FIACCADORI, F. S.; BORGES, A. M. T.; CARDOSO, D. D. P.; SOARES, C. M. A. Caracterizao molecular de isolados do vrus da hepatite A na cidade de Goinia Gois.

. In: CONGRESSO DE PESQUISA, ENSINO E EXTENSO DA UFG - CONPEEX, 2., 2005, Goinia. Anais eletrnicos do II Seminrio de Pesquisa e Ps-graduao [CD-ROM], Goinia: UFG, 2005. n.p. _________________________________________________________________________________________________________

CARACTERIZAO MOLECULAR DE AMOSTRAS DO VRUS DA HEPATITE A NA CIDADE DE GOINIA GOIS. FIACCADORI, Fabola Souza1; BORGES, Ana Maria Tavares2; CARDOSO, Divina das Dores de Paula3; SOARES, Clia Maria de Almeida4 Palavras-chave: vrus da hepatite A; sequenciamento; genotipagem 1.INTRODUO (Justificativa e Objetivos) A hepatite pelo vrus A (VHA) problema de sade pblica em todo o mundo, incluindo o Brasil. O VHA membro da famlia Picornaviridae, gnero Hepatovrus. O genoma RNA fita simples sentido positivo, com aproximadamente 7,5Kb (Provost et al., 1975; Cohen et al., 1987; Minor 1991; Buchen-Osmond 2003). O VHA sorotipo nico (Gellis et al., 1945; Rakela et al., 1976; Lemon & Binn 1983) no entanto anlise filogentica feita a partir de um segmento de 168 nucleotdeos da juno VP1/2A do genoma do VHA, levou definio de sete gentipos (I VII) que diferem entre si de 15 a 25%. Os gentipos I e III so subdivididos em subgentipos A e B, os quais diferem em aproximadamente 7,5% na posio das bases. O gentipo I predominante em todo o mundo e no Brasil tem sido observada a circulao dos subgentipos IA e IB (Robertson et al., 1992; de Paula et al., 2002 e 2004; Villar et al., 2004), muito embora poucos estudos tenham sido realizados a este respeito no pas. Este estudo, o primeiro realizado na cidade de Goinia Gois, apresenta dados referentes aos gentipos do VHA circulantes na regio. 2.MATERIAL E MTODOS 2.1 Amostragem O material de estudo foi constitudo de dezoito amostras de soro positivas para o RNA do VHA, coletadas no perodo de 1996 a 2001, as quais eram provenientes de indivduos com suspeita clnica de hepatite. O presente estudo foi aprovado pelo Comit de tica em Pesquisa da UFG (COEP-UFG) sob o nmero 22000000289. 2.2 Deteco do RNA viral O ssRNA viral foi extrado a partir dos soros, seguindo o mtodo descrito por Boom et al., (1990) com modificaes. Em seguida, procedeu-se a transcrio reversa para obteno do DNA complementar (cDNA). Este foi submetido a PCR e Nested PCR, utilizando-se iniciadores desenhados para regio codificante da juno VP1/2A do genoma do vrus (de Paula et al., 2002). O produto de amplificao foi submetido eletroforese em gel de agarose 2% e visualizado em transluminador-UV para observao da banda com tamanho esperado de 244pb. 2.3 Sequenciamento e Anlise Filogentica O produto da segunda amplificao foi purificado utilizando-se o Qiaquick PCR Purification Kit (Qiagen), seguindo instrues do fabricante. A reao de sequenciamento foi realizada diretamente, em ambas as fitas, utilizando o DYEnamic ET Dye Terminator Cycle Sequencing Kit for MegaBACE DNA Analysis Systems

FIACCADORI, F. S.; BORGES, A. M. T.; CARDOSO, D. D. P.; SOARES, C. M. A. Caracterizao molecular de isolados do vrus da hepatite A na cidade de Goinia Gois. In: CONGRESSO DE PESQUISA, ENSINO E EXTENSO DA UFG - CONPEEX, 2., 2005, Goinia. Anais eletrnicos do II Seminrio de Pesquisa e Ps-graduao [CD-ROM], Goinia: UFG, 2005. n.p. _________________________________________________________________________________________________________

(Amersham Pharmacia) e o seqenciador automtico (MegaBace 1000 Amersham Biosciences). A pesquisa por similaridade foi feita usando o programa BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) e o alinhamento das seqncias foi gerado usando o programa ClustalX 1.81 (Thompson et al., 1997).

3. RESULTADOS E DISCUSSO A anlise das 18 seqncias obtidas demonstrou alto grau de homologia quando estas foram comparadas a outros isolados do VHA disponveis no GeneBank classificados como gentipo I. Adicionalmente, com a finalidade de se definir os gentipos dos isolados obtidos, anlises filogenticas foram feitas baseadas em um segmento de 168 nucleotdeos da juno VP1/2A do genoma do VHA. Neste procedimento, os isolados obtidos foram comparados com seqncias previamente descritas de isolados de diferentes reas geogrficas, incluindo seqncias representativas de todos os gentipos do VHA (I VII). Todos os isolados do presente estudo foram classificados dentro do gentipo I, sendo oito deles definidos como subgentipo IB e 10 como subgentipo IA. Este resultado est em acordo com outros estudos realizados em diferentes regies do mundo, incluindo pases da Amrica do Sul, os quais caracterizam o gentipo I como sendo o predominante em todo mundo. Ainda, na Amrica do Sul, foi observada uma maior prevalncia do subgentipo IA (Robertson et al., 1992; Daz et al., 1999; Costa-Mattioli et al., 2001; Mbayed et al., 2002). Por outro lado, estudos realizados a partir de isolados brasileiros, confirmaram a circulao prevalente do gentipo I, mas com ocorrncia dos dois subgentipos, IA e IB (de Paula et al., 2002 e 2004; Villar et al., 2004), como tambm observado no presente estudo. 4. CONCLUSO Consideramos que os dados obtidos neste estudo reforam a postulao da existncia de predominncia da ocorrncia do gentipo IA do VHA em todo o mundo. Entretanto, demonstra a co-circulao dos subgentipos IA e IB no Brasil, levando a considerao de que a populao do VHA circulante endemicamente no Brasil, no seria composta somente pelo subgentipo IA, quadro caracterstico dos pases da Amrica do Sul, mas sim, pelos dois subgentipos, IA e IB.

5.REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS BOOM, R., et al. Rapid and simple method for purification of nucleic acids. J Clin Microbiol, v. 28, p. 495-503, 1990. BUCHEN-OSMOND, C. Taxonomy and Classification of Viruses. Manual Clin Microbiol, v. 2, p. 1217-1226, 2003. COHEN, J.I., et al. Complete nucleotide sequence of wild-type hepatitis A virus: comparison with different strains of hepatitis A virus and other picornaviruses. J Virol, v. 61, p. 50-59, 1987.

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FONTE DE FINANCIAMENTO CNPq ________________________________

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Bolsista do Programa de Ps-Graduao em Medicina Tropical (IPTSP), Nvel: Doutorado, rea de Concentrao: Microbiologia, Laboratrio de Virologia IPTSP/UFG, fabiola-bio@uol.com.br 2 Colaboradora, Laboratrio de Virologia IPTSP/UFG, amtborges@hotmail.com 3 Co-orientadora, Laboratrio de Virologia IPTSP/UFG, dcardoso@iptsp.ufg.br 4 Orientadora, Laboratrio de Biologia Molecular ICB/UFG clia@icb.ufg.br