Rajaofenolnh Espa Ing 02

UNIVERSITE D'ANTANANARIVO
ECOLE SUPERIEURE POLYTECHNIQUE D'ANTANANARIVO

DEPARTEMENT GENIE CHIMIQUE
Mmoire de fin d'tudes pour l'obtention

du diplme d'Ingnieur en Gnie chimique
ANALYSE PAR HPTLC.

RECHERCHE DE METHODES D'EXTRACTION
DE CENTELLA ASIATICA.
Prsent par:
RAJAOFENO Lovasoa Nirina Harilaza
Promotion 2001
UNIVERSITE D'ANTANANARIVO
ECOLE SUPERIEURE POLYTECHNIQUE D'ANTANANARIVO
DEPARTEMENT GENIE CHIMIQUE
Mmoire de fin d'tudes pour l'obtention

du diplme d'Ingnieur en Gnie chimique
EX TRA CTION D E C E NTE LLA AS IATIC A.
E T A N A LY S E QUA N T I TAT I V E
D ES PRINCIPES A CTIFS PA R HPTL C
Prsent par:
RAJAOFENO Lovasoa Nirina Harilaza
Membres du jury:
Prsident
: Monsieur RAHARIJAONA Tovo Robin
Rapporteur : Madame RASOLONDRAMANITRA Jocelyne Valisolalao

Examinateurs : Monsieur ANDRIANARY Philippe
Monsieur RARIMAMPIANINA Rakiady
Monsieur RAZAFIMANDEFITRA Andr
Promotion 2001
Soutenu le 08 Aot 2002
Mais la sagesse, o la trouver ?

O rside lintelligence
La crainte du Seigneur, voil la sagesse
Scarter du mal, cest lintelligence !
Job 2812,28
REMERCIEMENT S
Quelque soit notre vouloir, une telle tude na pas pu tre ralise sans les
grces que Dieu nous a montres depuis toujours, sans le soutien pdagogique,
matriel, culturel et moral de notre entourage.
Notre profonde reconnaissance va Monsieur RAHAR I J A O N A
Tovo Robin,
Chef de dpartement de la filire Gnie Chimique lEcole Suprieure Polytechnique

dAntananarivo, qui a bien voulu tre le Prsident du Jury.
Nos sincres remerciements sadressent Madame RSOLO N DR A M A N I T R A
Jocelyne
Valisolalao, Professeur
titulaire
lEcole
Suprieure
Polytechnique
dAntananarivo, qui est notre rapporteur et qui nous donne de conseils si intelligents
et instructifs, ses remarques nous ont t dun prcieux secours.
Nous
adressons
RAZA M A N D EF I T R A
intgralement
Andr,
notre
Enseignant
profonde
lEcole
gratitude
Suprieure
Monsieur
Polytechnique
dAntananarivo, qui est notre encadreur et qui nous a fait confiance pour la ralisation
de ce travail.
Notre respectueuse considration sadresse Monsieur RAR I M A MP I A N I N A
Rakiady, Directeur de la socit SOTRA M E X, qui nous a si aimablement prt ses
matriels pendant la ralisation exprimentale de ce mmoire. Nous sommes heureux
quil sige parmi les membres du Jury.
Nous remercions aussi vivement Monsieur ANDR I A N A R Y Philippe, enseignant
lEcole Suprieure Polytechnique dAntananarivo, qui a accept de faire partie du Jury
pour valuer notre tude.
Nous remercions tous les enseignants qui nous ont forms durant nos annes dtudes.
Nous tenons remercier toutes personnes qui nous ont aids de prs ou de loin
pendant la ralisation de ce mmoire de fin dtudes en particulier :
-
Monsieur
Alain
LO I S E A U,
Directeur
Recherche
Laboratoire ROCHE N ICHOL A S Division SERDEX Paris,
et
Dveloppement
du
Extraction de Centella asiatica et analyse quantitative des principes actifs par HPTLC
La socit SOTRA M E X et ses Ingnieurs chimistes,
Monsieur Jean Franois FERRAT, Directeur Gnral du Groupe ARCO OCEAN

I N D I E N Madagascar.
Que la bndiction de Dieu reste toujours avec notre famille et nos amis qui
nous ont soutenus et encourags tout au long de nos tudes.
Lova RAJAOFENO
TABLES DES MATIERES

INTRODUCTION
Premire partie : CENTELLA ASIATICA ET SES PRINCIPES ACTIFS
Chapitre I. Gnralits
I. Etude de la plante.
I.1. Etude botanique.
I.2. Historique des dcouvertes et travaux sur les principes actifs.
I.3. Les constituants organiques de Centella asiatica.
II. Le vgtal
II.1. Diffrentes varits de Centella asiatica
II.2. Chimiotypie
II.3. Spcificit de Centella de Madagascar.
Chapitre II. Les principes actifs de Centella asiatica : les triterpnes.
I. Gnralits sur les triterpnes
I.1. Dfinition
I.2. Caractristiques des triterpnes
I.3. Biosynthse des triterpnes
II. Les triterpnes actifs de Centella asiatica :
II.1. Mise en evidence.
II.2. Lasiaticoside
II.3. Le madcassoside
II.4. Lacide asiatique
II.5. Lacide madcassique
II.6. L'acide madasiatique
II.7. Solubilit des triterpnes
III. Les diffrents extraits usage pharmaceutique et cosmtique
III.1. LETCA
III.2. Les Htrosides
III.3. LERCA
III.4. Les Gnines amel
III.5. Tableau rcapitulatif des solubilits.
1
2
3
3
3
4
6
7
7
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10
10
10
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11
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19
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21
21
22
22
23
23
23
24
Deuxime partie : ACTIVITE BIOLOGIQUE DE CENTELLA ASIATICA

Chapitre I. Modes daction des principes actifs.
I. Gnralits.
II. Activits des principes actifs sur la peau
II.1. Tests In-vivo.
II.2. Tests In-vitro.
Chapitre II. Les usages
I. Usages traditionnels
II. Usages pharmaceutiques
III. Usages cosmtiques des principes actifs
III.1. Usages cosmtiques de l'acide asiatique
III.2. Usages cosmtiques de l'Extrait titr de Centella asiatica
III.3. Usages cosmtiques des htrosides de Centella asiatica
III.4. Usages cosmtiques des autres principes actifs de Centella asiatica
25
26
26
26
26
30
32
32
32
33
33
34
34
35
Troisime partie : DETECTION, ISOLEMENT ET DOSAGE DES PRINCIPES

ACTIFS DE CENTELLA ASIATICA.
Chapitre I. Mise au point de l'analyse quantitative des principes actifs de
Centella asiatica
I. Principe
II. Appareillage
II.1. Dispostif experimental
II.2. Principe de fonctionnement de l'appareil
III. Mise en oeuvre de la technique
Chapitre II. Lextraction des principes actifs
I. Principe.
II. Procds dextraction :
II.1. Procd ancien
II.2. Procd moderne
II.2.1. Obtention des triterpnes bruts.
II.2.2. Obtention des triterpnes purs
II.2.3. Obtention des autres extraits
III. Essai en laboratoire
III.1. Objectif
III.2. Mode opratoire
III.2.1. Obtention des gnines
III.2.2. Obtention de l'asiaticoside
III.2.3. Obtention d'extrait en poudre
III.2.4. Obtention de gomme
III.3. Rendement en extrait
III.4. Interprtation
Chapitre III. Dosage par HPTLC des principes actifs de lextrait en poudre de
Centella asiatica.
I. Analyse qualitative
II. Analyse quantitative
II.1. Analyse qualitative de l'extrait
II.1. Analyse quantitative d'asiaticoside
II.1.1. Protocole danalyse
II.1.2. Rsultats
II.1.3. Calcul de rendement
II.2. Analyse quantitative des gnines
II.2.1.Protocole d'analyse
II.2.2. Principe de calcul du rendement
II.2.3. Rsultats
III. Rcapitulation
Chapitre IV. Conception d'une unit semi-industrielle d'extraction
Quatrime partie : ETUDE DE LA VARIABILITE DE LA BIOACTIVITE DE
CENTELLA ASIATICA
Chapitre I. Les paramtres identifiables
I. Variabilit-Adaptabilit
II. La dgradabilit de la matire premire vgtale
Chapitre II. Les facteurs de dpendance de la bioactivit de Centella asiatica.
I. Variabilit de Centella asiatica en fonction de la priode de collecte : zone de
I.1. Analyses par HPTLC.
Tananarive
I.2. Rsultats des analyses
36
37
37
37
37
39
39
46
46
46
46
47
47
49
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50
50
50
51
52
52
52
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53
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55
55
55
55
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57
57
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61
63
64
64
65
68
68
68
69
I.3. Critre dacceptabilit

I.4. Commentaires.
II. Variabilit de Centella asiatica en fonction de la zone de croissance
II.1. Analyse par HPTLC.
II.2. Rsultats des analyses
II.3. Critre dacceptabilit
II.4. Commentaires.
69
70
73
73
73
74
75
CONCLUSION.
78
INTRODUCTION
Les Malgaches connaissent bien la plante "Talapetraka" ou Centella asiatica,

travers ses proprits cicatrisantes. L'espce pousse en abondance Madagascar, et a fait
l'objet des divers travaux de recherche pourtant notamment sur la structure des principes
actifs, et sur leurs utilisations pharmaceutiques et cosmtiques. Mais ce jour, aucun
travail n'a t effectu concernant les conditions optimales de l'exploitation de la plante
dont on sait que la teneur en principes actifs est trs variable.
Le prsent mmoire intitul "Extraction de Centella asiatica et analyse quantitative
de ses principes actifs par la HPTLC" propose une approche originale du problme. Notre
tude comporte 4 parties dont les deux premires concernent, du fait de l'importance des
travaux dj raliss sur la plante, la description bibliographique du vgtal, de ses
principes actifs et des diverses utilisations de ceux-ci.
Dans une Troisime partie, nous dcrivons la mise en oeuvre de la technique de la
HPTLC dans le dosage des principes actifs obtenus par l'extraction de la plante. Cette mise
au point de la HPTLC sera mise profit dans l'tude de la variabilit de la bioactivit de la
plante que nous prsentons dans la Quatrime partie.
Nous terminons la prsentation de ce mmoire par une conclusion gnrale.
Lova RAJAOFENO
Premire Partie
CENTELLA ASIATICA ET SES

PRINCIPES ACTIFS
Lova RAJAOFENO
10
CHAPITRE I : GENERALITES
I. ETUDE DE LA PLANTE
I.1. Etude botanique [1] [2] [3] [4]
Centella asiatica est une plante classe dans la famille des Ombellifres du genre
Centella, et connue sous le nom vernaculaire "Talapetraka". Cest une plante rampante,
diffrencie du genre Hydrocotyle par un calice tronqu dont les ptales ne prsentent pas
de dents, par cinq ptales imbriqus dans le bouton, par un mricarpe rticul 7,9 cts et
un involucre bractes prominentes.
Centella asiatica est une herbe polymorphe mettant de nombreux stolons qui
permettent une diffusion rapide et au niveau de laquelle se dveloppe parfois une racine
pivotante importante. Les tiges qui portent de 1 5 feuilles par nud sont cylindriques.
Les ptioles, longs de 0,8 30 cm possdent une base engainante, glabre ou pubescente.
Les limbes sont rniformes, ovales ou subcirculaires. Dun diamtre compris entre 1 7
cm, ils prsentent de nombreuses nervures ainsi quune base corde. Les fleurs regroupes
par 3 ou 4 en ombelles subcapites, ont des ptales circulaires dots dun sommet troit
variant du pourpre au blanc verdtre.
Lova RAJAOFENO
11
Figure n1 : La plante CENTELLA ASIATICA [3]
I.2. Historique des dcouvertes et travaux sur les principes actifs

[3] [4] [5] [6]
Centella asiatica tait connue depuis fort longtemps des populations locales
tablies sur les sites o elle crot. Il y a quelque 3000 ans, les anciens Vdas, dans leur
mdecine Ayurveda, lutilisaient en compresse quils appliquaient directement sur la peau
ou labsorbaient par voie orale afin de cicatriser les blessures et les lsions dermiques
dorigines diverses et les ulcres destomac. Il y a 2000 ans, les premiers crits la
concernant sont inscrits dans les manuscrits sanscrits.
En 1851 : redcouverte du Docteur Boileau .Il avait contract la lpre en soignant
ses patients. Il a utilis la plante Centella asiatica qui produit un effet et amliore son tat
gnral. Par la suite, ses plaies se cicatrisrent; ce qui l'amena effectuer des observations
Lova RAJAOFENO
12
sur dautres malades traits dans les mmes conditions. Il consulte le Docteur Lpine
Pondichry, et aprs des essais cliniques trs tendues, il obtient de bons rsultats. Le
Docteur Hunter, Madras, confirme lamlioration de ltat des patients. En 1857, le
Docteur Devergie affirme que lHydrocotyle asiatica est un cicatrisant, notamment sous la
forme dun extrait hydroalcoolique.
En 1884, Centella asiatica est mentionne dans le codex franais.
Puis, les travaux ne sont repris quen 1930 o le genre Hydrocotyle est rorganis,
et le nouveau genre Centella est dfini du fait des diffrences morphologiques distinguant
les 2 genres. La mention Hydrocotyle a dsign Centella asiatica dans la pharmacope
franaise, mais aujourdhui elle est abandonne
dans la nouvelle pharmacope
europenne.
En 1937, le premier extrait fut prpar par Pierre Boiteau.
En 1941, le professeur Bontemps, Marseille, fait le premier isolement de
lasiaticoside, lun des principes actifs de Centella asiatica, et le professeur Albert Rakoto
Ratsimamanga alors Directeur de Recherche au CNRS (Centre Nationale de Recherche
Scientifique), avec Pierre Boiteau proposent ltude de Centella asiatica Marguerite
Navarron qui consent en financer la recherche dans son laboratoire.
En 1942, R. Razafimahery, lun des premiers ingnieurs chimistes malgaches
montre la prsence dacide libre quil identifie laglycone, acide asiatique de
lasiaticoside.
En 1944, Pierre Boiteau isola les triterpnes de Centella asiatica, et des essais dans
le traitement de la lpre furent tents.
Depuis, de nombreuses recherches ont t menes en chimie.
En 1949, Frrejacque montre lexistence de 3 molcules de sucre dans lasiaticoside : 2
glucoses et 1 rhamnose.
Lova RAJAOFENO
13
En 1955, le professeur Albert Rakoto Ratsimamanga et Pierre Boiteau confirment

lactivit de lasiaticoside, et en 1958, le professeur Albert Rakoto Ratsimamanga et
C.
Boely montrent que Centella asiatica agit galement comme tonique veineux dans la
phlbite et sur les ulcres variqueux.
En 1959, en France, les laboratoires Laroche-Navarron ont mis au point lextraction
industrielle des triterpnes de Centella asiatica et les commercialisent sous le nom de
Madcassol pour rappeler le rle que les Malgaches ont jou dans leur dcouverte.
LAROCHE-NAVARRON est devenu la socit SYNTEX en 1980, puis laboratoire
ROCHE-NICHOLAS en 1995, qui est une filiale du groupe Hoffmann-Laroche.
En 1961, la structure de lasiaticoside est publie par J. Polonsky.
En 1963, T. Rahandraha effectue le dosage spcifique lanthrone de lasiaticoside.
En 1967, H. Pinhas publie la structure du Madcassoside, autre principe actif de
Centella asiatica.
Toutes ces recherches ont permis daboutir avec succs la cration de spcialits
pharmaceutiques et de produits de haute qualit en cosmtologie.
I.3. Les constituants organiques de Centella asiatica [4] [5] [7]

[8] [9]
Il y a dabord les principes actifs, qui sont les 5 triterpnodes pentacycliques dans
la plante :
Les htrosides : lasiaticoside et le madcassoside,
Les gnines ou aglycones : lacide asiatique, lacide madcassique et l'acide madasiatique
en trs faible quantit.
A part ces principes actifs, on peut citer la prsence dautres constituants
organiques de Centella asiatica, savoir :
Lova RAJAOFENO
14
- Des produits lipophiles, son huile essentielle ou la "vellarine", avec un rendement

faible de 10 13 ml/tonne de feuilles sches, qui rend improbable lexploitation de cette
huile essentielle. Lpine avait attribu laction physiologique de la plante son huile
essentielle. Cette huile essentielle se rvla dpourvue dactivit, manifestant par contre
une toxicit leve.
- Des acides gras : acide linolnique, acide linolique, acide arachidonique, acide
olique
- Des quinones
- Des esters qui sont des lactones souvent actives (vermifuges)
- Des strodes : cardnolides, sapognines, strodes (hormones)
- Des coumarines ayant une action sur le systme vasculaire
- Des flavonodes : querctine, kaempfrol agissant comme anti-oxygne ou antiinflammatoire.
- Des anthocyanes l'origine de la coloration des organes des vgtaux
- Des glucides structuraux et nergtiques
- Des lipides simples ou complexes : phospholipides, glucolipides
- Absence dalcalode.
On souponne la prsence dun isomre du madcassoside : le terminoloside, mais sa
prsence na pas t rvle jusqu' ce jour.
II. LE VEGETAL
II.1. Les diffrentes varits de Centella asiatica [2] [3] [10]
La plante prsente, en raison de sa grande extension gographique, des variations

dont linterprtation est assez difficile. Drge a reconnu une forme minor et une forme
major pour lAfrique du Sud, mais il ne semble pas que ce soit l une distinction valable.
Les diminutions varient en effet considrablement avec lhabitat et, dans un mme habitat,
au cours de lanne, suivant le changement dhumidit, de temprature, de luminosit,
etc.La forme gnrale des feuilles, les variations de la pilosit et du dveloppement des
Lova RAJAOFENO
15
involucres semblent permettre la reconnaissance de 3 types principaux entre lesquels

existent toutes les variations possibles :
-
La forme asiatico-malgache : la typica, varit de Centella asiatica limbes

nettement rniformes, bien dentes, dune contexture variable, plus ou moins molle
suivant lhabitat et lpoque de rcolte, pilosit plutt faible ; les bractes de
linvolucre sont subglabres et relativement courtes.
La forme africaine : labyssinica, varit de Centella asiatica
feuilles
suborbiculaires sinus moins marqu, avec dents plus attnues et pilosit

relativement forte ; linvolucre est plus dvelopp que ce que l'on a dans la feuille
prcdente et est entirement recouvert de poils longs et arachnens. Le genre est
rpandu au Kenya.
-
La forme amricaine : la floridana, varit de Centella asiatica feuilles souvent

plus longues que larges, sinus bien marqu, faible pubescence, feuilles parfois
subglabres, dents nettement marques.
II.2. Chimiotypie [5]
On peut galement distinguer les espces en fonction de leurs constituants

chimiques :
-
Centella asiatica de Madagascar et du continent amricain contient 2 triterpnes

principaux : l'asiaticoside, le madcassoside et leurs gnines.
Centella asiatica de l'Inde contient 4 triterpnes principaux, les 2 prcdents,

l'acide thankhulinique trs abondant (5%) et
des isomres tels l'acide
centillique/centelliloside. De part sa composition chimique, notamment l'absence

de gnines, la plante indienne ne peut pas tre exploite pharmaceutiquement. Par
contre, celle en provenance de Madagascar qui pousse l'tat sauvage possde une
activit thrapeutique malgr une variation frquente de la proportion
asiaticoside/gnines.
Lova RAJAOFENO
16
II.3. La spcificit de Centella asiatica de Madagascar [3] [4]
Le laboratoire Roche-Nicholas nexploite que l'espce Centella asiatica provenant

de Madagascar, car daprs leur analyse, c'est la seule espce qui fournit le taux exig
dasiaticoside.
Lova RAJAOFENO
17
CHAPITRE II : LES PRINCIPES ACTIFS DE CENTELLA ASIATICA :

LES TRITERPENES
I. GENERALITES SUR LES TRITERPENES
I.1. Dfinitions [11] [12] [13]
Les terpnes ou carbures terpniques ont pour formule gnrale (C5H8)n. La chane
carbone des terpnes est construite thoriquement par l'union de 2 molcules ou plus
d'isoprne C5H8.
Les monoterpnes sont des carbures en C10H16 (n=2) et leurs drivs.
Les triterpnes sont des composs en C30 (n=6), soit 3 fois (tri) la molcule de
monoterpne. Il existe diffrents types de squelette triterpnique dont voici 2 exemples :
le triterpne ttracyclique et le triterpne pentacyclique.
30
20
12
19
18
9
10
17
19
25
30
25
28
10
Lova RAJAOFENO
18
22
28
14
27
17
16
15
7
6
24
Triterpne ttracyclique
26
9
6
29
13
11
15
21
12
26
16
14
20
29
23
13
11
24
22
21
27
23
Triterpne pentacyclique
18
I.2. Caractristique des triterpnes [12]
Les triterpnes ne sont ni volatils, ni entranables par la vapeur d'eau. Ils ne

deviennent solubles dans l'eau que lorsqu'ils sont combins des sucres (saponosides).
Chez les triterpnes pentacycliques, les gnines paraissent surtout actives quand
elles sont combines des sucres (saponosides).
I.3. Biosynthse des triterpnes [11]
Les triterpnes sont issus de la cyclisation du 3S-2,3-poxy-2,3-squalne ou du

squalne lui-mme. Cette cyclisation conduit en premier lieu aux dammaranes, molcules
ttracycliques. Le compos ttracyclique de type dammarane n'est qu'un intermdiaire qui
volue vers des squelettes pentacycliques : olanane, ursane et lupane qui peuvent euxmmes subir des rarrangements.
Cette laboration des principaux squelettes triterpniques est illustre comme suit :
[O]
1
2
squalne : C 30
H+
O
poxydosqualne
Lova RAJAOFENO
19
H
+
H
OH
OH
Type DAMMARANE
H
H
OH
OH
Type LUPANE
Type TARAXASTANE
H
+
OH
OH
Type OLEANANE
Lova RAJAOFENO
20
OH
Type URSANE
GENINES TRITERPENIQUES
Les lments structuraux qui caractrisent les types Olanane et Ursane sont:
l'existence habituelle d'une insaturation en 12(13), la fonctionnalisation des mthyles,
surtout ceux en 23 et 28 sous forme hydroxymthyle, aldhyde ou carboxyle.
Les composs triterpniques actifs isols de Centella asiatica et qui appartiennent
au type Ursane sont l'acide madcassique 3, l'acide asiatique 4, ainsi que leurs htrosides
1 et 2, puis l'acide madasiatique 5 prsent en trs faible quantit.
Lova RAJAOFENO
21
STRUCTURE CHIMIQUE DE L'ASIATICOSIDE
CH 3
H3 C
20
19
11
18
HO
HO
CH 3
CH 3
1
6
16
15
OH H
14
17
13
OH
22
12
OH
21
CH 3
OH
H
H
O
OH
H
O
H
OH H
O
H
H
CH 2OH
10
OH
OH
CH 3
23
OH
CH 3
2, 3, 23-trihydroxy-ursa-12-ne-28-oate de1[0--L-rhamnopyranosyl-(1-4)-0--D-glucopyranosyl-(16)]-0--D-glucopyranose
1
STRUCTURE CHIMIQUE DE MADECASSOSIDE
Lova RAJAOFENO
14
CH 3
H3 C
OH
OH
H
H
CH 3
HO
CH 3
OH H
O
H
O
OH
H
O
H
OH H
O
H
H
CH 2OH
HO
CH 3
OH
CH 3
OH
OH
OH
CH 3
OH
2, 3, 6, 23-ttrahydroxy- ursa-12-ne-28- oate de 1 [0--L-rhamnopyranosyl-(1-4)-0--D-glucopyranosyl(1-6)]-0--D-glucopyranose.
Acide 2, 3, 6, 23ttrahydroxy-ursa-12-ne-28-oque.
Acide 2,Lova
3,RAJAOFENO
23-trihydroxy-ursa-12ne-28-oque.
15
HO
CO 2 H
HO
CO 2 H
HO
OH
acide madcassique
Acide 2, 3, 6, 23ttrahydroxy-ursa-12-ne-28-oque.
HO
HO
HO
HO
OH
HO
acide asiatique
Acide
3, 3,
23-trihydroxy-ursa-12Acide2,2,
6-trihydroxyne-28-oque.
ursa-12-ne-28-oque.
Lova RAJAOFENO
acide madasiatique
Acide 2, 3, 6-trihydroxyursa-12-ne-28-oque.
16
II. LES TRITERPENES ACTIFS DE CENTELLA ASIATICA

II.1. Mise en vidence [5] [9] [14]
La mise en vidence des principes actifs de l'extrait de Centella asiatica par la
chromatographie en couche mince (CCM) sur alumine et sur poudre de verre a t
effectue par Rahandraha. Les solvants d'lution utiliss pour le dveloppement sont les
suivants :
- chromatoplaque d'alumine :
systme 1: benzne-thanol-eau (30 : 50 : 4)
systme 2: butanol-thanol-eau-ammoniaque (45 : 5 : 49 : 1)
- chromatoplaque de poudre de verre:
systme 1: actate d'thyle-thanol-eau (30 : 4 : 1)
systme 2: actate d'thyle-thanol-acide actique (48 : 1 : 1)
Un exemple est donn la figure 2. Les rsultats rvlent l'existence de
diffrentes substances dont l'acide asiatique et l'asiaticoside, identifis par l'utilisation de
tmoins.
Figure n2 : Chromatographie de l'extrait de Centella asiatica. [14]

(1) Extrait de Centella asiatica
(4) Glucose
(2) Acide asiatique (tmoin)
(5) Rhamnose
(3) Asiaticoside (tmoin)
(6) Extrait de Centella asiatica
Solvant de migration : benzne-thanol-eau (30 : 50 : 4)
L'analyse par HPTLC dans la socit SOTRAMEX montre plus clairement la

prsence des diffrents constituants actifs (Voir Troisime partie).
II.2. Lasiaticoside [1] [6] [15] [16] [17]

Description : lil nu, lasiaticoside est un corps cristallis; c'est une poudre de
couleur blanche, sans odeur, de saveur amre, aux reflets lgrement brillants et soyeux.
Au microscope, il apparat sous la forme de longues aiguilles, parfois isoles, plus
souvent groupes en branches de gent.
Puret : suprieure 95% (sur produit sec).
Temprature de fusion : 235/238C.
Stabilit : il est stable durant au moins 5 ans.
Pouvoir rotatoire : lasiaticoside est lvogyre.
[]D=-4,80 dans la pyridine
[]D=-15,73 dans l'alcool 60%.
Lasiaticoside a comme formule chimique C48H78O19 et un poids molculaire
PM=958.
D'aprs la nomenclature systmatique, sa structure 1 correspond au
2, 3, 23-trihydroxy-ursa-12-ne-28-oate de 1[0--L-rhamnopyranosyl-(1-4)-0--Dglucopyranosyl-(1-6)]-0--D-glucopyranose.
Lasiaticoside rsulte donc de la combinaison dune molcule dacide asiatique
2 molcules de glucose et une molcule de rhamnose.
L'asiaticoside est considr non comme un oside mais comme un ester, la chane
sucre tant fixe sur le carboxyle de lacide asiatique. Plusieurs constatations sont en
cette faveur :
lasiaticoside est neutre, cest--dire qu'il n'y a pas dacidit titrable au

pH-mtre contrairement aux osides dacides triterpniques.
lhydrolyse de lasiaticoside par lmulsine est impossible, de mme que

lhydrolyse par la rhamnodiastase. Les osides triterpniques sont au
contraire gnralement hydrolysables par lun ou par lautre de ces
enzymes.
Lova RAJAOFENO
18
lasiaticoside na pratiquement pas de pouvoir hmolytique in-vitro alors

que les osides des acides triterpniques ont gnralement une activit
hmolytique plus ou moins forte.
L'asiaticoside est insoluble dans l'ther sulfurique, trs peu soluble dans l'eau,
peu soluble dans l'actate d'thyle et dans l'actone, soluble dans le mlange hydroalcoolique, dans le butanol et dans le butylne glycol, et trs soluble dans la pyridine.
II.3. Le madcassoside [4] [9]

Le madcassoside est une substance de formule brute C48H78O20, de poids
molculaire
PM=974, et dont la structure 2 est dsigne selon la nomenclature
systmatique par :
2, 3, 6, 23-ttrahydroxy-ursa-12-ne-28-oate de1 [0--L-rhamnopyranosyl-(1-4)-0-D-glucopyranosyl-(1-6)]-0--D-glucopyranose.
Il s'agit l encore d'un ester triterpnique, et non d'un oside, car c'est la fonction
carboxyle qui est associe l'un des hydroxyles du premier glucose. La structure de la
chane sucre s'est avre identique celle de l'asiaticoside. La meilleure solubilit de
madcassoside dans les mlanges hydro-alcooliques rsulte de la prsence de
l'hydroxyle supplmentaire en C-6. Le madcassoside est aussi soluble en toute
proportion dans l'eau.
II.4. L'acide asiatique [1] [3] [4] [9]
L'acide asiatique est un corps cristallis. En produit fini, c'est une poudre de
couleur crme, sans odeur.
Temprature de fusion : 245C.
Stabilit: c'est un produit stable.
L'acide asiatique a comme formule brute C30H4805 de poids molculaire PM=488.
La dsignation de la structure 4 correspondante est :
Lova RAJAOFENO
19
Acide 2, 3, 23-trihydroxy-ursa-12-ne-28-oque.
L'acide asiatique a une acidit titrable au pH-mtre.
L'hydrolyse de l'asiaticoside, sous l'action d'acides ou d'alcalis en solutions
hydro-alcooliques peut aboutir l'obtention de l'acide asiatique.
L'acide asiatique est trs soluble dans l'alcool 95%, trs soluble dans la pyridine,
soluble dans le mthanol ainsi que dans le butylne glycol. L'acide asiatique est
insoluble dans l'eau.
II.5. L'acide madcassique [4] [9]

L'acide madcassique est un corps cristallis. En produit fini, c'est une poudre de
couleur blanche.
Temprature de fusion : 265-266C.
Stabilit : c'est un produit stable.
L'acide madcassique a comme formule brute C30H48O6 , de poids molculaire
PM=504 ; sa structure 3 est dsigne par :
Acide 2, 3, 6, 23-ttrahydroxy-ursa-12-ne-28-oque.
L'acide madcassique possde un hydroxyle de plus que l'acide asiatique.
La courbe de neutralisation par la soude au pH-mtre rvle l'existence d'un seul
carboxyle.
On obtient l'acide madcassique par l'hydrolyse acide du madcassoside.
L'acide madcassique est trs soluble dans l'alcool 95%, ainsi que dans la
pyridine. Il est soluble dans l'acide actique et dans le butylne glycol. L'acide
madcassique est insoluble dans l'eau.
II.6. L'acide madasiatique [9][18]
Lova RAJAOFENO
20
A la structure 5 de l'acide madasiatique correspond le nom suivant :

Acide 2, 3, 6-trihydroxy-ursa-12-ne-28-oque.
II.7. Solubilit des triterpnes actifs [4]

Rappelons que le madcassoside est soluble en toute proportion dans l'eau, tandis
que l'asiaticoside est peu soluble dans l'eau. Les gnines sont trs solubles dans l'alcool
95% contrairement aux htrosides.
Du fait de ces solubilits contradictoires, le compromis acceptable c'est d'extraire
les principes actifs de Centella asiatica par l'thanol 50 70%, d'aprs la courbe cidessous de la variation de la quantit extraite en fonction du degr alcoolique.
Figure n3 : Domaines de solubilit des triterpnes actifs
% alcool
95
GENINES
70
50
ASIATICOSIDE
10
MADECASSOSIDE
Quantit des
actifs extraite
III.
LES
DIFFERENTS
EXTRAITS
PHARMACEUTIQUE ET COSMETIQUE [3] [6]
Lova RAJAOFENO
USAGE
21
A partir de combinaisons varies des gnines et htrosides actifs de Centella

asiatica, diffrentes formulations ont t mises au point par la division SERDEX de
Roche-Nicholas Pau pour un usage en pharmacie ou en cosmtologie. On connat,
notamment les produits suivants :
-
L'Extrait Titr de Centella asiatica (ETCA ou TECA)
Les Htrosides de Centella asiatica
L'Extrait Raffin de Centella asiatica (ERCA)
Les Gnines amel.
A chaque extrait est adapt la formulation qui convient. Ainsi, les Htrosides de
Centella asiatica sont hydrosolubles et sont utiliss sous forme de gel et de lait ; l'Extrait
Titr de Centella asiatica quant lui, se prte mieux la prparation de crme ou de gel.
III.1. L'Extrait Titr de Centella asiatica ou ETCA

L'Extrait Titr de Centella asiatica est form par 40% d'asiaticoside et 60%
d'acide asiatique et d'acide madcassique.
En produit fini, c'est une poudre de couleur blanche crme, de saveur doucetre,
lgrement amre.
Sa puret en HPLC est de 95% en produit sec.
Stabilit: L'Extrait Titr de Centella asiatica est stable la temprature ambiante
pendant au moins 5 ans.
Solubilit : l'Extrait Titr de Centella asiatica est insoluble dans l'eau, il est
soluble dans un mlange hydro-alcoolique, assez soluble dans le butylne glycol, et peu
soluble dans le glycrol.
III.2. Les Htrosides de Centella asiatica
Lova RAJAOFENO
22
Les Htrosides de Centella asiatica sont forms par environ 55% de madcassoside,
environ 25% d'asiaticoside et 20% de produits non identifis.
En produit fini, c'est une poudre de couleur blanche crme, de saveur doucetre
lgrement amre, sans odeur.
Sa puret en HPLC est de 75%.
Solubilit : Les Htrosides de Centella asiatica sont trs solubles dans l'eau,
solubles dans l'alcool, dans le glycrol, ainsi que dans le butylne glycol.
III.3. L'Extrait Raffin de Centella asiatica ou ERCA
L'Extrait Raffin de Centella asiatica est form par au moins 20% en

asiaticoside, 20% en madcassoside, 4% en acide asiatique, 4% en acide madcassique
et environ 50% de produits non identifis.
En produit fini, l'Extrait Raffin de Centella asiatica est une poudre de couleur
jaune ple et d'odeur caractristique.
Sa puret en HPLC est suprieure 44% en composs triterpniques.
Stabilit : l'Extrait Raffin de Centella asiatica est un produit stable.
Solubilit : l'Extrait Raffin de Centella asiatica est partiellement soluble dans
l'eau et dans l'thanol, il est soluble dans le butylne glycol et peu soluble dans le
glycrol.
III.4. Les Gnines amel
Les Gnines amel sont forms par environ 25% d'acide asiatique, 55% d'acide
madcassique et 20% de produits non identifis.
En produit fini, c'est une poudre de couleur blanche crme, de saveur doucetre,
lgrement amre.
Sa puret en HPLC est autour de 80%
Lova RAJAOFENO
23
Stabilit : c'est un produit stable.

Solubilit : Il est insoluble dans l'eau, peu soluble dans le glycrol; il est assez
soluble dans l'thanol ainsi que dans le butylne glycol.
III.5. Tableau rcapitulatif des solubilits [3]

Le tableau 1 rsume les solubilits des produits dans diffrents solvants.
Substance
(1 g)
Ethanol
(ml)
Eau
(ml)
Acide asiatique
33
****
6275
**
De
Asiaticoside
87
****
33
****
3667
**
1340
**
43
****
11
*****
28
****
68
****
2
******
1824
**
Extrait Titr de
Centella asiatica
Extrait Raffin de
Centella asiatica
Htrosides
Gnines amel
Indications : * pratiquement insoluble

**** assez soluble
Glycrol
(ml)
Butylne
glycol (ml)
100 1000
**
De 30 100
****
Plus
de 10000
*
De 100 1000
***
De 30 100
****
De 30 100
****
De 100 1000
***
De 10 100
*****/****
De 100 1000
***
De 10 100
*****/****
De 10 100
*****/****
De 30 100
****
** trs peu soluble
***** soluble
*** peu soluble
****** facilement soluble
Tableau 1 : Tableau de solubilit des triterpnes actifs

Cette tude bibliographique nous aura permis de connatre la plante Centella
asiatica, la nature et les proprits physico-chimiques de ses principes actifs, et leurs
utilisations actuelles.
Certains auteurs [2] et [4] ont signal que le taux en principes actifs dans la
plante n'est pas stable, et dpend de diffrents facteurs. Nous aborderons en dtail cet
aspect dans la quatrime partie.
Lova RAJAOFENO
24
Deuxime Partie
ACTIVITES BIOLOGIQUES DE
CENTELLA ASIATICA
Lova RAJAOFENO
25
CHAPITRE I : MODES D'ACTION DES PRINCIPES ACTIFS DE

CENTELLA ASIATICA
I. GENERALITES [3] [6] [19]

Centella asiatica est connue depuis longtemps pour ses proprits cicatrisantes.
De nos jours, elle continue d'tre largement utilise en mdecine traditionnelle o elle
est dsigne sous le nom d'"Herbe du Tigre", et l'on dit que le fameux tigre de Bengale
soigne ses blessures en se frottant sur la plante et en mangeant ses feuilles.
Les extraits de Centella asiatica a donc une action importante sur la peau. Les
proprits anti-inflammatoires et cicatrisantes de ces extraits triterpniques constituent
ses principales activits biologiques.
Mais les triterpnes purifis, extraits de Centella asiatica, sont aussi prescrits
dans le domaine de la rparation tissulaire ou de la restauration de la tonicit veineuse.
Ils sont trs efficaces dans la reconstitution du tissu conjonctif.
Enfin, il est prouv qu'en stimulant la synthse du collagne, ils ont galement
des proprits antioxydantes.
Nous donnons prsent la description de certains tests d'activit raliss soit in vivo, soit
in vitro.
II. ACTIVITES DES PRINCIPES ACTIFS
II.1. In vivo
Application n1 [20]
Evaluation de l'efficacit clinique d'une crme base d'Extrait Titr de Centella
asiatica 1% dans le traitement des vergetures
Lova RAJAOFENO
26
Le but de cette tude est de comparer l'efficacit d'une crme anti-vergeture

contenant 1% d'Extrait Titr de Centella asiatica par rapport celle du placebo. L'tude
a t conduite chez 40 volontaires de sexe fminin prsentant des vergetures rcentes:
20 volontaires recevaient l'Extrait Titr de Centella asiatica, les 20 autres le placebo.
Chaque volontaire devait appliquer 2 fois par jour (matin et soir) l'Extrait Titr de
Centella asiatica ou le placebo sur la zone vergeture, durant 3 mois.
Aprs 3 mois de traitement, la taille des vergetures a significativement diminu pour
les volontaires traites avec l'Extrait Titr de Centella asiatica par rapport au placebo.
La figure n2 montre que la longueur des vergetures subit une diminution ds le
premier mois pour le groupe trait, mais la diffrence n'est significative qu' partir du
deuxime mois. L'amlioration au bout du troisime mois est de 25,7% contre 2,9%
pour le tmoin.
Pour la largeur des vergetures (figure n1), les mmes observations ont t faites
avec une rgression au bout de 3 mois, qui est encore plus importante (37,5% contre
6,4% pour le placebo). La rgression totale est mme observe chez 3 femmes des 20
volontaires traites.
Enfin, on observe une diminution de la couleur des vergetures ds le premier
mois pour le groupe trait, mais la diffrence n'est significative qu' partir du deuxime
mois, comme le montre la figure n3.
En conclusion, la crme base d'Extrait Titr de Centella asiatica a
permis d'obtenir une amlioration importante de l'aspect et de la texture de la peau
vergeture.
Lova RAJAOFENO
27
Produit
Diminution de la largeur
%)(
20 -
Placebo
0- 20 - 40 - 60 - 80 1
Mois
Figure n1 : Variation de la largeur des vergetures [20]
Diminution de la longueur
%)(
Produit
Placebo
10 0- 10 - 20 - 30 - 40 - 50 - 60 -
Mois
Figure n2 : Variation de la longueur des vergetures [20]
Produit
5-
Placebo
4-
Couleur
32100
1
Mois
Figure n3: Variation de la couleur des vergetures [20]
Lova RAJAOFENO
28
Applications n2 [21] [22] [23]

Effet d'une prparation usage topique contenant de l'Extrait de Soja 5%, de
l'Extrait Titr de Centella asiatica 1% et une association de ces 2 extraits dans le
vieillissement cutan chez l'animal
On dfinit le vieillissement cutan comme "un processus irrversible avec un
nombre dcroissant de retour un tat idal".
Cette tude est base sur l'effet de l'application topique d'un phytoestrogne de
l'Extrait Titr de Soja associ un Extrait Titr de Centella asiatica, ou Fadiamone.
On choisit l'Extrait Titr de Soja comme produit associ l'Extrait Titr de
Centella asiatica dans ce traitement car le Soja contient des Isoflavones qui ont des
effets antioxydants, en rduisant la production de peroxyde d'hydrogne H2O2 qui
dgrade les phospholipides membranaires et les protines.
Une tude clinique sur 53 femmes mnopauses avait rvl, aprs l'utilisation de
l'Extrait Titr de Centella asiatica et l'Extrait de Soja sur le visage et l'avant bras, une
amlioration significative de l'clat du teint d un effet anti-radicalaire par diminution
des peroxydes membranaires.
Une exprience ralise sur des rats adultes en application topique a t mene, en
testant les extraits sparment, puis en association.
L'Extrait Titr de Soja concentr 5% contient 12% d'Isoflavones et l'Extrait
Titr de Centella asiatica est concentr 1%.
4 groupes de 4 rats adultes ont t traits pendant 1 mois, leur peau dorsale est
rase chaque semaine, permettant de mener l'tude:
Le premier groupe recevait une application de 0,1 g/cm2 de peau/jour par le
traitement avec l'Extrait Titr de Soja 5%.
Le deuxime groupe recevait une application de 0,1 g/cm2 de peau/jour par le
traitement avec l'Extrait Titr de Centella asiatica 1%.
Lova RAJAOFENO
29
Le troisime groupe recevait une application de 0,1 g/cm 2 de peau/jour par le

traitement du Fadiamone (Extrait titr de Soja 5% associ l'Extrait titr de Centella
asiatica 1%).
Le quatrime groupe recevait une application de 0,1 g/cm2 de peau/jour de
l'excipient.
Rsultats
On observe une augmentation statistiquement significative du contenu en
collagne dans les 3 groupes traits par les actifs par rapport l'excipient:
Dans le groupe trait par l'Extrait Titr de Centella asiatica, le taux de collagne
augmente de 50%.
Dans le groupe trait par l'Extrait Titr de Soja, on note une augmentation de
150%.
Dans le groupe trait par le mlange d'extraits, le taux de collagne augmente de
256%, et il y a une augmentation simultane du dermatane-sulfate laquelle stabilise les
fibres de collagne.
Commentaire
Cette tude met en vidence une augmentation trs importante du taux de
collagne dans les groupes traits par les principes actifs dont les effets s'ajoutent quand
on les associe. Les constituants sont donc complmentaires et susceptibles d'amliorer
les proprits structurales et fonctionnelles du tissu conjonctif noform dans le
vieillissement cutan.
II.2. Test in vitro [4] [24]

Des tudes in vitro ont permis de mettre en vidence les effets antiinflammatoires de l'Extrait titr de Centella asiatica.
Dans le processus complexe de rparation tissulaire mettant en jeu l'ensemble des
lments cellulaires protiniques structuraux ou d'adhrence et les constituants de la
matrice extracellulaire, l'Extrait Titr de Centella asiatica est impliqu directement dans
la coordination ou la rgulation du phnomne rparateur qui succde la phase
inflammatoire aigu.
Lova RAJAOFENO
30
En bref, l'implication de l'Extrait Titr de Centella asiatica dans les diffrentes

phases de la (re)constitution de la peau est souvent en accord avec les observations
pharmacologiques ou cliniques.
Lova RAJAOFENO
31
CHAPITRE II : LES USAGES
I. USAGES TRADITIONNELS [3] [25]

Rappelons quen Inde, il y a longtemps, les anciens Vda l'utilisaient en
compresse qu'ils appliquaient directement sur la peau ou alors l'absorbaient par voie
orale afin de cicatriser les blessures et les lsions dermiques d'origines diverses (y
compris les ulcres d'estomac). Les manuscrits Sanskrits anciens mentionnent
l'utilisation de Centella asiatica dans le traitement des 2 formes principales de la lpre:
une forme lpromatose caractrise par de fortes pousses inflammatoires et qui
ncessite d'tre traite par des substances aux proprits anti-inflammatoires et
cicatrisantes, et une forme tuberculode.
Aujourd'hui en Inde, en Chine ou en Malaisie, cette herbe sche et broye
continue d'tre employe dans le traitement de la lpre, de la bronchite, de l'asthme, du
catarrhe et de la syphilis. Si les Indiens lui prtent volontiers des proprits calmantes,
chez les Malais, elle a la rputation d'tre une plante tonifiante.
A Madagascar, la plante Centella asiatica ou "Talapetraka" est bien connue des
empiriques malgaches qui l'utilisent, en macration dans l'eau, pour la cicatrisation des
plaies lpreuses. Les Malgaches l'utilisent aussi pour le traitement des maux d'estomac,
des eczmas et pour son pouvoir amaigrissant.
En Amrique, on utilise le plus souvent cette plante pour le traitement des
brlures et de la lpre.
II. USAGES PHARMACEUTIQUES DES EXTRAITS DE

CENTELLA ASIATICA [3] [6] [25]
Parmi les mdicaments fabriqus partir de l'extrait de Centella asiatica et
commercialiss, le plus clbre est le Madcassol. Gnralement, les prsentations
galniques sont sous forme de crme, de poudre (dose 2%), de comprims ( 10 mg),
de glules ( 30 mg) ou de compresses imprgnes.
Lova RAJAOFENO
32
Le Madcassol possde 2 indications principales:

Traitement des ulcrations cutanes, des escarres hypertrophiques, des chlodes, et des
dsordres de la cicatrisation.
Traitement de l'insuffisance veino-lymphatique (jambes lourdes, douleurs).
Dans certains pays, l'Extrait Titr de Centella asiatica est associ des
antibiotiques usages dermiques ou des anti-fongiques (en ovule gyncologique).
L'action de l'Extrait Titr de Centella asiatica a t mise en vidence par
diffrents travaux sur la cicatrisation (brlures, chirurgie plastique, ulcre). Il s'agit
d'une action eutrophique sur le tissu conjonctif. Il y a d'une part, augmentation de la
synthse du collagne par les fibroblastes mais galement modulation des drglements
du tissu conjonctif. Ainsi, le produit favorise la rgnration du tissu conjonctif en cas
de perte de substances cutanes (ulcre, plaies, greffes). Certaines tudes ont galement
montr une action dans la rgulation des prolifrations excessives du tissu conjonctif
(chlodes, cicatrices hypertrophiques).
Mais, les domaines actuels d'application pharmaceutique de l'Extrait Titr de
Centella asiatica sont: la cicatrisation et l'insuffisance veineuse.
D'autres applications ont donn des rsultats positifs, notamment
les traumatismes
la Prparation du terrain aux greffes de peaux
les Eczmas
la Syphilis
III. USAGES COSMETIQUES [3] [6]
III.1. Usages cosmtiques de l'acide asiatique
L'acide asiatique est utilis en cosmtologie.
Lova RAJAOFENO
33
L'action de l'acide asiatique permet de desserrer les mailles du filet fibrinode qui
isole les adipocytes et de restaurer les changes cellulaires favorisant ainsi l'limination
des graisses et des dchets accumuls lors du processus d'installation de la cellulite.
Donc en cosmtologie, l'acide asiatique est un produit amincissant du corps.
L'autre application cosmtique de l'acide asiatique est la rgnration du rseau
de fibres de collagne impliqu dans la fermet du tissu conjonctif sous-cutan et
contribuant donner la peau un aspect lisse et jeune. L'acide asiatique est un produit
drainant.
III.2. Usages cosmtiques de l'Extrait Titr de Centella

asiatica
On utilise aussi l'Extrait Titr de Centella asiatica pour des usages cosmtiques.
L'Extrait Titr de Centella asiatica, en renouvelant le collagne en quantit et en qualit,
a une activit dans l'insuffisance veino-lymphatique et des applications intressantes
dans le domaine du drainage. Il permet d'une faon plus gnrale de retrouver un tissu
conjonctif souple et de bonne qualit. La cosmtologie a bnfici de ces travaux ainsi
que d'autres tudes spcifiques cette activit. Sur cette base, il apparat clairement que
l'Extrait Titr de Centella asiatica peut tre utilis avec profit dans les domaines
suivants:
Actions anti-rides et anti-ages, anti-cernes, anti-rougeurs sur le visage
Raffermissant de la peau
Anti-cellulites et amincissant du corps
On peut aussi l'utiliser en maquillage: rouge lvres, fard paupire.
III.3. Usages cosmtiques des Htrosides de Centella asiatica
Les Htrosides sont utiliss dans des prparations usages cosmtiques. Dans le
processus de vieillissement, la rsistance et la cohsion des fibres collagnes diminuent,
entranant un relchement de ce tissu de soutien. La peau prend alors un aspect distendu
et vieilli. On parle, juste titre, de trame conjonctive et l'on peut concevoir un produit
cosmtique base d'Htrosides de Centella asiatica dont l'objectif sera de dgnrer
Lova RAJAOFENO
34
cette trame par l'apport d'un collagne jeune (augmentation quantitative) et de restaurer
la fermet des tissus par l'effet tenseur qu'il entrane (apport qualitatif : rsistance accrue
des fibres de collagne la traction).
Un autre avantage des Htrosides porte sur leur hydro-solubilit permettant leur
incorporation dans des compositions aqueuses, gels et srums. On peut les utiliser donc
comme un srum tenseur sur le visage.
III.4. Usages cosmtiques des autres principes actifs de Centella asiatica
L'Extrait Raffin de Centella asiatica (ERCA) est un extrait de Centella asiatica

dvelopp spcialement pour des applications cosmtiques.
L'Extrait titr de Centella asiatica, en renouvelant le collagne en quantit et en
qualit, permet de retrouver un tissu conjonctif souple et de bonne qualit.
Les gnines amel (acide asiatique + acide madcassique ) entrent aussi dans la
prparation de produits cosmtiques destins rgnrer le tissu conjonctif. On peut les
utiliser comme amincissant du corps.
En dermatologie, de nombreuses tudes ont mis en vidence l'action cicatrisante
et l'activit des 3 triterpnes sur la rgulation du collagne veineux.
Ainsi, la littrature nous renseigne sur le vaste domaine d'application des extraits
de Centella asiatica. Aprs les usages traditionnels dj connus de la plante, les extraits
peuvent aujourd'hui tre dvelopps dans les industries pharmaceutique et cosmtique
grce aux actions des triterpnes sur la peau.
Lova RAJAOFENO
35
Troisime Partie
DETECTION, ISOLEMENT ET
DOSAGE DES PRINCIPES ACTIFS DE
CENTELLA ASIATICA
Lova RAJAOFENO
36
CHAPITRE I : MISE AU POINT DE L'ANALYSE QUANTITATIVE

DES PRINCIPES ACTIFS DE CENTELLA ASIATICA.
L'analyse quantitative des principes actifs de Centella asiatica est difficile

effectuer ; et parmi les diffrentes mthodes d'analyse, seule la mthode HPTLC (High
Performance Thin Layer Chromatography) peut le faire.
I. PRINCIPE
La spcificit de la HPTLC tient au fait que la phase stationnaire est dpose en
un film trs adhrent de faible paisseur (0,1 2,5 mm) sur une surface solide rigide (en
verre).
Avec la HPTLC, il est possible de raliser aussi bien des analyses qualitatives
que quantitatives, alors que la TLC ou CCM (Chromatographie par Couche Mince =
Thin Layer Chromatographie) fait essentiellement de l'analyse qualitative [26].
La HPTLC se prte la sparation des substances ou des composs organiques
contenus dans les mlanges. Dans une analyse quantitative, chaque tache apparaissant
sur la plaque chromatographique est dimensionne, et cette dimension est convertie en
hauteur et en surface des pics donnant la quantit exacte du produit correspondant.
Le dpt d'chantillon, le dimensionnement, la conversion en hauteur et en
surface sont excuts par un ordinateur.
II. APPAREILLAGE
II.1. Dispositif exprimental
Le systme d'appareillage utilis est l'ATS III (Automatic TLC Sampler III ou
Echantionneur Automatique en CCM) ; qui comme son nom l'indique est un dposeur
automatique d'chantillon command par le logiciel ATS III.
Lova RAJAOFENO
37
Il est quip d'un scanner assist par le logiciel CATS III qui dtecte les
principes actifs en scannant les taches correspondantes de la plaque.
Figure n1 : Schma de l'appareil et du scanner
Guide de seringue
Tte
applicateur
Flacon de
rcupration
Unit de rinage
Vial rack
Unit applicateur
Figure n1.a : L'appareil ATS III
Lova RAJAOFENO
38
Figure n1.b : Le scanner
II.2. Principe de fonctionnement de l'appareil

L'chantillon est dpos l'aide d'un capillaire qui, dans le cas d'un dosage, est
reli une seringue guide par un moteur.
Les dpts sont appliqus sur la plaque sous forme circulaire
ou en trait
rectangulaire selon la programmation dsire.

Les chantillons contenus dans des petits flacons sont placs dans les vials par
ranges de 16 (figure n1.a).
III. MISE EN OEUVRE DE LA TECHNIQUE
L'opration comporte plusieurs tapes depuis la prparation de l'chantillon
partir du matriel vgtal jusqu' la dtermination du taux des principes actifs.
Prparation de l'extrait
Un chantillon de 5 g de plante sche (humidit<15%) provenant de Moramanga est
broy jusqu' obtenir des dbris de dimension infrieure 2 mm.
Lova RAJAOFENO
39
L'extraction se fait reflux (80C) dans de l'thanol 70% (50ml) avec agitation et pour
une dure de 30 minutes.
Prparation de la solution analyser
Aprs l'extraction, on passe le mlange sur le papier filtre. On prlve 1 ml du
filtrat que l'on dilue jusqu' 20ml l'aide de l'thanol 70%.
Dpt
L'applicateur ATS III excute 2 types de dpts : 2 l et 8 l de la solution
prcdente, ce qui correspond des quantits infinitsimales. Simultanment, on
effectue le dpt d'un standard qui sert la fois identifier les principes actifs et la
dtermination quantitative.
Ainsi, la concentration du jus de la plante Centella asiatica pour faire le dpt
est :
C= 5 g/50 ml/20 (dilution 20 fois)
D'o C= 0,25 g/50ml
Dveloppement
La cuve de migration doit tre d'une tanchit parfaite.
Le solvant de migration est vers dans la cuve quelque temps avant le dbut de la
chromatographie pour saturer l'atmosphre avant l'introduction de la plaque. Le solvant
progresse vers le sommet de la plaque suivant un front bien horizontal lorsque
l'atmosphre est convenablement sature. Le systme de solvant de migration utilis est
: acide actique- chloroforme-eau (2 : 1 : 1).
La migration est arrte lorsque le front est environ 1 cm du sommet. La plaque
est ensuite sche l'aide d'un sche-cheveux afin d'liminer le solvant.
Rvlation
La rvlation de la plaque se fait par la pulvrisation d'une solution base d'acide
sulfurique H2SO4 ( Annexe n2) suivie de chauffage environ 100C destin
carboniser les composs spars.
Lova RAJAOFENO
40
Le chromatogramme obtenu est prsent la figure n2.
standard
standard
n3
n2
n1
Figure n2 : Rsultat chromatographique

D1 D4
D2 deDl'analyse
D3 Dde6 la plante
D1 Centella
D4 D2 asiatica
D5 D3 D6
5
La comparaison avec le standard permet d'identifier les principes actifs suivants:
-
asiaticoside: couleur gris fonc, Rf = 0,2. (n1)
acide madcassique: couleur violette, Rf = 0,65 (n2)
acide asiatique: couleur bleu, Rf = 0,75 (n3)
- Lecture
La dtermination quantitative se fait par une lecture au scanner de la plaque dveloppe.
Chaque tache de la plaque est traduite sous forme d'un pic dont la surface et la hauteur
expriment la quantit de substance contenue dans la tache.
La figure n3 donne les rsultats de cette lecture.

Lova RAJAOFENO
41
Rf
Figure n3 : Rsultats de la lecture au scanner

Calcul de rendement
On effectue le calcul de rendement des gnines et de l'asiaticoside sur 2 dpts de
concentration diffrente. En effet, la plante est souvent riche en asiaticoside et le calcul
de son rendement se fait sur le dpt de 2 l, en rgression linaire ou en rgression
polynomiale, tandis que celui des gnines est fait sur le dpt plus concentr de 8 l.
Remarque : La rgression linaire et la rgression polynomiale sont des
paramtres de calibrage utiliss par l'ordinateur lors de la dtermination des quantits
des principes actifs contenus dans la plante, l'quation de base de la rgression linaire
est y=ax+b, tandis que celle de la rgression polynomiale est y=ax2+bx+c.
Taux d'asiaticoside
Lova RAJAOFENO
42
Hauteur
Surface
g/2 l
g/2 l
Dpt D1
0,218
0,251
Dpt D2
0,233
0,234
Dpt D3
0,269
0,298
A partir des 3 dpts de 2 l et des hauteurs et surfaces des pics reprsentant

l'asiaticoside, on peut obtenir le taux moyen d'asiaticoside par le calcul suivant :
( 0,218+0,233+0,269+0,251+0,234+0,298 )/6 = 0,250 g d'asiaticoside/2 l.
Or C= 0,25 g/50 ml soit 10 g/ 2l.
D'o, dans 2 l de dpt:
0,250 g d'asiaticoside dans 10 g de plante Centella asiatica
et masiaticoside = (0,2505)/10 = 0,125 g = 125 mg.
La quantit d'asiaticoside contenu dans 5 g de la plante Centella asiatica est
analyser est : masiaticoside = 125 mg, soit 2,5 % d'asiaticoside par rapport la plante
sche.
Taux d'acide asiatique
Hauteur
Surface
g/8 l
g/8 l
Dpt D4
0,0403
0,0359
Dpt D5
0,0344
0,0346
Dpt D6
0,0658
0,0459
A partir des 3 dpts de 8 l et des hauteurs et surfaces des pics reprsentant les
gnines, on obtient le taux moyen des gnines suivant :
( 0,0403+0,0344+0,0658+0,0359+0,0346+0,0459 )/6 = 0,0428 g d'acide asiatique/8 l.
Or la concentration du jus est C= 0,25 g/50 ml
Lova RAJAOFENO
43
C= 0,25 g/50 ml= 40 g/ 8l.

D'o, dans 8 l de dpt :
0,0428 g d'acide asiatique dans 40 g de plante Centella asiatica
et macide asiatique = (0,04285)/40 = 5,35 mg.
D'o, la quantit d'acide asiatique contenu dans 5 g de la plante Centella asiatica
est : macide asiatique = 5,35 mg, soit 0,107 % d'acide asiatique par rapport la plante
sche.
Taux d'acide madcassique
En Hauteur
En Surface
Dpt D4
g/8 l
*
g/8 l
*
Dpt D5
Dpt D6
0,0308
0,0340
* L'ordinateur n'affiche pas de valeur lorsqu'elle est trop faible par rapport celle du
standard qui est la solution tmoin.
En moyenne, le taux d'acide madcassique contenu dans le dpt de 8 l est :
( 0,0308+0,0340 )/2 = 0,0324 g d'acide madcassique/8 l.
Or la concentration du jus est C= 0,25 g/50 ml

C= 0,25 g/50 ml= 40 g/ 8l.
D'o, dans 8 l de dpt :
0,0324 g d'acide madcassique dans 40 g de plante Centella asiatica
Lova RAJAOFENO
44
et macide madcassique = (0,03245)/40 = 4,05 mg.

D'o, la quantit d'acide madcassique contenu dans 5 g de la plante Centella
asiatica est : macide
madcassique
= 4,05 mg, soit 0,081 % d'acide madcassique par
rapport la plante sche.

Les valeurs de rendement sont rassembles dans le tableau ci-aprs :
Plante
Asiaticoside
Centella
Acide
Acide
Asiaticoside
asiatique
madcassique
+ Gnines
asiatica 5g
Masse
125 mg
5,35 mg
4,05 mg
134,4 mg
Taux
2,5 %
0,107 %
0,081 %
2,69 %
Ces essais montrent que la HPTLC est une mthode fiable et efficace pour l'analyse
quantitative des principes actifs de Centella asiatica.
Lova RAJAOFENO
45
CHAPITRE II : EXTRACTION DES PRINCIPES ACTIFS
I. PRINCIPE
Le principe de l'isolement des principes actifs de Centella asiatica est bas sur la
prcipitation de ces principes actifs par la concentration du filtrat d'extraction. La plante
Centella asiatica sche et de bonne qualit est mise macrer dans un mlange hydroalcoolique. Aprs filtration et dcoloration du filtrat, celui-ci est concentr sous vide
dans un vaporateur rotatif jusqu' l'apparition de prcipit. Le solvant rsiduel est
limin par filtration, et le rsidu constitu par le prcipit est sch sous vide l'tuve
jusqu' l'obtention d'une poudre.
II. PROCEDES D'EXTRACTION:
II.1. Procd ancien [7]
La plante frache est stabilise par une immersion pendant 30 minutes dans de
l'alcool 90% bouillant, en prsence d'une petite quantit de carbonate de calcium Ca
CO3.
Aprs refroidissement, le liquide alcoolique, spar par dcantation du dpt
terreux qui l'accompagne, ainsi que la solution obtenue par expression du marc sont
rassembls puis concentrs jusqu' une consistance presque sirupeuse.
Cette solution extractive, concentre et aqueuse, est additionne de sous-actate
de plomb en lger excs pour provoquer la prcipitation.
Le prcipit abondant qui prend naissance est spar par filtration du liquide qui
l'accompagne, lav l'eau distille, sch l'tuve 30C et pulvris au mortier. Il
apparat alors sous forme d'une poudre homogne, d'un vert franc.
Lova RAJAOFENO
46
Cette poudre, additionne de son poids de sable lav, est puise froid par de
l'alcool 60%, suivant les rgles habituelles de la lixiviation, jusqu' ce que le solvant
n'entrane plus que des quantits insignifiantes de substances solubles. Ce liquide
d'puisement est dcolor par passage sur un lit de charbon animal, d'o il sort peine
teint de jaune, puis concentr sous pression rduite jusqu' l'vaporation totale de
l'alcool. La solution aqueuse rsiduelle additionne de 1/4 de son volume d'eau laisse
apparatre, aprs plusieurs heures de repos un prcipit blanc jauntre, tantt
floconneux, tantt plus dense, se runissant au fond du vase.
Spar par filtration, ce prcipit est lav l'eau bouillante, sch l'tuve
30C et repris par la plus faible quantit possible d'alcool 70%. Cette nouvelle solution
alcoolique, porte l'bullition est verse lentement la surface d'un volume d'eau
reprsentant environ 100 fois son propre poids.
L'asiaticoside cristallise plus ou moins rapidement en surface, puis gagne
lentement le fond du cristallisoir alors que la couche suprieure, riche en alcool, garde
en solution les quelques impurets, de couleur jaune qui peuvent encore subsister.
Aprs dcantation du liquide, le prcipit cristallin est recueilli sur le filtre, puis
sch.
II.2. Procds modernes [27]
Nous avons signals que diffrents extraits peuvent tre obtenus partir de la
plante Centella asiatica: les triterpnes bruts, les triterpnes purifis, ou bien prpars
par un mlange de ces triterpnes comme l' ETCA. Les schmas de leur obtention sont
donns ici.
Lova RAJAOFENO
47
II.2.1. Obtention des triterpnes bruts
Feuille
Centella asiatica
70% Ethanol
Extraction
Charbon actif
Dcoloration
Dgraissage
Heptane
Concentration
Filtration
Prcipit
70% Ethanol
30% Soude NaOH
Hydrolyse
Acide chlorhydrique
HCl
Filtrat
Concentration
Neutralisation
Concentration
Filtration
Filtration
Prcipit
Prcipit
Schage
Schage
Gnines pentacycliques bruts
Lova RAJAOFENO
Asiaticoside brut
48
II.2.2. Obtention des triterpnes purs
Gnines pentacycliques bruts

Dcoloration
90% Ethanol
Charbon
Concentration
Filtration
Prcipit
Schage
Broyage
Calibration
Homognisation
Gnines pentacycliques purs
Asiaticoside brut
90% thanol
Charbon actif
Dcoloration
Concentration
Cristallisation
Filtration
Cristaux
Schage
Broyage
Calibration
Homognisation
Asiaticoside pure
Lova RAJAOFENO
49
Remarque
D'aprs le travail de Loiseau [14], les prcipits constitus par les triterpnes
apparaissent sous forme de cristaux blanc crme, tandis que la solution-mre fournit,
aprs concentration sec, une gomme rouge.
II.2.3. Obtention des autres extraits

A partir de l'asiaticoside pure et des gnines purs, on peut reconstituer des
mlanges dans des proportions constantes dfinies pour obtenir d'autres extraits de
Centella asiatica usage pharmaceutique et cosmtique. Ainsi, l'Extrait titr de
Centella asiatica ou ETCA connu sous le nom de Madcassol est obtenu par un
mlange constitu de 60% de gnines et 40% d'asiaticoside purs.
III. ESSAIS EN LABORATOIRE

Nous adoptons le schma d'extraction dcrit prcdemment en dterminant les
diffrents paramtres chaque tape de l'opration.
III.1. Objectif
Il s'agit d'obtenir un extrait en poudre de Centella asiatica teneur minimum
garantie en principes actifs, et de dterminer le rendement en extrait sec
III.2. Mode opratoire

Broyage
A l'aide d'un broyeur, on pulvrise les feuilles sches jusqu' obtenir des dbris
de 2mm environ.
Lova RAJAOFENO
50
Macration
La plante broye (1kg) est mise macrer 30C sous agitation et pendant 24
heures dans 8 l d'alcool thylique 70% (annexe n4) dans une cuve tanche.
Filtration
Aprs macration, on procde une filtration la pression atmosphrique avec
essorage.
Le filtrat obtenu a une couleur verte noire cause de la prsence de chlorophylle.
Dcoloration
Le filtrat est additionn de 75g de charbon actif (soit 7,5% de la masse vgtale
qui est le pourcentage ncessaire pour l'limination de la coloration) et soumis une
agitation pendant 1 heure.
Filtration
Les fines particules de charbon actif contenant les chlorophylles adsorbes sont
limines par filtration sous vide travers plusieurs couches de papier filtre ou sur
clite.
Le filtrat obtenu (5,4 l) est de coloration jaune rougetre.
III.2.1. Obtention des gnines

Concentration
Elle se fait l'aide d'un vaporateur rotatif une pression de 0,2 0,3 bars et
une temprature moyenne de 50C. Aprs 3 heures et demie de temps, il reste le tiers du
volume initial, c'est dire 1,6 l.
Prcipitation
Par refroidissement dans un bain de glace de la solution aqueuse prcdente, on
provoque la prcipitation des gnines triterpniques.
Lova RAJAOFENO
51
Filtration
Le prcipit P1 est rcupr par filtration. Ils sont de couleur blanche crme
tandis que le filtrat est de couleur rouge.
III.2.2. Obtention de l'asiaticoside

Sur le filtrat obtenu prcdemment, on poursuit l'vaporation sous vide (0,3 bar)
et 60C jusqu' ce qu'il y ait formation d'un trouble qui apparat au bout d'une heure de
temps: c'est l'asiaticoside qui prcipite. Le volume restant est alors de 520 ml.
Filtration
Le prcipit P2 est isol par une filtration sous vide. Il a un aspect cireux et une
couleur jaune crme.
III.2.3. Obtention d'extrait en poudre
L'extrait en poudre s'obtient par le mlange de P1 et P2 puis schage de ce
mlange dans une tuve 40C et sous un vide de 0,3 bar pendant 72 heures.
La masse sche est ensuite broye au mortier. On obtient ainsi une poudre de
couleur blanc crme et de masse gale 27,8 g.
III.2.4. Obtention de gomme

La gomme est le rsidu de la concentration sec du dernier filtrat. On opre sous
vide (0,3 bar) et 65C pendant 3 heures et demi de temps.
La gomme de couleur rouge a une masse de 199 g. Elle est constitue par les
composs organiques de Centella asiatica autres que les gnines et l'asiaticoside. On
peut la conserver en la dissolvant dans l'alcool 70%.
Lova RAJAOFENO
52
III.3. Rendement en extraits

Une masse de 1 kg de plante sche a fourni 27,8 g d'extrait sec et 199 g de
gomme, soit 226,8 g d'extrait total brut. Les rendements respectifs sont :
Extrait en poudre : 2,78% (P1 + P2 = gnines bruts +asiaticoside brute)
Gomme
: 19,9%
Extrait total
: 22,68%
III.4. Discussion
On obtient un rendement en extrait total autour de 20% (22,68%)

Et on a 2 formes d'extraits : extrait en poudre blanc crme, et extrait en gomme rouge.
Les conditions que nous avons adoptes conviennent donc bien l'extraction des
principes actifs de Centella asiatica :
- Charbon actif : 7,5% de la masse vgtale
- Pression = 0,3 bar
- Temprature = 50C
Lova RAJAOFENO
53
CHAPITRE III : DOSAGE PAR HPTLC DES PRINCIPES ACTIFS

DE L'EXTRAIT EN POUDRE DE CENTELLA ASIATICA
L'extrait en poudre obtenu prcdemment contient les principes actifs l'tat brut
: gnines bruts et asiaticoside brut. L'utilisation de la HPTLC va permettre de dterminer
la teneur en gnines purs et asiaticoside pur contenus dans cet extrait, en suivant le mode
opratoire dcrit au chapitre I- paragraphe III.
I. ANALYSE QUALITATIVE
C'est une dmarche prliminaire qui permet de reprer sur la plaque la prsence des
principes actifs, grce l'utilisation de produits tmoin.
La plaque correspondante est donne en figure n2.
ACIDE
ASIATIQUE
ACIDE
MADECASSIQUE
ASIATICOSIDE
Figure n4 : Rsultat chromatographique de l'analyse de l'extrait en poudre de Centella

asiatica
Acide asiatique: Rf= 0,75.
Acide madcassique: Rf= 0,65.
Asiaticoside: Rf= 0,20.
Lova RAJAOFENO
54
II. ANALYSE QUANTITATIVE

II.1. Analyse quantitative de l'asiaticoside
II.1.1. Protocole d'analyse
Dissolution
Nous effectuons 3 essais en parallles afin de minimiser les erreurs, avec des masses
diffrentes d'extrait en poudre : 80 mg, 110 mg et 140 mg.
Prparation des solutions
L'extrait est dissout chaque fois dans 20 ml d'alcool 70%.
80 mg + 20 ml correspond la solution S1
Dpts, dveloppement et lecture
Pour chacune des solutions, l'appareil effectue un dpt de 2 l.
Le dveloppement se fait en utilisant le systme d'luant : acide actique-chloroformeeau (2 : 1 : 1).
La plaque est ensuite lue par le scanner.
II.1.2. Rsultats
Les rsultats de chaque analyse sont donns en hauteur et surface de pics, partir
desquelles on obtient directement la quantit de l'asiaticoside contenu dans l'extrait.
Lova RAJAOFENO
55
En rgression linaire
En hauteur
En surface
En rgression polynomiale
En hauteur
En surface
S1
g/2 l
0,371
g/2 l
0,337
g/2 l
0,358
g/2 l
0,333
S2
0,542
0,516
0,489
0,469
S3
0,658
0,587
0,608
0,533
II.1.3. Calcul de rendement

Si Q est la quantit en asiaticoside donne en hauteur ou en surface, QE la
quantit correspondante de l'extrait, le rendement en cette substance est (Q/QE)x100, et
le tableau prcdent est transform en tableau de rendement :
En rgression linaire
En hauteur
En surface
En rgression polynomiale
En hauteur
En surface
S1
%
4,46
%
4,22
%
4,47
%
4,16
S2
4,93
4,69
4,44
4,26
S3
4,71
4,19
4,34
3,80
On observe en gnral une valeur de rendement situe entre 4 et 5%, ce qui

permet de dduire la valeur moyenne de rendement suivant :
rendement /nombre d'essais = 4,40%.

L'extrait en poudre contient donc 4,40% d'asiaticoside.
Lova RAJAOFENO
56
II.2. Analyse quantitative des gnines

II.2.1. Protocole d'analyse
Dilution
On dissout 80 mg d'extrait en poudre dans 20 ml d'alcool 70%, et on prpare 3
solutions de dilution diffrente :
S1 : la solution initiale est dilue 10 fois ; pour cela, on prlve 1 ml que l'on
complte 10 ml avec de l'alcool 70%.
S2 : la solution initiale est dilue 11 fois ; on prlve 1 ml que l'on complte 11
ml avec de l'alcool 70%.
S1 : la solution initiale est dilue 12 fois ; on prlve 1 ml que l'on complte 12
ml avec de l'alcool 70%.
Les dilutions sont destines ramener les concentrations des valeurs
comparables celle de la solution standard qui correspond une zone de non saturation
dans laquelle on peut faire les estimations quantitatives.
Dpts, dveloppement et lecture
Pour chacune des solutions, l'appareil effectue un dpt de 8 l.
Aprs dveloppement de la plaque, celle-ci est lue par le scanner.
II.2.2. Principes de calcul du rendement
L'ordinateur CATS III dlivre la courbe donnant les quantits de gnines dans
l'chantillon. Il y a une relation linaire entre la hauteur des pics et la quantit de gnines
prsents ; car cette courbe est une droite.
Ainsi, on peut connatre la quantit des gnines dans l'chantillon partir de
l'quation de cette droite y= ax+b, o y= hauteur des pics donne par l'ordinateur, x=
quantit des gnines dans l'chantillon, et les constantes a et b sont dterminer.
C'est la connaissance de la concentration des solutions standards qui va permettre
de trouver la valeur de ces 2 paramtres (annexe 5).
Lova RAJAOFENO
57
Rappelons que le calcul du taux des gnines est sur le dpt de 8 l; donc l'unit de x est
en g/8 l.
II.2.3. Rsultats
x en g/8 l
Acide
Acide
madcassique
asiatique
(y)
20
Standard
0,1
(y)
16
Solution S1
20
24
Standard
0,2
24
26
Solution S2
22
25
Standard
0,3
30
28
Solution S3
24
26
Calcul du rendement
Les dtails du calcul sont fournis en annexe 5. Les rsultats trouvs sont repris ici pour
un calcul de rendement moyen.
Rendement moyen en acide madcassique

acide madcassique= i/n
n: nombre d'essais et de rsultats = 3.
1 =5,90
2=6,38
3= 6,69
acide madcassique= (5,90+6,38+6,69)/3 =6,32%.

Lova RAJAOFENO
58
acide madcassique= 6,32% d'acide madcassique dans l'extrait brut en poudre.
Rendement moyen en acide asiatique :

acide asiatique= i/n
n: nombre d'essais et de rsultats=3.
1 =7,52
2=7,76
3= 7,81
acide asiatique= (7,52+7,76+7,81)/3 =7,70%.

acide asiatique= 7,70% d'acide asiatique dans l'extrait brut en poudre.
Rendement en gnines: gnines

gnines= acide asiatique + acide madcassique= 6,32 + 7,70 = 14,02%.
Dans l'extrait en poudre, on a 14,02% de gnines.
III. RECAPITULATION
asiaticoside= 4,40%
principes actifs= asiaticoside + gnines= 4,40 + 14,02 =18,42%.
principes actifs= 18,42% de principes actifs dans l'extrait en poudre obtenu.
En rsum, voici la synthse des rsultats :
Tableau n1 : Rendement de l'extrait en poudre par rapport la plante
Plante Centella asiatica 1 kg Extrait en poudre

Masse
27,8 g
Rendement
2,78%
Lova RAJAOFENO
59
Tableau n2 : Rendement en principes actifs par rapport l'extrait en poudre

Extrait
Actifs
Asiaticoside
Acide
Acide
27,8 g
Masse
Rendement
5,12 g
18,42%
1,22 g
4,40%
asiatique
2,14 g
7,70%
madcassique
1,76 g
6,32%
Rendement en principes actifs par rapport la plante

Ce rendement de 18,42% est assez lev car il n'y a pas eu de procd de
purification autre que la dcoloration.
En comparant avec le rsultat de l'analyse quantitative de la plante dans le
chapitre I, le taux de gnines et d'asiaticoside contenu dans la plante n'est pas fixe. La
plupart du temps, le taux en asiaticoside est plus lev, mais pas toujours.
Nous constatons que la technique HPTLC est efficace pour l'analyse quantitative
aussi bien de l'extrait total de la plante Centella asiatica que de l'extrait enrichi en
principes actifs.
Lova RAJAOFENO
60
CHAPITRE IV : CONCEPTION D'UNE UNITE SEMIINDUSTRIELLE D'EXTRACTION

La proposition d'une unit semi-industrielle est indique dans le schma ci-dessous.
Schma : SCHEMA D'UNITE D'EXTRACTION DE CENTELLA ASIATICA

Lgendes
E : Extracteur
B : Ballon de finition
D : Cuve de dcoloration
Ps : Pompe solvant
Ev : Evaporateur
Cp : Cuve de prcipitation
U : Unit de rectification
Pv : Pompe vide
C : Cuve de solvant
S : Source de chaleur
F : Filtre
Lova RAJAOFENO
61
Les feuilles sches de Centella asiatica sont mises macrer dans l'alcool
thylique 70% dans l'extracteur fond filtrant (E) pendant
24 heures et une
temprature T=40C. Le jus est ensuite pass dans la cuve de dcoloration (D)
galement fond filtrant contenant le charbon actif. Le jus et le charbon actif sont
mlangs l'aide d'une turbine pendant un certain temps (1 heure), puis spars par
filtration en utilisant la pompe vide (Pv). Le jus dcolor passe dans l'vaporateur
(Ev). Le solvant alcoolique vaporis est condens et rcupr directement dans la cuve
de solvant (C), tandis que le concentrat va passer dans la cuve de prcipitation (Cp) puis
dans le ballon de finition (B). L'opration dans le ballon de finition (B) se fait sous vide.
Le ballon est muni d'un condenseur et d'une cuve de rcupration de solvant.
La pompe solvant (Ps) est ncessaire pour la circulation de solvant dans cette
unit d'extraction.
La pompe vide (Pv) maintient une pression de 0,3 bar.
Il faut galement d'une unit de rectification de solvant (U) pour atteindre le
degr alcoolique exig pour l'extraction.
Lova RAJAOFENO
62
Quatrime Partie
ETUDE DE VARIABILITE DE LA
BIOCATIVITE DE CENTELLA
ASIATICA
Lova RAJAOFENO
63
CHAPITRE I : LES PARAMETRES IDENTIFIABLES

I. VARIABILITE-ADAPTABILITE [2] [4]
Centella asiatica est une plante trs variable en saison ubiquit.

Sur une mme plantation de Centella asiatica, les feuilles peuvent contenir une quantit
leve de principes actifs pour une priode, et pour une priode ne pas en contenir. Cette
variabilit adaptabilit est illustre par la figure n1 qui montre le priode idale pour la
cueillette se situe entre dcembre et avril.
Principes
Actifs %
Asiaticoside et madcassoside
60
Gnines
30
Septembre
Dcembre
Avril
Septembre
Priode chaude et humide

Figure n1 : Variation du taux de principes actifs en fonction de la saison [2]
Centella asiatica apprcie les endroits humides et ombrags, notamment les berges de
cours deau. Daprs les tudes de Ratsimamanga, la prsence deau fait augmenter la
teneur en principes actifs dans les feuilles de Centella asiatica. Plus lapport en eau est
lev (saison humide), plus les feuilles sont dveloppes et larges. Les principes actifs
vhiculs par la sve se concentrent alors dans les feuilles. Les feuilles restreintes,
rabougries dues une scheresse ou une manque deau, ont une teneur en principes
actifs faibles. Le polymorphisme de la plante est rvlateur de son adaptabilit des
Lova RAJAOFENO
64
conditions climatiques trs diversifies ayant pour consquence une bio activit
extrmement variable.
Au niveau de la plante, les htrosides sont les formes de retenue et les gnines les
formes actives libres pour la dfense de la plante contre les prdateurs ( bactries,
levures ), notamment en saison chaude et humide.
II. LA DEGRADABILITE DE LA MATIERE VEGETALE [4]

Il est important de savoir que Centella asiatica cultive perd toutes ses qualits
pharmacologiques.
Dautre part, les principes actifs de la plante Centella asiatica sont extrmement
sensibles la fermentation enzymatique. Les courbes reprsentes dans la figure n2
indiquent que 72 heures aprs la cueillette, la plante laisse lair se dgrade et les
principes actifs disparaissent totalement.
Ceci tmoigne de lextrme difficult doptimisation de lexploitation de la plante.
Principes actifs
%
Asiaticoside
60
Vitesse de
dgradation
30
Gnines
24
48
72
Heure
Figure n2 : Dgradation dans le temps des principes actifs

On dmontre que lhumidit joue un rle trs important dans la dgradation de la plante.
La courbe de la figure n3 suivante donne la vitesse de dgradation de la plante en
fonction de lhumidit.
100
Lova RAJAOFENO
Dshydratation
plante vivante
13
Ltalit
Stabilit
Humidit
65
Figure n3 : La vitesse de dgradation de la plante en fonction de lhumidit. [4]
Daprs cette courbe, en-de de 13% dhumidit rsiduelle, la plante devient stable. On
peut effectuer son schage au soleil jusqu 20% dhumidit rsiduelle qui baissera
13% pendant la nuit. Dautres procds de schage existent comme le schage industriel
lair puls chaud 70C. Dans tous les cas, il convient dparpiller la masse vgtale
sur une paisseur de moins de 5 cm afin dobtenir une bonne aration.
La plante sche est stocke un sac plastique qui doit maintenir une siccit de moins de
13%.
Ainsi, la considration de la variabilit et de la dgradabilit de Centella asiatica permet
doptimiser lexploitation de cette plante.
1-
en choisissant une priode de cueillette qui concide avec une saison chaude et humide et o
lon trouve un taux maximal en principes actifs.
Lova RAJAOFENO
66
2-
en assurant la collecte au plus tard 36 heures aprs la cueillette au-del desquelles, les
principes actifs connaissent une dgradation acclre,
Dans lattente de la collecte, il faut idalement que la longueur de tige soit entre 2 et 3cm
pour que la plante reste provisoirement vivante. Il est donc ncessaire que les paysans qui
oprent la cueillette reoivent une formation dans ce sens,
3-
en procdant au schage du vgtal immdiatement aprs la collecte pour viter les effets
nfastes de lhumidit,
4-
en adoptant un stockage adquat capable de maintenir le taux optimal de lhumidit.
A chaque tape de lopration intervient lassurance qualit qui value le taux des principes
actifs prsents dans la plante. Cette vrification systmatique est capitale, car delle dpend le
succs de lopration qui est la recherche des proprits pharmacologiques de la plante.
Le schma ci-aprs rsume le rle essentiel de lassurance qualit sur lequel sappuient les
diffrentes tapes :
Cueillette
Collecte
Assurance
qualit
Schage
Extraction
Lova RAJAOFENO
67
CHAPITRE II : LES FACTEURS DE DEPENDANCE

DE LA BIOACTIVITE DE CENTELLA ASIATICA
I. VARIABILITE DE CENTELLA ASIATICA EN FONCTION DE LA

PERIODE DE COLLECTE
Il sagit de suivre au moyen de la HPTLC lvolution de la teneur en principes actifs de

Centella asiatica dans la rgion de Tananarive sur 4 semaines successives.
I.1. Analyses par HPTLC
On procde lanalyse dun chantillon par semaine, soit 4 chantillons analyser
pendant une priode de 4 semaines successives allant du 25 novembre au 20 dcembre
2001.
A chaque chantillon est attribu un de code :
Premire semaine : APB 0148
Deuxime semaine : APB 0149
Troisime semaine : APB 0150
Quatrime semaine : APB 0151
Pour chaque chantillon correspondant une rcolte, on prend 5 g de plante sche
dhumidit 15% au maximum. Aprs broyage, on y ajoute 50 ml dalcool 70%. On
laisse reflux pendant un temps t = 30mn et une temprature T = 80C ; puis on fait
une filtration.
Le filtrat est dilu 20 fois on prlevant 1 ml de ce jus que lon complte 20 ml avec de
lalcool 70%.
Cest partir de cette solution dilue que lon effectue les dpts au moyen de lappareil
ATS III. Lappareil fait 2 dpts de 2 l et de 8 l.
La suite des oprations est la mme que celle dcrite dans la Troisime partie.
Lova RAJAOFENO
68
I.2. Rsultats des analyses

Le tableau n1 donne lensemble des rsultats danalyses sur les 4 chantillons.
SOTRAMEX ANALYSES HPTLC

Expression en indices de qualit
APB01- Rcap 1
Numro d'ordre d'analyse

Analyse opre par :
Mamy
NOV-DEC 01
Date de l'analyse :
Rsultats HPTLC Lot N
APB 0148
CV
APB 0149
CV
APB 0150
CV
APB 0151
CV
Asiaticoside H =
S=
Moy=
A.Asiatique
H=
S=
Moy=
A.Madcassiqu
e
H=
S=
Moy=
Total AA + AMMoy=
75,400
71,100
73,250
2,680
2,680
2,680
0,5
0,7
73,720
63,600
68,660
74,102
80,802
77,452
0,2
0,2
71,190
64,270
67,730
2,680
4,020
3,350
0,5
0,4
40,540
38,040
39,290
1,340
1,340
1,340
2,680
1,340
2,010
4,690
1,340
1,340
1,340
4,690
1,340
1,340
1,340
2,680
>.05
>.05
30,820
26,800
28,810
106,262
Tableau n1 : Rsultats des analyses de Centella asiatica dAntananarivo pendant 1

mois
AA : Acide asiatique
AM : Acide madcassique.
CV : Coefficient de Variance entre les rsultats de 2 dpts.

Moy : Moyenne (H+S)/2 obtenue partir de la hauteur H et de la surface S du pic
correspondant un principe actif.
I.3. Critres dacceptabilit
A partir des rsultats ci-dessus, on peut en dduire si un chantillon est
acceptable ou non, cest--dire, si les quantits prsentes des principes actifs sont
exploitables ou non.
La courbe dacceptation est donc prsente comme suit :
Lova RAJAOFENO
69
Acceptabilit de Centella asiatica

80
75
70
65
60
55
50
Indice de qualit
45
40
35
30
25
20
15
1
Asia 100
Asia 20
APB 0149
3
Asia 80
Asia 0
APB 0150
Asia 60
Accept,si +de..
APB 0151
AA+AM
Asia 40
APB 0148
Figure n4 : Courbe de critre dacceptabilit de Centella asiatica dAntananarivo

pendant 1 mois
En effet, il existe une quation qui permet de passer des rsultats du tableau 1
aux courbes de la figure 4. Les chantillons sont ici reprsents par des courbes qui sont
compars par rapport une courbe dacceptabilit se situant 50 en indice de qualit.
Ainsi, nous lisons les rsultats suivants exprims en indice de qualit :
APB 0148 : IQ = 58
APB 0149 : IQ = 67
APB 0150 : IQ = 53
APB 0151 : IQ = 32
La plante est accepte lorsque IQ est suprieure 50.
I.4. Commentaires
En combinant le tableau 1 et la figure 4, nous pouvons faire les commentaires suivants :
Lova RAJAOFENO
70
Premire semaine : APB 0148 : IQ=58>50, la plante est bonne mme si les gnines sont
faibles en quantits (4,690 : non quantifiables-voir tableau n1), et lasiaticoside a un
taux lev. Donc, lexploitation de cette plante est acceptable.
Deuxime semaine : APB 0149 : IQ=67>50, la plante samliore, le taux de
gnines saccrot trs rapidement : de 4,690 106,262. Les principes actifs sont
abondants dans cette deuxime semaine. Lexploitation de la plante est acceptable.
Troisime semaine : APB 0150 : IQ=53>50, le taux de gnines diminue trs
rapidement : de 162,262 4,690. La plante a une tendance la dcroissance, mais
lindice de qualit reste toujours dans la gamme : suprieure 50. Donc pour cette
troisime semaine, la plante est toujours acceptable.
Quatrime semaine : APB 0151 : IQ=32<50, les taux de gnines et de
lasiaticoside diminuent considrablement jusque presque la moiti, respectivement de
4,690 2,680 et de 67,730 39,290. La plante nest plus exploitable dans cette
quatrime semaine, et on a la fin de cycle de production de principes actifs. Il faut
dcider darrter la cueillette de la feuille. La plante est refuse.
Ces commentaires sont rassembls dans le tableau 2 rcapitulatifs ci-aprs :
Tableau n2 : Commentaires
ANALYSE ET COMMENTAIRES selon courbe d'acceptation .

Lot N
APPRECIATION
APB 0148 Bonne plante, gnines non quantifiables
ACCEPTEE
Lot N
APB 0149 Plante en amlioration, gnines en teneur accrue.
ACCEPTEE
Lot N
APB 0150 Plante acceptable, tendance la dcroissance ?
ACCEPTEE
Lot N
APB 0151 Fin de cycle de production de principes actifs, arrt de la cueillette de la feuille
REFUS
Evolution en actifs
Lova RAJAOFENO
71
On constate que le taux de principes actifs dans la plante de Centella asiatica

volue de semaine en semaine, cest--dire quil est instable dans la plante mme dans
une priode suppose favorable, puisque dcembre est en pleine saison chaude et
humide. En effet, notre tude a montr que la plante est non exploitable la 3 me semaine
du mois de dcembre.
La courbe suivante donne plus clairement lvolution en actifs de cette plante, de la
premire semaine jusqu la quatrime semaine, entre les mois de novembre et de
dcembre 2001.
ZONE TANANARIVE, EVOLUTION EN ACTIFS, base TECA
70
65
60
55
50
IQ
45
40
35
30
25
APB 0148
APB 0149
EV OLUTION TECA de S-48 S-50
APB 0150
APB 0151
Figure n5 : Evolution en actifs pendant 1 mois
Lova RAJAOFENO
72
II. VARIABILITE DE CENTELLA ASIATICA EN FONCTION DE LA

ZONE DE CROISSANCE
On se propose de comparer les teneurs en principes actifs de Centella asiatica

dans 3 chantillons rcolts 3 endroits diffrents : Antananarivo, Ambatondrazaka, et
Moramanga qui sont les 3 zones o se trouve la plante en abondance. Les rcoltes ont
t faites dans la troisime semaine de dcembre.
II.1. Analyses par HPTLC

Aux 3 chantillons sont attribus respectivement les noms de code suivants :
Centella asiatica dAmbatodrazaka : VAT 0151
Centella asiatica de Moramanga : MOR 0151
Centella asiatica dAntananarivo : APB 0151
Pour chaque chantillon, on prend 5 g de plante sche dhumidit 15% au maximum. Le
protocole dextraction et danalyse par la HPTLC est identique celui dcrit dans la
Troisime partie.
II.2. Rsultats des analyses

Comme prcdemment, les rsultats exprims en hauteur et surface de pics sont
rassembls dans le tableau 3.
Lova RAJAOFENO
73
Voici les rsultats des analyses de Centella asiatica dans ces 3 rgions :
SOTRAMEX ANALYSES HPTLC

Expression en indices de qualit
Numro d'ordre d'analyse

Analyse opre par :
AN - 0112 - SP
Mamy
: 21/12/01
Date de l'analyse
Rsultats HPTLC Lot N
VAT 0151
CV
MOR 0151
CV
APB 0151
CV
CV
H=
S=
Moy=
H=
A.Asiatique
S=
Moy=
H=
A.Madcassique
S=
Moy=
Total AA + AM Moy=
36,850
39,830
38,340
1,340
1,340
1,340
1,340
1,340
1,340
2,680
0,3
0,9
59,050
57,600
58,325
60,166
56,950
58,558
30,820
26,800
28,810
87,368
0,3
0,2
40,540
38,040
39,290
1,340
1,340
1,340
1,340
1,340
1,340
2,680
0,5
0,4
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
Asiaticoside
0,1
0,2
-
Tableau n3 : Rsultats des analyses des 3 rgions : Ambatondrazaka-MoramangaAntananarivo.
II.3. Critres dacceptabilit

Ces valeurs sont transcrites sous forme de courbes reprsentes par des droites et dont la
comparaison avec la courbe dacceptabilit situe un indice de qualit de 50 permettra
de se prononcer sur lacceptabilit ou non de lchantillon.
Lova RAJAOFENO
74
Indice de qualit
Acceptabilit de Centella asiatica

80
75
70
65
60
55
50
45
40
35
30
25
20
15
1
6
AA+AM
Asia 100
Asia 20
M OR 0151
Asia 80
Asia 0
APB 0151
Asia 60
Accept,si +de..
-
Asia 40
VAT 0151
Figure n6 : Courbe de critre dacceptabilit de Centella asiatica dans 3 zones : Ambatondrazaka-Moramanga-Antananarivo
Les courbes de la figure 6 donnent les indices de qualit suivants pour les 3 chantillons
tudis :
VAT 0148 : IQ = 31
MOR 0149 : IQ = 57
APB 0150 : IQ = 32
II.4. Commentaires
Sur la base des indices de qualit et des valeurs du tableau 3, nous pouvons faire
les remarques suivantes :
Lova RAJAOFENO
75
1- Zone dAmbatondrazaka VAT 0151 : IQ=31<50, lasiaticoside et les gnines ont

une teneur totale ne dpassant pas le taux exig, donc la plante nest pas
exploitable, et elle est refuse industriellement.
2- Zone de Moramanga MOR 0151 : IQ=57>50, la plante est accepte. On note en
particulier un taux trs lev des acides : 87,368 contre 2,68 pour VAT 0151.
Lexploitation de cette plante de la zone de Moramanga est ainsi accepte.
3- Zone dAntananarivo APB 0151 : IQ=32<50, les taux de gnines et de
lasiaticoside sont faibles, cest--dire, la plante nest pas encore exploitable.
Cette plante de la zone dAntananarivo est refuse industriellement.
ANALYSE ET COMMENTAIRES selon courbe d'acceptation .
Lot N
APPRECI
ATION
VAT 0151
AMBATONDRAZAKA
REFUS
Lot N
MOR 0151
MORAMANGA
ACCEPTEE
Lot N
APB 0151
RGION DE ANTANANARIVO : production faible en actifs.
REFUS
Lot N
Tableau n4 : Commentaires
Comparaison des diverses zones
Le taux de principes actifs dans la plante Centella asiatica varie de zone en zone.
Ce travail danalyse confirme la variabilit et linstabilit de la plante Centella asiatica.
La courbe suivante donne plus clairement la diffrence de taux des principes
actifs de cette plante dans les diffrentes zones, tudies la date du 21 dcembre 2001.
Lova RAJAOFENO
76
COMPARAISON DIVERSES ZONES DE COLLECTE

60
55
50
45
40
IQ
35
30
25
20
15
10
VAT 01 51
MOR 0151
APB 0151
S-50
Srie1
Figure n7 : Influence des zones de collecte

Conclusion : Ce travail danalyses est dat du 21 dcembre 2001, cest--dire en
priode de saison favorable. Or seule la plante venant de Moramanga fournit un taux en
principes actifs normalement acceptable. Il est donc possible quon trouve une
insuffisance de principes actifs dans le plante au niveau de certaines zones mme si on
est dans la priode de collecte ( dcembre-avril).
Centella asiatica est une plante trs fragile. Sa variabilit dpend dun certain
nombre de paramtres qui sont les conditions de cueillette, de collecte, de schage. Le
taux de principes actifs varie en fonction de la priode de collecte et de la zone. Il faut
systmatiquement suivre lvolution de cette plante au moyen de la HPTLC si lon veut
assurer la rentabilit de lexploitation.
Lova RAJAOFENO
77
CONCLUSION
L'tude bibliographique de Centella asiatica montre le grand intrt accord
cette plante doue d'activits biologiques varies, et qui connat aujourd'hui une
utilisation tant pharmaceutique, comme cicatrisant que cosmtique, comme rgnrateur
du tissu conjonctif d'une peau vieillissante.
L'exploitation de la plante exige toutefois de prendre certaines mesures de
prcaution car tout d'abord, la plante s'avre instable et fragile, ensuite parce que le taux
en principes actifs dans la plante subit des variations considrables selon la priode et la
zone gographique de rcolte. Dans le prsent travail, nous montrons en effet que des
chantillons rcolts en priode suppose favorable, c'est--dire en saison chaude et
humide, peuvent encore prsenter un taux trs variable en principes actifs dans un
espace de 4 semaines. D'autre part, des chantillons prlevs Antananarivo,
Moramanga et Ambatondrazaka la mme priode n'ont pas la mme teneur en
principes actifs.
D'o la ncessit absolue de suivre rgulirement l'volution de la plante, et cet
effet, nous apportons ici une dmonstration de l'utilisation efficace de la technique de la
HPTLC combine la lecture au scanner qui est une premire Madagascar.
Au niveau de l'extraction des principes actifs, nos essais en laboratoire ont
permis de les isoler par une cristallisation fractionne, et nous dterminons les
conditions optimales chaque tape de l'opration, notamment la quantit de charbon
actif de dcoloration de l'extrait, les temprature et pression adoptes lors de la
cristallisation.
Mais c'est aussi de la qualit du matriel vgtal dont dpend le succs de
l'opration, et il y a lieu d'imposer un suivi rigoureux des manipulations subies par le
vgtal depuis la cueillette jusqu' l'extraction, en passant par la collecte, l'entreposage
et le schage de la plante.
L'observation de l'une et l'autre de ces prcautions permettent de garantir une
exploitation trs avantageuse de Centella asiatica malgr l'existence de saison morte, et
malgr la complexit du problme.
Lova RAJAOFENO
78
LISTE DES FIGURES

PREMIERE PARTIE
LISTE DES TABLEAUX

PREMIERE PARTIE
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
[1] BOITEAU P., M. CHANES.,. Quelques drivs de l'asiaticoside et de l'acide
asiatique. Vol XV. Dissertationes Pharmaceutae. 1963.
[2] BOITEAU P. Travaux sur l'asiaticoside. Rapports annuels. 1947.
[3] LOISEAU A. "Centella asiatica: Quel avenir en cosmtologie?" Revue, Extrait de
parfums cosmtiques. Actualits de septembre-octobre 1998.
[4] LOISEAU A. " Centella asiatica" Rapport de formation. Janvier 2002.
[5] LOISEAU A. " Les extraits vgtaux ". Rapport d'expos. 2001.
[6] Laboratoire ROCHE NICHOLAS Division SERDEX.:"La Centella asiatica" Revue.
1997.
[7] BONTEMS J. E. Un htroside nouveau, l'asiaticoside. 1940.
[8] LEPINE. Journal pharmaceutique chimique. 3me sr. 1855.
[9] RATSIMAMANGA A. Rakoto. Dictionnaires des plantes malgaches.
[10] DREGE. Documents.
[11] BRUNETON J. Pharmagnosie-Phytochimie-Plante mdicinale, 2me d. Technique
et documentation. 1993.
[12] PARIS R. R., MOYSE H. Matire Mdicale. Collection de prcis de pharmacie.
1972.
[13] RASOLONDRAMANITRA J. Cours de Huiles essentielles. 5me Anne Gnie
chimique. 2001.
[14]
RAHANDRAHA
Thomas.
Dosages
l'anthrone
de
l'asiaticoside
par
chromatographie quantitative sur poudre de verre en couche mince. Annales

pharmaceutiques franaises. 1963.
[15] BOITEAU P., BUZAS A., LEDERER E., et al. Bull. Soc. Chim. Biol. 1949.
[16] SACH. Thse. 1958.
[17] FREREJACQUE. Bull. Soc. Chim. Biol. 1949.
[18] THERON E. Valorisation d'espces vgtales endmiques malgaches des genres
Centella, Helichrysum et Ravensara. 1993.
[19] BOITEAU P. Les triterpnoides. Rle en physiologie animale. 1963.
[20] LAUGEL C. Evaluation de l'efficacit clinique d'une crme base d'Extrait titr de
Centella asiatica dans le traitement des vergetures, vol 18. Les nouvelles dermatologies.
1999.
[21] GIRARD L., COHEN L.. Clinique et biomtrologique de l'efficacit d'une crme
anti-vieillissement cutan contenant un Extrait titr de Soja et Extrait titr de Centella
asiatica. 1998.
[22] MAQUART. Effet d'une prparation usage topique contenant de l'Extrait titr de
Soja et de l'Extrait titr de Centella asiatica dans le vieillissement cutan, vol 19. Les
nouvelles dermatologies. 2000.
[23] MAQUART. Stimulation of collagen synthesis in fibroblast cultures by a triterpene
extracted from Centella asiatica. 1990.
[24] Laboratoire ROCHE NICHOLAS Division SERDEX."Commentaire relatif au

tableau illustrant les principaux rsultats obtenus en biologie molculaire: Centella
asiatica" Communiqu. 2001.
[25] RATSIMAMANGA A. Rakoto. Proprits thrapeutiques des extraits de Centella
asiatica. 1964.
[26] MAHUZIER G., HAMON H.. Mthode de sparation. Tome 2. Abrg de chimie
analytique. 1990.
[27] Laboratoire ROCHE NICHOLAS Division SERDEX. "Les procds d'extractions".
Communiqu. 2002.
LISTE DES ANNEXES
ANNEXE N1 : DFINITION DE QUELQUES MOTS CLS DE MDECINE ET

DE BOTANIQUE...........................................................................................................85
ANNEXE N2 : SYSTME DE RACTIF RVLATEUR.................................... 88
ANNEXE N3 : DTAILS DES RSULTATS DE LANALYSE DE LA PLANTE
ISSUS DE LORDINATEUR........................................................................................89
ANNEXE N4 : PRPARATION DE LALCOOL 70% (OU DUN ALCOOL DE
POURCENTAGE QUELCONQUE)........................................................................... 93
ANNEXE N5 : CALCULS MANUELS DES RENDEMENTS DES GNINES
PARTIR DU TABLEAU DES RSULTATS..............................................................94
Annexe n1 : Dfinition de quelques mots cls de mdecine et de

botanique
Aglycone : Fraction non glucidique de la molcule dun htroside.

Angiogense : Dveloppement de vaisseaux capillaires partir de capillaires
prexistants. (Ce processus intervient notamment dans la cicatrisation mais pourrait
jouer un rle dans la formation de cancers).
Bracte : (lat. bractea, feuille de mtal) : Feuille (dont la morphologie et la taille
diffrent en gnral fortement de celles des autres feuilles du vgtal considr)
laisselle de laquelle un bourgeon a diffrenci une fleur ou une inflorescence.
Calice : (lat. calyx) : Ensemble des pices les plus externes du prianthe (ou spales)
rle minemment protecteur.
Catarrhe : Terme ancien dsignant toute inflammation aigu ou chronique des
muqueuses, accompagne dune hyperscrtion de leurs glandes.
Chimiotactisme : Chimiotaxie manifeste par des cellules isoles et mobiles
[Chimiotaxie : Raction de locomotion oriente et obligatoire dorganismes mobiles,
dclenche et entretenue par une substance chimique diffusant dans le milieu et
seffectuant soit dans sa direction ( chimiotaxie positive), soit dans la direction oppose
( chimiotaxie ngative ).
Collagne : Protine, constituant des fibres entre les cellules du tissu conjonctif.
Cord : Forme dun cur.
Cytokine : Substance peptidique ou protinique synthtise par une cellule du systme
immunitaire (lymphocyte, macrophage) et agissant sur dautres cellules immunitaires
pour en rgules lactivit.
Dermatane-sulfate : Sel de lacide dermatane sulfurique (ou acide chondrotine
sulfurique, on trouve cet acide accumul dans les inclusions cellulaires du tissu
conjonctif du gargoylisme, ainsi que dans les urines de ces malades).
Edaphique : On entend par facteur daphique, des facteurs cologiques uniquement lis
au sol ?
Escarre : Masse noirtre rsultant da la mortification dune portion de tissu sous
linfluence de la gangrne, dune brlure, dune gelure ou de laction dun caustique.
Eutrophique : Qui se rapporte leutrophie, qui est dans un tat deutrophie.

[Eutrophie : Etat normal de nutrition, avec dveloppement rgulier des toutes parties de
lorganisme].
Fibrinode : Terme pour dsigner un aspect pathologique de la substance fondamentale
du tissu conjonctif se caractrisant par sa ressemblance morphologique avec un dpt de
fibrine.
Fibroblaste : Cellule du tissu conjonctif, trs allonge, losangique, denviron 30 sur
10, noyau ovalaire claire nuclol, rappelant celui des cellules rticulaires, et
cytoplasme lgrement basophile, avec des zones dacidiphilie.
Gnine : Toute aglycone des htrosides retirs des digitales [Digitale : nom
vernaculaire de diverses plantes du genre Digitalis]
Glabre : Se dit dun organe dpourvu de poils.
Htroside : Substance glucidique dont lhydrolyse donne 1 ou plusieurs oses et une
substance non glucidique (aglycone).
Isoflavone : Noyau htrocyclique constitu par une -benzopyrone et par un cycle
benznique.
Immuno- : Prfixe indiquant une relation avec lensemble des mcanismes de dfense
dun organisme vivant contre les agents trangers
In vivo : Cest une raction physiologique, biochimique dont on fait ltude
exprimentale dans lorganisme
In vitro : Toutes exploration, exprimentation ou manipulation biologique qui se fait en
dehors de lorganisme, en milieu artificiel, dans des prouvettes par exemple.
Involucre : En botanique, membrane qui enveloppe une structure.
Limbe : Ce terme sert dsigner la partie largie dune feuille ou dune pice florale.
Mricarpe : On dsigne ainsi chacun des lments dun fruit qui se dissocie maturit.
Placebo : Substance et traitement
pouvant amliorer des symptmes chez certains
malades mais sans activit thrapeutique reconnue scientifiquement autre que

psychologique.
Plasmine : Enzyme protolytique plasmatique qui peut dgrader la fibrine et la
fibrinogne et acclrer la dissolution dun caillot sanguin.
Ptale : Chacune des pices, normalement colores, de la colore dune fleur
dangiosperme.
Pubescent : Caractre dun organe qui possde des poils.
Rniforme : Qualifie dun organe qui a la forme dun rein.

Rticul : Se dit dun organe dont la surface est ornemente dun rseau de stries ou de
nervures.
Saponine : Htroside caractris par ses proprits moussantes, prsent dans les
feuilles, les racines et les graines de nombreuses plantes.
Saponoside : Syn. Saponine.
Stolon : Tige arienne, rampante, capable de diffrencier de loin en loin (au point de
contact avec le sol ) tout la fois des racines et des bourgeons feuills, permettant la
multiplication de lindividu.
Subcapit : Trs voisine de la forme capit [capit : se dit dun organe dont lextrmit
est globuleuse, limage dun pingle la tte].
Subcirculaire : Trs voisine de la forme circulaire.
Vergeture : La vergeture est une fine raie cutane, daspect cicatriciel, due la
dintension ou la rupture des fibres lastiques. Cest une cicatrice dermique atrophique
trs probablement dune atteinte de la cellule fibroblastique par les corticodes,
entranant une dgnrescence des protines fibreuses du tissu conjonctif.
Annexe n2 : Systme de ractif rvlateur
Solution dacide sulfurique 20% :

10 volumes
.Ethanol 96% :
5 volumes
.Solution 2%V/V de la solution concentre dhypochlorite de sodium :
3 volumes
Annexe n3 : Dtails des rsultats de lanalyse de la plante issus de

lordinateur
CAMAG TLC Evaluation Software
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TLC/HPTLC-Evaluation (CATS3.20 S/N:0503A009/SCANNER II V3.15 S/N : 940621)
Evaluation de qualit de Centella asiatica
Mthode du 22/08/2001 par Mamy.
Calibr.Table
Scan
Integration
Calculate
Calibration table, created : SOTRAMEX

File name : MAM-06
19/NOV/01
User name while measuring : SOTRAMEX
File name : MAM-06
19/NOV/01
User while integrating : SOTRAMEX
File name : MAM-06
25/JAN/02
User name :
SOTRAMEX
Date and time
07/MAY/02
Calibrating method
Analysis a :
Substance
ASIATICOSIDE
Ac.Madcassique
Ac.Asiatique
Substance
ASIATICOSIDE
Ac.Madcassique
Ac.Asiatique
Analysis b :
Substance
ASIATICOSIDE
Ac.Madcassique
Ac.Asiatique
Substance
ASIATICOSIDE
Ac.Madcassique
14:34:10
13:27:42
12:08:28
Linear regression
MOR0146-1 2L
MD
height : mean
21.4
2178.779 mg
MD
21.4
13:40:52
area : mean
2508.048 mg
MOR0146-1 8L
MD
height : mean
21.5
2110.351 mg
CV [%]
**
n
1
CV [%]
**
n
1
CV [%]
13.0
n
2
75.2
403.133 mg
**
MD
21.5
area : mean
2508.048 mg
CV [%]
13.2
n
2
Ac.Asiatique
Analysis c :
Substance
ASIATICOSIDE
Ac.Madcassique
Ac.Asiatique
Substance
ASIATICOSIDE
Ac.Madcassique
Ac.Asiatique
Analysis d :
Substance
ASIATICOSIDE
Ac.Madcassique
Ac.Asiatique
Substance
ASIATICOSIDE
Ac.Madcassique
Ac.Asiatique
Analysis e :
Substance
ASIATICOSIDE
Ac.Madcassique
Ac.Asiatique
Substance
ASIATICOSIDE
Ac.Madcassique
Ac.Asiatique
Analysis f :
Substance
ASIATICOSIDE
Ac.Madcassique
Ac.Asiatique
Substance
ASIATICOSIDE
Ac.Madcassique
Ac.Asiatique
75.2
359.591 mg
MOR0146-1 2L
MD
height : mean
21.2
2329.001 mg
MD
21.2
area : mean
2344.278 mg
MOR0146-1 8L
MD
height : mean
21.5
2044.286 mg
38.2
CV [%]
**
n
1
CV [%]
4.7
n
2
CV [%]
27.2
n
2
75.2
344.817 mg
**
MD
21.5
area : mean
1898.833 mg
CV [%]
21.6
n
2
75.2
346.012 mg
14.5
CV [%]
**
n
1
CV [%]
**
n
1
CV [%]
**
**
**
n
1
1
1
CV [%]
13.2
**
49.5
n
2
1
2
MOR0146-1 2L
MD
height : mean
21.4
2686.117 mg
MD
21.4
area : mean
2679.674 mg
MOR0146-1 8L
MD
height : mean
21.5
1996.282 mg
68.8
308.006 mg
75.1
658.155 mg
MD
21.5
68.8
75.1
User name : SOTRAMEX
area : mean
2168.847 mg
340.831 mg
459.324 mg
10/MAY/2002 ID : 7D2050A92D11714
CAMAG TLC Evaluation Software

Avalable to the user for report header documentation
two lines of 78 characters each.
TLC/HPTLC-Evaluation (CATS3.20 S/N:0503A009/SCANNER II V3.15 S/N : 940621)
Evaluation de qualit de Centella asiatica
Mthode du 22/08/2001 par Mamy.
Calibr.Table
Scan
Integration
Calculate
Calibrating method
Substance :
SI
a
b
c
d
e
f
SI
a
b
c
d
e
f
Substance :
SI
f
SI
f
Calibration table, created : SOTRAMEX

File name : MAM-06
19/NOV/01
User name while measuring : SOTRAMEX
File name : MAM-06
19/NOV/01
User while integrating : SOTRAMEX
File name : MAM-06
25/JAN/02
User name :
SOTRAMEX
Date and time
07/MAY/02
:
ASIATICOSIDE
MD height : mean
21.4
2178.779 mg
21.5
2110.351 mg
21.2
2329.001 mg
21.5
2044.286 mg
21.4
2628.117 mg
21.5
1996.282 mg
MD area : mean
21.4
2508.048 mg
21.5
1968.085 mg
21.2
2344.278 mg
21.5
1898.883 mg
21.4
2979.674 mg
21.5
2168.847 mg
Ac. Madcassique
MD height : mean
68.8
308.006 mg
MD area : mean
68.8
304.831 mg
13:40:52
14:34:10
13:27:42
12:08:28
Linear regression
P.dev.range :
CV [%]
**
13.0
**
27.2
**
**
0%
n Reference amount
1
2
1
2
1
1
CV [%]
n
1
2
2
2
1
2
**
13.0
4.7
21.6
**
13.2
Reference amount
P.dev.range :
CV [%]
**
0%
n Reference amount
1
CV [%]
n
1
**
Reference amount
Substance :
SI
b
d
f
Ac. Asiatique
MD height : mean
75.2
403.133 mg
75.2
344.817 mg
75.2
658.155 mg
User name : SOTRAMEX
P.dev.range :
CV [%]
**
**
**
0%
n Reference amount
1
1
1
10/MAY/2002 ID : 7D2050A92D11714
Annexe n4 : Prparation de lalcool 70% (ou dun alcool de

pourcentage quelconque)
Pour prparer le mlange hydro-alcoolique partir de lalcool 90% on part de lquation

gnrale suivante :
[1] (Valcool 90teneur en alcool dans lalcool 90%) + (Veauteneur en alcool dans leau)=
(Valcool
+Veau)teneur en alcool dans lalcool 70(ou dans lalcool de pourcentage
90
quelconque)
avec teneur en alcool dans lalcool 70%=70
teneur en alcool dans lalcool 90%=90
teneur en alcool dans leau =0
et o Valcool 90 et Veau sont les inconnus.
Dautres part, Valcool
+Veau=volume de lalcool 70% ncessaire = 8 l si Veau=x,
90
lquation [1] devient

(8-x) 90=870
do x=1,77 et Valcool 90 = 8-1,77=6,23
Donc, pour avoir 8 l dalcool 70%, on mlange 6,23 l dalcool 90% avec 1,77 l deau.
Quelque soit le pourcentage de lalcool quon veut rectifier, lquation [1] est toujours
applicable.
Un autre procd aussi peut tre appliqu pour prparer ce mlange hydro-alcoolique, il
sagit de lutilisation de labaque suivant :
Tableau-Prparation des mlanges hydro-alcooliques
Dilution millilitres
dthanol dans
100ml de mlange
0,1 prs
Volume deau distille la

temprature de 20C ajouter
100ml dthanol 95% (V/V) la
mme temprature 0,1 prs pour
prparer les dilutions
correspondants
ml
Masse
dthanol
95%
(V/V)
Masse deau
ajouter
g
g
50
55
60
65
70
75
80
85
90
95
95,8
77,9
62,9
50,2
39,1
29,5
20,9
13,3
6,4
0,0
45,9
51,1
56,4
61,8
67,6
73,4
78,5
85,9
92,7
100
54,1
48,9
43,6
38,2
32,5
26,6
20,5
14,1
7,3
0
Limites de la densit relative et de la masse

volumique dans lair
d
0,9316 0,9320
0,9214 0,9218
0,9105 0,9119
0,8990 0,8995
0,8869 0,8874
0,8740 0,8746
0,8605 0,8611
0,8461 0,8467
0,8303 0,8310
0,8124 0,8132
Indice de
rfraction
20C
(g/ml)
0,9300 0,9303
0,9198 0,9202
0,9089 0,9093
0,8974 0,8979
0,8853 0,8858
0,8725 0,8731
0,8590 0,8596
0,8446 0,8452
0,8288 0,8295
0,8110 0,8118
1,3590
1,3598
1,3614
1,3625
1,3633
1,3640
1,3648
1,3648
1,3645
1,3638
Annexe n5 : Calculs manuels des rendements des gnines partir

du tableau des rsultats
Le rsultat donne les hauteurs des pics del courbes des quantits des gnines prsents.
x en g/8l
Standard
Solution S1
Standard
Solution S2
Standard
Solution S3
0,1
x
0,2
x
0,3
x
Acide
madcassique
(y)
16
20
24
22
30
24
Acide
asiatique
(y)
20
24
26
25
28
26
Rendement en acide madcassique :

Dtermination de lquation de la droite y=ax+b, plus prcisment a et b :
A partir du standard, on peut avoir 2 quations :
16=0,1a+b
30=0,3a+b
14=0,2a
a=14/0,2a
a=70
16=0,1x70+b
b=16-7=9
Do lquation de la droite est : y=70x+9
Ci : concentration de la solution i.
Pour S1 : Aprs la dilution 12 fois de la solution S de concentration C=80mg/20ml, on a
comme concentration en extrait
C1=C/12=6,66mg/20ml , do une concentration de 2,66 g dextrait/8 l.
A partir du tableau du rsultat : 20=70x+9
x=0,157 g dacide madcassique/8l

Do le rendement de 1=5,90% par rapport C1
C1=C/12=8mg/20ml , do une concentration de 3,2 g dextrait/8 l.
Rendement gnral en acide madcassique :
acide madcassique = i/n
n : nombre dessais et de rsultats
acide madcassique=(5,90+6,38+6,69)=6,32%
acide madcassique=6,32% dacide madcassique dans lextrait en poudre.
Rendement en acide asiatique :
Dtermination de lquation de la droite y=ax+b, plus prcisment a et b :
A partir du standard, on peut avoir 2 quations :
20=0,1a+b
28=0,3a+b
8=0,2a
a=8/0,2a
a=40
20=0,1x40+b
b=20-4=16
Do lquation de la droite est : y=40x+16

Ci : concentration de la solution i.
x=0,2 g dacide asiatique/8l
C1=C/12=8mg/20ml , do une concentration de 3,2 g dextrait/8 l.
Rendement gnral en acide asiatique :
acide asiatique = i/n
n : nombre dessais et de rsultats
acide asiatique=(7,52+7,76+7,81)=7,70%
acide asiatique=7,70% dacide asiatique dans lextrait en poudre.
Auteur : RAJAOFENO Lovasoa Nirina Harilaza
Titre
EXTRACTION
DE
CENTELLA
ASIATICA
ET
ANALYSE
QUANTITATIVE DES PRINCIPES ACTIFS PAR HPTLC.

Nombre de pages : 84
Nombre de figures : 17
Nombre de tableaux : 5
Nombre de schma : 1
RESUME
Centella asiatica fait l'objet d'une exportation massive depuis que ses
extraits sont connus pour avoir une action bnfique sur la peau.
Or le taux en principes actifs de la plante varie considrablement selon la
priode et la zone gographique de rcolte. Nous montrons que la technique de
la HPTLC est particulirement efficace pour la dtection des principes actifs et
l'valuation de leur taux, ce qui va permettre de cibler le moment le plus
favorable pour la cueillette en vue d'une meilleure exploitation de la plante.
D'autres part, nos essais en laboratoire ont permis d'isoler les principes
actifs par une cristallisation fractionne ralise dans des conditions de
temprature et de pression optimales.
Mots cls: Centella asiatica ; principes actifs ; rcolte ; cristallisation fractionne ;
HPTLC.
Directeur de mmoire: Madame RASOLONDRAMANITRA Valisolalao.

Professeur titulaire l'E.S.P.A.
Adresse de l'auteur : Monsieur RAJAOFENO Lovasoa Nirina Harilaza
Lot III P 20 AA Bis Marohoho
E-mail : rajaof_lov @yahoo.fr
101 Antananarivo

Rajaofenolnh Espa Ing 02

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UNIVERSITE D'ANTANANARIVO

ECOLE SUPERIEURE POLYTECHNIQUE D'ANTANANARIVO

Mmoire de fin d'tudes pour l'obtention

ANALYSE PAR HPTLC.

Mmoire de fin d'tudes pour l'obtention

EX TRA CTION D E C E NTE LLA AS IATIC A.

: Monsieur RAHARIJAONA Tovo Robin

Rapporteur : Madame RASOLONDRAMANITRA Jocelyne Valisolalao

Mais la sagesse, o la trouver ?

Chef de dpartement de la filire Gnie Chimique lEcole Suprieure Polytechnique

Laboratoire ROCHE N ICHOL A S Division SERDEX Paris,

La socit SOTRA M E X et ses Ingnieurs chimistes,

Monsieur Jean Franois FERRAT, Directeur Gnral du Groupe ARCO OCEAN

nous ont soutenus et encourags tout au long de nos tudes.

TABLES DES MATIERES

Deuxime partie : ACTIVITE BIOLOGIQUE DE CENTELLA ASIATICA

Troisime partie : DETECTION, ISOLEMENT ET DOSAGE DES PRINCIPES

I.3. Critre dacceptabilit

Les Malgaches connaissent bien la plante "Talapetraka" ou Centella asiatica,

CENTELLA ASIATICA ET SES

I.1. Etude botanique [1] [2] [3] [4]

Figure n1 : La plante CENTELLA ASIATICA [3]

I.2. Historique des dcouvertes et travaux sur les principes actifs

dans la nouvelle pharmacope

En 1955, le professeur Albert Rakoto Ratsimamanga et Pierre Boiteau confirment

I.3. Les constituants organiques de Centella asiatica [4] [5] [7]

- Des produits lipophiles, son huile essentielle ou la "vellarine", avec un rendement

II.1. Les diffrentes varits de Centella asiatica [2] [3] [10]

La plante prsente, en raison de sa grande extension gographique, des variations

involucres semblent permettre la reconnaissance de 3 types principaux entre lesquels

La forme asiatico-malgache : la typica, varit de Centella asiatica limbes

La forme africaine : labyssinica, varit de Centella asiatica

suborbiculaires sinus moins marqu, avec dents plus attnues et pilosit

La forme amricaine : la floridana, varit de Centella asiatica feuilles souvent

II.2. Chimiotypie [5]

On peut galement distinguer les espces en fonction de leurs constituants

Centella asiatica de Madagascar et du continent amricain contient 2 triterpnes

Centella asiatica de l'Inde contient 4 triterpnes principaux, les 2 prcdents,

des isomres tels l'acide

centillique/centelliloside. De part sa composition chimique, notamment l'absence

II.3. La spcificit de Centella asiatica de Madagascar [3] [4]

Le laboratoire Roche-Nicholas nexploite que l'espce Centella asiatica provenant

CHAPITRE II : LES PRINCIPES ACTIFS DE CENTELLA ASIATICA :

I. GENERALITES SUR LES TRITERPENES

I.1. Dfinitions [11] [12] [13]

I.2. Caractristique des triterpnes [12]

Les triterpnes ne sont ni volatils, ni entranables par la vapeur d'eau. Ils ne

I.3. Biosynthse des triterpnes [11]

Les triterpnes sont issus de la cyclisation du 3S-2,3-poxy-2,3-squalne ou du

STRUCTURE CHIMIQUE DE L'ASIATICOSIDE

2, 3, 6, 23-ttrahydroxy- ursa-12-ne-28- oate de 1 [0--L-rhamnopyranosyl-(1-4)-0--D-glucopyranosyl(1-6)]-0--D-glucopyranose.

II. LES TRITERPENES ACTIFS DE CENTELLA ASIATICA

Figure n2 : Chromatographie de l'extrait de Centella asiatica. [14]

(2) Acide asiatique (tmoin)

(3) Asiaticoside (tmoin)

(6) Extrait de Centella asiatica

Solvant de migration : benzne-thanol-eau (30 : 50 : 4)

L'analyse par HPTLC dans la socit SOTRAMEX montre plus clairement la

II.2. Lasiaticoside [1] [6] [15] [16] [17]

lasiaticoside est neutre, cest--dire qu'il n'y a pas dacidit titrable au

lhydrolyse de lasiaticoside par lmulsine est impossible, de mme que

lasiaticoside na pratiquement pas de pouvoir hmolytique in-vitro alors

II.3. Le madcassoside [4] [9]

PM=974, et dont la structure 2 est dsigne selon la nomenclature