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LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
ENSAYOS MICROBIOLGICOS LABORATORIO DE MICROBIOLOGA IES A SARDIEIRA ANALISIS Y CONTROL DE CALIDAD Responsable: Isabel Marfany Medn Fecha: 21/01/2014
PRUEBA Indol Rojo de metilo y Voges-Proskauer KLIGER Nitratos Citratos Catalasa Oxidasa Manitol movilidad
ENSAYO
Prueba del Indol Deteccin de la encima triptofanasa. Medio de cultivo: Agua de triptona. Tipo de siembra: transferencia asptica con asa curva. Incubacin: 24h 37c Reactivos: Kovacs (4 5 gotas). Resultados:
Aadimos al cultivo el reactivo de Kovacs y se forma un anillo prpura en la superficie del medio. El microorganismo contiene la encima triptofanasa. Indol positivo.
Prueba del Rojo de Metilo y Voges-Proskauer -Rojo de Metilo. Deteccin de la presencia de fermentacin acido-mixta. Medio de cultivo: caldo MRVP. Tipo de siembra: transferencia asptica con asa curva. Incubacin: 24h 37c Reactivos: Rojo de metilo (4 5 gotas). -Voges-Proskauer. No presenta fermentacin butanodioica. Medio de cultivo: caldo MRVP. Tipo de siembra: transferencia asptica con asa curva. Incubacin: 24h 37c Reactivos: Alfa-naftol y KOH (4 5 gotas de cada uno). Resultados:
Dividimos el cultivo en dos tubos diferentes y en uno aadimos el reactivo rojo de metilo (tubo derecho) y en el otro el reactivo alfa-naftol seguido de KOH (tubo izquierdo). Rojo de metilo: color rojo intenso (positivo). Voges-Proskauer: No se vuelve rojo (negativo).
Prueba del KLIGER Deteccin de gas. Medio de cultivo: KIA (Slant) Tipo de siembra: transferencia asptica con asa recta. Picadura y estra. Incubacin: 16h-24h 37c Resultados:
Medio inolulado. No se aaden reactivos. Produccin de cidos de la lactosa (y de la glucosa): En la superficie del medio las enterobacterias respiran utilizando la glucosa y luego la lactosa en condiciones aerbicas y anaerbicas. En el fondo producen una elevada cantidad de cidos y difunden hasta la superficie (todo el medio amarillo). El color del medio indica el PH cido (Baja el PH del medio de cultivo). *Produccin de gas cido-cido.
Prueba de Nitratos Deteccin de nitritos. Medio de cultivo: Caldo nutritivo con campana de Durham (lleva como suplemento nitrato potsico). Tipo de siembra: transferencia asptica con asa curva. Incubacin: 24h 37c Reactivos: Reactivos A y B de Griess-Ilosvay. Polvo de Zinc. Resultados:
Aadimos los reactivos A y B de GriessIlosvay. Al no cambiar el medio de color, aadiremos polvo de Zinc, ya que no podemos confirmar que sea negativo. Al aadir polvo de Zinc, el color sigue sin cambiar, y por lo tanto la prueba es positiva y hay presencia de nitritos.
Prueba de citratos Medio de cultivo: Agar Citrato de Simmons (Slant). Tipo de siembra: transferencia asptica con asa recta. Estra. Incubacin: 24h 37c Resultados:
Medio de cultivo despus de inocular. No es necesario aadir ningn reactivo. No se ha obtenido crecimiento y el agar no ha cambiado de color a azul, por tanto la prueba es negativa.
Prueba de la catalasa Deteccin de catalasa. Medio de cultivo: Agar Nutritivo (Slant). Tipo de siembra: transferencia asptica con asa curva. Estra. Incubacin: 24h 37c Reactivos: Agua Oxigenada. Resultados:
En un portaobjetos, colocamos una gota de agua oxigenada y depositamos con el asa curva (de plstico) una muestra de una colonia. El agua oxigenada se ha disociado en agua y oxgeno (se observa el burbujeo del oxgeno). La prueba es positiva (hay presencia de catalasa).
Prueba de la oxidasa Deteccin de oxidasa. Medio de cultivo: Agar Nutritivo (Slant). Tipo de siembra: transferencia asptica con asa curva. Estra. Incubacin: 24h 37c Reactivos: Reactivo de la oxidasa/reactivo de Kovacs. Resultados:
En el papel de filtro depositamos una gota de reactivo de Kovacs. Con el asa curva (de plstico), restregamos una muestra de una colonia sobre la gota. No se ha obtenido coloracin prpura. No hay cambio de color y por tanto, hay ausencia de oxidasa. La prueba es negativa.
Medio de cultivo: Manitol movilidad (agar recto, superficie lquida). Tipo de siembra: transferencia asptica con asa recta. Picadura. Incubacin: 24h 37c Resultados:
Medio de cultivo antes (derecha) y despus (izquierda) de inocular. Tras la incubacin, el medio ha cambiado a color amarillo, lo cual indica que el resultado es positivo. El microorganismo es capaz de fermentar el manitol. Hay movilidad ya que el crecimiento va ms all de la picadura, tomando una direccin determinada.