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Evaluacin de la efectividad fotoprotectora en piel de animales de experimentacin del gel cosmtico a base del extracto etanlico del alga

marina Caulerpa flagelliformis Var. ligulata obtenida en la Playa El Chaco provincia de Pisco Ica.

Autores: Hernndez Gmez P., Huaman Sayritupac L., Laura Santa Mara S., Mirano Casafranca M., Vila Hernndez J.

Facultad de Farmacia y Bioqumica - Universidad Nacional San Luis Gonzaga de IcaACIF, Ciudad Universitaria, ICA -Av. Los Maestros S/N Ica. Telfono: 940313721. e-mail: friends_25_2@hotmail.com.

INTRODUCCIN La globalizacin mundial y el acelerado desarrollo de la industria conlleva a que cada vez se utilizen ms combustibles fsiles lo que daa la capa de ozono y hace que estemos ms expuestos a la radiacin ultravioleta de lo que suceda hace medio siglo. La radiacin solar daa directamente la piel, causando disminucin de la respuesta inmunolgica, y aumento del riesgo de cncer de piel, adems de promover el fotoenvejecimiento y exacerbar dermatosis fotosensibles. (lvarez H., Etchechoury E., Zunino C., Lanza M., Val S., 2011). Per, Ecuador y Colombia reciben la mayor dosis de radiacin ultravioleta del planeta, un estudio de campo acerca del estado de la capa de ozono sobre la franja ecuatorial de nuestro planeta, basado en imgenes de 10 satlites e instrumentos distintos de la EXA (Agencia Espacial Civil Ecuatoriana), la Agencia Ambiental Canadiense, la NASA (Administracin Nacional de la Aeronutica y del Espacio), el KNMI (Real Instituto Meteorolgico de Holanda) y el DLR (Centro Aeroespacial Alemn) que prueban la existencia de un gran debilitamiento de la capa de ozono sobre latitudes ecuatoriales. (Cazorla Martnez M., 2013). Estudios epidemiolgicos han establecido una relacin causal entre la exposicin solar y todos los principales tipos de cncer de piel. En el Per, segn el Instituto Nacional de Enfermedades Neoplsicas (INEN), se diagnostican entre 3 000 y 5 000 casos de cncer de piel por ao siendo as la cuarta incidencia despus del cncer de estmago, pulmn y mamas. As dentro de los ltimos cinco aos, se ha duplicado en nuestro pas el nmero de personas con lesiones neoplsicas malignas de piel, de un 2% al 4%, a causa del hbito de exponerse al sol sin proteccin.

Actualmente se pueden encontrar muchos mtodos de fotoproteccin tanto fsicos como qumicos sobre los cuales existen investigaciones acerca de los efectos perjudiciales que causan estos fotoprotectores especialmente los qumicos por su uso en demasa, pues segn la evidencia y algunas investigaciones realizados sugieren que se debe disminuir su uso y aun mejor optar por alternativas provenientes de fuentes naturales. El uso de formas farmacuticas fotoprotectoras a partir de productos naturales es una alternativa para la prevencin contra el dao y perjuicios provocados por la exposicin del epitelio a la radiacin UV. Actualmente, los principales laboratorios y consorcios farmacuticos cuentan con grupos de especialistas multidisciplinarios con lneas de investigacin enfocados a la exploracin etnomdica y quimiotaxonmica; es decir, a la clasificacin de las caractersticas qumicas de las plantas con propiedades medicinales. Los productos naturales que se originan en las plantas se sintetizan a travs de mltiples rutas metablicas y se dividen en metabolitos primarios y secundarios, siendo estos ltimos los ms importantes en lo referente a propiedades anteriormente citada. Actualmente se conocen aproximadamente 30 000 especies de algas marinas distribuidas en todo el mundo, estas especies poseen variadas formas, desde la ms simple estructura celular de 1 a 15 micras (microalgas) hasta las ms complejas que llegan a 60 m. de largo (macroalgas). Numerosas publicaciones en revistas cientficas, les atribuyen a las sustancias bioactivas de origen marino, actividades farmacolgicas como: anticancergenos, antivirales, anti-malricos, anti-fngicos, anti-coagulantes, antibacterianos, entre otros. (Dorta, E., Darias J., San Martn, A. & Cueto, M. 2012) Dentro de estas se encuentran las algas del gnero Caulerpa especies que presentan diversos tipos de actividad biolgica, los cuales son objeto de estudio en diferentes pases, las mismas han sido poco estudiadas o permanecen an por descubrir. Muchos organismos producen diferentes sustancias capaces de absorber luz ultravioleta. Dentro de estos se encuentran las algas y algunas cianobacterias. Estudios en plantas vasculares han demostrado que la RUV-B (Radiacin Ultravioleta B) estimula las vas de produccin de algunos metabolitos incluyendo polifenoles y flavonoles que han demostrado ser compuestos atrapadores de radiacin UV. La presente investigacin consisti en elaborar un gel con actividad fotoprotectora, para la cual se formularon concentraciones (cc) de 2,5%; 5%; 10% y 20% del extracto etanlico del alga marina Caulerpa flagelliformis Var. ligulata, teniendo mayor efecto la cc de 20% en piel de animales de experimentacin.

Se concluye que los geles a base del extracto etanlico del alga marina presentaron actividad fotoprotectora, esta se debe a la presencia de metabolitos secundarios responsables de dicha actividad frente a RUV (Radiacin Ultravioleta). Palabras claves: Radiacin solar, Rayos ultravioleta, Gel fotoprotector, Caulerpa flagelliformis.

OBJETIVOS: Objetivo general Evaluar la Efectividad fotoprotectora en piel de animales de experimentacin de un gel cosmtico a base del extracto etanlico del alga marina Caulerpa flagelliformis Var. ligulata obtenido en la playa el chaco provincia de Pisco - Ica. Objetivos especficos Formular un gel a diferentes concentraciones del extracto etanlico del alga Caulerpa flagelliformis var. ligulata obtenido en la playa el chaco provincia de Pisco - Ica. Realizar el control de calidad del producto terminado a base del extracto etanolico del alga Caulerpa flagelliformis var. Ligulata. Evaluar la efectividad fotoprotectora en el rango UVC por los mtodos macroscpico e histopatolgico.

MATERIALES Y MTODOS: MATERIAL VEGETAL: Algas marinas Caulerpa flagelliformis Var. ligulata. MATERIAL BIOLGICO: 38 Ratones Albinos Cepa Balb/c 53. MATERIAL DE LABORATORIO: Reactivos: Etanol, agua des-ionizada, Carbopol 940, Trietanolamina, Glicerina lquida, Metilparabeno, Propilparabeno. Material de vidrio: Los necesarios para la investigacin. Equipos: Balanza Analtica marca BOECO modelo BPB 31, Rotavapor marca HEIDOLPH modelo LABORATORA 4000), Micropipeta modelo Brand marca TRANSFERPETTE, Balanza de precisin SARTORIUS, pHmetro HANNA.

ENSAYO FITOQUMICO: Recoleccin de las muestras.- Para la presente investigacin, se recolect el alga marina Caulerpa flagelliformis var. ligulata. Provenientes de la playa denominada El chaco (Baha de Paracas) Pisco. Posteriormente se transport para su secado a la ciudad de Ica, para la identificacin de dicha especie. Obtencin de extractos.-El extracto etanlico se obtuvo por el mtodo de maceracin, posteriormente se llev a concentrar a un evaporador rotatorio hasta sequedad.

PRE FORMULACIN Y FORMULACIN DEL GEL FOTOPROTECTOR: Ensayo de solubilidad del extracto etanlico del alga marina.-Se realiz el ensayo para determinar los excipientes solubles que se emplean en el proceso de elaboracin del gel. Preparacin de gel fotoprotector.- Para los ensayos, en la formulacin se usaron las cc de 2.5%, 5%, 10% y 20%. EVALUACIN FARMACOLGICA: DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD FOTOPROTECTORA: Se us 38 ratones albinos de la cepa Balb/C con un promedio de peso entre 24-26 g, se distribuy en 5 grupos experimentales; estos fueron depilados con depile en el rea del lomo del animal de experimentacin 72 horas antes de iniciar cada ensayo. Se utiliz gel del extracto etanlico a concentraciones de 2.5%, 5%, 10% y 20%, un control positivo

(fotoprotector comercial Bahamas), y un grupo control negativo: gel base, que sern aplicados en el lomo y orejas de los animales de experimentacin. Inmediatamente despus de transcurrir el tiempo de exposicin a la lmpara UVC el 1, 2, 3,4, 5,6 y 7 da se evalu. (Soares G, Furtado A, Ramos L. & Moreira M. 2009).

CONTROL DE CALIDAD DEL GEL FOTOPROTECTOR

Controles realizados a la crema.- Se determin el aspecto, textura, color, olor. Determinacin de pH.- Para la determinacin del pH, se utiliz un pH-metro. Se realiz a 25 C, introduciendo directamente el electrodo en las formulaciones obtenidas. Untuosidad, Textura y Aspecto.- Mediante aplicacin del gel en el dorso de a mano. Homogeneidad: Homogneo al tacto, y libre de grumos por visualizacin directa.

RESULTADOS Y DISCUSIN: ENSAYO FITOQUMICO.La recoleccin y conservacin se realiz siguiendo parmetros del manual de mtodos ficolgicos de la Universidad de Concepcin, Chile. Para sus siguientes usos: Clasificacin del material biolgico.- El alga fue identificada como Caulerpa flagelliformis Var. ligulata siguiendo el protocolo de Acleto, C. (1991). Obtencin del extracto.- Se obtuvieron aproximadamente 80 g de extracto etanlico seco del alga marina a partir de 2000 g de muestra previamente procesada. PRE FORMULACIN DEL GEL FOTOPROTECTOR.- Segn el test de solubilidad, el extracto present mayor solubilidad en Glicerina lquida y alcohol, en comparacin con Propilenglicol y agua. FORMULACIN DEL GEL FOTOPROTECTOR.-Se formularon geles a base del extracto etanlico del alga marina a cc 2.5%, 5%, 10% y 20% a los que se le realizaron ensayos de control de calidad donde se obtuvieron resultados aceptables. Caractersticas organolpticas: color (verde limn), olor (suigneris), aspecto, textura (uniforme), aspecto (homogneo). Untuosidad se observ muy buena adhesin y

absorcin en el dorso de la mano. El pH entre 5.0 y 6.0 que es el valor de pH de la piel. Cumpliendo con los requisitos de los productos cosmticos de uso tpico en base a criterios de evaluacin sensorial en productos cosmticos.

EVALUACIN FARMACOLGICA: DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD FOTOPROTECTORA Mtodo macroscpico e histopatolgico.- En la evaluacin clnica macroscpica e histopatolgica de la piel de ratones albinos Balb/ C irradiados con radiacin UVC en el da 7 de la tcnica se observ: GRUPO I: Macroscpicamente: Ratones de piel sana. Histopatolgicamente: Dermis y epidermis sana. GRUPO II: Macroscpicamente: Todos los ratones de este grupo presentaron deshidratacin de piel con intenso eritema en lomos y orejas a punto convertirse en lesiones cstricas descamativas. Histopatolgicamente: Epidermis hiperplsica, ondulante, con patrn de reaccin acantsico leve, con aumento de papilas y crestas interpupilares asociados a severa hiperqueratosis y mnima paraqueratosis. Dermis con infiltrado inflamatorio moderado, a predominio linfocitario, difuso a manera de banda con proliferacin y congestin vascular de dermis superficial y profunda.

GRUPO III: Macroscpicamente: Ratones con intenso en lomos y orejas camino a

deshidratacin de piel y eritema en lesiones cstricas.

convertirse

Histopatolgicamente: Epidermis hiperplsica, ondulante, con patrn de reaccin acantsica leve, con aumento de papilas y crestas interpupilares asociados a severa hiperqueratosis y paraqueratosis. Dermis con infiltrado inflamatorio moderado, a predominio linfocitario, difuso a manera de banda con proliferacin y congestin vascular de dermis superficial y profunda. GRUPO IV: Macroscpicamente: pieles con ligeros eritemas Histopatolgicamente: Epidermis y dermis sin poco perceptibles. microscpicas

alteraciones

significativas con infiltrado inflamatorio moderado. GRUPO V: Macroscpicamente: piel sana. Histopatolgicamente: Dermis y epidermis sana.

DISCUSIN: En la actualidad los ndices altos de radiacin UV causan dao y perjuicios a las molculas biolgicas de gran importancia. Frente a esto existen muchos organismos que producen diferentes sustancias capaces de absorber luz ultravioleta. Dentro de estos compuestos se encuentran los denominados pantalla como las MAAs (Mycosporine -like aminoacids) (Copia J., 2012) producidas por muchas algas y algunas cianobacterias. Caulerpa flagelliformis variedad ligulata es una especie de la que no se han reportado estudios qumicos ni de actividad cosmtica, sin embargo existen referencias bibliogrficas de estudios botnicos. Estudios importantes refieren que el gnero Caulerpa posee las siguientes propiedades farmacolgicas: antiinflamatoria, anticancergena, antiviral, antimalrico, antifngico, anticoagulante, antibacteriano entre otros. La evaluacin clnica macroscpica por observacin directa de los signos drmicos, en piel de animales de experimentacin durante los 7 das de exposicin a radiacin UV, nos demuestra un alto grado de fotoproteccin de los geles a base del extracto a cc de 2.5%, 5%, 10% y 20%, de las cuales result ser la ms eficaz la cc de 20%, observando una relacin directamente proporcional, que a mayor cc del extracto mayor grado de

proteccin frente a RUV. El diagnstico histopatolgico de la piel de los Ratones irradiados con UVC confirma los resultados obtenidos en la evaluacin clnica macroscpica, observando epidermis y dermis sin alteraciones microscpicas significativas con el gel al 20% frente al grupo control negativo que presentaron epidermis con

hiperqueratosis ortoqueratsica leve de aspecto atrfico, y control positivo dermis y epidermis sana. Con esta investigacin se demuestra que las algas marinas pueden ser utilizadas de forma beneficiosa, para el desarrollo de biofrmacos con una amplia aplicacin medicinal, demostrando ser una fuente de aminocidos, terpenos, florotaninos, esteroides, compuestos fenlicos, cetonas y alcanos halogenados y polisulfuros cclicos. La actividad fotoprotectora podra explicarse debido a la presencia de los triterpenos y Los flavonoides. Los triterpenos tienen actividad muy variada de agentes anti cncer, inhibidores de la acetilcolinesterasa y anti inflamatorias. Los flavonoides por la presencia de sus anillos aromticos reducen la absorcin de UVB. La clave para la proteccin es la concentracin de electrones deslocalizados en los anillos bencnicos de las estructuras qumicas de esas sustancias, lo que facilita el traslado de energa, la oxidacin de un solo electrn de los flavonoides por cualquier oxidante tendr una barrera entrpica, porque por lo menos dos protones se intercambian en la reaccin.

CONCLUSIONES: 1. Los resultados obtenidos en este estudio demuestran el efecto fotoprotector del gel cosmtico a base del extracto etanlico del alga marina Caulerpa flagelliformis Var. ligulata obtenida en la playa el chaco provincia de Pisco Ica. 2. El gel cosmtico a base del extracto etanlico del alga marina Caulerpa flagelliformis Var. Ligulata, obtenida en la playa el chaco provincia de Pisco Ica, al 20% presenta una capacidad fotoprotectora alta en la regin UVC comprobados por observacin macroscpica e histopatolgicas en comparacin con un fotoprotector comercial BAHAMAS. 3. El gel cosmtico a base del extracto etanlico del alga marina Caulerpa flagelliformis Var. ligulata cumple con los parmetros de control de calidad de un producto terminado, garantizando su inocuidad.

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3. Copia J. (2012, 1 de Marzo). Efecto de la radiacin ultravioleta B en la produccin de polifenoles en la microalga marina Chlorella sp/Effect of ultraviolet B radiation on the production of polyphenols in the marine microalga Chlorella sp. Latin American Journal of Aquatic Research. Recuperado de:

http://www.readperiodicals.com/201203/2655241041.html#ixzz2hbDdK3Hf

4. Soares, G, Furtado, A.,

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5. lvarez H., Etchechoury E., Zunino C., Lanza M., Val S. (2011). Proteccin a la radiacin solar ultravioleta de tejidos teidos con colorantes naturales. (Informe anual). Buenos aires: Departamento de Diseo Grfico y Multimedia

correspondiente al rea de Comunicacin del INTI y Participacin Social.

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http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-75152003000100003