Proyectos para Inversin en Ciencia, Tecnologa e Innovacin (SIDCAI) Actividad 42-8-a TITULO DIAGNSTICO DE LAS ENFERMEDADES RESPIRATORIAS, INMUNOSUPRESORAS

Y EXOTICAS QUE AFECTAN LA SALUD AVIAR MEDIANTE TCNICAS ESTANDARES Y MOLECULARES. Actividad PROBLEMA La industria avcola a nivel mundial, suministra una considerable proporcin de fuente de protena de origen animal que consume la poblacin humana, durante los ltimos aos se han logrado grandes avances en materia de gentica, manejo y nutricin que han permitido el desarrollo de las integraciones avcolas. La produccin intensiva de carne de aves hace que su costo sea inferior a la carne de cerdos y bovino, como resultado de esa intensificacin, el nmero y concentracin de aves en ciertas regiones del pas, han aumentado considerablemente y como consecuencia son cada vez ms susceptibles a la introduccin y diseminacin de enfermedades. Actualmente la Industria Avcola Nacional cuenta con grandes inversiones, proporcionando ms de 56% de la protena que consumen los venezolanos y numerosos puestos de trabajo. La productividad de esta fuente de protena puede ser afectada por una serie de factores como agentes infectocontagiosos, nutricionales, genticos e inadecuadas medidas de bioseguridad, entre otros. La presencia de ms de uno de estos factores, hacen que se potencie la situacin, incrementando las prdidas econmicas por baja ganancia de peso, baja postura, alta morbiletalidad, decomiso en las plantas de procesamiento, costo por tratamiento, etc. Por todo lo antes expuesto se considera de suma importancia el aislamiento e identificacin de los agentes infecciosos que afectan la salud aviar, y de esta manera contribuir con la seguridad agroalimentaria del venezolano. Entre las limitantes que afectan el desarrollo de la industria avcola aparecen como prioritarias las prdidas ocasionadas por las enfermedades virales y bacterianas. Segn datos obtenidos del sector oficial y privado, se evidencia que una gran cantidad de pollitos de engorde y pollitas para postura procedentes de la produccin nacional de granjas reproductoras, no alcanzan la edad productiva por causas diversas y entre ests las ms importantes es por enfermedades infectocontagiosas. Estas prdidas son debidas en su mayora a la accin de agentes patgenos y entre estos los virus y bacterias juegan un papel importante. Dentro de las enfermedades virales que afectan a las aves tenemos la Enfermedad de Newcastle, Bronquitis infecciosa aviar,

Gumboro, Influenza aviar, Anemia Infecciosa aviar, Marek, etc., y entre las enfermedades bacterianas podemos mencionar algunas como Clera aviar, Colibacilosis, Micoplasmosis, Bordetelosis y Salmonelosis Aviar, las que ocasionan fuertes prdidas a los productores avcolas. El diagnstico preciso de estas enfermedades, es necesario ya que los signos clnicos en muchos casos son similares lo cual se presta a confusin cuando solo se realiza el diagnostico clnico. A pesar de que muchas integraciones tienen sus propios laboratorios, son muy pocos los que realizan aislamientos virales, siendo esta una fortaleza de este laboratorio el cual esta en capacidad de realizar aislamiento de la mayora de los virus que afectan a las aves y su evaluacin mediante el uso de tcnicas moleculares. Las patologas respiratorias (BIA, NC) y las inmunosupresoras (EIB y AIA) son considerados frecuentemente, a nivel mundial, como causantes de las prdidas econmicas en la industria avcola, principalmente por altas mortalidades, cuadros de inmunosupresin, respiratorios, alteracin de la produccin de carne y huevos y dificultad en la comercializacin. Por lo antes expuesto se considera necesaria la identificacin rpida y exacta de los serotipos o variantes de patgenos actuantes, mediante el uso de tcnicas altamente especficas y sensibles como lo son las tcnicas de biologa molecular (RTPCR-RFLP, Secuenciacin parcial del genoma, hibridizacin de sondas entre otras). Los cambios antignicos que constantemente ocurren en los virus de BIA y EIB han originado la aparicin de variantes antignicas en ambos virus, haciendo verdaderamente difcil la prevencin y el control de estas patologas, ya que el uso de biolgicos elaborados con cepas diferentes a las que estn actuando en campo, no siempre confieren la proteccin adecuada. La tcnica mas usada para determinar el genoma de EIB es la RT-PCR-RFLP y para BIA RT-PCRRFLP y Secuenciacin Cclica Directa. El virus de la AIA se report por primera vez en Venezuela en el ao 2002 produciendo cuadros de anemia aplsica, hemorragia, atrofia en rganos linfoides y disfuncin inmunolgica, confirmada la presencia de este virus, se hace imperativo evaluar la incidencia de esta patologa en los planteles avcolas y dilucidar su papel en torno a la problemtica existente a los cuadros de inmunosupresin, infecciones mixtas complicadas y fallas en los programas de inmunizacin. Para ello es necesario el uso de tcnicas de alta sensibilidad y especificidad, rpida y eficiente como la Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR). La Enfermedad de Newcastle (EN) y la Influenza Aviar (IA) son enfermedades de declaracin obligatoria a nivel mundial, especficamente ante la Oficina Internacional de Epizootias (OIE). Esto debido a que las cepas de alta patogenicidad pueden producir enfermedad de fcil diseminacin causante de altas mortalidades en aves, poniendo en riesgo la produccin total de un pas y la disponibilidad de protena animal consumida por el humano; adems de todas implicaciones econmicas, en lo que respecta, al intercambio de productos avcolas entre pases. La IA tiene implicacin en salud pblica, por ser causante, en algunos casos, de enfermedad letal en humanos. La EN es una enfermedad enzotica en nuestro pas y ha sido controlada mediante planes de vacunacin estrictos; aunque, en los ltimos cuatro aos se han

presentado brote de cepas cada vez mas virulentas en parvadas vacunadas. Una forma de evaluar molecularmente la patogenicidad de estas cepas es mediante la Secuenciacin Cclica Directa. La IA no ha sido diagnosticada en Venezuela, pero no sabemos si cepas de baja patogenicidad han actuado o estn actuando en las diversas especies de aves, que habitan el territorio nacional, considerando que cuatro de las vas migratorias usadas por aves provenientes del norte del continente, y que son reservorio de esta enfermedad, atraviesan el territorio nacional haciendo paradas en algunas zonas, como por ejemplo, en islas del lago de Valencia y laguna de Taguayguay en Aragua, siendo, estas zonas altas productoras avcolas. Puesto que no existe ningn estudio por parte del sector oficial ni privado en el pas, de esta enfermedad, La OIE recomienda, para este caso, un estudio serolgico de deteccin de anticuerpos contra el virus, pudiendo utilizar como tcnica la ELISA y la prueba de AGP como confirmatoria. Por todo lo antes expuesto es imperiosa la necesidad de estandarizar tcnicas biotecnolgicas en nuestra institucin, lo que permitir diagnosticar en forma exacta y oportuna la presencia de patgenos actuantes, dando respuesta a los productores sin tener que recurrir a laboratorios forneos; adems de ser una fuente para la transferencia de tecnologa para aquellos laboratorios interesados en implementar estas tcnicas, permitiendo de sta manera ampliar el sistema nacional de diagnostico veterinario, para apoyar los programas nacionales de control de enfermedades. OBJETIVOS -Aislar mediante tcnicas estndares y caracterizar molecularmente cepas virales actuantes en el pas, de Bronquitis Infecciosa Aviar, Newcastle, Neumovirus aviar mediante RT-PCR y secuenciacin parcial del genoma -Detectar la presencia del virus de Anemia Infecciosa Aviar mediante la identificacin de su genoma usando PCR, y secuenciacin parcial del genoma. - Aislar mediante tcnicas estndares y caracterizar molecularmente el virus de Enfermedad infecciosa de la Bursa mediante RT-PCR-RFLP y secuenciacin parcial del genoma. - Aislar mediante tcnicas estndares y caracterizar molecularmente cepas de Micoplasma sinoviae y gallisepticum en aves reproductoras y ponedoras comerciales. -Determinar la presencia de anticuerpos especficos contra el virus del Nilo (West Nile) en aves comerciales de traspatio y de vida libre.

-Determinar la presencia de anticuerpos especficos contra el virus de Influenza Aviar en aves comerciales y de vida libre. -Aislar mediante tcnicas estndares y caracterizar molecularmente el virus de Influenza Aviar en aves comerciales, de traspatio y de vida libre.

- Aislar agentes bacterianos que afectan la produccin avcola mediante tcnicas estndares y moleculares. ACTIVIDADES -Seleccionar la metodologa a utilizar para la toma de muestra segn el agente patgeno. -Toma de muestras en campo -.Aislar los diferentes agentes virales que afectan la produccin avcola. -Aislar agentes bacterianos que afectan la produccin avcola. -Utilizar tcnicas basadas en biologa Molecular como herramientas de diagnstico. -Utilizar Tcnicas de Histopatologa como herramienta diagnstica. -Utilizar Tcnicas serolgicas como herramienta diagnstica. -Atender las demandas del productor. -Realizacin de Informes. PRODUCTOS -Lograr a travs de la validacin y estandarizacin de las diferentes tcnicas de diagnstico: Inhibicin de la hemoaglutinacin PARA Influenza Aviar (IH) Reaccin en Cadena de la Polimerasa (RCP), aislamiento viral de los Neumovirus aviares, cumplir con los objetivos establecidos y as obtener informacin sobre estos agentes etiolgicos causantes de enfermedades y merma en la produccin avcola nacional, con el fin de elaborar estrategias de manejo y control basadas en la interpretacin y discusin de los resultados. Los resultados esperados aportaran informacin: Epidemiolgica: comportamiento de los virus durante el estrudio Clnica: relacin entre los signos clnicos, hallazgos morfolgicos y resultados de laboratorio de los agentes en estudio. Serolgica: niveles de anticuerpos circulantes en determinadas reas. Virolgica : informacin sobre el tipo y comportamiento de los virus en estudio. Inmunohistoquimica: deteccin del antgeno en tejidos. Molecular: Identificacin y caracterizacin del genoma de los agentes en estudio ( BIA, EIB, EN, AIA, Neumovirus, Micoplasmas, entre otros). -Detectar la presencia o no de anticuerpos especficos contra IA mediante ELISA y AGP. -Obtener resultados que aporten informacin epidemiolgica, clnica, serolgica, virolgica y molecular de los agentes estudiados, lo que permitir aplicar las medidas correspondientes para disminuir las prdidas econmicas y ofertar un producto de mejor calidad para el consumo del venezolano. Responsable Mariela Brett FECHA Desde 01-05-2007 HASTA 01-05-2012 MONTO 600000000,00