ACTIVIDAD METANOGNICA ESPECFICA EN UN REACTOR ANAEROBIO - AEROBIO APLICADO AL TRATAMIENTO DE AGUA RESIDUAL DOMSTICA

Mlida del Pilar Anzola Rojas, Antonio Oliveira Netto y Marcelo Zaiat
RESUMEN El ensayo de actividad metanognica especca (AME) es una importante herramienta para el monitoreo de la digestin anaerobia. En este estudio se observ el comportamiento de las arqueas metanognicas de un lodo anaerobio, bajo diferentes condiciones de oxigenacin en un reactor anaerobio-aerobio de lecho jo, operado de modo continuo con diferentes razones de recirculacin de la fase lquida para remover carbono y nitrgeno, aplicado al tratamiento de aguas residuales domsticas. La aplicacin del ensayo AME fue adaptado de varios autores y la medicin del metano acumulado en el reactor se realiz mediante cromatografa gaseosa. Al nalizar los experimentos se observ que la presencia de oxgeno no inhibi el comportamiento de los organismos metanognicos. Al contrario, la velocidad de produccin de CH4 fue mayor en comparacin con los resultados obtenidos en la fase en que el reactor oper de forma anaerobia.

SPECIFIC METHANOGENIC ACTIVITY IN AN ANAEROBIC-AEROBIC REACTOR APPLIED TO THE TREATMENT OF DOMESTIC RESIDUAL WATER Mlida Anzola Rojas, Antonio Oliveira Netto and Marcelo Zaiat SUMMARY The specic methanogenic activity (SMA) test is an important tool for the monitoring of anaerobic digestion. This paper presents the behavior of the methanogenic archaea of an anaerobic sludge under different conditions of oxygenation in a xed-bed anaerobic-aerobic reactor treating domestic sewage. The reactor was operated in a continuous manner under different liquid recycle ratios from aerobic to anaerobic zones in order to remove carbon and nitrogen. The application of the SMA test was adapted from several authors and the measurement of the accumulated methane in the reactor was carried out by means of gas chromatography. Methanogenic organisms were not inhibited by the presence of oxygen. In contrast, the values of CH4 production rate by sludge exposed to oxygen were greater than those obtained for strictly anaerobic sludge.

Introduccin Una propuesta reciente para tratamientos de efluentes industriales y domsticos considera el reactor anaerobio como la unidad principal de una depuradora, no obstante generalmente se requiera de un postratamiento para la obtencin de los niveles exigidos por la legislacin. Esta propuesta deriva de un concepto ms amplio de proteccin ambiental sostenible y de la conservacin aplicada para aguas residuales (Foresti et al., 2006). Estos tratamien-

tos han sido responsables por el cambio en las condiciones de control y contaminacin industrial, pues son tecnologas de bajo costo econmico y energtico. La operacin de estos reactores depende de un buen control de las condiciones ambientales del proceso fermentativo, as como del diseo del equipamiento (Poetsch y Koetz, 1998). La biomasa anaerobia, responsable por la degradacin de la materia orgnica de las aguas residuales, debe ser constantemente evaluada en su capacidad de depuracin

(Poetsch y Koetz, 1998). Para que esta biomasa pueda ser preservada y monitoreada se torn imperativo el desarrollo de tcnicas para la evaluacin de la actividad microbiana de reactores anaerobios, en particular de las bacterias metanognicas. Diversos mtodos han sido propuestos (Chernicharo, 1997) para evaluar la actividad microbiana anaerobia a partir de la caracterizacin de la actividad metanognica especca (AME). Inicialmente el ensayo de AME fue utilizado para la seleccin del lodo a inocular

(Jawed y Tare, 1999). Pero el ensayo puede ser una importante herramienta para el estudio de procesos anaerobios, segn varios autores (Soto et al ., 1993; Ince et al ., 1995, 2001; Stewart et al ., 1995; Chernicharo, 1997; Araujo et al ., 1998; Poetsch y Koetz, 1998; Hutnan et al ., 1999; Miranda et al., 2005). El ensayo de AME consiste en evaluar la capacidad de los microorganismos metanognicos en convertir substrato orgnico en CH4 y CO2. De esta forma, a partir de cantidades conocidas de biomasa (slidos

PALABRAS CLAVE / Actividad Metanognica Especca / Aguas Residuales Domsticas / Digestin Anaerobia /
Recibido: 25/06/2007. Modicado: 19/02/2008. Aceptado: 20/02/2008.

Mlida del Pilar Anzola Rojas. Ingeniera Ambiental, Universidad Manuela Beltrn, Colombia. Estudiante de Maestra en Hidrulica y Saneamiento, Universidade de So Paulo (USP), Brasil.

Antonio Pedro Oliveira Netto. Ingeniero Civil, Universidade Federal de Alagoas, Brasil. Maestro en Hidrulica y Saneamiento, USP, Brasil. Estudiante de Doctorado, USP, Brasil.

Marcelo Zaiat . Ingeniero Qumico y Maestro en Ingeniera Qumica, Universidade Federal de So Carlos, Brasil. Doctor en Ingeniera Hidrulica y Saneamiento, USP, Brasil. Profesor, USP, Brasil. Direc-

cin: Escola de Engenharia de So Carlos (EESC), USP, Av Trabalhador So-carlense, 400, 13566-490, So Carlos, SP, Brasil. e-mail: zaiat@sc.usp.br

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0378-1844/08/04/284-06 $ 3.00/0

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ATIVIDADE METANOGNICA ESPECFICA EM UM REATOR ANAERBIO-AERBIO APLICADO AO TRATAMENTO DE AGUA RESIDUAL DOMSTICA Mlida Anzola Rojas, Antonio Oliveira Netto e Marcelo Zaiat RESUMO O ensaio de atividade metanognica especca (AME) uma ferramenta importante para o monitoramento da digesto anaerbia. Nesse artigo, foi observado o comportamento das arqueias metanognicas de um lodo sob diferentes condies de oxigenao em um reator anaerbio-aerbio de leito xo, operado de modo contnuo, com diferentes razes de recirculao da fase lquida, aplicado ao tratamento de esgoto sanitrio. A voltiles totales, SVT), bajo condiciones establecidas, se puede evaluar la produccin de CH4 a lo largo de un periodo de tiempo. Algunos mtodos utilizados para la medicin de la produccin de CH4 en el ensayo de AME son desplazamiento de lquido, cromatografa gaseosa y respirometra (Chernicharo, 1997). En este trabajo de investigacin se estudi el comportamiento de los organismos metanognicos bajo diferentes condiciones de oxigenacin en un reactor anaerobio-aerobio de lecho jo, operado de modo continuo con recirculacin de la fase lquida aplicado al tratamiento de aguas residuales domsticas; registrando los resultados obtenidos en el ensayo de AME en tres diferentes fases del reactor. Materiales y Mtodos Reactor Fue utilizado un reactor de lecho fijo de flujo ascendente con arcilla expandida y espuma de poliuretano como soportes de inmovilizacin de la biomasa. El lecho del reactor fue dividido en tres compartimientos de volmenes diferentes. En una primera fase, el reactor fue operado de forma anaerobia. Los dos compartimientos anaerobios fueron llenados con arcilla expandida el primero y con espuma de poliuretano el segundo. En una segunda etapa, un mdulo adicional fue insertado en la parte superior del reactor, precedido por una cmara de aireacin. As, el reactor pas a operar al mismo tiempo como anaerobioaerobio de lecho jo con ujo ascendente. En este nuevo compartimiento tambin se coloc espuma de poliuretano para inmovilizacin de la biomasa. En la tercera y ltima etapa, el reactor fue operado como combinado anaerobio-aerobio, con recirculacin del euente para la zona anaerobia, justo encima del lecho que contiene arcilla expandida (Figura 1). En esta etapa experimental la variable fue la razn de recirculacin (relacin entre el caudal de recirculacin y el caudal de alimentacin del reactor). Dos razones de recirculacin (r) fueron adoptadas: 0,5 y 1,5; es decir, el caudal de recirculacin fue igual a la mitad del valor del caudal de alimentacin en un primer experimento y, nalmente, fue 50% superior al caudal de alimentacin en un segundo experimento. El ensayo de actividad metanognica especca fue realizado en tres ocasiones, la primera al final de la operacin de la fase anaerobia del reactor de lecho jo y ujo ascendente, la segunda despus de la operacin combinada anaerobia-aerobia con recirculacin a razn de 0,5 y la tercera en el nal de la fase combinada anaerobia-aerobia con recirculacin a razn de 1,5. Las caractersticas de funcionamiento del reactor, presentadas por Oliveira Netto (2007), para cada fase son presentadas en las Tablas I, II y III. El caudal del auente fue de 0,59lh 1 en las tres fases del reactor, y los caudales de recirculacin utilizados en la tercera fase fueron de 0,30 y 0,90lh1. aplicao do ensaio de AME foi adaptado de vrios autores e a medio de metano acumulado no reator foi realizada por cromatograa gasosa. Ao nal dos experimentos observou-se que a presena de oxignio no inibiu a atividade dos organismos metanognicos. Ao contrrio, a velocidade de produo de CH4 foi maior em comparao como os resultados obtidos na fase em que o reator foi operado de forma anaerbia. Durante todo el experimento el caudal de aire inyectado no se midi, ya que lo importante era mantener una concentracin de O2 disuelto >1,5mgl1. La media de la concentracin de O2 disuelto durante todo el periodo de operacin estuvo en 4,5mgl1. Agua residual El agua residual utilizada en este estudio es la que abastece la estacin de tratamiento de agua residual (ETE) del Campus de la Universidad de So Paulo (USP) en So Carlos. Se trata de agua residual del Campus universitario, proveniente del restaurante, baos, y tambin del agua residual domstica de los barrios Tijuco Preto y Vila So Jos, de la ciudad de So Carlos, SP, Brasil. Algunos residuos de laboratorios tambin son vertidos en la red que alimenta la ETE, pero estos valores al ser diluidos son despreciables. Actividad metanognica especca (AME) Los ensayos fueron basados en los trabajos de Oliveira (1997), Zaiat et al. (2000), Steil (2001) y Vich (2006). Para las tres ocasiones del ensayo las espumas de poliuretano (~30

Figura 1. Reactor anaerobio-aerobio de lecho jo y ujo ascendente con recirculacin de la fase lquida (Oliveira Netto, 2007)

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matrices) fueron retiradas del reactor con ayuda de una pinza metlica. Se tom como punto de muestreo el tercer compartimiento de la zona anaerobia,

justo antes de la zona de aireacin (Figura 1). Las espumas fueron colocadas en un beaker de 80ml cubierto con plstico expandible para evitar la conta-

Tabla I Etapa anaerobia con tiempo de detencin hidrulica (TDH) de 8h

Parmetros pH Temperatura (C) DQO bruta (mgl-1) DQO ltrada (mgl-1) Alc. total (mg CaCO3 l )
-1

aparato fueron: temperatura del detector, columna e inyector de 50C y corriente de 150mA. Para el clculo de la concentracin del metano (mmol de CH4/l1) se prepar una curva de calibracin. Clculo de la AME Los valores de las reas obtenidas fueron convertidos por Figura 2. Montaje de frascos de reaccin y medio de la ecuacin extraccin de muestra del biogs para lectura de la recta padrn, a en el cromatgrafo. mmol CH4 en condiciones normales de temperatura y presin (CNTP), minacin. Se llev a una incues decir, a 0C (273K) y 1atm badora a 30C por 12h, tras las y, los valores de CH4 obtenicuales se retir la biomasa de dos para 1ml de gas fueron las espumas de poliuretano y se convertidos para el headspace virti por partes iguales en dos de cada frasco a partir de la frascos con volumen de 80ml ecuacin cada uno (Figura 2). En los frascos se agreg agua residual domstica del afluente del reactor hasta completar el volumen lquido de cada uno (2/3 del volumen til). Se burbuje N2 puro en el medio durante 5min para expulsar los gases contenidos en los frascos. Posteriormente, se sellaron con tapa de caucho y lacre metlico y se llevaron a una incubadora a 30C con agitacin a 40rpm. Durante los experimentos los frascos no fueron despresurizados a fin de mantener concentraciones acumuladas del biogs. Determinacin de metano Alcuotas de 1ml de biogs del interior de cada frasco (headspace) fueron retiradas con ayuda de una jeringa con vlvula de traba de 1,0ml (VICI Precisin Sampling) y la concentracin de CH4 medida en un cromatgrafo Gow-Mac Instrument modelo 69, con columna porapak-Q, largo de 2,0m y dimetro interno de '', con detector de conductividad trmica serie 15. El gas de arrastre usado fue hidrgeno superseco. Se emple un integrador Hewlett-Packard modelo HP 3396 serie II. Las condiciones de operacin del

Auente 6,65 0,17 24,4 1,2 823 180 275 69 153 11 102 15 70,9 9,3 251,8 82,6 31,2 15,0

Euente 6,69 0,11 23,6 1,7 255 70 159 26 202 35 162 27 57,0 16,5 81,2 25,9 4,6 5,6

Alc. a bicarbonato (mg CaCO3 l-1) AVT (mg HAcl )

-1

SST (mgl-1) SSV (mgl )

-1

Tomado de Oliveira Netto (2007).

Tabla II Etapa combinada con recirculacin (r= 0,5) Y tiempo de detencin hidrulica (TDH) de 11h
Parmetros pH Temperatura (C) DQO bruta (mgl-1) DQO ltrada (mgl-1) Alc. total (mg CaCO3 l-1) Alc. a bicarbonato (mg CaCO3 l-1) AVT (mg HAcl-1) NT (mgl-1) NTK (mgl-1) NH4+ (mgl-1) SST (mgl-1) SSV (mgl-1)
Tomado de Oliveira Netto (2007).

Auente 6,93 0,22 27,6 1,6 579 121 234 43 166 16 109 16 79,2 14,4 40,0 4,7 39,9 4,7 26,9 1,5 130,0 55,2 22,5 17,2

Euente 7,37 0,28 27,6 2,2 44 17 29 7 100 55 41 24 23,9 14,3 13,6 2,4 8,1 4,2 6,0 4,0 23,9 18,1 6,1 11,4

Tabla III Etapa combinada con recirculacin (r= 1,5) Y tiempo de detencin hidrulica (TDH) de 11h
Parmetros pH Temperatura (C) DQO bruta (mgl-1) DQO ltrada (mgl-1) Alc. total (mg CaCO3 l-1) Alc. a bicarbonato (mg CaCO3 l-1) AVT (mg HAcl-1) NT (mgl-1) NTK (mgl-1) NH4+ (mgl-1) SST (mgl-1) SSV (mgl-1)
Tomado de Oliveira Netto (2007).

Auente 6,98 0,18 29,9 1,4 627 319 220 36 167 23 119 20 67,8 9,3 40,1 3,1 40,0 3,1 25,3 4,2 129,2 72,0 11,6 14,2

Euente 7,42 0,15 28,2 1,9 31 10 28 10 86 38 75 36 15,6 2,8 9,9 1,3 5,9 1,6 2,2 1,1 14,8 6,4 2,0 2,8

Los datos experimentales fueron ajustados a la sigmoide de Boltzman a travs del software Microcal Origin 6.0 c el algoritmo de Levenberg-Marquardt, minimizando la sumatoria de los errores al cuadrado. Con el mismo software, la sigmoide ajustada fue posteriormente derivada numricamente, a n de determinar las velocidades mximas de formacin de metano (r max). Dividiendo la velocidad mxima por la concentracin de biomasa de cada frasco (g STV), se obtuvo la actividad metanognica especca (AME). La derivada de la sigmoide ajustada fue integrada para determinar el rea y posteriormente la actividad metanognica media (rmed), estimndola a partir de la ecuacin (2) La concentracin de la biomasa en cada frasco o slidos totales voltiles (STV) de cada uno fue calculada por el procedimiento descrito en APHA (1998).

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Resultados El ensayo de AME fue realizado en tres fases: la primera en el nal de la fase anaerobia del reactor de lecho jo y ujo ascendente (fase 1), la segunda en la fase combinada anaerobia-aerobia con recirculacin a razn de 0,5 (fase 2), y, la tercera en la fase combinada anaerobia-aerobia con recirculacin a razn de 1,5 (fase 3). Fase 1. Reactor anaerobio de lecho jo con ujo ascendente Los anlisis de AME fueron hechos por duplicado al final de esta fase del reactor. Se realizaron 16 lecturas en el cromatgrafo durante 8 das. La concentracin de CH 4 acumulado en 176h de experimento fueron de 1,4710 2mmoll1 para el frasco 1 y de 1,46 10 2 mmoll 1 para el frasco 2 (Figura 3). El inicio de produccin de CH4 se present en ~48h en ambos frascos y la estabilizacin tuvo lugar despus de las 132h. Los valores de r mxima y r media obtenidos para los dos frascos se muestran en la Figura 4. La masa de STV para el frasco 1 fue de 151,40mg, por tanto la velocidad mxima fue de 2,37106mmolCH4/mgSTVh y la velocidad media de 7,9010 7mmolCH4 /mgSTVh. Pa r a el f r a s c o 2 la m a sa de ST V fue de 163,30mg, l a ve l o c i d a d m x i m a d e 2,1410 6 mmolCH4 /mgSTVh y la velocidad media de 7,3010 7mmolCH4/mgSTVh. Fase 2. Reactor operado anaerobioaerobio con recirculacin a razn de 0,5 Los anlisis fueron realizados por duplicado en la fase 2 del reactor, cuando fue operado de forma combinada anaerobio-aerobio con recirculacin a razn de 0,5. Se realizaron 19 lecturas en el cromatgrafo durante 8 das. La concentracin de CH4 acumulado en 175h de experimento fue de

Figura 3. Variacin temporal de la produccin de CH4, fase 1. La curva es el modelo sigmoidal ajustado a los valores experimentales ().

Figura 5. Variacin temporal de la produccin de metano, fase 2. La curva es el modelo sigmoidal ajustado a los valores experimentales ().

Figura 4. Estimacin de la actividad metanognica por el ajuste de la expresin sigmoidal, fase 1.

Figura 6. Estimacin de la actividad metanognica por el ajuste de la expresin sigmoidal, fase 2.

2,99101mmoll1 para el frasco 1 y de 3,18101mmoll1 para el frasco 2 (Figura 5). El inicio de produccin de CH4 se present en ~7h en ambos frascos y la estabilizacin tuvo lugar despus de las 120h. Los valores de r mxima y r media obtenidos pa ra los dos frascos se muestran en la Figura 6. La masa de STV pa ra el frasco 1 fue de 143,70mg, por tanto la velocidad mxima fue de 2,4110 5mmolCH4 /mgSTVh y la velocidad media de 1,2210 5mmolCH4 /mgSTVh. Pa ra el frasco 2 la masa de STV fue de 163,20mg, la velocidad mxima de

2,2210 5mmolCH4 /mgSTVh y la media de 1,17105mmolCH4 / mgSTVh. Fase 3. Reactor operado anaerobio aerobio con recirculacin a razn de 1,5 Los anlisis fueron hechos por duplicado en la fase 3 del reactor, cuando fue operado de forma combinada anaerobio-aerobio con recirculacin a razn de 1,5. Se realizaron 11 lecturas en el cromatgrafo durante 5 das. La concentracin de CH 4 acumulado en 100h de experimento fue

de 8,1210 2 mmoll 1 para el frasco 1 y de 1,02101mmoll1 para el frasco 2 (Figura 7). El inicio de produccin de CH4 se present en ~5h en los dos frascos y la estabilizacin despus de las 53h. Los valores de r mxima y r media obtenidos pa ra los dos frascos se muestran en la Figura 8. La masa de STV pa ra el frasco 1 fue de 260,40mg, por tanto la velocidad mxima fue de 1,1110 5mmolCH4 /mgSTVh y la velocidad media de 1,0010 6mmolCH4 /mgSTVh. Pa r a el f r a s c o 2 la m a s a de ST V f ue de 113,70mg, la velocidad mxima de

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2,11105mmolCH4/mgSTVh y la media fue de 1,13105mmolCH4/ mgSTVh. Discusin En la Tabla IV se presentan los valores medios de la produccin mxima y media de CH 4 pa ra cad a u na de las tres fases del reactor en que fue realizado el ensayo AME, a fin de facilitar el anlisis de los resultados. Los resultados muestran que el contenido de O 2 disuelto no a fe ct la met anognesis, al contrario, aument la velocidad y mejor la produccin de CH4. Esto puede ser explicado por el aumento de la variedad microbia na ex istente en ese compartimiento del reactor. Despus de la insercin de O 2 en el medio, microorganismos que no habitaban en ese compartimiento pasaron a existir con las nuevas condiciones impuestas. Una pr i mer a h ip t esis para explicar este comportamiento podra ser que con la recirculacin de la fase lquida aumentara el contenido de bacterias facultativas en la zona anaerobia del reactor, ubicndose as para proteger las bacterias estrictas anaerobias del O2 disuelto. Una segunda hiptesis podra ser que al aumentar la cantidad de bacterias facultativas, las cuales tienen tasas de crecimiento mayores, incrementaran la velocidad de la hidrlisis, mejorando as las fases siguientes de la digestin anaerobia: acidognesis, acetognesis y metanognesis. Estas dos hiptesis se pueden sustentar con comportamientos similares de los microorganismos en cuanto a produccin de CH 4 , bajo condiciones diferentes para su crecimiento y desarrollo, en este caso el soporte. Se observ un gran aumento en la produccin mxima y media de CH4 en la fase 2 y 3 con respecto a la fase 1, hecho que puede ser explicado siguiendo a Shen y Guiot (1996), quienes estudiaron el

impacto del O2 disuelto sobre la actividad de g r nulos anaerobios, asumiendo los grnulos como un tipo de biolm. Se podra hacer una analoga, segn Shen y Guiot (1996) bajo concentraciones limitadas de O2, mientras los microorganismos aerobios respiran ellos pueden mantener condiciones muy bajas de O 2 disuelto en un sistema cocultivado anaerobio-aerobio, Figura 7., Variacin temporal de la produccin de meevitando as una tano, fase 3. La curva es el modelo sigmoidal ajustado eventual inhibi- a los valores experimentales (). cin de los microorganismos anaerobios. Las bacterias facultativas son predominantes en el lecho perimetral del biolm, mientras que las metanognicas se sitan en el centro. Las primeras, sobre el permetro, adquieren la capaFigura 8. Estimacin de la actividad metanognica cidad de limipor el ajuste de la expresin sigmoidal, fase 3. tar ecazmente la penetracin difusiva de O 2 y prevenir el en el interior puedan sobrevivir O 2 txico para las bacterias en ambientes ricos en O2. metanognicas, situadas en el En comparacin con el trainterior del biolm y que son bajo de Shen y Guiot (1996), sensibles al mismo. De esta el crecimiento de los micromanera, la estructura espacial organismos y formacin del es considerada como una clave biofilm sobre los soportes fundamental para que las bacutilizados en el reactor del terias metanognicas situadas presente estudio es diferenTabla IV Valores medios de la produccin mXima Y media de CH4
Fase de operacin del reactor Fase 1 Fase 2 Fase 3 Valores medios r max (mmol/mg.h) r med (mmol/mg.h) 2,2510 -6 2,3110 -5 1,6110 -5 7,6010 -7 1,1910 -5 7,6710 -6

te, debido a la porosidad de la arcilla expandida y a la espuma de poliuretano. Sin embargo, la ptima tolerancia de las anaerobias al O2 podra ser atribuida a la presencia de bacterias facultativas y aerobias en el lodo, ubicadas sobre los soportes de modo tal que formen un gradiente de O 2 , evitando el contacto de ste con las bacterias anaerobias. Los resultados del estudio de Estrada et al. (2001) sugirieron que el consorcio de organismos anaerobios/metanognicos tuvieron una resistencia especial, pequea o nula al O2 , y que esta tolerancia se debe principalmente a la proteccin que ejercieron las bacterias facultativas que lograron reducir el O2 disuelto en la fase lquida. El decrecimiento de la produccin de CH4 en la fase 3 con respecto a la fase 2, puede ser explicado tambin con una analoga, ya que como se dijo anteriormente no se utilizaron grnulos durante estos experimentos. Segn Kato et al . (1997), no obstante, a pesar de la no-toxicidad del O 2 a los cultivos mixtos naturales, en los lodos granulares usados en el tratamiento de aguas residuales todava hay una preocupacin en cuanto a la competencia por el substrato entre las arqueas metanognicas y las bacterias facultativas. Si el reactor fuera alimentado con exceso de O2, el substrato sera consumido por las bacterias facultativas, puesto que tienen actividades y tasas de crecimiento especcas mucho ms altas que las metanognicas. Estas ltimas, sin el acceso al substrato, quedaran fuera de competencia. Al elevar la razn de recirculacin de 0,5 a 1,5 en la fase 3, el contenido de O2 disuelto aument y probablemente el substrato fue consumido rpidamente por las bacterias facultativas, creando una ventaja de crecimiento sobre las metanognicas y una inhibicin sobre stas. Se observ un aumento de velocidad en el inicio y estabilizacin de produccin de CH4 en los anlisis de las fases 2 y 3 del reactor; lo que tambin

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enfatiza el hecho que las bacterias facultativas tienen actividades y tasas de crecimiento especficas mucho mas altas que las arqueas metanognicas (Kato et al., 1997), probablemente acelerando as las etapas anteriores a la metanognesis. Conclusiones La presencia de O2 disuelto en la zona anaerobia del reactor cuando la fase lquida fue recirculada no inhibi la metanognesis. Por el contrario la produccin de metano fue mayor. El lodo mantuvo buena actividad metanognica en las fases 2 y 3, demostrando que el reactor funcionando en fase anaerobio-aerobio puede ser operado con xito para mantener tanto a las bacterias anaerobias estrictas, como a las aerobias, al mismo tiempo, en condiciones existentes de O2 disuelto en el uido de recirculacin. El impacto no negativo del O2 disuelto en el auente sobre las arqueas estrictas anaerobias, indica una probable presencia de bacterias facultativas formando una estructura protectora para estas bacterias anaerobias. Los resultados sugieren que aunque el O2 disuelto fue inhibitorio para las bacterias metanognicas en el reactor anaerobio-aerobio; cuando la razn de recirculacin fue un 50% mayor que el caudal de alimentacin, la tasa de produccin de CH4 fue mejor que en la fase anaerobia.

El ensayo de actividad metanognica especca fue una herramienta eficiente para el monitoreo del comportamiento de las bacterias en el reactor anaerobio-aerobio de lecho jo, operado de modo continuo con recirculacin de la fase lquida.
AGRADECIMIENTOS

Los autores agradecen a la FAPESP (Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo, Brasil) por el soporte nanciero a este trabajo.
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