Licenciatura en Qumica

Laboratorio de Bioquimica I

Practica #1

Fotocolorimetra
Palabras clave: Espectrofotmetro, espectro de absorcin, absorbancia, curva de calibracion

Introduccin Las molculas que forman a las sustancias pueden absorber energa luminosa y cada molcula absorbe distintas cantidades de energa dependiendo de su concentracin y estructura. La luz que absorbe cada molcula dependiendo de la longitud de onda es el espectro de absorcin. La energa luminosa que absorben las molculas se mide en un instrumento llamado espectrofotmetro. ste instrumento permite detectar una cantidad desconocida se soluto, capturando las radiaciones recibidas del espacio a el cual se someti a esta radiacin y compararlo con una muestra ya conocida. El aparato produce un haz de luz incidente de cierta longitud de onda que se dispersa al chocar con las molculas del analito, y solo una porcin emergente del haz de luz llega a ser medida por el espectrofotmetro. A esto se le llama transmitancia y da una medida de la relacin entre la intensidad del haz y la luz transmitida por la muestra (porcentaje). La absorbancia es la cantidad de luz absorbida por la muestra y es contraria a la transmitancia (Logaritmo (1/Transmitancia)). La concentracin del analito est relacionada con su absorbancia. La ley de Lambert-Beer dice que la absorbancia de una solucin es directamente proporcional a su concentracin y expresa que la cantidad de luz que sale de una muestra es disminuida por su concentracin, la trayectoria ptica del haz de luz y la probabilidad de que el foton sea absorbido por el material. Debido a que la absorbancia y la concentracin de

una muestra son directamente proporcionales, es posible realizar una grfica donde la absorbancia depende de la concentracin llamada curva de calibracin la cual tiene una ecuacin de la recta: y= mx + b Donde y es la absorbancia y x concentracin de la muestra. Con esta ecuacin es posible conocer concentraciones de muestras en las que solo se conoce su absorbancia. Objetivo Determinar la absorbancia de diversas sustancias con una determinada concentracin utilizando el espectrofotmetro UV de la universidad as como realizar una curva de calibracin de cada una de las sustancias. Procedimiento Experimento #1
Fue determinado el espectro de absorcin del permanganato de potasio (KMnO4) y del dicromato de potasio (K2Cr2O7), leyendo las absorbancias a cada una de las longitudes de onda comenzando a 420 nanometros y aumentando de 30 en 30 hasta llegar a 690 nanometros, calibrando a cero con la solucin de H2SO4 0.05 M.

Experimento #2 Fueron preparadas 4 diluciones (1:2, 1:4, 1:8, 1:16) para cada una de las soluciones utilizando la solucin de H2SO4 como diluyente. Despus fue leda la absorbancia de cada dilucin a la longitud de onda con mayor absorbancia de cada sustancia obtenida en el paso anterior. Resultados Experimento #1

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Licenciatura en Qumica La mayor absorbancia para el permanganato de potasio fue de 0.86 a 510nm mientras que la del dicromato fue de 0.72 a 450nm (Tabla 1). Longitud Absorbancia Absorbancia de onda (KMnO4) (K2Cr2O7) 420 0.06 0.69 450 0.25 0.72 480 0.33 0.45 510 0.86 0.17 540 0.85 0.01 570 0.64 0.01 600 0.14 0 630 0.10 -0.01 660 0.21 -0.01 690 0.19 -0.16
Tabla 1. Absorbancias de permanganato y dicromato de potasio a diferentes longitudes de onda.

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Grafica 2. Absorbancias del permanganato de potasio (KMnO4). La mxima absorbancia fue de 0.86 a 510nm.

En las siguientes graficas se muestra la mxima absorbancia que tuvieron cada una de las muestras de las sustancias.

Experimento #2 Con las longitudes de onda seleccionadas para cada una de las sustancias fue medida la absorbancia en las 4 diferentes disoluciones (Tabla 2) y se realiz una curva de calibracin para cada una de las sustancias. KMnO4 K2Cr2O7 Dilu Absor Concent Absor Concent cin bancia racin bancia racin -4 1:2 0.54 2x10 M 0.40 8x10-4M 1:4 0.32 1x10-4M 0.24 4x10-4M 1:8 0.31 5x10-5M 0.15 2x10-4M 1:16 0.13 2.5x10- 0.08 1x10-4M 5 M Mues 0.36 1.10x10 -4 tra M
Probl ema
Tabla 2. Absorbancias para cada una de las dos sustancias a la longitud de onda seleccionada.

Grafica 1. Absorbancias del dicromato de potasio (K2Cr2O7). La mxima absorbancia fue de 0.72 a 450nm.

En base a los datos anteriores se realiz una curva de calibracin para cada sustancia. Las curvas se muestran en las siguientes graficas junto con sus respectivas ecuaciones:

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Laboratorio de Bioquimica I dos sustancias analizadas cumplen con esta ley ya que se observa una proporcionalidad en ambas grficas. Los coeficientes de correlacin muestran que tanto se desvan los resultados de la recta, mientras R2 sea ms cercano a 1 ms exacto es el anlisis. Para el permanganato de potasio (KMnO4), R2=0.8955 y para el dicromato de potasio (K2Cr2O7) R2=0.9935. El resultado del coeficiente en el permanganato de potasio puede ser debido a que el manejo instrumental para hacer las diluciones no fue el correcto para esta sustancia mientras que para el dicromato de potasio, el resultado del coeficiente es aceptable. Conclusion Se determin la longitud de de onda optima de dos sustancias, el permanganato de potasio (KMnO4) y dicromato de potasio (K2Cr2O7) y en base a estas longitudes de onda se realiz una curva de calibracin para cada sustancia. Se observ que para estas dos sustancias la ley de Lambert-Beer se cumple debido a que la concentracin y la absorbancia son proporcionales. Conociendo este dato se pudo conocer la concentracin de la muestra problema de permanganato de potasio. Los conocimientos adquiridos en esta prctica podrn ser aplicados en cualquier laboratorio debido a que la espectrofotometra es uno de los mtodos ms utilizados e indispensables en la actualidad para el anlisis de muestras debido a su precisin, rapidez y fcil manejo. Bibliografa 1. Quesada Mora Slivia. Manejo de esperimentos de laboratorio para bioquimica. Editorial Universidad estatal a distancia. Costa Rica, 2007. Pagina 10.

Grafica 3. Curva de calibracion del permanganato de potasio (KMnO4). La ecuacion de la recta es y = 2052.2x + 0.1326 y su coeficiente de correlacion es de 0.8955.

Grafica 4. Curva de calibracin para el dicromato de potasio (K2Cr2O7). La ecuacin de la recta es y = 459.13x + 0.0478 y su coeficiente de correlacion es de 0.9935.

Discusin La longitud de de onda que se selecciona influye en la absorbancia que tendr nuestra muestra ya que cada sustancia tiene su propia longitud de onda optima llamada espectro de absorcin. El espectro de absorcin es caracterstico para cada sustancia y la forma de la curva es igual para una misma sustancia a diferentes concentraciones1. En este experimento el espectro de absorcin fue de 450nm para el dicromato de potasio (K2Cr2O7) y 510nm para el permanganato de potasio (KMnO4). La ley de Lambert-Beer dice lo siguiente: La cantidad de luz absorbida por la muestra es directamente proporcional a la concentracin de la muestra1. De acuerdo a las curvas de calibracin obtenidas, las

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Licenciatura en Qumica 2. Chang R. Qumica. Editorial Mc Graw Hill. Mxico. Undecima edicin, 2013. Pagina 284.

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