TINCIN

Los colorantes sufren combinacin qumica con el protoplasma de la bacteria; si la clula no est muerta, el proceso de tincin la destruye; por tanto, tal proceso es drstico y puede producir artefactos. Los colorantes utilizados a menudo son sales. Los colorantes bsicos consisten de cationes teidos con un anin incoloro (p. ej., cloruro de azul de metileno+); ocurre lo contrario con los colorantes cidos (p. ej., eosinato de sodio+). Las clulas bacterianas son ricas en cidos nucleicos y portan cargas negativas en los grupos fosfato. sta se combina con las cargas positivas de los colorantes bsicos. Los colorantes cidos no tien a las clulas bacterianas y por tanto pueden utilizarse para teir el material de fondo a fi n de proporcionar un contraste de color (vase la seccin Tincin negativa, adelante). Los colorantes bsicos tien las clulas bacterianas de manera uniforme a menos que en primer lugar se destruya el RNA citoplsmico. Sin embargo, pueden utilizarse tcnicas de tincin especial para diferenciar los fl agelos, cpsulas, paredes celulares, membranas celulares, grnulos, nucleoides y esporas.

Tincin de Gram
Una caracterstica taxonmica importante de las bacterias es su respuesta a la tincin de Gram. Las propiedades de tincin de Gram parecen ser fundamentales, porque la reaccin de Gram se correlaciona con muchas otras propiedades morfolgicas en formas con relacin fi logentica (cap. 3). Un microorganismo que en potencia es positivo para la tincin de Gram puede parecerlo slo bajo condiciones ambientales particulares y en un cultivo joven. Los procedimientos de tincin de Gram (vase el captulo 47 para detalles) inician con la aplicacin de un colorante bsico, violeta de genciana. A continuacin se aplica una solucin de yodo; todas las bacterias se tien de color azul en este punto del procedimiento. Luego la clula se trata con alcohol. Las clulas grampositivas que conservan el complejo de violeta de gencianayodo adquieren un color azul y las clulas gramnegativas se decoloran por completo con la adicin de alcohol. Como ltimo paso se aplica otro colorante (como rojo de safranina) de forma que las clulas gramnegativas decoloradas adquieran un color contrastante; las clulas grampositivas adquieren un color violceo. La base de la reaccin diferencial a la tincin de Gram es la estructura de la pared celular, como se coment antes en este captulo.

Tincin acidorresistente
Las bacterias acidorresistentes son aquellas que conservan la carbolfucsina (tiroxina bsica disuelta en una mezcla de aguaalcoholfenol) incluso cuando se decolora con cido clorhdrico en alcohol. Un frotis de clulas sobre una laminilla se cubre con carbolfucsina y se calienta en bao Mara. A continuacin se lleva a cabo la decoloracin con la mezcla de cido-alcohol y por

ltimo se aplica una tincin de contraste (azul o verde) (cap. 47). Las bacterias acidorresistentes (micobacterias y algunos actinomicetos relacionados) adquieren un color rojizo en tanto que otras clulas adquieren el color del segundo colorante.

Tincin negativa
Este procedimiento consiste en la atencin del entorno con un colorante cido, dejando a las clulas incoloras. El colorante negro de nigrosina (tinta china) se utiliza a menudo. Dicho mtodo se emplea para aquellas clulas o estructuras difciles de teir en forma directa (fi g. 2-21B).

Tincin de los flagelos

Los fl agelos son demasiado delgados (12 a 30 nm de dimetro) para que sean visibles en el microscopio de luz. Sin embargo, su presencia y distribucin pueden demostrarse al tratar las clulas con una suspensin coloidal inestable de sales de cido tnico, lo que causa la precipitacin intensa sobre las paredes celulares y fl agelos. De esta manera, el dimetro aparente de stos se incrementa a un tamao tal que las tinciones subsiguientes con fucsina bsica hacen visibles a los fl agelos en la microscopia de luz. En la fi gura 2-29 se muestran clulas teidas con este mtodo. En las bacterias peritricas los fl agelos forman haces durante el movimiento y tales haces pueden tener un grosor tal que sea posible observarlos en clulas vivas en la microscopia de campo oscuro o de contraste de fases.

Tincin de la cpsula
La presencia de la cpsula por lo comn se demuestra por procedimientos de tincin negativa o modifi caciones de tales procedimientos (fi g. 2-21). Uno de estos mtodos de tincin de la cpsula (mtodo de Welch) implica el tratamiento con solucin de violeta de genciana caliente seguido de un lavado con solucin de sulfato de cobre. Este ltimo se utiliza para eliminar el exceso de colorante porque las tcnicas convencionales de lavado con agua causaran la disolucin de la cpsula. Las sales de cobre tambin proporcionan color al fondo, con el resultado de que la clula y el fondo adquieren un color azul oscuro y la cpsula tiene un color azul mucho ms plido.

Tincin de nucletidos
Los nucletidos se pueden teir con la tincin de Feulgen, un mtodo especfi co para el DNA (fi g. 2-4).

Tincin de esporas
Las esporas se observan de la manera ms simple como cuerpos refringentes intracelulares en suspensiones celulares no teidas o como reas incoloras en clulas teidas por mtodos convencionales (fi g. 2-27). La pared de la espora es relativamente impermeable, pero puede lograrse que el colorante penetre la espora mediante el calentamiento de la preparacin. La misma impermeabilidad que sirve para evitar la decoloracin de la espora despus de un tratamiento con alcohol es sufi ciente para decolorar clulas vegetales. Ms tarde puede aplicarse un segundo

colorante. Las esporas a menudo se tien con verde de malaquita o carbolfucsina.