DETERMINACIN CUALITATIVA DE METABOLITOS SECUNDARIOS DE LA CASCARA DE LIMN SECO (Citrus limonaria) Domnguez Balan Oscar; Justiniano Canul Daniel;

Keb Tamayo Edgar; Martnez Arcos samuel; Quevedo Castrejn Crystal; Trujillo Lpez Angel; Wicab Che G. Caracterizacin biolgica: Bil. Ricardo Efran Gngora Chin Tcnico Docente del CENTRO DE ESTUDIOS DE DESARROLLO SUSTENTABLE Y APROVECHAMIENTO DE LA VIDA SILVESTRE (CEDESU) RESUMEN

RESUMEN El trabajo siguiente tuvo como objetivo la determinacin cualitativa de los

metabolitos secundarios de los extractos de la cascara de Citrus limonaria, se realizaron diferentes extracciones con alcohol y agua, a distintas temperaturas,

para determinar de forma cualitativa los metabolitos secundarios presentes en la C. limonaria, por diferentes mtodos o tcnicas, como la prueba de dragendorff y mtodo de cloruro ferrrico , entre otras. Obteniendo como resultado del macerado acuoso, la presencia de fenoles y taninos, de agrupamientos lactonicos, quinonas y en los de procedencia alcohlica se encontr la presencia de: mucilagos, antocianidinas, terpenos y esteroides. Al trmino de las tcnicas de determinacin cualitativa de los metabolitos que se encontraban en las distintas maceraciones de la hoja C. limonarie,que dieron como resultado una mayor presencia de metabolitos secundarios en los extractos etanolicos. Palabras clave: Cualitativo, metabolitos secundarios, extractos, Citrus limonaria, mtodos.

INTRODUCCION En la sociedad humana desde hace muchos siglos ha padecido toda clase de enfermedades, epidemias, y pandemias, por lo cual ha hecho que se necesiten alternativas para poder remediarlos. Para eso el ser humano ha experimentado todo tipo de maneras de intentar aliviarse de las enfermedades que lo aflige, por ejemplo, creyendo en seres mitolgicos a los cuales ofrecan algo simblico para poder aliviar sus enfermedades. Con el paso de los aos fueron observando que no era una manera lgica de hacerlo; por tal motivo pasaron a buscar otros medios y para eso fueron experimentado con toda clase de cosas para poder aliviar lo que les aconteca en su salud, hasta que se percataron que en las plantas podran encontrar la respuesta para el bienestar a sus males, para ello necesitaban experimentar con las plantas y encontrar que propiedades de ellas eran tiles y es as como da a da se ha recopilado informacin que ha sido delegada por personas llamadas comnmente curanderos, yerbateros, etc.; que hasta el da de hoy ejercen su oficio, de esta manera la sociedad ha llegado a recabar conocimientos en base al uso de estas plantas para su mejorar, tratar o curar algn padecimiento en la salud. Hay diferentes tipos de plantas, todas pueden tener caractersticas similares e inclusive nicas que las hace representativas de su especie, en este artculo hablaremos de la familia de los ctricos en especfico de la especie Citrus limonaria (limn), los fines del uso del limn son muy variados; ya que se puede aprovechar todas las partes que la planta nos brinda, es decir se puede usar las hojas, corteza y el fruto, de este ltimo tambin se puede usar por separado la cascara, la pulpa y las semillas. En este trabajo nos enfocaremos en las propiedades que tiene la cascara del Citrus limonaria al haber pasado en un proceso de secado en estufa y haberlos puestos en maceracin con agua y alcohol.

MARCO TEORICO Los citricos son el principal cultivo frutal del mundo. Se estima que en la actualidad el cultivo de los citricos ocupa una superficie de 7,4 millones de hectareas en las regiones tropicales y subtropicales del planeta, aproximadamente entre los 40o de latitud Norte y los 40o de latitud Sur, aunque las principales areas de produccion se situan entre los 20o Norte y los 20o Sur. La produccion de citricosesta en continuo crecimiento y se estima que en el ano 2007 se superaron los 110 millones de toneladas de frutos producidos (FAO,2007). Los principales paises productores de citricos en el mundo, de mayor a menor, son: Brasil, EE.UU., China, Mexico y Espana. En Brasil y Florida (primera zona productora de EE.UU.) la citricultura esta orientada a la produccion de naranjas para laobtencion de zumo concentrado, al contrario que en Espana donde la mayoria de la produccion es destinada al mercado de fruta fresca. Espana es lider mundial en exportaciones de citricos frescos, sobre todo para el mercado de las mandarinas y clementinas donde supera la cantidad de 1,5 millones de toneladas de producto exportado anualmente (casi el 75% de la produccion total de mandarinas en Espana). En total Espana exporta mas del 50% de su produccion de citricos, lo que nos da una idea de la importancia economica que representa este cultivo para el pas.

Metabolitos Primarios: Son los productos qumicos necesarios para la vida, resultantes del metabolismo vital de todo ser vivo, son: los carbohidratos, los lpidos, las protenas y los cidos nucleicos.

Metabolitos Secundarios: Otros compuestos llamados metabolitos secundarios son subproductos de rutas metablicas normales que ocurren en ciertas especies, siendo particulares dentro de un grupo taxonmico, estado de vida o tejido presentando una distribucin

restringida dentro del Reino Vegetal dando origen a la quimiotaxonoma. Su ocurrencia depende de condiciones externas tales como ataques de patgenos, predadores, cambios trmicos o lumnicos, deficiencias nutricionales o presencia de otros organismos intra o interespecficos. El metabolismo secundario es una caracterstica fundamental de la especializacin, es decir que el compuesto resultante, puede no ser importante para la clula pero s para el organismo como un todo. Los metabolitos secundarios pueden ser bioactivos, pero no jugar un papel esencial en los procesos fisiolgicos del organismo. Algunos metabolitos secundarios son residuos bioqumicos, es decir, productos de actividad enzimtica de substratos no apropiados o productos de destoxificacin o desecho de importancia para la supervivencia y la buena condicin de los organismos. Con pocas excepciones, los metabolitos secundarios pueden clasificados dentro de cinco grupos, de acuerdo con su base biosinttica: fenilpropanos, acetogeninas, terpenoides, esteroides y alcaloides.

Reconocimientos de Metabolitos: El reconocimiento de metabolitos secundarios se realiza por medio de pruebas fitoqumicas preliminares, las cuales son una prueba qumica de caracterizacin consistente en una reaccin qumica que produce alteracin rpida en la estructura molecular de un compuesto, por ejemplo, la modificacin de un grupo funcional, la apertura de un sistema anular, la formacin de un aducto o un complejo, lo cual da por resultado una manifestacin sensible como el cambio de un color, la formacin de un precipitado o el desprendimiento de un gas, dndonos indicios de la presencia o ausencia de un metabolito secundario en particular.

A continuacin se presenta el fundamento de algunas pruebas que utilizaremos en la metodologa.

El reactivo de Fehling se utiliza para la deteccin de sustancias reductoras, particularmente azcares reductores. Se basa en el poder reductor del grupo carbonilo de un aldehdo que pasa a cido reduciendo la sal cprica de cobre (II),

en medio alcalino, a xido de cobre (I). ste forma un precipitado de color rojo. Un aspecto importante de esta reaccin es que la forma aldehdo puede detectarse fcilmente aunque exista en muy pequea cantidad. Si un azcar reduce el licor de Fehling a xido de cobre (I) rojo, se dice que es un azcar reductor.

La prueba de nihidrina se utiliza para la deteccin de aminocidos, actualmente acoplada a sistemas de valoracin automtica. La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) es un oxidante energtico que por una desaminacin oxidativa de los aminocidos conduce a la formacin del aldehdo correspondiente, con liberacin de amoniaco y gas carbnico y formacin de la ninhidrina reducida o hidrindrantina. La molcula de hidridantina, en presencia de otra de ninhidrina, condensa a travs del amoniaco produciendo una estructura denominada indanona o prpura de Ruhemann, manifestando un color rojizo, excepto para la prolina, hidroxiprolina y en menor medida para la histidina. Presenta su mximo de absorbancia a los 570 nm, exceptuando los tres aminocidos reseados anteriormente.

La presencia de mucilagos permite reconocer en los extractos de vegetales la presencia de esta estructura tipo polisacrido, que forma un colide hidrfilo de alto ndice de masa que aumenta la densidad del agua donde se extrae.

Las saponinas son una clase de compuestos qumicos, uno de muchos metabolitos secundarios que se encuentran en fuentes naturales, con saponinas que se encuentran en abundancia en particular, varias especies de plantas. Ms especficamente, son glucsidos anfipticas agrupados, en trminos de la fenomenologa, por el jabn-como la formacin de espuma que producen cuando se agitan en soluciones acuosas, y, en trminos de estructura, por su composicin de uno o ms restos hidrfilos glucsido combinado con un triterpeno lipfilo derivado.

El comercio mundial de citricos experimento un fuerte incremento a partir de mediados del siglo XIX, concretandose en las zonas donde el cultivo podia desarrollarse con facilidad gracias a la climatologia. A finales de este mismo siglo el comercio de Espana, sobre todo con Francia, comienza a ser relevante y la citricultura se trasforma en una actividad lucrativa.

METODOLOGIA Materiales y mtodos. Al limon recolectado se le fue retirando la cascara, el peso obtenido fue de 184 gr que posteriromente se metio a la estufa de desacacion como a las 8 de la maana y obteniendose un peso a medio dia de 58.75 gr. El porcentaje de humedad del limn fue de 68.1%.

Figura 3. Quitando las cascara de limn

Figura 2. Estufa de desecacin

Se realizaron una serie de pruebas para determinar las propiedades que tiene el extracto de la hoja de Citrus aurantium (lima dulce), como son la determinacin de azcares reductores, la determinacin de aminas, los muclagos, principios amargos o astringentes, antocianidinas, determinacin de terpernos o esteroides, saponinas, glucsidos cardiotnicos, determinacin de alcaloides, quinonas y agrupamientos lactnicos. Para la determinacin de azucares reductores se utiliz la prueba de Fehling. Se realiz tomando una gota del extracto de la maceracin de la hoja de Citrus aurantium, se trat con una gota de Fehling A y una gota de deFehling B y se someti a bao mara por tres minutos. La prueba de aminas se determin mediante la tcnica de la Ninhidrina, se tomaron dos gotas del extracto y se le aadieron 2 gotas de ninhidrina al 5 % en etanol, se someti a bao mara por cinco minutos. La determinacin de los muclagos se vio mediante la viscosidad que present el extracto. Para el ensayo de los principios amargos o astringentes se coloc una gota de extracto en placas ELISA y se diluy con 5 gotas de agua, se prob el resultado. La identificacin de antocianidinas se realiz depositando dos gotas del extracto en un tubo de ensayo y se llev a sequedad; el residuo se diluy en 10 gotas de HCL 2N. Posteriormente se coloc el tubo a bao mara durante 15 minutos y para terminar se le agregaron dos gotas de alcohol amlico. La prueba de la triterpenos y esteroides se realiz agregando en un pozo de la placa de ELISA 2 gotas del extracto con 2 gotas de cloroformo, posteriormente se le aadi 2 gotas de anhdrido actico. Se le adicion 2 gotas de cido sulfrico concentrado. En el ensayo de saponinas, en un tubo de ensayo se adicion 1 ml del extracto con 1 ml de agua destilada y se agit la mezcla durante dos minutos.

Para los glucsidos cardiotnicos se agreg 2 gotas del extracto las placas de ELISA se mezcl con 2 gotas de cido 3,5 dinitrobenzoico al 2% en metanol y 2 gotas de Hidrxido de potasio en agua. La prueba de Sudan se us para determinar lpidos y aceites esenciales, se realiz extrayendo 0.5 ml del extracto y adicionndolo en un tubo de ensaye. Se le aadi 0.5 ml de Sudan III al 0.6% en glicerina-agua 1:1. Para la determinacin de flavonoides fue elegido el mtodo de Shinoda. En un tubo de ensaye se aadi 1 ml de agua destilada con 1 ml de extracto, luego se adicion 0.5 ml de cido clorhdrico y un pequeo trozo de magnesio metlico. Despues de haber acabado la reaccin se le adicion 0.5 ml de cido amlico y se agit. Para la deteccin de fenoles y taninos en un tubo de ensaye dispusimos 0.5 ml del extracto, se le aadi 0.25 ml de cloruro frrico al 5% en solucin salina. Al extracto acuoso se le adicion acetato de sodio previo al ensayo. En la

determinacin especifica de taninos, de la prueba anterior extraer 0.5 ml del extracto y se adicion 0.5 ml de gelatina al 1% en cloruro de sodio al 0.85%. Para la deteccin de los alcaloides utilizamos el mtodo de Dragendorff, ocupamos un tubo de ensaye para la determinacin aadiendo 0.5 ml de extracto al igual que 0.5 ml del reactivo de Dragendorff. Posteriormente para la especificacin de quinonas; en un tubo de ensaye se agreg 0.5 ml del extracto y se diluyo en proporcin 1:1 en cloroformo luego se agito esperamos un momento y se agreg 0.5 ml de hidrxido de sodio al 5% y se agito vigorosamente. Para la identificacin de los agrupamientos lactonicos; se agreg a un tubo de ensayo 0.5 ml del extracto obtenido a la cual se le agrego 0.5ml de cido picrico al 1% en etanol y 0.5 ml de hidrxido de sodio al 10% en agua, en esta identificacin solo se observ el cambio de color y la formacin de un precipitado rojo.

RESULTADOS CASCARA DE LIMN SECA PRUEBA DE FEHLING (AZCARES REDUCTORES) MACERACIN AGUA CALIENTE AGUA FRA ALCOHOL FRO ALCOHOL CALIENTE RESULTADO NEGATIVO NEGATIVO POSITIVO POSITIVO

PRUEBA NINHIDRINA (AMINAS) MACERACIN AGUA CALIENTE AGUA FRA ALCOHOL FRO ALCOHOL CALIENTE RESULTADO NEGATIVO NEGATIVO NEGATIVO NEGATIVO

PRUEBA DE MUCLAGOS MACERACIN AGUA CALIENTE AGUA FRA ALCOHOL FRO ALCOHOL CALIENTE RESULTADO NEGATIVO NEGATIVO POSITIVO POSITIVO

PRUEBA DE ANTOCIANIDINAS MACERACIN AGUA CALIENTE RESULTADO NEGATIVO

AGUA FRA ALCOHOL FRO ALCOHOL CALIENTE

NEGATIVO POSITIVO POSITIVO

PRINCIPIOS AMARGOS Y ASTRINGENTES MACERACIN AGUA CALIENTE AGUA FRA ALCOHOL FRO ALCOHOL CALIENTE RESULTADO AMARGO AMARGO ASTRINGENTE ASTRINGENTE

PRUEBA DE TERPENOS Y ESTEROIDES MACERACIN AGUA CALIENTE AGUA FRA ALCOHOL FRO ALCOHOL CALIENTE RESULTADO NEGATIVO NEGATIVO POSITIVO POSITIVO

PRUEBA DE SAPONINAS MACERACIN AGUA CALIENTE AGUA FRA ALCOHOL FRO ALCOHOL CALIENTE RESULTADO NEGATIVO NEGATIVO NEGATIVO NEGATIVO

PRUEBA DE GLCOSIDOS CARDIOTNICOS MACERACIN AGUA CALIENTE RESULTADO NEGATIVO

AGUA FRA ALCOHOL FRO ALCOHOL CALIENTE

NEGATIVO NEGATIVO NEGATIVO

PRUEBA DE LPIDOS MACERACIN AGUA CALIENTE AGUA FRA ALCOHOL FRO ALCOHOL CALIENTE RESULTADO NEGATIVO NEGATIVO NEGATIVO NEGATIVO

PRUEBA DE ACEITES ESENCIALES MACERACIN AGUA CALIENTE AGUA FRA ALCOHOL FRO ALCOHOL CALIENTE RESULTADO NEGATIVO NEGATIVO NEGATIVO NEGATIVO

PRUEBA DE FLAVONOIDES MACERACIN AGUA CALIENTE AGUA FRA ALCOHOL FRO ALCOHOL CALIENTE RESULTADO POSITIVO POSITIVO NEGATIVO NEGATIVO

PRUEBA DE FENOLES Y TANINOS MACERACIN AGUA CALIENTE RESULTADO POSITIVO

AGUA FRA ALCOHOL FRO ALCOHOL CALIENTE

POSITIVO POSITIVO POSITIVO

PRUEBA DE ALCALOIDES MACERACIN AGUA CALIENTE AGUA FRA ALCOHOL FRO ALCOHOL CALIENTE RESULTADO POSITIVO POSITIVO NEGATIVO NEGATIVO

PRUEBA DE QUINONAS MACERACIN AGUA CALIENTE AGUA FRA ALCOHOL FRO ALCOHOL CALIENTE RESULTADO POSITIVO (+++) POSITIVO(+++) POSITIVO(+++) POSITIVO(+++)

PRUEBA DE AGRUPAMIENTO LACTNICOS MACERACIN RESULTADO

AGUA CALIENTE AGUA FRA ALCOHOL FRO ALCOHOL CALIENTE

POSITIVO POSITIVO POSITIVO POSITIVO

DISCUSION Existen programas de mejora gentica que pueden variar dependiendo de las zonas de produccin; hay lugares donde el factor pluvial es muy alto, por lo cual, se busca la manera de que no existan plagas en los rboles y daen los frutos. En otros lugares hay otros factores que se han querido ir erradicando a travs de diferentes estudios regionales. Por esto resulta de gran importancia la seleccin de genotipos que permitan cultivar ctricos en suelos salinos o alcalinos, cidos, inundados, secos. Por lo tanto tenemos que tener en cuenta que estas mejoras genticas que se han hecho a estas plantas son satisfactorias para una mayor produccin de los mismos pero teniendo en cuenta que ya es un producto mejorado genticamente o incluso podra llamarse transgnicos y que ya no es la especie autctona que se conoca.

CONCLUSION El limn es un ctrico que ayuda a combatir muchas enfermedades, ya que tiene un espectro muy amplio sobre estas; las diferentes pruebas efectuadas nos sirvieron para determinar la presencia de metabolitos secundarios en Citrus limonaria, siendo una excelente base de inicio para posteriores investigaciones con fines farmacolgicos y teraputicos. Aunque todavia queda mucho por investigar acerca de este fruto que hace bien al organismo por sus distintas propiedades.

BIBLIOGRAFIA APA http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S1028-47962008000400004&script=sci_arttext http://farmacia.udea.edu.co/~ff/manual2008.pdf http://www.panreac.es/pdf/pdf01/Reactivo-de-Fehling.pdf http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/26aminoacidos.pdf