ARTIGO ORIGINAL

UMA NOVA PINA REGULVEL PARA A PRODUO DE LESES POR ESMAGAMENTO DO NERVO CITICO DO RATO
A NEW ADJUSTABLE PINCH DESIGNED FOR PRODUCING CRUSH NERVE INJURIES IN THE SCIATIC NERVE OF RATS VANESSA VILELA MONTE-RASO, CARLOS ALBERTO MORO, NILTON MAZZER, MARISA DE CSSIA REGISTRO FONSECA, VALRIA DE PAULA SASSOLI FAZAN, GIULIANO BARBIERI, CLUDIO HENRIQUE BARBIERI
RESUMO Objetivo: Foi nosso objetivo, desenvolver uma pina regulvel que permite produzir uma leso com carga conhecida, num segmento de 5 mm de comprimento do nervo isquitico de ratos. Mtodos: O material escolhido para confeco da pina foi o ao inoxidvel, pela sua maior durabilidade e possibilidade de esterilizao com solues anti-spticas, quase sempre corrosivas. A carga de esmagamento da pina regulvel, pelo aumento ou diminuio da tenso da mola que a aciona, por meio de um parafuso de regulagem de calibrao, feita com uma clula de carga. Resultado: A pina foi utilizada em investigaes experimentais e mostrou-se to eficiente quanto as mquinas de ensaio e de peso morto anteriormente utilizadas. Concluso: A pina desenvolvida apresenta vantagens de ser porttil, de fcil manuseio, baixo custo e permite padronizao da carga aplicada. Descritores: Compresso nervosa. Nervo citico. Ratos.
Citao: Monte-Raso VV, Moro CA, Mazzer N, Fonseca MCR, Fasan VPS, Barbieri G et al. Uma nova pina regulvel para a produo de leses por esmagamento do nervo citico do rato. Acta Ortop Bras. [online]. 2009; 17(4):236-8. Disponvel em URL: http://www.scielo.br/aob.

ABSTRACT Objective: A new adjustable pinch has been developed for producing a crush injury, with a previously known load of 5 kg, on a 5 mm-long segment of the nerve. Methods: Stainless steel was the material selected for building the pinch due its durability and possibility of sterilization with anti-septic substances, which are often corrosive. The crushing load of the pinch is adjustable by increasing or decreasing the tension of the spring by means of a screw used for calibration, which is performed by a load cell. Result: This pinch has been used in a few experimental investigations and was shown to be as efficient as both the universal testing machine and the dead weight machine, previously used. Conclusion: The developed pinch has the advantages of being portable and user-friendly. In addition, the pinch is cheap and allows for the standardization of the applied load. Keywords: Nerve crush. Sciatic nerve. Rats.
Citation: Monte-Raso VV, Moro CA, Mazzer N, Fonseca MCR, Fasan VPS, Barbieri G et al. A new adjustable pinch designed for producing crush nerve injuries in the sciatic nerve of rats. Acta Ortop Bras. [online]. 2009; 17(4):236-8. Available from URL: http://www.scielo.br/aob.

INTRODUO Muito dos conhecimentos acumulados sobre a fisiologia, patologia, degenerao, tratamento e regenerao dos nervos perifricos tem sido resultado de estudos experimentais em pequenos animais1-5, particularmente os ratos, cuja velocidade de regenerao espontnea favorece estudos de curta durao. O nervo isquitico de ratos um modelo confivel para estudar diferentes tipos de leso e mtodos de tratamento e a leso por esmagamento um dos tipos preferidos, porque ela causa ruptura das fibras nervosas sem ruptura da maior parte das estruturas de sustentao do nervo6,7, o que facilita a regenerao subsequente leso.8-13 Apesar do uso difundido da leso experimental por esmagamento do nervo citico do rato com diferentes finalidades e objetivos, no h um padro definido em relao a quase todos os parmetros relacionados ao mecanismo de produo da leso, a comear pelo instrumento ou aparelho utilizado. Os mecanismos descritos variam desde a aplicao de presso externa com um torniquete14, at a abordagem direta do nervo e aplicao de algum tipo de

instrumento de esmagamento, como as pinas micro-cirrgicas ou de relojoeiro8ou mesmo uma sutura com fio cirrgico15 e alguns tipos de mquinas.7,9,16 Em uma srie de estudos prvios, os autores deste trabalho empregaram uma mquina universal de ensaios9,10,12 ou uma mquina de peso morto17, sempre com cargas pr-determinadas e controladas durante todo o tempo estipulado para produzi-la. Apesar da fidedignidade dos resultados obtidos com as duas mquinas, o seu prprio emprego relativamente difcil, pois o animal anestesiado e com o nervo citico exposto tem que ser levado at ela e adaptado nos acessrios que permitem o seu uso para manipular uma estrutura anatmica to pequena. A mquina universal de ensaios ainda tem a desvantagem de que a carga aplicada diminui paulatinamente, com a acomodao do nervo esmagado, necessitando de constantes ajustes para que ela se mantenha nos nveis planejados. A mquina de peso morto resolve esse problema17, mas trata-se de um instrumento robusto. Depois de empregar os dois tipos de mquina, os autores do presente trabalho vislumbraram a possibilidade de obter os mesmos

Todos os autores declaram no haver nenhum potencial conflito de interesses referente a este artigo.

Departamento de Biomecnica, Medicina e Reabilitao do Aparelho Locomotor - Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto da Universidade de So Paulo. Endereo para Correspondncia: Departamento de Biomecnica, Medicina e Reabilitao do Aparelho Locomotor - Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto da Universidade de So Paulo. Campus Universitrio. CEP:14048-900 Ribeiro Preto, SP , Brasil. E-mail: vanmonteraso@yahoo.com.br Trabalho recebido em 05/03/08 aprovado em 26/11/08

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resultados com um dispositivo muito mais simples e de fcil manejo e aplicao, na forma de uma pina esmagadora ajustvel, para uso in loco, sem a necessidade de transporte e adaptao do animal nas mquinas anteriormente utilizadas. A pina foi desenhada e confeccionada com um mecanismo acionado por uma mola de tenso regulvel, a regulagem sendo feita com uma clula de carga. MATERIAL E MTODOS Detalhamento do desenho O material escolhido para confeco da pina foi o ao inoxidvel, pela sua maior durabilidade e possibilidade de esterilizao com solues anti-spticas, quase sempre corrosivas. A pina dotada de duas hastes dobradas em S longo, conectadas por um mecanismo de dobradia reversa, ou seja, quando premidas as extremidades de manuseio e regulagem ela se abre, e quando liberadas, ela se fecha. (Figura 1) A dobradia de conexo est deslocada para mais prximo da extremidade de trabalho da pina (15 mm), sendo a extremidade de manuseio mais longa (30 mm) do que a de trabalho. (Figura 2) A carga de esmagamento da pina regulvel, pelo aumento ou diminuio da tenso da mola que a aciona, por meio de um parafuso de regulagem de calibrao, feita com uma clula de carga.

Calibrao e acionamento Sendo a pina um sistema de alavancas de primeira ordem, ou uma alavanca interfixa, a fora resultante (FR) na extremidade de trabalho uma funo da fora de calibrao da mola (FM), aplicada na extremidade de manuseio, segundo a frmula: FR 15 FM 30 Dado que se conhece a fora de calibrao da mola (FM), a fora resultante calculada pela equao: FM 30 , ou FR 2 FM, do que resulta que a fora resul15 tante na extremidade de trabalho da pina o dobro da fora de calibrao aplicada nas extremidades de regulagem e manuseio. Portanto, para a calibrao de uma carga de esmagamento de 5 kg era aplicada uma fora na de 2,5 kg na mola, simplesmente acionando o parafuso de calibrao, que era travado com uma porca, assim mantendo a carga estvel. A pina calibrada na mquina universal de ensaios com uma clula de carga de 50 Kgf de capacidade (Kratos) e um indicador digital (Kratos, modelo IKE-01). FR Uso experimental da pina A pina foi inicialmente utilizada em uma investigao sobre a reprodutibilidade do mtodo de anlise funcional13 conhecido como ndice Funcional do Citico (IFC), avaliado nas impresses das pegadas das patas posteriores de 20 ratos Wistar. O IFC foi medido por quatro examinadores antes e depois da produo de uma leso por esmagamento do nervo isquitico, com uma carga de 5 kg (Figura 3), a intervalos semanais at a oitava semana ps-operatria. A anlise macroscpica do nervo esmagado com a pina mostrava o mesmo aspecto da leso produzida com as mquinas de ensaio e de peso morto. Igualmente, a anlise do IFC indicou que o grau de acometimento funcional era compatvel com o observado em leses semelhantes produzidas com essas mquinas, para a mesma carga de leso, conforme trabalhos anteriormente realizados.

Figura 1 Ilustrao esquemtica da pina esmagadora: Base de leso (1); haste da pina (2); parafuso de calibrao (3); porca trava (4); mola aplicadora de fora; (5); base de afastamento (6); pino de articulao (7).

Figura 3 Esmagamento do nervo isquitico de um rato utilizando a pina esmagadora (A). Pina esmagadora (B).

DISCUSSO Os fenmenos envolvidos na regenerao dos nervos perifricos podem ser estudados atravs de vrios modelos experimentais, mas o modelo da leso por esmagamento tem a vantagem de no envolver as variveis introduzidas na leso por seco seguida de sutura. De fato, na leso por esmagamento controlado h manuteno, ao menos em parte, da estrutura do nervo, o que facilita a regenerao, alm de no haver necessidade de realizar a sutura, que requer treinamento prvio com as tcnicas micro-cirrgicas, alm de instrumental e material adequados, em geral de alto custo.

Figura 2 Esquema da Pina de esmagamento. Fora resultante (Fr), fora da mola (Fm).
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 inegvel o fato de que o esmagamento produz alteraes estruturais no nervo, que variam com a intensidade da presso aplicada. Dahlin e Rydevik18 demonstraram leses estruturais e funcionais nas compresses de nervos perifricos, enfatizando que os vasos intraneurais (vasa nervorum) so ocludos aplicao de presses elevadas, causando isquemia focal. Alm disso, ocorrem alteraes estruturais das fibras nervosas, com desorganizao dos envoltrios neurais, inclusive a bainha de Schwann, levando deteriorao da funo nervosa. Demonstraram, ainda, que h interrupo do transporte axonal bidirecional, a presses iguais ou maiores que 200 mmHg, aplicadas por 8 horas. Em estudo recente em nosso grupo (dados ainda no publicados), observou-se que a aplicao de cargas crescentes de esmagamento (500 g, 1.000 g, 5.000 g, 10.000 g e 15.000 g) comea a produzir leso do tipo axonotmesis j com a carga inicial e a leso se intensifica, conforme a classificao de Sunderland, com as cargas maiores, sem atingir, todavia, o grau de neurotmesis.17 A literatura especializada rica de publicaes sobre o uso da leso por esmagamento para estudar diferentes aspectos da regenerao e do tratamento dos nervos perifricos.1,2,6,8,9,10,12 Todavia, no h uma padronizao em relao ao mecanismo de produo dessas leses, o que dificulta a reproduo e comparao dos mtodos propostos. Vrios mecanismos tm sido propostos, sem predomnio de nenhum deles. Chen et al.7 introduziram o uso de mquinas de ensaio ou de outro tipo, com as quais a carga pode ser ajustada e mantida pelo tempo necessrio para causar a leso, a qual passou a ser, ento, controlada. O nosso prprio grupo empregou o modelo de leso por esmagamento com uma mquina de ensaio numa srie de investigaes.9,10,12,13 Entretanto, depois de alguns anos usando-o, ficou evidente que seu emprego um tanto quanto canhestro, pois o animal com o nervo citico exposto deve ser transportado at a mquina e l, adaptado a acessrios que por si s infligem algum dano no nervo; alm disso, a presso exercida

pela mquina no constante, diminuindo com a acomodao do nervo aps alguns minutos, requerendo constantes reajustes. Mais recentemente, foi introduzida uma mquina de peso morto, que elimina esse inconveniente, mas que continua sendo de utilizao canhestra.17 Por outro lado, as pinas cirrgicas, de fcil emprego e largamente utilizadas para o mesmo fim8, no possibilitam a quantificao e padronizao da presso exercida sobre o nervo. Dessas observaes surgiu a idia de construir uma pina regulvel que exercesse exatamente a presso desejada, objeto do presente trabalho. Essa pina foi projeta para ser muito simples, tanto no desenho, como na confeco e, mais ainda, na utilizao. Ela permite calibragem, que feita, esta sim, em uma mquina universal de ensaios, dotando-a das mais variadas cargas, de alguns gramas a vrios quilogramas, inclusive do mximo empregado nas nossas investigaes prvias, de 15 kg. Os resultados obtidos com essa pina foram comparveis queles obtidos com as mquinas de ensaios e de peso morto, particularmente a se julgar pela avaliao funcional do nervo citico.13 CONCLUSO A pina esmagadora idealizada, construda e testada em investigao experimental mostrou-se de emprego muito mais fcil e prtico do que as mquinas de ensaios e de peso morto. Dada a facilidade de calibragem com qualquer carga pretendida, seu uso deve ser difundido, lembrando que seu uso depende da disponibilidade de uma mquina de ensaios para calibr-la. AGRADECIMENTOS Agradecemos FAPESP , pela concesso de bolsa Ps-doutorado. Aos professores, Jos Batista Volpon e Antnio Carlos Shimano, e aos funcionrios do Laboratrio de Bioengenharia da FMRP-USP de Ribeiro Preto, onde foi realizada esta pesquisa.

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