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DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
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Transporte
X
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EXAMEN DIRECTO
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Diagnstico
Examen directo SS KOH 10 30 % KOH 10% + DMSO (60/4) KOH: 2 gotas + muestra: mezcla sobre porta Varios pases a la llama (Con DMSO no) Entre porta y cubre 30 Examinar al microscopio (100 400 aumentos, poca luz
y el condensador bajo)
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Ex. directo
Clamidosporas y pseudomicelio
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Observacin microcpica
La mayora de las hifas son hialinas (incoloras), aunque algunas, especialmente las de los hongos dematiceos, pueden ser obscuras.
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Tipo de reproduccin
Conidios
Clamidosporas
Reproduccin asexual
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La observacin de la reproduccin asexual se puede efectuar a partir una colonia micelial ya desarrollada por: Visualizacin de un fragmento de medio de cultivo con micelio fngico, que observaremos entre porta y cubre con la adicin de una gota de azul de lactofenol. Visualizacin de un fragmento de micelio adherido a cinta adhesiva transparente. Es el procedimiento ms rpido. Se observa tambin con adicin de una gota de azul de lactofenol. Microcultivo. Consiste en la observacin de un micelio fngico en cultivo directamente al microscopio, siendo necesario que ste se desarrolle en un solo plano.
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En portaobjetos
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Colonias
La observacin macroscpica de la colonia premite comprobar: el aspecto superficial (algodonoso, pulverulento, aterciopelado, lanoso, etc.) el borde la elevacin de la colonia (plana o elevada en el centro) la pigmentacin durante el crecimiento de la colonia la pigmentacin difundida al medio y observable en el reverso de la colonia la existencia de pliegues.
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Colonias
Es importante recordar: el MC empleado (las caractersticas se refieren a ADS en general) la T de crecimiento el tpo de crecimiento
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Slo C. albicans es capaz de producir verdaderos tubos germinales; sin embargo, otras especies pueden producir pseudohifas. 1 Emulsionar una porcin de la colonia aislada en 0,5 ml de suero humano o conejo. 2 Incubar a 35 C durante 2 h. 3 Depositar una gota de la emulsin entre porta y cubre y visualizar a x100 y x400.
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Criterios bioqumicos
Prueba de la ureasa
Se recomiendan el caldo urea de Christensen por ser ms sensible en la deteccin de esta actividad.
Auxanogama
(Levaduras especialmente) Medios con peptonas
Para estudiar la asimilacin de HC debe utilizarse un medio exento de azcares, en el que no podra crecer el hongo, ya que todos los microorganismos necesitan una fuente de carbono. La presencia en el medio de, por ejemplo, un disco impregnado con un determinado hidrato de carbono permitir el desarrollo del h. solo si es capaz de utilizar dicho azcar como fuente de carbono.
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Diagnstico
Tincines Azul de lactofenol Gram Calcofluor
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Diagnstico
Tincin Azul de lactofenol
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Observacin microcpica
tincin
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Diagnstico
Tincin Gram
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Diagnstico
Tincin: Calcofluor
KOH
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Calcofluor + KOH
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Diagnstico
Tincin tisular PAS Gomory Gomory - Grocott
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Diagnstico
Ticin tisular: PAS (Periodic Acid - Schiff)
El ac. perydico prepara al reativo de Shiff (una fucsina) que tie los ncleos de azul y los hongos de prpura. La hematoxilina, similar al Azul de Metileno. Tie el fondo.
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Diagnstico
Ticin tisular: Gomory
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Diagnstico
Ticin tisular: Gomory-Grocott. (Variacin de la anterior)
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Diagnstico
Tincin (LCR y sangre) Tinta china Tinta china + KOH 10% Cpsula
Levadura
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Cultivo
Miceliar
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Diagnstico
Los MC se incuban en aerobiosis a 25-30C para micosis superficiales y oportunistas y 37C para infecciones sistmicas. Los h. levaduriformes dan lugar en 24-48 horas a colonias de aspecto similar a las bacterianas. Los h. filamentosos son de aspecto variable, crecen lentamente, pero sus colonias son caractersticas. Los MC para h. necesitan una fuente de N (peptonas) y de C (HC).
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Cultivo
La temperatura ptima de crecimiento de la mayora de los hongos patgenos es 30 C . Hay laboratorios que utilizan la temperatura ambiente en lugar de 30C, pero no es recomendable, ya que los cambios de temperatura son notables. La temperatura de 37 C no se recomienda por : 1 Las muestras contienen abundantes bacterias que crecen a esta T
2 Algunos hongos crecen mal a esta temperatura o no crecen,especialmente los hongos que infectan la piel. La temperatura de 37 C debe reservarse para h. dimrficos o algn hongo que se desarrolle mejor a esta temperatura y en patologa sistmica. La estufa ha de estar humedecida, con un recipiente con agua.
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Cultivo
Los medios ms empleados en Micologa pueden agruparse en dos categoras en funcin de su utilidad: aislamiento e identificacin. Los cultivos de hongos deben incubarse durante 3-4 semanas antes de ser desechados. Sin embargo, hay muestras que se pueden eliminar a los 7 das de forma habitual: Orina y exudados de mucosas. Para la identificacin, puede ser necesario un nmero mayor de medios que depender del nmero de muestras, las etiologas ms probables en la zona geogrfica, las posibilidades del laboratorio y el nivel diagnstico esperable segn el tipo de centro. Como norma general, todos los medios deben utilizarse antes de la fecha de caducidad indicada por el fabricante y, antes de su utilizacin, deben atemperarse durante unos minutos.
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Diagnstico
Cultivo
HC pH 6 Antibiotico o/y antifngicos
Sabouraud (Mycosel)
Frmula en g/l de agua destilada Peptona: Glucosa: Actidiona: Cloranfenicol: Agar: 15 g. pH: 6-6.3 10 g. 20 g. 0,5 g. (Inhibe h. Saprfitos) 0,5 g. (Inhibe bacterias)
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Agar Sabouraud
Las levaduras (Candida, Cryptococcus, Malasezia, dermatofitos, ...) crecen bien en agar sangre, agar chocolate, Cled, etc., pero el agar Sabouraud es el medio de aislamiento por excelencia.
Candida AS ADS
Paracocidioides
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Paracoccidiomicosis
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Agar Sabouraud
En ADS las colonias de levaduras son algo abombadas, lisas o rugosas. Si se observa un micelio areo definido: hongo dimrfico (Blastomyces, Histoplasma, coccidioides) levaduras que forman micelio (no hifas) verdadero (Geotrichum o Trichosporon) Una colonia de consistencia mucoide: formacin de cpsulas (Cryptococcus)
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Agar Sabouraud
Tb los h. filamentosos crecen bien en MC habituales pero en agar Sabouraud las colonias son tpicas. Se cultivan a 25 C
Trichophyton
Sporotix
Cladosporium
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Agar Sabouraud
H. filamentosos en agar Sabouraud. Colonias son tpicas.
Dematiceos
Cladosporium
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Medio de Czapek
Para aislamiento y cultivo de Aspergillus y Penicillium
sacarosa nitrato sdico sulfato de magnesio ClK sulfato de Fe fosfato dipotsico Agar
Aspergillus
Conidiophores
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Malassezia
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macro y microconidios
Histoplasma
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Detalle
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8.5 g 500 ml
macro y microconidios
Trichophyton
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Otros criptococos
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C. neoformans
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Medios cromognicos
(Medios de cultivo de hongos en los cuales se ha incluido substratos cromognicos que permiten detectar actividades enzimticas: Cambia el color del medio o de la colonia) Para levaduras generalmente.
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Cultivo
Miceliar
Candida
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Levaduriforme
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Pruebas de identificacin
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Pruebas de identificacin
Tubos germinales
Fermentacin
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A: - despus de 7 dias
B: + antes de 7 dias C: Control no inoculado
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Para estudiar la asimilacin de HC debe utilizarse un medio exento de azcares, en el que no podra crecer el hongo, ya que todos los microorganismos necesitan una fuente de carbono. La presencia en el medio de, por ejemplo, un disco impregnado con un determinado hidrato de carbono permitir el desarrollo del h. solo si es capaz de utilizar dicho azcar como fuente de carbono.
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En placa En pocillos: El medio contiene un indicador de oxido-reduccin que cambia su color de azul (ausencia de crecimiento) a rosa (crecimiento). Fungitest
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Serologa
microtitulacin
Aglutinacin
precipitacin
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ATB
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ANTIFUNGICOS
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ANTIFNGICOS
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ANTIFNGICOS
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