Facultad de Ciencias Agroalimentarias y del Ambiente Departamento de Tecnologa en Alimentos Anlisis Instrumental de los Alimentos

Facilitadora: Lic. Mara Elisa Estevez, Ph.D.

Cromatografa: Principios Generales

Por: Nundia Emile2010- 0015 Ana Gmez Bretn2010-0036 Eliezer Ortega2010-0244 Licelot Gonzlez Gmez2010-0266

La Herradura, Santiago, Repblica Dominicana 26 de enero de 2014

ndice
Introduccin .................................................................................................................................. 4 I. II. III. IV. V. Historia de la Cromatografa: Cronologa ............................................................................. 5 Etimologa de Cromatografa. ............................................................................................... 7 Cromatografa: Explicacin de la tcnica. ........................................................................ 7 Trminos frecuentemente utilizados en la cromatografa. ............................................... 8 Definiciones e importancias de la cromatografa. ............................................................... 10 Definiciones: ........................................................................................................................... 10 Importancias: ........................................................................................................................... 11 VI. Ventajas y desventajas de la cromatografa: ................................................................... 11

Ventajas:.................................................................................................................................. 11 Desventajas: ............................................................................................................................ 11 VII. 1. a. b. 2. a. b. c. d. 3. VIII. 1. 2. 3. 4. IX. 1. 2. X. 1. a. b. c. Clasificacin de los mtodos cromatogrficos. ............................................................... 12 Cromatografa de gases. .................................................................................................. 13 Gas-lquido (GLC) ...................................................................................................... 13 Gas-slido (GSC) ........................................................................................................ 13 Cromatografa de lquidos. .............................................................................................. 13 Lquido-slido (LSC) o de adsorcin. ......................................................................... 13 Lquido-lquido (LLC). ................................................................................................ 13 Intercambio inico (IEC). ........................................................................................... 13 Exclusin (EC) o de filtracin en gel. ......................................................................... 13 Cromatografa de fluidos supercrticos (SFC)................................................................. 13 Comportamiento cromatogrfico de los solutos. ............................................................. 14 Comportamiento de retencin: ........................................................................................ 14 Coeficiente de distribucin o de reparto (K): .................................................................. 14 Factor de capacidad: ........................................................................................................ 15 Retencin relativa o factor de selectividad: .................................................................... 15 Eficiencia de la columna y resolucin. ............................................................................ 16 Eficiencia de la columna. ................................................................................................ 16 Resolucin de la columna. .............................................................................................. 16 Condiciones cromatogrficas. ............................................................................................. 17 Procesos en la columna y ensanchamiento de la banda .................................................. 17 Difusin en remolinos. ............................................................................................... 17 Difusin longitudinal o axial....................................................................................... 17 Resistencia a la transferencia de materia o masa. ...................................................... 17

2. XI.

Tiempo de anlisis y resolucin ...................................................................................... 18 Alcance de la aplicacin de la cromatografa. ................................................................. 18

Conclusin................................................................................................................................... 20 Bibliografa ................................................................................................................................. 21

Introduccin De forma genrica la cromatografa no es ms que un mtodo fsico que se emplea, tanto en la industria alimentaria con en otras reas, para: separar, identificar, cuantificar y purificar compuestos mediante la velocidad diferencial de desplazamiento de los mismos la cual se establece al ser arrastrados por una fase mvil y una estacionaria. A continuacin se hablar de manera ms detallada en cuanto a ste mtodo.

I.

Historia de la Cromatografa: Cronologa primer uso de la

1855 Friedlieb Ferdinand Runge a quien se le atribuye el

cromatografa, describi el uso del papel para analizar los pigmentos.

1860 Christian Friedrich Schnbein y su estudiante Friedrich Goppelsroeder desarrollaron la tcnica de anlisis capilar. La tcnica de anlisis capilar no tuvo mucho desarrollo tcnico hasta bien entrado el siglo 20.

1901 El botnico ruso-italiano Mikhail Semyonovich Tsvet (Mijal Tsvet) a quien se le suele atribuir la verdadera primera cromatografa y se le considera como el fundador de la cromatografa en columna de lquido de adsorcin en este ltimo se emplea

carbonato de calcio para separar pigmentos vegetales de color amarillo, naranja y verde (lo que se conoce hoy en da como xantofilas, carotenos, y clorofilas, respectivamente).

1903 Mikhail Semyonovich Tsvet describi el uso de papel de filtro. El trabajo de Mikhail Semyonovich Tsvet tuvo poco uso hasta la dcada de 1930.

1927

Raphael Eduard Liesegang, desarroll avances significativos respecto a los

mtodos de Goppelsroeder. Estos avances incluyeron la colocacin de tiras de filtro en recipientes cerrados con atmsferas saturadas por los disolventes.

1931 La cromatografa sale de su relativa oscuridad cuando el qumico alemn Richard Kuhn y su alumno, el qumico francs Edgar Lederer, informaron sobre el uso de este mtodo en la resolucin de una serie de materiales biolgicamente importantes.

1941 Los qumicos britnicos, Archer John Porter Martin y Richard Laurence Millington Synge , desarrollaron la tcnica de cromatografa de particin.

1943 Raphael Eduard Liesegang, desarroll un mtodo esencialmente idntico a la cromatografa en papel moderno.

1944 Surge la tcnica de cromatografa de gases en Austria gracias al qumico Erika Cremer.

1956 Egon Stahl aplic a una investigacin el mtodo desarrollado por los soviticos Nikolay A. Izmaylov y Maria S. Shrayber. Este sistema se conoca como la cromatografa en capa fina (TLC).

1957 Marcel J.E., desarroll los capilares, o Golay, columnas, que ahora se llaman columnas tubulares abiertas.

1959 Per Flodin y Jerker Porath en Suecia desarrollaron la cromatografa de exclusin por tamao.

1964 El qumico estadounidense J. Calvin Giddings desarroll la tcnica que ahora se denomina cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC).

1969 Primeros equipos comerciales.

1970-1980 Expansin de la cromatografa de gases.

1980-1990 Expansin de la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC).

1987 Pedro Cuatrecasas y Meir Wilchek fueron galardonados con el Premio Wolf en Medicina por la invencin y el desarrollo de la cromatografa de afinidad y sus aplicaciones a las ciencias biomdicas. 1990-200Nuevas columnas y fases de HPLC

II.

Etimologa de Cromatografa.

La palabra cromatografa est formada con races griegas y significa proceso utilizado para separar y analizar sustancias coloreadas.

III.

Cromatografa: Explicacin de la tcnica.

A continuacin se comparten algunas explicaciones en cuanto a esta tcnica. a) La tcnica se fundamenta en poner en contacto dos fases o componentes mutuamente inmiscibles, que no reaccionen qumicamente, una de las cuales es mvil y la otra estacionaria. La fase estacionaria, un lquido un slido o un gel, est contenida en una probeta de largo cuello (llamada colector), formando una columna. La fase mvil consiste en una disolucin de material que se desea analizar en un disolvente apropiado que no se absorba a la fase estacionaria. A medida que la fase mvil pasa a travs de la fase estacionaria, se va produciendo una absorcin selectiva: aquellos componentes de la fase mvil que muestren mayor afinidad de absorcin con la fase estacionaria quedaran retenidos en las capas superiores de la columna, y aquellos que muestren menor afinidad se absorbern ms tarde, ms abajo en la columna. El resultado es una columna graduada o cromatograma en donde cada especie qumica se ha absorbido en una capa concreta. Estas capas reciben el nombre de platos.

Entre los materiales que se utilizan como absorbentes se encuentran la almina y la slice, tanto en estado pulverulento como en diversos geles. Cuando la fase estacionaria la forman lquidos, la columna resultado, se puede a su vez utilizar para hacer otras cromatografas, proceso que se denomina particin cromatografa. b) Se define como una tcnica o mtodo fsico de separacin basado en las diferentes velocidades con que se mueven los solutos disueltos en un disolvente llamado eluente (fase mvil) a travs de un medio estacionario o fijo. Los componentes a separar se distribuyen entre la fase estacionaria y la fase mvil o fluido que pasa a travs o a lo largo de la fase estacionaria. Como los componentes de la mezcla presentan diferente tendencia a permanecer en cualquiera de las fases, la separacin se da por el movimiento de la fase mvil en

relacin con la estacionaria y de la distribucin de las sustancias entre las dos fases. Las molculas que "prefieren disolverse" en la fase mvil sern eludas ms rpido que las que son preferencialmente solubles en la fase estacionaria y que tienden a quedar retenidas. En resumen se fundamenta en la separacin entre la fase estacionaria slida o liquida y la fase mvil liquida o gaseosa Los fenmenos rectores del proceso de retencin y separacin son la adsorcin y la absorcin. El primero queda delimitado a la superficie interfacial es decir se refiere a la fijacin o retencin de la sustancia entre la superficie de las dos fases; se relaciona con fuerzas qumicas y fsicas que dependen de la naturaleza de la sustancia absorbida, temperatura, naturaleza del absorbente y concentracin. El segundo fenmeno determina la retencin de una especie qumica por parte de una masa y depende de la tendencia que tiene sta a formar mezcla o reaccionar qumicamente con la misma.

IV.

Trminos frecuentemente utilizados en la cromatografa.

Analito: es la substancia que se va a separar durante la cromatografa. Cromatografa analtica: se emplea para determinar la existencia y posiblemente tambin la concentracin de un analito en una muestra. Fase enlazada: es una fase estacionaria que se une de forma covalente a las partculas de soporte o a las paredes internas de la columna. Cromatograma: es el resultado grfico de la cromatografa. En el caso de separacin ptima, los diferentes picos o manchas del cromatograma se corresponden a los componentes de la mezcla separada.

Cromatgrafo: es el equipo que permite una separacin sofisticada. Por ejemplo, un

cromatgrafo de gases o un cromatgrafo de lquidos. Cromatografa: es el mtodo fsico de separacin en el cual los componentes que se van a separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales es estacionaria (fase estacionaria) mientras la otra (la fase mvil) se mueve en una direccin definida. Eluyente: es la fase mvil que atraviesa la columna. Serie eluotrpica: es una lista de disolventes clasificados segn su poder de dilucin. Fase inmovilizada: es una fase estacionaria que est inmovilizada sobre partculas de soporte, o en la pared interior del tubo contenedor o columna. Fase mvil: es la fase que se mueve en una direccin definida. Puede ser un lquido (cromatografa de lquidos o CEC), un gas (cromatografa de gases) o un fluido supercrtico (cromatografa de fluidos supercrticos). La fase mvil consiste en la muestra que est siendo separada/analizada y el disolvente, que se mueven por el interior de la columna. La fase mvil se mueve a travs de la columna de cromatografa (fase estacionaria) de forma que la muestra interacciona con la fase estacionaria y se separa. Una de sus funciones es la de servir como medio para transportar los solutos desde la entrada a la salida de una columna. Cromatografa preparativa: se usa para purificar suficiente cantidad de sustancia para un uso posterior, ms que para anlisis. Tiempo de retencin o ndice de retencin de Kovats.: es el tiempo caracterstico que tarda un analito particular en pasar a travs del sistema (desde la columna de entrada hasta el detector) bajo las condiciones fijadas.

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Muestra: es la materia que va a ser analizada en la cromatografa. Puede consistir en un simple componente o una mezcla de varios. Cuando la mezcla es tratada en el curso del anlisis, la fase o fases que contienen los analitos de inters es llamada igualmente muestra mientras el resto de sustancias cuya separacin no resulta de inters es llamado residuo. Soluto: es cada uno de los componentes de la muestra que va a ser separado. Disolvente: es toda sustancia capaz de solubilizar a otra, y especialmente la fase lquida-mvil en cromatografa de lquidos. Fase estacionaria: es la sustancia que est fija en una posicin en el procedimiento de la cromatografa. Adsorcin: Es un proceso por el cual tomos, iones o molculas son atrapados o retenidos en la superficie de un material. Absorcin: La absorcin es una operacin qumica que trata la separacin de los componentes que conforman una mezcla gaseosa, ayudndose de un solvente en estado lquido, con el que conseguir formar una solucin. Plato terico: Es el volumen requerido por una molcula para establecer un equilibrio entre ella, la matriz y la fase mvil en el sistema.

V.

Definiciones e importancias de la cromatografa.

Definiciones: *La cromatografa es un mtodo fsico de separacin que depende del principio de adsorcin selectiva en el que los componentes que se han de separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales est en reposo (fase estacionaria, F.E.) mientras que la otra (fase mvil, F.M.) se mueve en una direccin definida. En otras palabras, es un proceso fsico que nos permite separar los diferentes componentes de una disolucin. *Tcnica de anlisis que consiste en separar las substancias disueltas en una mezcla por absorcin o concentracin selectiva, de forma que produce manchas de diferente color en ella.

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*La cromatografa puede definirse como una tcnica que separa una mezcla de solutos basada en la velocidad de desplazamiento diferencial de los mismos que se establece al ser arrastrados por una fase mvil (lquida o gaseosa) a travs de un lecho cromatogrfico que contiene la fase estacionaria, la cual puede ser lquida o slida. Las propiedades de los componentes de una mezcla determinan su movilidad entre s y con respecto a la fase mvil. La base de la separacin cromatogrfica ser, por tanto, la diferencia en la migracin de los mismos. *Es una tcnica de medicin utilizada para separar, identificar, cuantificar y purificar compuestos. Importancias: *Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos ms puros y que puedan ser usados posteriormente (etapa final de muchas sntesis).

Medir la proporcin de los componentes de la mezcla (finalidad analtica). En este caso, las cantidades de material empleadas son pequeas. *Su importancia radica en que esta tcnica en los ltimos aos ha sido el mtodo ms eficaz para la separacin, identificacin, cuantificacin y purificacin de pequeas cantidades de complejos orgnicos.

VI. Ventajas:

Ventajas y desventajas de la cromatografa:

En ocasiones constituye el nico mtodo conocido para la separacin, purificacin e identificacin de pequeas cantidades de complejos orgnicos. Desventajas: Las cromatografas, no son baratas, casi siempre se limitan a empresas muy grandes, transnacionales, o que tengan una cantidad de produccin enorme por da.

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VII.

Clasificacin de los mtodos cromatogrficos.

La fase mvil puede ser un gas o un lquido, mientras que la fase estacionaria slo puede ser un lquido o un slido dando lugar a la cromatografa de gases y a la cromatografa lquida, sin embargo entre estas dos fases hay un hbrido llamado Fluido supercrtico que es cualquier sustancia que se encuentre en condiciones

de presin y temperatura superiores a su punto crtico.

CGL

Lquido

Gases Slido CGS

Clasificacin de los Mtodos Cromatogrficos

Fluido supercrtico

Lquido
Slido

CLL

CLS

Lquidos

Intercambio inico Exclusin

Clasificacin de los mtodos cromatogrficos.

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1. Cromatografa de gases. a. Gas-lquido (GLC) La cromatografa gas-lquido (GLC, de gas-liquid chromatography) lleva a cabo la separacin por medio del reparto de los componentes de una mezcla qumica, entre una fase gaseosa que fluye (mvil) y una fase lquida estacionaria sujeta a un soporte slido inerte. b. Gas-slido (GSC) La cromatografa gas-slido (GSC, de gas-solid choromatography) utiliza un absorbente slido como fase estacionaria y un gas inerte como helio o nitrgeno como fase mvil. Esta tcnica ha tenido una aplicacin limitada. 2. Cromatografa de lquidos. a. Lquido-slido (LSC) o de adsorcin. En esta la fase estacionaria es un slido adsorbente como slice o almina que interacta con las sustancias que se desea separar disolvente o mezcla de disolventes. b. Lquido-lquido (LLC). Involucra predominantemente un reparto simple entre dos fases lquidas inmiscibles, una estacionaria y la otra mvil. c. Intercambio inico (IEC). Consiste en un intercambio reversible y estequiomtrico de iones entre una fase slida y una fase lquida. d. Exclusin (EC) o de filtracin en gel. Consiste en la separacin de molculas en funcin de su tamao molecular. 3. Cromatografa de fluidos supercrticos (SFC). Es una tcnica hbrida entre la cromatografa de gases (GC) y la HPLC, que combina lo mejor de ambas tcnicas. Esta tcnica es importante porque permite la separacin de mezclas en las que no es adecuada la aplicacin de la GC ni de la HPLC. y la fase mvil es un

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VIII.

Comportamiento cromatogrfico de los solutos.

1. Comportamiento de retencin: El comportamiento de retencin refleja la distribucin del soluto entre la fase mvil y estacionaria. Conceptos relacionados: a. El volumen de retencin (VR) de un soluto es el volumen de fase mvil necesario para transportar la banda de soluto desde el punto de inyeccin a travs de la columna, hasta el detector. VR = tRFc;

(tR = tiempo de retencin y Fc = gasto o flujo volumtrico). b. El volumen muerto, espacio muerto,

Recuperado de http://www.alkemyweb.com/images/actividades /un_poco_de_historia/cromatografia_fig12.gif

volumen vaco o retraso de la columna (VM) es el volumen de fluido mvil requerido para transportar un soluto no absorbido desde la inyeccin hasta su mximo en el detector. c. El volumen neto de retencin (V') es igual al volumen de retencin menos el espacio muerto de la columna. d. La retencin relativa de dos solutos () es la relacin de sus volmenes netos de retencin. e. El volumen especfico de retencin (Vg) es el volumen neto de retencin por gramo de fase estacionaria. 2. Coeficiente de distribucin o de reparto (K): Cuando un soluto entra al sistema cromatogrfico inmediatamente se reparte o distribuye entre la fase mvil y la estacionaria. Si la fase mvil se para en cualquier momento, el soluto establece un equilibrio de distribucin entre las dos fases. La concentracin en fase est dada por el coeficiente termodinmico de reparto:

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K = CS/CM Donde CS, y CM son las concentraciones de soluto en la fase estacionaria y mvil, respectivamente. Cuando K = 1, el soluto se encuentra igualmente distribuido entre las dos fases. El coeficiente de reparto determina la velocidad promedio de cada zona de soluto conforme la fase mvil avanza a lo largo de la columna. 3. Factor de capacidad: El factor de capacidad k es la cantidad ms importante en cromatografa en columna. Este parmetro se emplea para describir las velocidades de migracin de los analitos en las columnas y se interpreta considerando que mientras mayor sea el valor de este menos es la velocidad de migracin de los solutos en la columna. Para una especie A, el factor de capacidad k'A se define como:

donde KA es la constante de distribucin, VS es el volumen de la fase estacionaria y VM es el volumen de la fase mvil. 4. Retencin relativa o factor de selectividad: El factor de selectividad de una columna, como su nombre lo indica, es un trmino que define que tan selectiva es una columna para separar dos picos. El factor de selectividad de una columna para dos especies A y B se define como: donde k'B es el factor de capacidad del compuesto B, que es el ms retenido y k'A es el factor de capacidad del compuesto A, que es el menos retenido.

Resolution in Molecular Exclusion Chromatography. Recuperado de http://en.wikibooks.org/wiki/Proteomics /Protein_Separations_-

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Recuperado de http://pubs.rsc.org/services/images/RSCpubs.ePlatform.Service. Service/Articleimage/2014/LC/c3lc51023a/c3lc51023a-f6_hi-res.gif

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IX.

Eficiencia de la columna y resolucin.

1. Eficiencia de la columna. La eficiencia de la columna es la medida del grado de ensanchamiento de una banda cromatogrfico, se suele expresar en trminos de la altura H, de los platos o del nmero N de platos tericos. Otro trmino relacionado a la eficiencia es la asimetra de la banda que se define como la razn de las mitades del ancho del pico a una altura dada. 2. Resolucin de la columna. El grado de separacin o resolucin de dos bandas adyacentes se define como la distancia entre los picos de las bandas (o centros) dividida entre el ancho promedio de las bandas. La resolucin RS de una columna constituye una medida cuantitativa de su capacidad para separar dos analitos.

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X.

Condiciones cromatogrficas.

1. Procesos en la columna y ensanchamiento de la banda Existen varios procesos que tienen lugar en la columna durante una separacin cromatogrfica y que contribuyen a la variancia del pico, 2, o ensanchamiento de la banda. Cabe destacar que no todas las molculas de un mismo soluto fluyen de igual forma en el mismo instante de tiempo, es decir, no presentan un comportamiento ideal. Este comportamiento no ideal se debe a tres factores: a) difusin en remolinos, b) difusin longitudinal y c) resistencia a la transferencia de materia. a. Difusin en remolinos. Se debe a los distintos caminos que toman las molculas del soluto al atravesar la fase estacionaria. Aquellas partculas de soluto que atraviesen canales ms amplios, viajarn ms rpido con la fase mvil, y aquellas que vayan por canales ms estrechos viajarn ms lentamente. b. Difusin longitudinal o axial. La difusin longitudinal en la cromatografa en columna es una causa del ensanchamiento de banda por lo que los solutos difunden del centro de la banda o zona central, que es ms concentrado en soluto hacia regiones ms diluidas situadas por delante y detrs del centro de la banda, en sentido paralelo al flujo de la fase mvil. c. Resistencia a la transferencia de materia o masa. La resistencia a la transferencia de masa del soluto en la superficie de la fase estacionaria es otro factor que contribuye al ensanchamiento del pico. El movimiento molecular lento dentro de la fase estacionaria significa un mayor tiempo de residencia en esta fase de una molcula de soluto, mientras que otras molculas avanzan con la fase mvil. Conforme la fase mvil se mueva ms rpidamente a travs de la columna y ms lenta sea la transferencia de masa, ms ancha ser la banda del soluto que eluye de la columna.

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2. Tiempo de anlisis y resolucin El tiempo de anlisis y resolucin son parmetros que dependern del tiempo de retencin requerido para efectuar una separacin.

XI.

Alcance de la aplicacin de la cromatografa.

El campo de aplicacin de la cromatografa es muy amplio, pero cabe destacar que en donde haya productos orgnicos, ah tendr aplicacin la cromatografa. Algunos ejemplos de aplicacin: 1. Determinacin del porcentaje de formacin de la molcula de sntesis, en una planta de sntesis orgnica. 2. Determinacin de porcentaje de solvente en un producto agroqumico terminado. 3. Determinacin de concentracin de producto activo, en un producto agroqumico terminado. 4. Control de calidad de pureza de solventes, como alcohol etlico anhidro, tolueno, xileno, benceno, que entran como materias primas a una planta. 5. Determinacin del contenido de principio activo de un antitusivo en una planta de medicamentos. 6. Determinacin de concentracin de alcohol benclico, en un producto inyectado en una fbrica de medicamentos. 7. Control de calidad de la pureza de materias primas entrantes a bodega de una fbrica de productos medicinales, tales como: alcohol etlico al 95%, propilenglicol, glicerina, alcohol isoproplico, o-toluidina, paracetamol, butanol, octanol, benzaldehdo, acetato de etilo, ter dietlico, alcanfor, y muchos otros. 8. Control de calidad de producto terminado en una fbrica de cosmticos, como por ejemplo, porcentaje de alcohol en una laca para el cabello, acetona en un esmalte de uas, colorantes en casi todos los productos elaborados, porcentaje de control, en las

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esencias que se utilizan para la confeccin de perfumes, all es muy importante, realizar esta prueba. 9. En fbricas de adhesivos, pegamentos, pinturas, para controlar que el producto terminado lleve las cantidades indicadas de solventes, humectantes, colorantes, gomas, resinas, poliuretanos, secantes, rellenantes, esponjantes, suspensores, emulsificantes. 10. En la industria petrolera, es un mtodo indispensable, para analizar las composiciones de casi todos los productos que van saliendo, del cracking, los tipos de gasolinas, los compuestos orgnicos destinados a sntesis. 11. En el control de la produccin vincola, tiene infinidad de usos, desde usarse como una nariz electrnica, para caracterizacin de vinos, de acuerdo a parmetros previamente establecidos por expertos, concentracin de componentes, anlisis de aminas, como etanolamina, metilamina, agmatina, triptamina. Determinacin de ocratoxina-A. Medicin de flavonoides y fenoles. 12. En la industria de alimentos, para control de calidad de producto terminado y materias primas, tales como: protenas, sabores, sustancias que dan el olor, o sea aromatizantes, pues algunos son sintticos, como el olor a pollo, y solo este tiene variantes, como pollo con barbacoa, pollo frito, pollo asado, determinacin de colorantes. Tambin se utilizan para la caracterizacin de aceites esenciales, anlisis de nitrosaminas en agua potable, determinacin de trazas de pesticidas rgano-fosfricos en aceite de oliva, contaminacin por dioxinas, controles de alcoholemia, deteccin de pesticidas en aves y peces, para medir los nueve antioxidantes ms comunes, anlisis de carbohidratos en bebidas, analizar ismeros de carotenoides, entre otros.

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Conclusin. En conclusin, como se pudo apreciar la cromatografa no es una tcnica de separacin que se haya comenzado a desarrollar en las ltimas dcadas sino ms bien su desarrollo comienza a mediados del siglo XIX y el cual ha tenido muchos avances desde entonces. La cromatografa es un mtodo que se puede utilizar para analizar sustancias en los diferentes estados de la materia permitiendo esto que su aplicacin sea variada, y de manera especfica en la industria alimentaria.

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