele concluiu que as duas amostras de san(ue contin)am a mesma /actria,

Coc) esta/eleceu uma srie de procedimentos experimentais para relacionar diretamente um micror(anismo especfico a uma doena especfica* esses procedimentos s+o con)ecidos )o3e em dia como 7ostulados de (oc0* durante os 0ltimos :@@ anos* esses mesmos procedimentos t2m sido de (rande a3uda na identifica+o de a(entes etiol(icos, Postulados de Coc0 $ 2 4 = D mesmo 7at&geno de#e estar 7resente em todos os casos da doen5aE D 7at&geno de#e ser isolado do 0os7edeiro doente e crescer em cultura 7uraE D 7at&geno da cultura 7ura de#e causar a doen5a quando inoculado em um animal de laborat&rio saudF#el e susce7t#elE D 7at&geno de#e ser isolado do animal inoculado e de#e-se demonstrar que ele o organismo original

2 Aefini56o dos n#eis de "iosseguran5a )<",

9s quatro nveis de /iosse(urana: 7D-:* 7D-E* 7D-F e 7D-A est+o em ordem crescente no maior (rau de conten+o e complexidade do nvel de prote+o, 9 nvel de /iosse(urana de um experimento ser% determinado se(undo o or(anismo de maior classe de risco envolvido no experimento, ?uando n+o se con)ece o potencial pato(2nico do microor(anismo* dever% ser procedida uma an%lise detal)ada e criteriosa de todas as condi1es experimentais, <"- $: <#el de "iosseguran5a $ !equer procedimentos para o tra/al)o com microor(anismos 5classe de risco :6 que normalmente n+o causam doena em seres )umanos ou em animais de la/oratrio, <"- 2: <#el de "iosseguran5a 2 !equer procedimentos para o tra/al)o com microor(anismos 5classe de risco E6 capa'es de causar doenas em seres )umanos ou em animais de la/oratrio sem apresentar risco (rave aos tra/al)adores* comunidade ou am/iente, -(entes n+o transmissveis pelo ar, G% tratamento efetivo e medidas preventivas disponveis, 9 risco de contamina+o pequeno, <"- 4: <#el de "iosseguran5a 4 !equer procedimentos para o tra/al)o com microor(anismos 5classe de risco F6 que (eralmente causam doenas em seres )umanos ou em animais e podem representar um risco se disseminado na comunidade* mas usualmente existem medidas de tratamento e preven+o, Exi(e conten+o para impedir a transmiss+o pelo ar, <"- =: <#el de "iosseguran5a = !equer procedimentos para o tra/al)o com microor(anismos 5classe de risco A6 que causam doenas (raves ou letais para seres )umanos e animais* com f%cil transmiss+o por contato individual casual, 7+o existem medidas preventivas e de tratamento para estes a(entes,

2 $ "iosseguran5a no Trabal0o com "actrias

2 $ $ 'equisitos bFsicos de "iosseguran5a 7ara instala56o e funcionamento de um .aborat&rio de "acteriologia &m $a/oratrio de Dacteriolo(ia* de acordo com seu o/3eto de estudo* pode rece/er diariamente (rande n0mero de amostras de fluidos corporais e de fe'es que s+o potencialmente infecciosos, 9s maiores peri(os est+o relacionados com os vrus da )epatite D* GIH* /acilos da tu/erculose* salmonelas* fun(os e proto'o%rios,

9 primeiro cuidado a ser tomado no la/oratrio que tra/al)a com espcimes clnicos eIou com culturas isoladas evitar a exposi+o atravs de medidas de /iosse(urana e conseqJente infec+o, 4eve-se considerar que os riscos s+o influenciados por uma rela+o vari%vel entre o a(ente infectante 5virul2ncia* car(a infectante* ciclo e toxi(enicidade6 e o )ospedeiro 5idade* sexo* (ravide'* uso de antimicro/ianos* nvel de nutri+o* imunidade - incluindo vacina+o prvia* compostos terap2uticos especficos6 e a atividade desempen)ada 5dia(nstico* produ+o ou pesquisa6, 4eve-se sempre considerar que o risco elevado ao tra/al)ar com material clnico descon)ecido, -lm disso* deve-se ter con)ecimento das principais vias de transmiss+o para a ado+o de cuidados especiais, Existem v%rias portas de entrada de microor(anismos, Entretanto no la/oratrio* a via respiratria tem maior import8ncia dado a facilidade com que partculas pequenas s+o produ'idas por tcnicas de la/oratrio comuns* sendo a se(uir capturadas pelo trato respiratrio superior, 2 $ 2 Produ56o de aeross&is 9 uso incorreto de material de la/oratrio como pipetas* alas de inocula+o* a(ul)as* serin(as* centrfu(as e )omo(enei'adores pode produ'ir (randes quantidades de aerossis potencialmente infectantes, 4eve-se* portanto* se(uir os se(uintes critrios /%sicos: K 7+o destampar frascos com culturas que foram fec)ados com tampa de press+o> K 7+o eliminar o ar das serin(as> K Evitar que/rar frascos que conten)am cultura de microor(anismos> K 7+o e3etar lquido de pipetas so/ alta press+o 5foto(rafias de alta velocidade t2m demonstrado que o fluido* ao sair da pipeta pelo sopro* produ' um aerossol de aproximadamente :L,@@@ (otculas com :@ Mm cada uma6> K 7+o centrifu(ar tu/os ou frascos sem tampa, ?uando )ouver risco de contamina+o por aerossis* recomenda-se o empre(o de ca/ines de se(urana /iol(ica 3untamente com o uso de luvas* m%scaras e culos de prote+o, 7estas condi1es* manusear frascos e serin(as envolvendo-os com (a'e ou al(od+o em/e/idos em %lcool B@N, 2 $ 4 Pi7etagem O proi/ido a pipeta(em* com a /oca* de material clnico ou de suspens1es /acterianas, &tili'ar pipetas autom%ticas ou /ul/os de /orrac)a, 7o uso de pipetas de vidro* imprescindvel a prote+o da extremidade da pipeta com al(od+o )idrof/o, #e )ouver risco de contamina+o* tra/al)ar em ca/ines de se(urana /iol(ica, 2 $ = :lambagem de al5a bacteriol&gica - flam/a(em da ala /acteriol(ica deve ser feita atravs da c)ama do /ico de Dunsen ou do uso de incineradores /acteriol(icos, #e )ouver um excesso de material /iol(ico* recomenda-se es(otar a ala num frasco contendo %lcool a PLN e areia* flam/ando-se a ala em se(uida, !ecomenda-se o uso de alas descart%veis,

2 $ + Aescarte de resduosG amostras clnicas e material usado Qodo material contaminado* inclusive amostras clnicas e culturas* devem ser descartados em recipientes de ao inoxid%vel e autoclavados, -s a(ul)as* serin(as* l8minas de /isturi* lancetas e outros o/3etos prfuro-cortantes contaminados devem ser colocados em um recipiente r(ido* prova de va'amento e perfura+o e depois autoclavados, 2 $ * Aesinfec56o de bancadas Qodas as superfcies de /ancadas devem ser desinfetadas com )ipoclorito de sdio a @*LN ou %lcool B@N antes e aps o tra/al)o, 7o caso de contamina+o com material de cultura 5derramamento* que/ra de frascos6* usar )ipoclorito de sdio LN, 2 $ 1 Medidas a serem tomadas em caso de acidente 3 7rimeiros socorros Em caso de contamina+o das mucosas oral ou ocular com material clnico* lavar o local com %(ua em a/und8ncia e usar solu+o aquosa polividina 5=H=I LN6, =ara descontamina+o da pele nte(ra* usar =H=I :@N ou %lcool B@N, Em caso de inocula+o acidental com cortes ou queimaduras* lavar a %rea lesionada com %(ua em a/und8ncia* aplicar =H=I aquoso LN e procurar um mdico, 7o caso de in(est+o acidental* tentar re(ur(itar o material in(erido* comunicar a c)efia e procurar um mdico,

4 MBC'D?CDPBA HPTBCA DI AE .IJ 4 $ Com7onentes do microsc&7io e 7rinc7ios de funcionamento - microscopia ptica possi/ilita o aumento de ima(ens atravs da lu' que* aps incidir so/re determinada amostra* passa por um con3unto de lentes, -lm de ampliar a ima(em de um o/3eto* o microscpio serve para aumentar o poder de resolu+o do ol)o )umano, Poder de resolu56o: a capacidade de distin(uir dois pontos muito prximos um do outro, 9s microscpios pticos t2m um limite de resolu+o da ordem de @*E Rm* ou se3a* as lentes destes microscpios conse(uem mostrar distintos dois pontos separados por dist8ncias de pelo menos @*E Rm, O importante lem/rar que para o/servar ao microscpio ptico* necess%rio que o material se3a suficientemente fino para deixar que os raios luminosos o atravessem* alm de ter ndices de refra+o 5colora+o diferentes do meio que a circundam6, Im microsc&7io &7tico t7ico constitudo 7or 7artes mec8nicas e &7ticas que s6o: $ "ase: o suporte do microscpio* pea que sustenta todas as outras, 2 "ra5o: a pea que li(a a /ase at a parte superior do microscpio, 4 Mesa ou 7latina: uma placa de metal com um orifcio no centro* por onde passam os raios luminosos* se(ura o o/3eto que vai ser o/servado numa l8mina de vidro,

= C0arriot: formado por uma presil)a e dois /ot1es (iratrios que t2m a fun+o de movimentar a l8mina no plano )ori'ontal permitindo a o/serva+o de toda a sua %rea, + Can06o: parte mais superior do microscpio* contm um con3unto de espel)os que pro3etam a ima(em em dire+o s oculares nele encaixadas, * 'e#&l#er: pea encontrada a/aixo do can)+o na qual inserem-se v%rias lentes o/3etivas, O dotado de um movimento de rota+o que permite posicionar a o/3etiva dese3ada para a o/serva+o do material a ser analisado, 1 :onte de lu>: l8mpada na /ase do microscpio* com interruptor e o re(ulador da intensidade luminosa, ; Condensador: de forma circular e situado entre a platina e a /ase* o condensador conver(e os raios luminosos vindos da l8mpada e pro3eta-os como um cone de lu' so/re o material que est% sendo examinado, K :iltro: de forma circular* colorida 5a'ul* verde* etc,6 presa ao condensador* tornando a lu' adequada ao uso, $@ Aiafragma ou ris: fica acima do filtro* se li(a a uma alavanca que permite sua a/ertura ou fec)amento* levando ao controle da passa(em total ou parcial da lu', $$ DbLeti#as: s+o lentes que pro3etam uma ima(em aumentada e invertida do o/3eto nas oculares e inserem-se ao revlver* atravs de rosca, Qoda o/3etiva tra' (ravado o n0mero do aumento que proporciona, - o/3etiva de :@@x tam/m c)amada o/3etiva de imers+o e ser% somente utili'ada com leo especial* o qual permite maior refra+o da lu' para dentro da o/3etiva* corri(indo a pouca luminosidade nas o/serva1es feitas em (randes aumentos, $2 Dcular: aumenta a ima(em do o/3eto aps o aumento 3% proporcionado pela o/3etiva, O atravs desta lente que o o/servador v2 a ima(em do o/3eto como se ela estivesse situada a EL cm da ocular, Qoda ocular tra' (ravado o n0mero de aumentos que proporciona, .imite de resolu56o: do ol)o )umano $! S @*: a @*E mm> do M,9, : @*ERm micrTmetro 5Rm6 :@ -F mm> 5@*@@: mm6 nanTmetro 5nm6 :@-< mm 5@*@@@@@: mm6 an(strUm 5V6 :@ -B mm 5@*@@@@@@: mm6 Aumento do Microsc&7io: aumento dado pela o/3etiva pelo aumento da ocular, $4 Parafusos macromtrico e micromtrico: na parte lateral do /rao existem E parafusos encaixados um no outro, 9 maior o macromtrico* que permite (randes avanos ou recuos da platina em dire+o o/3etiva* enquanto o micromtrico permite pequenos avanos ou recuos, Esse movimento da platina leva focali'a+o do material o/servado em diferentes aumentos, 4 2 <ormas corretas de manuseio e focali>a56o de imagens ao microsc&7io &7tico: :, 4escu/ra o microscpio* E, Wire o revlver* encaixando a o/3etiva de menor aumento 5Ax6, F, Xoloque a l8mina so/re a platina* se(urando-a com uma das m+os e a/rindo a presil)a com a outra, A, -cenda a lu' do microscpio e centrali'e o material no orifcio da platina utili'ando os parafusos do X)arriot, Yaa isso ol)ando lateralmente* o que facilita a opera+o,

L, $evante a platina* movimentando o parafuso macromtrico* at que a dist8ncia entre a l8mina e a o/3etiva se3a de aproximadamente :cm, <, 9l)ando atravs das oculares* e utili'ando o parafuso micromtrico* a3uste o foco at que o material a ser o/servado se3a visto com clare'a, B, Xorri3a a intensidade de lu' e a/ertura do diafra(ma para evitar ofuscamento e o/ter o contraste dese3ados, -ten+o: o condensador deve ser mantido na sua posi+o mais alta, ;, 9/serve o material atentamente tra/al)ando o foco fino com o parafuso micromtrico, =ara percorrer outro campo da l8mina* utili'e o X)arriot, P, Wire o revlver para passar para a prxima o/3etiva de maior aumento* lem/rando sempre de re(ular a intensidade de lu' e a a/ertura do diafra(ma e corri(ir a focali'a+o com o parafuso micromtrico, :@, =ara utili'ar a o/3etiva de :@@. imprescindvel o empre(o do leo de imers+o so/re a l8mina* o qual dever% ser% removido da o/3etiva com os devidos cuidados lo(o aps o uso, ::, Qerminada a o/serva+o* encaixe a o/3etiva de menor aumento* a/aixe um pouco a platina* deixe a intensidade de lu' no mnimo e desli(ue-a* retire a l8mina* limpe o microscpio* cu/ra-o com a capa,

Ati#idade da aula: :6 Xomo fica a ima(em de um material ao microscpio quando comparada com a disposi+o do mesmo na l8minaZ E6 9 que acontece com o taman)o do campo de vis+o quando se passa de uma o/3etiva para outra de maior aumentoZ F6 9 que a manipula+o do parafuso micromtrico* auxiliada pelo fec)amento propcio do diafra(ma* so/retudo em (randes aumentos* nos permite o/servarZ Explique,

4 4 B<T'DAIMND AD? P'DCA'BDTD? Em procariotos* o termo crescimento indica aumento do n0mero de clulas ou aumento da massa de uma popula+o* ou se3a* crescimento populacional, &ma popula+o /acteriana um con3unto de indivduos da mesma espcie que se ori(inaram da divis+o de clulas individuais, &ma popula+o /acteriana pode existir na forma de clulas esparsas* em colTnias ou formando /iofilmes, =opula1es /acterianas constitudas de clulas livres* ou de or(anismos multicelulares* ocorrem na nature'a em am/ientes de %(ua doce ou sal(ada em amplos espectros de temperatura e press+o )idrost%tica,

XolTnias s+o a(re(ados de centenas a mil)ares de clulas /acterianas* da mesma espcie* e que podem se ori(inar a partir um 0nico indivduo, &ma colTnia formada por uma ou mais camadas de clulas aderidas entre si* sendo que a primeira camada de clulas se encontra aderida a uma superfcie slida ou pastosa, 9s indivduos de uma colTnia exi/em intera1es celulares si(nificativas e coopera+o* mas tam/m al(um (rau de competi+o, #o/ condi1es timas de crescimento* ou se3a* condi1es fsicas* qumicas e nutricionais adequadamente /alanceadas* muitas espcies /acterianas apresentam um tempo de (era+o mdio de E@ minutos* ou se3a* a cada E@ minutos uma nova (era+o de indivduos produ'ida, 7este caso* em uma cultura real* cada clula da popula+o se divide em al(um momento dentro do tempo de (era+o de E@ minutos* ou se3a* :IE@ das clulas da popula+o se divide a cada minuto, Isto reflete uma situa+o natural denominada crescimento n+o-sincrTnico, Xonsiderando-se uma popula+o /acteriana composta por mil)ares de indivduos em crescimento ativo por fiss+o /in%ria* pode-se presumir que a cada tempo de (era+o a popula+o do/ra de taman)o, Isto decorre do modo de reprodu+o por fiss+o /in%ria no qual a divis+o de uma 0nica clula resulta em duas novas clulas, Estas dividir-se-+o produ'indo quatro novas clulas* as quais* dividindo-se* produ'ir+o oito novas clulas e assim por diante, Este tipo de crescimento denominado crescimento exponencial ou lo(artmico* no qual o n0mero de indivduos do/ra a cada (era+o,

4 = :atores que afetam o crescimento bacteriano

H%rios fatores podem afetar o crescimento de uma popula+o /acteriana* incluindo o tipo de am/iente* n0mero de indivduos na popula+o* intera1es din8micas com outras popula1es /acterianas* presena de outros micror(anismos predadores* fatores qumicos e fsicos tais como disponi/ilidade de nutrientes essenciais* temperatura* pG* osmolaridade* press+o )idrost%tica* concentra+o de oxi(2nio* lu'* radia+o ioni'ante ou ultravioleta* presena de meta/litos txicos resultantes do meta/olismo das clulas da popula+o em crescimento ou presena de a(entes antimicro/ianos tais como /acteriocinas e anti/iticos, 4 = $ Po7ula56o 9 taman)o da popula+o afeta o n0mero de novas clulas que ser+o formadas, #e a popula+o aumenta* a taxa de crescimento tam/m aumenta* resultando em crescimento exponencial* desde que )a3a disponi/ilidade de nutrientes e espao, 4 = 2 <utrientes 9 crescimento /acteriano exi(e a disponi/ilidade de nutrientes essenciais* tais como fontes de car/ono* nitro(2nio* fsforo* enxofre* ferro e outros minerais com os quais as /actrias podem sinteti'ar precursores de macromolculas or(8nicas e vitaminas* ou quando incapa'es da sntese de um precursor essencial este deve estar presente no meio de crescimento, -s /actrias s+o (randemente diversificadas em rela+o aos seus requerimentos nutricionais* sendo que* para praticamente qualquer su/st8ncia )% um micror(anismo capa' de meta/oli'%-la como nutriente, disponi/ilidade de nutrientes diminui medida que a popula+o aumenta de taman)o> enquanto )ouver um mnimo de nutrientes a popula+o continuar% a crescer,

4 = 4 Tem7eratura - temperatura pode ter efeitos positivos ou ne(ativos so/re o crescimento de uma popula+o /acteriana, [ medida que a temperatura se aproxima de um valor timo* a taxa de crescimento aumenta rapidamente porque a cintica de rea+o das en'imas das clulas da popula+o aumenta de modo diretamente proporcional> as rea1es qumicas tendem a ocorrer mais rapidamente com aumento da taxa de divis1es celulares, Xontudo* )% um limite alm do qual al(umas macromolculas termos-sensveis tais como protenas* %cidos nuclicos ou lipdios ser+o desnaturadas* perdendo sua funcionalidade, G%* tam/m* uma temperatura mnima para o crescimento* a/aixo da qual a por+o lipdica da mem/rana plasm%tica n+o apresenta fluide' suficiente para funcionar apropriadamente, =or temperatura tima de crescimento entende-se aquela em que as clulas dividem-se mais rapidamente* ou se3a* apresentam um tempo de (era+o mais curto, -s temperaturas mnima e m%xima de crescimento s+o a menor e a maior temperatura que permitem a divis+o celular nas /actrias, YreqJentemente* a temperatura tima para o crescimento est% mais prxima da m%xima do que da mnima, -s diferentes espcies /acterianas diferem no espectro de temperatura na qual podem crescer, ?uanto temperatura de crescimento* as /actrias foram a(rupadas em quatro cate(orias: mesfilas* psicrfilas o/ri(atrias* psicrfilas facultativas e termfilas

4 = 4 $ "actrias mes&filas Dactrias mesfilas apresentam crescimento timo em temperaturas variando entre EL\X e A@\X* ou se3a* a faixa de temperatura mais comum na superfcie da Qerra e nos or(anismos animais, - maioria dos pat(enos )umanos apresenta crescimento timo em temperaturas prximas de FB]X, Dactrias termod0ricas* tais como Bacillus cereus* Clostridium botulinum e Listeria monocytogenes* (eralmente vivem como mesfilas* mas podem suportar temperaturas elevadas por curtos perodos de tempo, #e o processo de aquecimento de alimentos envasados em recipientes met%licos ou de vidro for inadequado* tais /actrias podem so/reviver e deteriorar o produto* representando uma sria ameaa se(urana dos alimentos,

4 = 4 2 "actrias 7sicr&filas obrigat&rias Dactrias psicrfilas o/ri(atrias requerem /aixas temperaturas para seu crescimento> o crescimento timo se d% a/aixo de :L\X, -l(umas espcies marin)as toleram temperaturas ne(ativas uma ve' que a %(ua do mar permanece lquida em temperaturas a/aixo de @]X, Qais or(anismos morrem quando expostos temperatura am/iente, #ua adapta+o a /aixas temperaturas devido ao alto conte0do de %cidos (raxos insaturados em suas mem/ranas, Estas molculas permanecem fluidas em temperaturas nas quais mem/ranas contendo %cidos (raxos saturados n+o s+o funcionais, - /actria Bacillus globisporus n+o cresce em temperaturas acima de E@]X,

4 = 4 4 "actrias 7sicr&filas facultati#as Dactrias psicrfilas facultativas ou psicrotrficas apresentam crescimento timo em temperaturas a/aixo de E@\X* mas podem crescer* em/ora mais lentamente* em temperaturas de refri(erador e t2m alta pro/a/ilidade de contaminar e estra(ar produtos resfriados tais como alimentos 5por exemplo* Bacillus cereus6 e san(ue, 4 = 4 = "actrias term&filas Dactrias termfilas s+o aquelas cu3as taxas de crescimento timo est+o entre L@\X e <@\X> s+o encontradas em pil)as de adu/o or(8nico, -l(umas espcies toleram temperaturas de at ::@ ]X em fontes termais, -s en'imas dos or(anismos termfilos apresentam propriedades de termo-esta/ilidade que l)es permitem atin(ir um pico de atividade entre <@\X e ;@\X, 4entro dessa cate(oria encontram-se os or(anismos termfilos o/ri(atrios que s crescem em temperaturas acima de FB]X e os termfilos facultativos que podem crescer em temperaturas a/aixo de FB] X, - /actria Dacillus stearot)ermop)illus cresce otimamente entre <L e BL]X* mas pode apresentar um pequeno crescimento e deteriorar alimentos em temperaturas em torno de F@]X, 9s esporos dessa /actria s+o utili'ados para controlar o funcionamento de autoclaves em la/oratrios de micro/iolo(ia, 4entre os termfilos o/ri(atrios encontram-se as /actrias )ipertermfilas que apresentam crescimento timo em temperaturas em torno e acima dos ;L]X, G% apenas tr2s (2neros de /actrias )ipertermfilas: -quifex* Q)ermocrinis e Q)ermoto(a, - /actria Q)ermoto(a maritima )a/ita solos oce8nicos aquecidos a ;L\X por atividade vulc8nica, 7+o se con)ecem micror(anismos eucariticos termfilos ou )ipertermfilos, -s en'imas dos or(anismos )ipertermfilos - en'imas )ipertermoflicas - apresentam propriedades de estrutura e fun+o excepcionais de alta termo-esta/ilidade e atividade tima em temperaturas acima de B@\X, -l(umas dessas en'imas s+o ativas em temperaturas que atin(em ::L\X, Qanto en'imas termoflicas quanto )ipertermoflicas n+o funcionam adequadamente so/ temperaturas a/aixo de A@\X, 7en)uma espcie /acteriana pode tolerar a faixa inteira de temperatura em qualquer uma dessas cate(orias e muitas espcies toleram faixas de temperatura que se so/rep1em entre uma cate(oria e outra, 7en)um psicrfilo so/revive no corpo )umano, 4o ponto de vista pr%tico* altas e /aixas temperaturas s+o utili'adas para evitar o crescimento de micror(anismos, - refri(era+o de alimentos a A]X impede o sua deteriora+o por or(anismos psicrfilos e pela maioria da /actrias, Mas* em casos de arma'enamento por lon(os perodos de tempo* e se o material suportar con(elamento* a temperatura ideal F@]X ne(ativos, -ltas temperaturas s+o utili'adas para esterili'a+o de materiais* como aqueles utili'ados em la/oratrios e na pr%tica mdica,

4 = = 7% - maioria das espcies /acterianas pode crescer em meios cu3o pG este3a entre L e P* faixa na qual encontra-se a maior parte dos am/ientes naturais, - maioria das /actrias n+o crescem em valores de pG com uma unidade acima ou a/aixo do seu pG timo, ?uanto toler8ncia ao pG* as /actrias podem ser classificadas em tr2s cate(orias: neutrfilas* acidfilas e alcalinfilas,

4 = = $ "actrias neutr&filas Dactrias neutrfilas crescem em faixas de pG entre L*A a ;*L, - maioria das /actrias apresenta um crescimento timo em am/ientes cu3o pG se aproxima da neutralidade, - maioria das /actrias pato(2nicas est% includa nessa cate(oria, 4 = = 2 "actrias acid&filas Dactrias acidfilas crescem em faixas de pG extremamente /aixos* entre @*: e L*A* como a /actria Helicobacter pylori que pode coloni'ar a parede estomacal, -l(umas /actrias que redu'em enxofre a %cido sulf0rico podem (erar e tolerar condi1es em torno de pG :, 4 = = 4 "actrias alcalin&filas Dactrias alcalinfilas crescem em faixas de pG entre ;*L e ::*L, - /actria Vibrio cholerae apresenta um crescimento timo em pG P, - /actria oportunista Alcaligenes faecalis pode criar e tolerar condi1es alcalinas com pG P ou maior, 7en)uma espcie /acteriana pode tolerar a faixa inteira de pG em qualquer uma dessas cate(orias e muitas espcies toleram faixas de valores de pG que se so/rep1em entre uma cate(oria e outra, 4 = + DOig9nio - capacidade de crescer na presena ou aus2ncia de oxi(2nio divide as /actrias em cinco (rupos: aer/icas estritas* microaerfilas* anaer/icas facultativas* anaer/icas aerotolerantes* anaer/icas estritas, 4 = + $ "actrias aer&bias estritas Dactrias aer/ias estritas crescem apenas onde )% disponi/ilidade de oxi(2nio* como por exemplo* as /actrias do (2nero Pseudomonas, 4 = + 2 "actrias microaer&filas Dactrias microaerfilas requerem uma quantidade redu'ida de oxi(2nio> altas concentra1es de oxi(2nio l)es s+o txicas, -s /actrias microaerfilas so/revivem em am/ientes com alta concentra+o de dixido de car/ono e /aixas concentra1es de oxi(2nio* como por exemplo* as /actrias do (2nero Campylobacter, 4 = + 4 "actrias anaer&bias facultati#as Dactrias anaer/ias facultativas utili'am oxi(2nio em seu meta/olismo ener(tico* mas tam/m podem crescer na aus2ncia de oxi(2nio, -s /actrias Escherichia coli e espcies de Staphylococcus s+o encontradas no trato intestinal e urin%rio onde )% pouca disponi/ilidade de oxi(2nio, Qodas as /actrias pertencentes famlia Enterobacteriaceae s+o anaer/ias facultativas,

4 = + = "actrias anaer&bias aerotolerantes Dactrias anaer/ias aerotolerantes suportam a presena de oxi(2nio* sem utili'%-lo em seu meta/olismo, =or exemplo* a /actria Lactobacillus acidophillus,

4 = + + "actrias anaer&bias estritas Dactrias anaer/ias estritas n+o crescem na presena de oxi(2nio que l)es txico, - maioria das espcies anaer/icas estritas encontrada no solo ou em microam/ientes em or(anismos animais que ten)am se tornado anaer/icos* como ferimentos profundos ou a 3un+o das (en(ivas com os dentes, #+o exemplos de or(anismos anaer/icos estritos as /actrias do solo Clostridium tetani 5causadora do ttano6* Clostridium botulinum 5causadora do /otulismo6 e as /actrias associadas com doenas periodontais* como Porphiromonas gengivallis e Prevotella intermedia, - (rande maioria das /actrias associadas aos intestinos de animais s+o anaer/icas estritas, 7a presena de oxi(2nio* o radical superxido 59E-6 e perxido de )idro(2nio 5GE9E6 s+o formados como su/produtos das atividades das en'imas oxidativas que participam da sntese de -Q=, 7as /actrias aer/icas estritas e na maioria das anaer/icas facultativas* o radical superxido convertido em oxi(2nio molecular 59 E6 e em perxido de )idro(2nio 5GE9E6 pela en'ima superxido dismutase, 9 perxido de )idro(2nio convertido em oxi(2nio molecular e %(ua pela en'ima catalase 5al(umas espcies de /actrias anaer/ias facultativas e de aerotolerantes n+o possuem a catalase6, -s /actrias anaer/icas estritas n+o sinteti'am nem a catalase nem a superxido dismutase e s+o mortas pelos efeitos txicos do superxido e do perxido de )idro(2nio, =ara o crescimento de /actrias anaer/ias estritas em la/oratrio s+o requeridos procedimentos especiais de cultivo* tais como a exclus+o total do oxi(2nio do meio e do am/iente de crescimento atravs do uso de a(entes redutores que rea3am com o oxi(2nio (asoso,

4 = * Imidade Qodas as clulas meta/olicamente ativas requerem a presena de %(ua, &ma ve' que os micror(anismos est+o expostos diretamente ao am/iente* a maioria das clulas ve(etativas das /actrias so/revive apenas al(umas )oras sem umidade, 7a aus2ncia de umidade apenas endsporos /acterianos podem so/reviver, 4 = * $ Press6o 0idrostFtica =ress+o )idrost%tica a press+o exercida pela %(ua parada so/re os corpos nela mer(ul)ados, - press+o )idrost%tica diretamente proporcional profundidade, press+o do/ra a cada aumento de de' metros na profundidade, Em um la(o* a L@ metros de profundidade a press+o )idrost%tica equivalente a FE atmosferas, -l(umas espcies de /actrias* denominadas /arfilas suportam altas press1es em am/ientes aqu%ticos, #up1e-se que altas press1es se3am requeridas para manter a conforma+o espacial de suas mem/ranas e en'imas,

4 = * 2 Dsmolaridade - presena de solutos na %(ua sais ou a0cares que provocam a difus+o de %(ua para dentro ou fora da clula importante para a so/reviv2ncia de uma /actria, -s /actrias adaptadas aos am/ientes dos intestinos dos animais* por exemplo* apresentam crescimento timo em @*:L M de cloreto de sdio 5concentra+o fisiol(ica de sdio6, ^% as /actrias marin)as est+o adaptadas concentra+o salina da %(ua do mar e seu crescimento ini/ido em concentra1es maiores ou menores de sais, -penas um (rupo de procariotos* os arqueas )aloflicos extremos 5por exemplo* Halobacterium sp6 )a/itam am/ientes )iper-salinos e n+o crescem em concentra1es de cloreto de sdio inferiores a :*L M, Qodos os )iper-)aloflicos crescem em concentra1es de sal prximas do ponto de satura+o, Xertas espcies de )alo/actrias sinteti'am -Q= usando ener(ia luminosa, Este processo n+o envolve clorofila* mas uma protena li(ada mem/rana plasm%tica denominada de /acteriorodopsina, 4 = 1 Metabolismo e toOicidade [ medida que a popula+o aumenta de taman)o aumenta o consumo de nutrientes com conseqJente aumento da produ+o de produtos secund%rios do meta/olismo, Esses meta/litos* quando em /aixos nveis t2m pouco efeito nas taxas de divis1es celulares* mas em altas concentra1es podem ini/ir a divis+o celular ou mesmo matar as clulas* conseqJentemente* diminuindo a taxa de crescimento da popula+o, Meta/litos txicos se acumulam rapidamente em (randes popula1es /acterianas, 9 meta/olismo de todos os or(anismos (era produtos secund%rios txicos a partir do oxi(2nio, Qais meta/litos s+o altamente reativos podendo destruir componentes celulares essenciais tais como protenas* %cidos nuclicos e lipdios, Xom exce+o das /actrias anaer/ias estritas* todos os or(anismos sinteti'am en'imas que detoxicam esses compostos* como por exemplo* as en'imas superxido dismutase* catalase e peroxidase, 4 = 1 $ Presen5a de agentes antimicrobianos =opula1es /acterianas t2m suas taxas de crescimento afetadas quando )ouver a presena de a(entes antimicro/ianos produ'idos por outras popula1es de micror(anismos em am/ientes naturais* tais como as /acteriocinas e anti/iticos ou por antimicro/ianos utili'ados na anti/ioticoterapia para o tratamento de infec1es /acterianas,

4 + P!A' <IT'BE<TE )mtodo de montagem, Princ7io 9 7utriente _(ar um meio relativamente simples* de f%cil prepara+o e /arato* muito usado nos procedimentos do la/oratrio de Micro/iolo(ia, Itilidade 9 nutriente %(ar tem v%rias aplica1es no la/oratrio de Micro/iolo(ia* e pode ser utili'ado para

an%lise de %(ua* alimentos e leite como meio para cultivo preliminar das amostras su/metidas exames /acteriol(icos e isolamento de or(anismos para culturas puras, uso mais freqJente para a conserva+o e manuten+o de culturas em temperatura am/iente neste %(ar* como mtodo opcional para os la/oratrios que n+o disp1em do mtodo da crioconserva+o 5con(elamento das cepas em free'er - B@\X6, &sado para o/servar esporula+o de espcies de /acilos Wram positivos, :&rmulaQProduto =roduto: 7utriente _(ar Yrmula: Extrato de carne F ( =eptona L ( _(ar %(ar :L ( _(ua destilada :@@@ ml pG: <*; `I- @*E Procedimentos =esar e )idratar os componentes> Yundir> 4istri/uir F ml por tu/o> Esterili'ar em autoclave> -ps retirar da autoclave* inclinar os tu/os ainda quentes para que solidifiquem com a superfcie em forma de a/ico de flautaa 58n(ulo de AL\6, Controle de qualidade Xrescimento /om a excelente Escherichia coli -QXX ELPEE Streptococcus pneumoniae -QXX <F@L Conser#a56o e #alidade Xonservar em/alado de A a ;]X por at F meses, Bnocula56o Estriar a superfcie inclinada do meio> Incu/ar, Bnter7reta56o Xor ori(inal do meio: /ranco opalescente =ositivo: Xrescimento na superfcie do %(ar> 7e(ativo: -us2ncia de crescimento, 'ecomenda5Res &sar tu/os com tampa de rosca para evitar ressecamento do %(ar, !epicar as cepas conservadas a cada F meses, Xonservar as cepas aps o crescimento no meio em temperatura am/iente, =or ser um meio nutritivo* a aus2ncia de crescimento n+o dever% ocorrer

4 * E?TIAD? AD C'E?CBME<TD "ACTE'BA<D =ara se estudar o crescimento de uma /actria preciso cultiv%-la* como cultura pura* em meios de cultura e condi1es am/ientais que variam em condi1es qumicas e fsicas* tais como fontes de nutrientes* osmolaridade* pG* presena ou aus2ncia de oxi(2nio e temperatura de incu/a+o, =or exemplo* a /actria E! coli crescendo em um meio de cultura rico e so/ condi1es aer/icas* atin(e uma concentra+o final de E a L . :@P clulas por ml em cerca de :E a :; )oras, &ma das a/orda(ens mais comuns no estudo do crescimento /acteriano a o/ten+o de curvas de crescimento, Estas s+o representa1es (r%ficas do aumento do n0mero de indivduos em um determinado perodo de tempo 5Yi(ura :6, &ma lin)a de tend2ncia passando pelos pontos do (r%fico uma curva exponencial e cada ponto por onde a curva passa indica o n0mero terico de clulas* em um dado tempo,

- tend2ncia de crescimento representada na Yi(ura : s pode ser mantida indefinidamente se )ouver um suprimento ilimitado de nutrientes* am/iente inalter%vel e espao ilimitado, Em am/ientes naturais e em condi1es experimentais nas quais as disponi/ilidades de nutrientes e de espao se3am limitadas* em um dado momento al(um fator se torna desfavor%vel: um nutriente essencial torna-se escasso 5fontes de ener(ia* elementos-trao6* produtos txicos do meta/olismo acumulam-se em concentra1es que ini/em a divis+o celular* o espao torna-se limitado* etc, ?uaisquer uma dessas situa1es* isoladamente ou em con3unto* ini/em o crescimento* provocando um declnio do n0mero de clulas vi%veis na popula+o at o ponto em que esta se extin(a completamente 5Yi(ura E6,

Em condi1es experimentais* quando se inocula uma popula+o /acteriana em um frasco contendo uma quantidade inalter%vel de meio de cultura 5sistema fec)ado6* o crescimento dessa popula+o passa por quatro fases caractersticas* dependendo do ponto no qual o processo do crescimento se3a interrompido pelo experimentador, Essas quatro fases est+o representadas na Yi(ura F,

:ases do crescimento bacteriano - curva de crescimento da Yi(ura F representa as quatro fases do crescimento populacional /acteriano em uma situa+o prxima da real quando uma popula+o de /actrias cresce em um am/iente fec)ado 5modelo /aseado no cultivo da /actria E! coli em um meio de cultura rico e so/ condi1es aer/icas6,

$ - :ase lag Yase de adapta+o meta/lica ao novo am/iente> o meta/olismo celular est% direcionado para sinteti'ar as en'imas requeridas para o crescimento nas novas condi1es am/ientais encontradas pelas clulas, 9 n0mero de indivduos n+o aumenta nesta fase* podendo at mesmo decrescer, - dura+o dessa fase depende das condi1es am/ientais nas quais as clulas se encontravam anteriormente, - fase la( ser% t+o mais lon(a quanto maiores as diferenas de composi+o do am/iente anterior ou se a popula+o for constitudo de /actrias esporuladas, 2 - :ase eO7onencial Yase na qual o n0mero de clulas da popula+o do/ra a cada (era+o, Esta taxa de crescimento n+o pode ser mantida indefinidamente em um sistema fec)ado, -ps um determinado perodo de crescimento exponencial* as condi1es am/ientais tornam-se

desfavor%veis pela escasse' de nutrientes essenciais* ac0mulo de meta/litos txicos e limita+o de espao, [ medida que a disponi/ilidade de nutrientes diminui as clulas se tornam menos capa'es de (erar -Q= e a taxa de crescimento se redu', - dura+o da fase exponencial altamente vari%vel dependendo tanto das caractersticas (enticas da /actria quanto das condi1es am/ientais, 4 - :ase estacionFria Yase em que a taxa de crescimento diminui si(nificativamente devido s condi1es limitantes do meio, -s clulas continuam meta/oli'ando e se dividindo* mas parte das clulas torna-se invi%vel e a taxa de divis+o celular muito prxima da taxa de morte celular* o que mantm constante o n0mero de clulas vi%veis na popula+o, - curva de crescimento atin(e um platT, - dura+o da fase estacion%ria depende do /alano entre a taxa de divis+o celular e o n0mero de clulas que v+o se tornando invi%veis 5morte celular ou incapacidade de se dividir6 devido s condi1es am/ientais tornarem-se pro(ressivamente desfavor%veis, = - :ase de declnio Yase em as clulas perdem a capacidade de se dividir* a taxa de morte celular torna-se maior que a taxa de divis+o e o n0mero de clulas vi%veis decresce exponencialmente at a completa extin+o da popula+o, 7esta fase muitas clulas assumem formas incomuns, Em /actrias formadoras de esporos so/revivem mais esporos que clulas ve(etativas, - dura+o desta fase vari%vel dependendo tanto das caractersticas (enticas da /actria quanto das condi1es am/ientais,

= AP.BCAMND AE MSTDAD? :T?BCD? <D CD<T'D.E AE MBC'D'!A<B?MD? -o selecionar mtodos de controle micro/iano* deve-se considerar os efeitos so/re outras coisas alm dos micror(anismos* pois* certas vitaminas ou anti/iticos em uma solu+o podem ser inativados pelo calor e tam/m muitos materiais )ospitalares ou de la/oratrio podem ser danificados pelo aquecimento repetitivo, 7a idade da =edra prov%vel que o )omem 3% se utili'asse de mtodos fsicos para preservar alimentos como a seca(em ao sol e uso de sal sendo estas tcnicas iniciais, = $ Calor 9 calor mata os micror(anismos desnaturando suas protenas* al(uns deles como 3% vimos anteriormente podem ser mais resistentes e por isso classificados de diferentes formas* a resist2ncia ao calor pode ser qualificada como 7onto de morte trmica )PMT, que a menor temperatura em que todos os micror(anismos em uma suspens+o lquida ser+o mortos em :@ minutos, 9utro ndice a ser considerado o tem7o de morte trmico )TMT,* perodo mnimo de tempo em que todas as /actrias em uma cultura lquida ser+o mortas em uma dada temperatura, -m/os o =MQ e o QMQ s+o orienta1es 0teis* que indicam a severidade necess%ria para eliminar determinada popula+o /acteriana, 9 tem7o de redu56o decimal )T'AG ou #alor A, o tempo em

minutos* em que P@N de uma popula+o /acteriana em determinada temperatura ser+o mortas* o Q!4 especialmente 0til na ind0stria de enlatados, = $ $ Calor Umido - presena de %(ua acelera a ruptura das pontes de )idro(2nio 5que mant2m o formato das protenas6* um tipo de esterili'a+o por calor 0mido a fervura que mata as formas ve(etativas dos pat(enos /acterianos* quase todos os vrus* e os fun(os e seus esporos dentro de :@ minutos aproximadamente, -l(uns endsporos e vrus n+o s+o destrudos t+o rapidamente* um tipo de vrus da )epatite pode so/reviver at F@ minutos de fervura* e al(uns endosporos /acterianos resistem a fervura por mais de E@ )oras* assim* a fervura nem sempre pode ser aplicada como mtodo efica' de esterili'a+o, esterili'a+o confi%vel com calor 0mido requer temperaturas acima da %(ua fervente* estas temperaturas s+o o/tidas por vapor so/ press+o em uma autoclave* que sempre recomendada quando n+o se danifica o material pelo calor, - esterili'a+o em autoclave mais efetiva quando os or(anismos entram em contato direto com o vapor ou est+o contidos em pequenos volumes de solu+o aquosa, - autoclave recomendada para esterili'a+o de meios de cultura* aplicadores* instrumentos* equipamentos intravenosos* /anda(ens e outros que suportarem a alta temperatura,

= $ $ $ Pasteuri>a56o 7o tratamento cl%ssico de pasteuri'a+o do leite* este era exposto a uma temperatura de cerca de <F@X por F@ minutos* a maioria dos mtodos atuais de pasteuri'a+o do leite utili'am temperaturas maiores* no mnimo BE@X* mas por apenas :L se(undos, Este tratamento con)ecido como 7asteuri>a56o de alta tem7eratura e curto tem7o 5)i(t)-temperature* s)ort-time %T?T6* aplicado enquanto o leite flui por uma serpentina* alm de matar os pat(enos diminui a conta(em /acteriana total* o que possi/ilita a /oa conserva+o em refri(era+o, 9utro mtodo /em diferente da pasteuri'a+o o tratamentos de tem7eratura ultra-ele#ada 5ultra-)i()t temperature I%T6* para possi/ilitar a arma'ena(em sem refri(era+o* este mtodo evita dar ao leite um sa/or de co'ido, 9 leite cai em um filme del(ado atravs de uma c8mara de vapor superaquecido e atin(e :A@@X em menos de um se(undo* depois mantido por F se(undos em um tu/o de arma'enamento e ent+o resfriado em uma c8mara de v%cuo* com este processo em menos de L se(undos a temperatura do leite so/e de BA@X para :A@@X e retorna para BA@X,

= $ 2 Calor ?eco

9 calor seco mata por efeito de oxida+o* o mtodo mais simples de esterili'a+o por calor seco a c)ama direta* muito utili'ado em la/oratrios de micro/iolo(ia para esterili'ar alas de inocula+o, &m princpio semel)ante usado na incinera+o* um modo efetivo de eliminar micror(anismos em /anda(ens* papel e sacos contaminados,

= $ 2 $ :iltragem Yiltra+o a passa(em de um lquido ou (%s atravs de um material semel)ante a uma tela* com poros pequenos o suficiente para reter os micror(anismos* um v%cuo que criado no frasco de recep+o auxilia a (ravidade a puxar o lquido atravs do filtro* a filtra+o usada para esterili'ar materiais sensveis ao calor* como al(uns meios de cultura* en'imas e solu1es anti/iticas, 9s filtros de 7artculas de ar de alta efici9ncia 5)i(t efficienc" particulate air* %EPA6 remove quase todos os micror(anismos maiores que cerca de @*F micrTmetros de di8metro, -tualmente os filtros de membrana compostos de su/st8ncias como steres de celulose ou polmeros pl%sticos* tornaram-se populares para uso industrial e la/oratorial,

= $ 2 2 Press6o Dsm&tica 9 uso de altas concentra1es de sais e aucares para conservar o alimento se /aseia nos efeitos da press+o osmtica* criam um am/iente )ipertTnico que ocasiona a sada da %(ua da clula micro/iana,

a, D que a forma #egetati#a de uma bactriaV

b, Pesquisar o mtodo de funcionamento de uma autocla#e

c, Pesquisar radia56o ioni>ante e n6o-ioni>ante

+ AP.BCAMND AE MBC'D'!A<B?MD?

MSTDAD?

QITMBCD?

<D

CD<T'D.E

AE

-(entes qumicos s+o muito utili'ados no controle de micror(anismos em tecidos vivos e o/3etos inanimados* nem todos os a(entes qumicos levam a esterili'a+o* a maioria apenas redu' as popula1es micro/ianas sendo assim* o uso indiscriminado pode levar a sele+o de or(anismos resistentes 5novas cepas6,

+ $ Mtodo do Pa7el :iltro O usado em la/oratrios de ensino para avaliar a efic%cia de um a(ente qumico* um disco de papel filtro em/e/ido com um produto qumico e colocado em uma placa de _(ar que foi previamente inoculada e incu/ada com o or(anismo teste, -ps a incu/a+o* se o produto qumico for efetivo formar% uma 'ona clara 5)alo6 representando a ini/i+o do crescimento /acteriano,

+ 2 Ti7os de Aesinfetantes + 2 $ :enol e Com7ostos :en&licos 9 fenol 5%cido car/lico6* foi primeiramente utili'ada por $ister em salas de cirur(ias* )o3e raramente utili'ado como anti-sptico ou desinfetante* pois irrita a pele e tem um odor desa(rad%vel muito utili'ado em pastil)as para a (ar(anta devido o seu efeito anestsico local, 9s compostos fenlicos exercem atividade antimicro/iana lesando as mem/ranas plasm%ticas* inativando as en'imas e desnaturando as protenas* s+o usados como desinfetantes* pois permanecem ativos em presena de compostos or(8nicos e s+o est%veis e persistem por lon(os perodos aps aplica+o,

+ 2 2 %alog9nios 9s )alo(2nios* particularmente o iodo e o cloroG s+o a(entes antimicro/ianos efetivos* tanto isoladamente quanto como constituintes de compostos or(8nicos ou inor(8nicos* o iodo 5IE6 um anti-sptico dos mais anti(os e mais efetivos* efica' contra todos os tipos /acterianos* muitos endsporos* v%rios fun(os e al(uns vrus, &m

mecanismo proposto para a+o do iodo que ele se com/ina ao amino%cido tirosina* um componente comum de muitas en'imas e outras protenas celulares* assim a fun+o protica ini/ida, 9 iodo est% disponvel como tintura isto * em solu+o em %lcool aquoso e como iodforo, &m iod&foro uma com/ina+o de iodo e uma molcula or(8nica* da qual o iodo li/erado lentamente* estes possuem a atividade antimicro/iana do iodo* mas n+o manc)am e s+o menos irritantes, Muitos campistas est+o familiari'ados com pastil)as de iodo para tratar a %(ua de seu consumo,

A<EWD?
AneOo$ 3 Ailui5Res 9s mtodos de la/oratrio nos quais uma quantidade de uma su/st8ncia adicionada a outra para redu'ir a concentra+o de uma das su/st8ncias s+o con)ecidos como dilui"#es, IM=9!Q-7QE: $ma dilui"%o & uma e'press%o de concentra"%o, n%o de volume! E'pressa de outra forma, uma dilui"%o indica a (uantidade relativa de subst)ncias em uma solu"%o! ?uando a palavra dilui+o usada* ela deve si(nificar o n0mero de partes que foram diludas em um n0mero total de partes, Em outras palavras* uma dilui"%o deve significar o volume de concentrado no volume total da solu"%o final! 9 menor n0mero corresponde ao n0mero de partes da su/st8ncia que est% sendo diluda> o maior n0mero refere-se ao n0mero total de partes da solu+o final, Xonsidere as se(uintes frases: Yaa uma dilui+o : para :@ de soro em salina, Yaa uma dilui+o : em :@ de soro em salina, Yaa uma dilui+o : para :@ de soro com salina, Yaa uma dilui+o :I:@ de soro com salina, Yaa uma dilui+o :::@ de soro usando salina, Yaa uma dilui+o de : parte de soro e P partes de salina, Yaa uma dilui+o de : parte de soro para P partes de salina, ?ual a diferena entre essas frasesZ 7en)umab Qodas si(nificam exatamente a mesma coisa, E7Qc9: 4iluir acrescentar solvente a uma solu+o mantendo-se inalteradas as quantidades de soluto existentes, 4S H soluto H soluto ` H solvente : parte de soro ` P partes de salina :@ partes de solu+o final 9 si(nificado difere quando usamos a palavra ra*%o, 9s n0meros passam a se referir aos materiais da ra'+o* que podem ser escritos de diversas formas: ::P : para P :IP 7+o importa como a ra'+o escrita* a ordem dos n0meros deve corresponder ordem das su/st8ncias s quais a ra'+o se refere,

Ex: &ma ra'+o de soro para salina ::P i(ual a uma ra'+o salina para soro P::* o que a mesma coisa que uma dilui+o de :::@ de soro com salina, QdQ&$9 a concentra+o de uma solu+o determinada por titula+o, O a menor quantidade ou concentra+o que produ'ia um efeito particular ou produto, 9 ttulo a recproca da dilui+o, Ent+o* em uma rea+o de pesquisa de anticorpos positiva na dilui+o e e f e ne(ativa na dilui+o :I; e :I:<* o ttulo A, Ex: 4ilua E m$ de soro com E; m$ de salina, 4eve-se somar E; m$ de salina em E m$ de soro, Ent+o* o volume total da solu+o final F@ m$, E m$ de soro ` E; m$ de salina F@ m$ de solu+o final - dilui+o desta solu+o seria E em F@, 7o entanto* dilui1es s+o (eralmente propostas como : para al(um n0mero, =ara converter uma dilui+o E:F@ em uma dilui+o de : em al(o* s montar um pro/lema de ra'+o-propor+o: E est% para F@ assim como : est% para ., EIF@ S :I. E.SF@ .S:L - a dilui+o soro em salina E:F@ ou :::L

- ra'+o desta solu+o seria E: E;, 7o entanto* dilui1es s+o (eralmente propostas como : para al(um n0mero, =ara converter uma dilui+o E:E; em uma dilui+o de : em al(o* s montar um pro/lema de ra'+o-propor+o: E est% para E; assim como : est% para ., EIE; S :I. E.SE; .S:A - a ra'+o soro em salina E:E; ou :::A ou ent+o* uma ra'+o salina em soro :A:: =ara dilui1es seriadas* ao se calcular a concentra+o* necess%rio multiplicar a concentra+o ori(inal pela :g dilui+o* a se(uir pela se(unda dilui+o* esta pela terceira dilui+o e assim por diante* at que a dilui+o final se3a con)ecida, Ex: &ma solu+o de 7a9G E M diluda :IL e :I:@, 4etermine a concentra+o de cada uma das F solu1es, solu+o : de 7a9G: EM solu+o :IL de 7a9G: EM x :IL S @*AM solu+o :I:@ de 7a9G: EM x :IL x :I:@ S @*@AM

E.E!XdXI9#: :, Yaa EL@ m$ de uma dilui+o :::@ de soro em salina, E, Yaa AL m$ de uma dilui+o :::L de soro em salina, F, Yaa FF m$ de uma dilui+o ::EE de soro em salina,

A, Yaa A m$ de uma dilui+o ::; de soro em salina, L, Yaa B*L m$ de uma dilui+o :::L@ de soro em salina <, 4etermine a quantidade de soro em A@ m$ de uma dilui+o ::L de soro em salina, B, ?uais dilui1es representam as misturas a/aixoZ a6 fisiol(ica, /6 fisiol(ica, c6 fisiol(ica, ;, =ipetou-se L@@ $ se um soluto em tu/o de ensaio e acrescentou-se A*L m$ de solvente, ?ual a dilui+oZ P, =ipetou-se E@@ $ se um soluto em tu/o de ensaio e acrescentou-se P*; m$ de solvente, ?ual a dilui+oZ :@, Em uma rea+o imunoen'im%tica* foi colocado @*: m$ de soro* @*; m$ de diluente e @*: m$ de con3u(ado, ?ue volume de soro existe no volume final e qual a dilui+o deste soroZ @*E m$ de soro san(uneo com <*E m$ de solu+o @*L m$ de soro san(uneo com F m$ de solu+o @*F m$ de soro san(uneo com A*E m$ de solu+o