Metabolismo de Carboidratos.

Profa.Dra. Leticia Labriola Abril 2012

Oxidao Completa da Glicose

C6H12O6 + 6O2 + 36-38ADP + 36-38 Pi
Via glicoltica gastou: 1 glicose, 2 ADP, 2 Pi, 2 NAD+ gerou: 2 ATP, 2 NADH, 2 Pyr Falta: Usar Pyr Formao de AcCoA e Krebs Reciclar NADH Transporte de eltrons Gerar CO2 Formao de AcCoA e Krebs Formar ATPs Fosforilao oxidativa

6CO2 + 6H2O + 36-38ATP

NAD Nicotinamida Adenina Dinucleotdeo (coenzima)

NADH

FAD Flavo Adenina Dinucleotdeo (grupo prosttico)

(Vit B2)

aa

AGL

Glicose
gliclise

estgio 1 produo de Acetil-CoA

A Respirao Celular ocorre em 3 estgios

1 nutrientes so oxidados e geram Acetil-CoA (Gliclise, -oxidao e oxidao de aminocidos) coenzimas so reduzidas

piruvato

Acetil-CoA estgio 2 oxidao de Acetil-CoA

oxaloacetato citrato

2 Acetil-CoA oxidado a CO2 no Ciclo de Krebs coenzimas so reduzidas 3 Coenzimas so oxidadas, transferindo os e- para O2, formando gua e armazenando a energia envolvida na forma de ATP, na Cadeia Respiratria (Cadeia de Transporte de e- + Fosforilao Oxidativa

ciclo de Krebs

transportadores de e-

estgio 3 transferncia de ee fosf. oxidativa

cadeia respiratria

Coenzima A (CoA) grupo reativo tiol

adenina

-mercaptoetilamina cido pantonnico ribose 3- fosfato

3-fosfoadenosina difosfato Acetil-CoA

o grupo acetil proveniente da descarboxilao do piruvato se une CoA atravs do grupo tiol desta

O piruvato proveniente da gliclise uma das principais fontes de Acetil-CoA

Descarboxilao oxidativa Remoo irreversvel de um CO2 do piruvato, gerando o grupo acetil que se liga coenzima A (CoA), formando Acetil-CoA

piruvato desidrogenase Piruvato Complexo Multienzimtico Acetil-CoA

3 enzimas (PDH)
piruvato desidrogenase diidrolipoil transacetilase diidrolipoil desidrogenase

5 coenzimas

Formao de Acetil-CoA

Formao de Acetil-CoA
- 5 coenzimas / grupos prostticos: tiamina pirofosfato (TPP) FAD Coenzima A NAD cido lipico - 5 vitaminas: tiamina (B1) riboflavina (B2) cido pantotnico (CoA) (B5) niacina (nicotinamida) (B3) cido lipico

Cofatores do Complexo da Piruvato Desidrogenase

Piruvato desidrogenase (E1) tiamina pirofosfato (TPP) Diidrolipoil transacetilase (E2) coenzima A (CoA) Diidrolipoil desidrogenase (E3) flavina adenina dinucleotdeo (FAD) nicotinamida adenina dinucleotdeo (NAD+) Diidrolipoil transacetilase (E2) cido lipico

vitamina precurssora tiamina (B1)

cido pantotnico (B5)

riboflavina (B2) niacina (B3)/nicotinamida

no deriva de vitaminas

Formao de Acetil-CoA

Regulao da Piruvato Desidrogenase

-ATP, NADH, Acetil-CoA +AMP, NAD+

Regulao do Complexo Piruvato Desidrogenase (regulao alostrica e por modificao covalente)

O complexo formado por 3 enzimas e 5 coenzimas Os produtos da via, NADH e acetil-CoA, bem como ATP so efetores alostricos negativos das enzimas do complexo As enzimas do complexo tm resduos de serina, modificveis por fosforilao As enzimas do complexo quando fosforiladas (por quinases) so inativas As enzimas do complexo quando desfosforiladas (por fosfatases) so ativas Alm das 3 enzimas, o complexo tem uma quinase e uma fosfatase associadas NADH, Acetil-CoA e ATP ativam a quinase (e inibem o complexo) A diminuio de NADH, Acetil-CoA e ATP ativam a fosfatase (e ativam o complexo) A insulina ativa fosfatases no geral, tendo o mesmo efeito, bem como o Ca2+ e Mg2+ O excesso de acetil-CoA e NADH provenientes da -oxidao durante o jejum inibem a sntese de acetil-CoA a partir de piruvato, favorecendo a gliconeognese

Oxidao Completa da Glicose

C6H12O6 + 6O2 + 36-38ADP + 36-38 Pi
Via glicoltica gastou: 1 glicose, 2 ADP, 2 Pi, 2 NAD+ gerou: 2 ATP, 2 NADH, 2 Pyr Form. de Acetil-CoA gastou: 2 NAD+, 2 Pyr gerou: 2 CO2, 2 NADH, 2 AcCoA

6CO2 + 6H2O + 36-38ATP

Reao Global - Ciclo de Krebs

Acetil-CoA + 3NAD+ + FAD + GDP + Pi

2CO2 + 3NADH + FADH2 + GTP + CoA

GTP + ADP
nucleosdeo difosfato quinase

GDP + ATP

Regulao do Ciclo de Krebs

- NADH, ATP +ADP

Acetil-CoA + OxAc
- NADH, ATP

citrato sintase CoASH

+ADP

Citrato

Isocitrato

isocitrato desidrogenase NAD+ NADH

- NADH, ATP

cetoglutarato

cetoglutarato

cetoglutarato desidrogenase NAD+ NADH CO2

Succinil-CoA

CoASH

Regulao do Ciclo de Krebs

piruvato + Ca2+, Mg2+ Acetil-CoA oxaloacetato (piruvato desidrogenase) ATP, Acetil-CoA, NADH (citrato sintase) ATP citrato cis-aconitato isocitrato (isocitrato desidrogenase) ATP aumenta o KM da citrato sintase para acetilCoA

malato fumarato

succinato

+ * -cetoglutarato Succinil * + Ca CoA

2+

ATP ADP, Ca2+ (-cetoglutarato desidrogenase)

Etapas que requerem coenzima oxidada (NAD+ ou FAD)

Succinil-CoA NADH, GTP, ATP

Regulao do Ciclo de Krebs

NADH, ATP +ADP

+ADP NADH, ATP

NADH, ATP ATP

Regulao Integrada

+ AMP

- citrato

(+ insulina no fgado)

Frutose 6P Frutose 2,6 P

Fosfofrutoquinase 2
ATP ADP Pi

Frutose 2,6 P Frutose 6P

Frutose 2,6 bisfosfatase

+ PEP (+ glucagon no fgado)

Substrato do Ciclo de Krebs regulando Gliclise

GLICOSE

frutose 6-fosfato

ATP

(fosfofrutoquinase) ADP Citrato

PIRUVATO

frutose 1,6-difosfato

O excesso de citrato indica abundncia de precursores biossintticos, e portanto a no necessidade de degradao de glicose

Destinos Metablicos do Citrato

Fonte de NADPH no citossol, para biossntese redutora (enzima mlica) citrato
Fonte de carbono para processos citosslicos biossintticos, como cidos graxos e esterides (fonte de acetil-CoA) Regulador de outras etapas metablicas (-) fosfofrutoquinase (+) Acetil-CoA carboxilase *

Ciclo de Krebs Gerao de Energia

*Acetil-CoA carboxilase a enzima que catalisa a formao de malonil-CoA a partir de acetil-CoA, o primeiro passo da sntese de cidos graxos

Piruvato

NAD+

CoA

-ATP, NADH, Acetil-CoA +AMP, NAD+ Piruvato desidrogenase CO2 NADH

Acetil-CoA Citrato

Citrato sintase - NADH, ATP

Oxaloacetato

+ADP ATP

Regulao do Ciclo de Krebs

NADH, ATP +ADP

+ADP NADH, ATP

NADH, ATP ATP

Piruvato

NAD+

CoA

-ATP, NADH, Acetil-CoA +AMP, NAD+ Piruvato desidrogenase

Piruvato carboxilase (biotina) +Acetil-CoA

CO2 ATP

CO2 NADH

Acetil-CoA
ADP + Pi Citrato sintase - NADH, ATP

Citrato

Oxaloacetato

+ADP ATP

Piruvato

NAD+

CoA

-ATP, NADH, Acetil-CoA +AMP, NAD+ Piruvato desidrogenase glucagon NADH lipdeos

Piruvato carboxilase (biotina) +Acetil-CoA

CO2 ATP

CO2

Acetil-CoA
ADP + Pi Citrato sintase - NADH, ATP

Citrato

Oxaloacetato

+ADP

Inibio do Ciclo de Krebs por Falta de Oxaloacetato gliclise (jejum, fgado, gliconeognese) PIRUVATO
protelise

-oxidao intensa

GLICOSE FOSFOENOLPIRUVATO OXALOACETATO

(malato desidrogenase citoplasmtica)

AMINOCIDOS

ACETIL CoA cetognese (recicla CoA) CITRATO

OXALOACETATO
NADH NAD+

MALATO mitocndria
Esta oxidao gera NADH citosslico que transferido para a matriz mitocondrial por lanadeiras especficas

MALATO

citossol

SUCCINIL CoA

-CETOGLUTARATO

O excesso de NADH da oxidao desloca o equilbrio em direo ao malato

PORFIRINAS (grupo heme)

AMINOCIDOS

Piruvato

NAD+

CoA

-ATP, NADH, Acetil-CoA +AMP, NAD+ Piruvato desidrogenase

Piruvato carboxilase (biotina) +Acetil-CoA

CO2 ATP

CO2 NADH

Acetil-CoA
ADP + Pi Citrato sintase - NADH, ATP

Citrato

Oxaloacetato

+ADP ATP, Oxaloacetato

Regulao do Ciclo de Krebs

NADH, ATP +ADP

+ADP NADH, ATP

NADH, ATP ATP

Inibio do Ciclo de Krebs

Jejum ou Atividade Fsica Prolongada (fgado) - Consumo do oxaloacetato para produo de glicose via gliconeognese - Acmulo de Acetil-CoA e NADH proveniente da intensa -oxidao Abundncia de aporte energtico - Inibio das enzimas por excesso de ATP (e falta de ADP) e excesso de coenzimas reduzidas NADH e FADH2 (falta de coenzimas oxidadas NAD+, FAD) Envenenamentos O Arsnico na forma de sais de arsenito (AsO33-) ou sais orgnicos txico porque se liga covalentemente a sulfidrilas, especialmente as vicinais, como no caso das lipoamidas, presentes na piruvato desidrogenase e -cetoglutarato desidrogenase.
O fluoracetato (acetato fluorado), presente nas folhas de certas plantas venenosas na frica, Austrlia e Amrica do Sul txico porque convertido a fluoracetil-CoA e ento convertido a fluorcitrato pela citrato sintase. Inibe a aconitase e o transporte de citrato atravs da membrana interna da mitocndria. Potentssimo: LD50 = 0,2mg/Kg de peso corpreo em ratos (ingerido, inalado ou absorvido pela pele) Produo, Comercializao e uso proibidos pela OMS

Regulao do Ciclo de Krebs em outros nveis (isoformas, nvel de expresso, transporte)

H diferentes isoformas das enzimas do complexo piruvato desidrogenase A expresso das isoformas parece ser tecido dependente e dieta dependente Dietas ricas em lipdeos ativa algumas, enquanto outras so favorecidas por dietas ricas em carboidratos processo pouco compreendido! Estas enzimas mitocondriais so produzidas no citossol. No s o nvel de expresso influencia o ciclo, como tambm a velocidade de transporte destas para a mitocndria

Deficincia de Piruvato Desidrogenase

- Crianas com acidose ltica, acmulo de piruvato e alanina - Geralmente em casamentos cossangneos - Acometimento cerebral - Dieta hipocalrica (predomnio de gorduras sobre carboidratos)

1. Indicar as vitaminas necessrias para a produo de acetil-CoA a partir de piruvato, e a localizao intracelular desta reao. 2. Indicar a localizao celular das enzimas do ciclo de Krebs e descrever os passos irreversveis do ciclo. Indicar as vitaminas necessrias. 3. Escrever a reao global da metabolizao da acetil-CoA pelo ciclo de Krebs. 4. Descrever a regulao do ciclo de Krebs em funo das relaes de ATP/ADP e NADH/NAD+. (Recorde tambm quais os efeitos de mudanas nos nveis de ATP/ADP e NADH/NAD+ na gliclise e neoglicognese.) 5. Quais dos compostos a seguir aumentam a concentrao de oxaloacetato em uma suspenso de mitocndrias: acetil-CoA, piruvato, glutamato, citrato, cidos graxos? Justifique, e explique porque estes compostos so gliconeognicos. 6. Descrever os mecanismos de regulao da piruvato desidrogenase e piruvato carboxilase. Como essa regulao afeta a velocidade das reaes do ciclo de Krebs? Como afeta a gliconeognese? 7. Indicar a direo preferencial da reao catalisada pela aconitase se reagentes e produtos estiverem em concentraes equivalentes. Qual o composto que se acumula quando o ciclo de Krebs inibido por altas relaes ATP/ADP e NADH/NAD+? Relacionar a atividade da via glicoltica com a atividade da isocitrato desidrogenase. 8. O beriberi, uma doena causada pela deficincia de tiamina (vitamina B1), caracterizado pelo acmulo de piruvato, especialmente aps refeies ricas em carboidratos. Explique porque ocorre este acmulo. 9. A sndrome de Wernicke-Korsakoff caracterizada por confuso mental, ataxia, oftalmoplegia e letargia, observada normalmente em alcolatras crnicos. Esta sndrome pode ser revertida completamente atravs da administrao de tiamina. Baseado nesses dados, explique a causa da doena e porque compromete principalmente as funes cerebrais. 10. A deficincia de biotina, uma doena rara, causa intolerncia a exerccio e hipoglicemia de jejum. Explique esse quadro clnico.