INFORME DE LABORATORIO DE BIOLOGA #4 ENZIMAS JORGE LEONARDO MEJA SNCHEZ CARLOS MARIO AYALA RAMREZ UNIVERSIDAD INDUSTRIAL DE SANTANDER

ESCUELA DE BIOLOGA jorge.jlms@hotmail.com krlos_mao10@hotmail.comm

INTRODUCCIN ENZIMAS La mayora de las reacciones qumicas requieren un ingreso inicial de energa para comenzar y desarrollarse a un ritmo razonable. Esto es vlido an para las reacciones exergnicas, como la oxidacin de la glucosa o la combustin del gas natural (metano). La energa aadida incrementa la energa cintica de las molculas, permitiendo que un mayor nmero de ellas adquiera la fuerza suficiente no solo para superar su repulsin mutua, sino tambin para romper los enlaces qumicos existentes en su interior. La energa que deben poseer las molculas se llama energa de activacin. En el laboratorio, la energa de activacin se obtiene a menudo como calor, pero en una clula ocurren muchas reacciones al mismo tiempo y el calor las afectara a todas indiscriminadamente. Las clulas evitan este problema utilizando enzimas, que son protenas globulares especializadas para actuar como catalizadores. Un catalizador es una sustancia que disminuye la energa de activacin necesaria para una reaccin formando una asociacin pasajera con las molculas que reaccionan. Como resultado, la reaccin ocurre ms rpidamente en presencia de un catalizador. El catalizador mismo no sufre ninguna alteracin permanente en el proceso y se puede volver a utilizar repetidamente. A raz de la presencia de enzimas, las clulas son capaces de desarrollar reacciones qumicas a gran velocidad a temperaturas comparativamente bajas. En la actualidad se conocen ms de dos mil enzimas diferentes, cada una de las cuales es capaz de catalizar una reaccin qumica especfica. Sin embargo, diversos tipos de clulas elaboran diferentes tipos de enzimas; ninguna clula contiene las enzimas conocidas. La molcula (o molculas) sobre la cul acta una enzima se conoce como su sustrato.

OBJETIVOS Determinar la influencia de la concentracin enzimtica, concentracin de sustrato, el pH y la temperatura en la actividad de las enzimas.

MATERIALES Gomitas de un solo color (con ingredientes: gelatina y protena). 20 tubos de ensayo grandes. Un vaso de precipitados. Pinzas. Pancreatina disuelta en buffer 7.0. Soluciones tamponadas a pH 3.4, 5.0, 6.8, 8.0 y 10.0.

PROCEDIMIENTO

Ejercicio 1. Efecto de la concentracin de la enzima en la reaccin enzimtica. Se dispuso de 5 tubos de ensayo; se introdujo una goma a cada uno. Se incubaron los tubos durante una hora en bao Mara a aproximadamente 37, y se hizo una revisin cada 15 minutos. Se usaron 10 mL de la solucin de enzima en cada tubo. Se hicieron observaciones.

Ejercicio 2. Efecto de la concentracin del sustrato en la reaccin enzimtica. Se repitieron los pasos realizados en el Ejercicio 1, pero en este caso se introdujo en cada tubo 1, 2, 3, 4 y 5 gomas respectivamente. Se hicieron observaciones.

Ejercicio 3. Efectos del pH sobre la reaccin enzimtica. Se repitieron los pasos del Ejercicio 1; se introdujeron de la misma manera 1 goma por tubo, pero en este caso los tubos contenan 10 mL de solucin con diferente pH cada uno. Se us la solucin con pH: 3.4, 5.0, 6.8, 8.0 y 10.0. Se hicieron las observaciones respectivas.

Ejercicio 4. Efecto de la temperatura sobre la reaccin enzimtica. Se dispuso de 5 tubos de ensayos y en cada uno se introdujo una goma. Se usaron 10 mL de solucin en cada tubo a 100%. La solucin enzimtica se someti a distintas temperaturas; por separado cada tubo: 100C, 37C, 25 C o temperatura ambiente y a 4C.

RESULTADOS

Ejercicio 1. Efecto de la concentracin de la enzima en la reaccin enzimtica.

TABLA 1 Tubo Sustrato Enzima Control 1 2 3 4 1 OBSERVACIONES Se derriti la gomita y tiene un aspecto gelatinoso. No hay cambio de coloracin. Se observan dos capas, una ms viscosa. La gelatina est ms viscosa. El color no cambia. Se observa a la gelatina con un aspecto de leve transparencia. Condiciones similares al primer control con Sln 10%. Se forma en la superficie una especia de nata debido al azcar que recubre a la gomita. La gelatina est ms consistente. La gelatina est ms viscosa. No hay cambio en la coloracin, solo se observa una leve transparencia en la gelatina. Se derriti la gomita y su consistencia es gelatinosa. Se forma en la superficie una nata. La gelatina est ms consistente. La gelatina presenta un color ms claro. La coloracin cambia levemente en un tono de transparencia en la gelatina. La gelatina se derriti. El color morado de la gelatina se ve un poco ms claro. Se observa la apariencia de una fina capa blanca sobre la capa viscosa de gelatina. No hay cambio en la coloracin. Se observa una leve transparencia en la gelatina.

Sln 10%

Sln 25%

2 3 4 1

1 gomita Sln 50%

2 3 4 1

Sln 75%

2 3 4

1 5 Sln 100%

Similar a las condiciones observadas en el primer control con Sln 75%. Hay grnulos flotantes en la solucin.

2 La gelatina est ms consistente. 3 No hay cambio visible. 4 La gelatina tiene un leve aspecto transparente. Condiciones. Temperatura: Aproximadamente 37 C

En presencia de exceso de sustrato, la velocidad de la reaccin se presenta en proporcin directa a la concentracin de la enzima. La regulacin de las concentraciones de la enzima es un medio principal por el cual las clulas regulan la velocidad de las reacciones qumicas.

En este caso podemos ver como despus de un punto en ninguno de los tubos de ensayo ocurri un hecho visible en la muestra. Aproximadamente en el 3er y 40to control de cada tubo aparentemente la enzima se desactiv.

Ejercicio 2. Efecto de la concentracin del sustrato en la reaccin enzimtica.

TABLA 2
Tubo Sustrato Enzima Control 1 1 1 gomita 2 3 4 1 2 2 gomitas 2 3 4 1 3 3 gomitas Sln 100% 2 3 4 Observaciones Se derriti la goma. El tono de la coloracin se ve un poco ms claro. La gelatina est ms consistente. Hay grnulos flotantes en la solucin. No hay cambio visible. La gelatina tiene un leve aspecto transparente. La gelatina se derriti. No hay cambio en la coloracin. El color est ms claro. La solucin empez a tomar el color de la gelatina. La solucin se colore completamente. Se derriti la goma. El color se ve ms oscuro y su consistencia es viscosa. No hay cambio en la coloracin de la gelatina. La solucin empez a colorearse. La solucin se ti completamente. Se observan dos capas, una de ellas de color cristalino.

1 4 4 gomitas 2 3 4 1 5 5 gomitas 2 3

Se derriti la goma y su color est ms claro. La solucin empez a colorearse. La gelatina est ms viscosa y la solucin se colore completamente. Se observan dos capaz viscosas. La solucin enzimtica se colore completamente.

El tono de la coloracin de la solucin se concentr. Se observa una fina capa blanca sobre la gelatina. La capa blanca observada anteriormente se observa ms 4 gruesa y la gelatina tiene un color ms claro. Condiciones. Temperatura: aproximadamente 37 C.

Si la concentracin de la enzima permanece constante cuando la concentracin del sustrato se incrementa, la velocidad de la reaccin se incrementa hasta que se aproxima a un mximo. Incrementos ulteriores en la concentracin del sustrato no tienen un efecto adicional sobre la velocidad de la reaccin. La velocidad mxima se alcanza cuando todas las molculas de la enzima estn ocupadas por molculas de sustrato.

En este caso podemos confirmar lo que dice la literatura. A mayor concentracin de sustrato, la velocidad de la reaccin aumenta si la concentracin de la enzima permanece constante (Sln 100% en todos los casos), hasta que se empieza a acercar a su punto mximo de reaccin. Por esto los cambios visibles se notaron de manera ms rpida en los tubos con mayor nmero de gomitas.

Ejercicio 3. Efecto del pH sobre la reaccin enzimtica.

TABLA 3
Tubo Sustrato Enzima pH Control 1 1 3.4 2 3 4 1 2 Observaciones La goma se derriti. No hay cambio de coloracin. Se observa una capa acuosa sobre la gelatina. Se observa la presencia de grnulos blancos flotando en la solucin. Se forma una capa blanca en la superficie. Hay grnulos en toda la solucin. La colacin de la gelatina y la solucin no cambian. El color de la gelatina est ms claro. La coloracin no cambia, pero tiene un tono cristalino

5.0

o transparente. 3 4 1 3 1 gomita Sln 100% 6.8 2 3 No hay grnulos en la solucin. No se observa cambio. La goma se derriti y su coloracin no cambi.

La coloracin se observa con un tono cristalino. La gelatina est menos viscosa. El color se aclara. Condiciones iguales a las observadas en el control 4 anterior. Se derriti la gelatina. Se observa una capa acuosa de color blanco sobre la gelatina. La coloracin de la 1 gelatina es ms clara que la inicial. 4 8.0 2 Se observan dos capas finas sobre el sustrato. La coloracin de la gelatina tiene un tono cristalino. Se forma una capa en la superficie y grnulos blancos en 3 la solucin. 4 No se observa cambio. Se observa un precipitado sobre la gelatina y grnulos 1 en la solucin. Se observa un precipitado. La gelatina est ms 5 10.0 2 viscosa. 3 El color de la gelatina tiene un aspecto cristalino. 4 No se observan cambio. Condiciones. Temperatura: aproximadamente 37 C.

El pH de la solucin circundante tambin afecta la actividad enzimtica. La conformacin de una enzima depende, entre otros factores, de la atraccin y la repulsin entre los aminocidos cargados negativamente (cidos) y los cargados positivamente (bsicos). Cuando el pH cambia, estas cargas tambin lo hacen y con ellas la configuracin de la enzima, hasta que se altera tan drsticamente, que ya no es funcional. Probablemente sea ms importante el hecho que las cargas del sitio activo y del sustrato cambian de tal manera que resulta afectada su capacidad de unin. El pH ptimo de una enzima no es igual al de otra.

Estos resultados indican que a mayor pH cido (menor que 7.0) la actividad de la enzima se ve altamente regulada, ya que los cambios visibles ocurrieron en el primer control y en el 3ero y 4to no se observ cambio alguno.

Ejercicio 4. Efecto de la temperatura sobre la reaccin enzimtica.

TABLA 4
Tubo Sustrato Enzima Temperatura Control Observaciones La goma se derriti. No hay cambio en la coloracin de la gelatina. Se forma una nata sobre la superficie de la solucin. Se form una capa sobre la gelatina. La coloracin no cambia. La gelatina est ms viscosa. No se observa cambio. La goma se derriti ms que a 37 C. No hay cambio en la coloracin. Se form una nata en la superficie de la solucin. Se observan 3 capas. La capa acuosa es ms diferenciable. La gelatina presenta una consistencia ms viscosa. No se observa cambio. El osito aumenta un volumen, se ve ms grande. No se observa cambio. No presenta cambios. El color de la goma es ms claro, con una leve transparencia. La goma aumenta de volumen. La forma y apariencia siguen iguales. La goma est ms dura, ms consistente. No hay cambio en la coloracin. La goma cambia su coloracin a un tono ms claro, con una leve transparencia.

100 C

1 2 3 4

1 2 37 C 2 3 1 gomita Sln 100% 4 1 2 3 4 1 2 3 4 Condiciones: pH neutro: 7.0

25 C

4 C

El efecto de la temperatura sobre la velocidad de una reaccin controlada por enzimas. Las concentraciones de molculas de enzima y de sustrato se mantuvieron constantes. La velocidad de la reaccin, al igual que en la mayora de las reacciones qumica se duplica aproximadamente por cada 10 C de incremento en la temperatura. En las reacciones enzimticas que ocurren en los seres humanos (temperatura corporal 37 C) y otro mamferos, la velocidad mxima de reaccin se alcanza a aproximadamente 40 C. Por

encima de esta temperatura, la velocidad disminuye y, a aproximadamente 60 C, la reaccin se detiene completamente, quizs a raz de la desnaturalizacin de la enzima. El intervalo de temperatura en la cual una enzima es activa vara con el tipo de organismo y con la enzima particular. Generalmente las enzimas trabajan con la temperatura corporal de los seres humanos, por lo cual vemos que en los tubos sometidos a temperaturas de 25 C y 4 C no hubo un cambio aparente, ya que la hidratacin representada como aumento del volumen de la goma no est relacionado con una actividad enzimtica. Vemos entonces como en los dos tubos con temperaturas de 37 C y 100 C la actividad de la enzima se ve reflejada en cambios fsicos, hasta cierto punto, ya que en el caso del tubo a temperatura de 37 C es probable que la enzima haya hecho su trabajo hasta donde considera necesario, por esto en el 4to control no se observa cambio. En el caso del tubo sometido a 100 C en los dos primeros controles, dado a que esta temperatura desnaturaliza la enzima rpidamente, en los controles 3 y 4 la enzima no sufri cambio aparente.

CONCLUSIONES

Si el sustrato permanece constante y la concentracin de la enzima vara, sta solo trabaja hasta un punto mximo, es decir, en que todas sus molculas estn ocupadas por molculas de sustrato. A mayor concentracin de sustrato, la velocidad de la reaccin aumenta si la concentracin de la enzima permanece constante. A condiciones muy de pH muy cido o muy bsico la enzima se regula de tal manera que su actividad se ve drsticamente afectada hasta inactivarse.

La temperatura ptima para la actividad enzimtica es la temperatura corporal de un ser humano 37 C. En el caso de temperaturas muy bajas o muy altas las enzima se ve desactivada, ya sea porque la temperatura no es suficiente para activar a la enzima o por su desnaturalizacin.

BIBLIOGRAFA 1. CURTIS, Helena y BARNES, N. Sue.2006. Biologa. Sexta Edicin en espaol. Editorial Mdica Panamericana, S.A. pp 192-200