1. INTRODUO 1.1 DNA (cido desoxirribonucleico) Atualmente, qualquer pessoa j ouviu falar de DNA.

Como voc imagina que seja o DNA?... Os alimentos que comemos so partes de seres vivos e, portanto, tm clulas com DNA. Ento quando comemos um simples morango, estamos ingerindo alm de agua, sais minerais e vitaminas tambm protenas, carboidratos e DNA. possvel extrair o DNA dos seres vivos. A unidade fundamental da informao nos organismos vivos o gene e este definido bioquimicamente como um segmento de DNA capaz de codificar a informao requerida para a produo de um produto biolgico funcional (NELSON e COX, 2002). As molculas de DNA so as maiores macromolculas nas clulas e apresentam se bastante sensveis suscetveis a quebra por foras mecnicas de cisalhamento, o que torna o isolamento de molculas intactas algo delicado (NELSON e COX, 2002). Segundo Lima e Fraceto (2007), o estudo da composio do material gentico dos seres vivos teve incio ainda no sculo XIX com as descobertas de Friedrich Miescher em 1869. A partir do pus humano e do esperma de salmo, o bioqumico suo isolou uma substncia com alto teor de fosfato, a qual denominou nuclena, pois se encontrava no interior do ncleo celular. Dando continuidade aos seus estudos, Miescher separou depois a nuclena em substncias proticas e em substncias cidas, vindo da a denominao cido nuclico. O entendimento atual das vias da informao surgiu da convergncia da gentica, fsica, e qumica na bioqumica moderna, resumindo-se pela descoberta da estrutura da dupla hlice do DNA, em 1953, por James Watson e Francis Crick. Segundo estes autores, molculas de cido desoxirribonuclico (DNA) so polmeros de nucleotdeos, os quais possuem trs componentes caractersticos: (1) uma das quatro bases nitrogenadas (adenina, guanina, timina ou citosina), (2) uma pentose (desoxiribose), e um grupamento fosfato, de maneira a formar uma estrutura em hlice complementar (NELSON e COX, 2002; LIMA e FRACETO, 2007).

Uma caracterstica importante do DNA o fato de suas duas cadeias poderem ser separadas quando as pontes de hidrognio entre suas bases so rompidas (Figura 2). Isto pode ser conseguido, por exemplo, por meio do aquecimento da soluo de DNA em altas temperaturas. O ponto mdio de uma faixa de temperaturas nas quais as cadeias de um DNA se separam conhecido como temperatura de fuso Tm (melting temperature). Esta separao pode ser monitorada pelo aumento da densidade ptica da soluo de DNA ou pela perda da viscosidade. Cada molcula de DNA tem uma temperatura de fuso caracterstica e que depende principalmente da proporo de pares de base G-C. Uma vez que cada par G-C apresenta trs pontes de hidrognio, ele mais estvel que o par A-T que forma duas pontes de hidrognio. Esta estrutura complexa do DNA, mantida por ligaes qumicas covalentes e no covalentes e que inspirou tantos cientistas, est localizada no ncleo das clulas dos organismos vivos (LIMA e FRACETO, 2007). 1.2 MORANGO Os morangos que consumimos so plantas da espcie Fragaria ananassa. Estas plantas so Rosceas, ou seja, so da mesma famlia das rosas que enfeitam muitos jardins. Elas se reproduzem principalmente por meio do estolo, que um ramo que cresce paralelo ao cho, gerando brotos de novas plantas. As variedades de morangos que consumimos hoje so resultado de cruzamentos de espcies diferentes que ocorriam, naturalmente na Europa (Frana e Rssia) e nas Amricas (Chile e Estados Unidos) (REIS, 2010). Uma das razes de se trabalhar com morangos que eles se prestam muito bem extrao de DNA, porque so muito macios e fceis de homogeneizar. Morangos maduros tambm produzem pectinases e celulases, que so enzimas que degradam a pectina e a celulose (respectivamente), presentes nas paredes celulares das clulas vegetais. Alm disso, os morangos possuem muito DNA: eles possuem 8 (oito) cpias de cada conjunto de cromossomos (REIS, 2010). O DNA um composto biolgico muito importante. To importante que, at hoje, muitos cientistas permanecem encantados com o fato dele conter toda a informao necessria para controlar as funes que esto acontecendo no corpo de
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todo e qualquer ser vivo. O DNA est presente nas clulas de todos os seres vivos, incluindo plantas, fungos e bactrias (REIS, 2010). Com exceo das bactrias, onde o DNA fica solto dentro da clula, em muitos outros seres vivos ele fica acomodado dentro de um compartimento existente, chamado de ncleo. O DNA forma os genes que, por sua vez, vo formar os cromossomos. atravs dos genes, que o DNA vai determinar as caractersticas que sero passadas dos pais para os filhos como, por exemplo: a cor dos olhos nos seres humanos ou a textura de uma folha nas plantas (REIS, 2010). Em 1953, os cientistas James Watson e Francis Crick descobriram, com a ajuda de uma outra pesquisadora, Rosalind Franklin, como era a estrutura do DNA. Eles deduziram que o DNA era formado por duas longas fitas paralelas torcidas em forma de hlice e presas uma outra por ligaes chamadas de pontes de hidrognio (REIS, 2010). Assim como os grandes pesquisadores fazem em seus experimentos, observe que em algumas das etapas do experimento, os reagentes utilizados tm funes muito importantes. Por exemplo, o detergente vai ajudar a romper as clulas que formam o morango para que o DNA possa sair e ficar livre na soluo. Quando ns colocamos o sal e depois o lcool, ns ajudamos as molculas de DNA a ficarem mais prximas umas das outras. Quando as molculas de DNA ficam bem prximas, ns comeamos a observ-las como se fosse uma nuvenzinha branca boiando na soluo (REIS, 2010). 2. OBJETIVO Extrair o DNA do morango 3. MATERIAS NECESSRIOS 1 Saco plstico tipo zip loc 3 morangos frescos 1 peneira lcool etlico (92,8 INPM) 3 tubos de ensaio 1 pincel
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1 bquer de 250 mL Suporte para tubos de ensaios 1 bquer com 150 mL de soluo de extrao de DNA 1 colher de ch 1 colher de sopa 1 basto de vidro Detergente Sal gua

4. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL 4.1 PASSO 1: MACERANDO OS MORANGOS Tirou-se a folha verde de 3 morangos. Colocou-se dentro de um saquinho plstico para macerao e pressionou-se entre os dedos at obter uma pasta quase homognea.

4.2 PASSO 2: PREPARO DA SOLUO PARA EXTRACAO DE DNA Em um bquer, preparou-se a soluo de extrao de DNA, misturou-se 150ml de gua, uma colher de sopa de detergente e uma colher de ch de sal de cozinha. Mexeu-se bem, porem cuidadosamente para no fazer espuma.

4.3 PASSO 3 Colocou-se cerca de 50ml da soluo de extrao do DNA sobre a massa do morango, vedou-se o saco plstico e misturou-se levemente por cerca de 15 minutos.

4.4 PASSO 4: INCUBANDO Incubou-se a temperatura ambiente por 30 minutos. Mexeu-se de vez em quando.

4.5 PASSO 5 Colocou-se uma peneira sobre o bquer limpo e passou-se a mistura para retirar os pedaes de morango.
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 Dividiu-se o liquido resultante em dois ou trs tubos de ensaio. Colocou-se apenas cerca de 3 dedos no fundo do tubo.

4.6 PASSO 6: FINALIZAO Despejou-se delicadamente sobre a soluo nos tubos uma quantidade de lcool comum maior que o volume do morango. No misturou-se o lcool com a soluo. Aguardou-se cerca de 3 minutos para o DNA, comeou-se a precipitar. Usou-se um basto para separar as molculas de DNA.

5. RESULTADOS Os resultados obtidos com essa experincia foram satisfatrios dentro programados pela professora. Um fator importante para a obteno da extrao do DNA do morango foram os elementos utilizados em sua experincia.

Figura1. Resultado da extrao do DNA do morango

6. DISCUSSO A adio do sal (NaCl) no incio da experincia proporciona ao DNA um ambiente favorvel. O sal contribui com ons positivos e negativos. Os positivos neutralizam a carga negativa do DNA, e os negativos as histonas, permitindo que o complexo DNA+Histonas no se repila mais e ento se enovele. Se no fosse a presena do sal, ele poderia desintegra-se. Outro fato, que o sal aumenta a densidade do meio, o que facilita a migrao do DNA para o lcool.
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O detergente afeta a permeabilidade das membranas, que so constitudas, em parte, por lipdeos. Com a ruptura das membranas os contedos celulares, incluindo as protenas e o DNA, so liberados e dispersam-se na soluo. A funo de algumas dessas protenas manter o DNA enrolado numa espiral muito apertada. O lcool etlico permite uma maior desidratao das molculas. O DNA no se dissolve no lcool. Como resultado, o DNA precipita-se. Ele aparece superfcie da soluo porque menos denso que a gua e a mistura aquosa dos restos celulares. Para que fosse possvel visualizar fibras aglomeradas de DNA foi adicionado ao filtrado etanol gelado, este procedimento faz com que ocorra a precipitao do DNA devido a sua baixa solubilidade nesse solvente orgnico (quanto mais gelado o etanol, menor a solubilidade do DNA e melhor o processo de precipitao). Nele tambm o DNA aumenta sua compactao e tende a formar fibras. Nessa etapa final, foi possvel capturar as fibras de DNA aglomerado.

7. REFERNCIAS LIMA, R. e FRACETO, L.F. Abordagem qumica na extrao de DNA de tomate. Qumica nova na escola, n. 25, p. 43-45, maio/2007.

NELSON, D.L. e COX, M.M. Lehninger: Princpios de Bioqumica. 3 Edio, So Paulo: SARVIER, 2002.

REIS, J, R, P. Experincia: extrao do DNA do morango. Projeto de Pesquisa elaborado para fins da extrao do DNA da Fragaria vesca (morango), no Colgio Floresta, atividade experimental realizada na aula de biologia, 2010.

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Pergunta 1: Qual a funo de cada reagente usado na extrao simplificada do DNA explanada nesta aula pratica?

Do sal R= A adio do sal (NaCl) no incio da experincia proporciona ao DNA um ambiente favorvel. O sal contribui com ons positivos e negativos. Os positivos neutralizam a carga negativa do DNA, e os negativos as histonas, permitindo que o complexo DNA+Histonas no se repila mais e ento se enovele. Se no fosse a presena do sal, ele poderia desintegra-se. Outro fato, que o sal aumenta a densidade do meio, o que facilita a migrao do DNA para o lcool.

Do detergente R= O detergente afeta a permeabilidade das membranas, que so constitudas, em parte, por lipdeos. Com a ruptura das membranas os contedos celulares, incluindo as protenas e o DNA, so liberados e dispersam-se na soluo. A funo de algumas dessas protenas manter o DNA enrolado numa espiral muito apertada.

Do lcool R= O DNA no se dissolve no lcool. Como resultado, o DNA precipitase. Ele aparece superfcie da soluo porque menos denso que a gua e a mistura aquosa dos restos celulares. Pergunta 2: O que se consegue ver seria o DNA puro? R= possvel observao do DNA (emaranhado), que se apresenta por filamentos esbranquiados; porm a observao das hlices s possvel atravs do uso de aparelhos sofisticados. Pergunta 3: Como se sabe que os filamentos so molculas de DNA? R= Porque, a partir de estudos das propriedades qumicas dos filamentos sabe-se que estes tm as mesmas propriedades das molculas de DNA. Por exemplo, o RNA no se enrolaria no palito, o DNA no solvel em lcool,
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menos denso que a gua, tem grande absoro de luz UV, quando corado com brometo de etdio mostra-se fluorescente em luz UV. Pergunta 4: Se fosse RNA seria possvel enrol-lo como foi feito para o DNA? Por qu? R= O RNA formado por uma cadeia simples de nucleotdeos, e no uma de dupla hlice como o DNA. Um filamento de RNA pode se dobrar de tal modo que parte de suas prprias bases se pareiam umas com as outras. Tal pareamento intramolecular de bases um determinante importante da forma do RNA. Assim, formando pontes intracadeia o RNA capaz de assumir uma variedade muito maior de formas moleculares tridimensionais complexas do que a dupla hlice de DNA.

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