VALIDACION DE TECNICAS ANALITICAS

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1. OBJETIVO Establecer un procedimiento para la validacin de tcnicas analticas que sean desarrolladas y estandarizadas en Tesla Chemical. 2. ALCANCE Este procedimiento est dirigido a todo el personal del rea tcnica del laboratorio que realiza anlisis fsico qumicos. 3. RESPONSABILIDADES Es responsabilidad del Director de laboratorio, exigir y verificar el cumplimiento del presente procedimiento. Es responsabilidad de los analistas del laboratorio ejecutar y cumplir este procedimiento. 4. DEFINICIONES 4.1. VALIDACION: Evidencia documentada que provee un alto grado de certeza de un proceso, procedimiento, mtodo, equipo o sistema de que producir consistentemente un producto o resultado de una calidad previamente establecida. 4.2. VALIDACIN DE TCNICAS ANALTICAS : La validacin de un mtodo analtico es el proceso por el cual se establece, que las caractersticas de desempeo del mtodo renen los requisitos para las aplicaciones analticas requeridas. Demostracin de manera experimental y documentada, de que una tcnica analtica es adecuada para la aplicacin que se pretende, considerando todas las variables del mtodo, preparacin de la muestra, separacin cromatogrfica aplicacin de la tcnica de anlisis, deteccin de los Principio Activos y evaluacin de los datos. 4.3. TCNICA ANALTICA: Documento que describe en detalle los pasos necesarios para llevar a cabo el ensayo analtico. 4.4. REVALIDACIN: Cuando se realizan cambios en la tcnica analtica, materias primas o en el producto, la revalidacin se deber ejecutar para asegurar que la tcnica analtica mantiene sus caractersticas (selectividad, especificidad, etc.) y para demostrar que la misma continua asegurando la identidad, calidad, pureza y potencia de las materias primas y del producto. El grado de revalidacin depender de la naturaleza del cambio. 4.5. PLACEBO: Mezcla homognea de los excipientes de un producto sin el (los) principio (s) activo (s) con las mismas proporciones declaradas en la formulacin del mismo. 4.6. PRINCIPIO ACTIVO: Un principio activo o ingrediente activo es aquella sustancia con actividad farmacolgica. 4.7. PRODUCTO DE DEGRADACIN: Posibles compuestos que se pueden formar a partir de la molcula original del activo por reacciones qumicas.

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4.8. SYSTEM SUITABILITY TEST (Tcnicas HPLC): Trmino utilizado en mtodos cromatogrficos. Consiste en una serie de parmetros que deben ser revisados cada vez que se aplica la metodologa analtica. Con estos parmetros se verifica que el sistema permanece idneo en el tiempo. Estos parmetros son: Tiempo de Retencin (Tr): es el tiempo medido entre la inyeccin y la elucin de la concentracin mxima del soluto ensimo (mxima seal). Resolucin (R): Es el parmetro que expresa el grado desaparicin que se puede obtener en un sistema cromatogrfico parados componentes dados. Relaciona la capacidad separadora de un sistema cromatogrfico para dos componentes. Se define como: R = 2 (t2 t1) W1 + W2 Dnde: R= Factor de resolucin t= Tiempo de retencin para cada pico (t+/- 10 %) W= Ancho del pico medido en su base. Nmero de Platos Tericos (N): medida de dispersin de la columna cromatogrfica y de su poder separativo, Se define como: N= 16 [tn / Wtan]2 Dnde: tn= Tiempo de retencin del pico ensimo Wtan= Ancho, medido sobre la lnea base y expresado en unidades de tiempo. Factor de Asimetra (Tailing): Mide el grado de Asimetra de un pico cromatogrfico. Un valor de 1 indica un pico completamente simtrico, el valor se aleja de 1 al aumentar las colas de los picos. Conformidad: Realizar 5 inyecciones del estndar y calcular el coeficiente de varianza o la desviacin estndar relativa. Cv debe ser menor o igual al 2% a menos que la monografa individual especifique lo contrario. 4.9.0 SELECTIVIDAD Y/O ESPECIFICIDAD: es la capacidad de un mtodo analtico para medir exacta y especficamente el analito, sin ninguna interferencia que pueda encontrarse en el placebo o en los productos de degradacin conocidos o probables. 4.9.1. PRECISIN: La precisin de un mtodo analtico mide el grado de concordancia de los resultados de la prueba, cuando el procedimiento se aplica repetidamente a muestras mltiples de una muestra homognea. La precisin de un mtodo analtico generalmente se expresa como la desviacin estndar relativa (coeficiente de variacin) de una serie de medidas. La precisin puede ser medida por el grado de REPRODUCIBILIDAD o de REPETIBILIDAD del mtodo analtico bajo condiciones operativas normales.

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Reproducibilidad: Es la precisin de los resultados realizados sobre la misma muestra pero ejecutados por analistas distintos en das diferentes. Repetibilidad: Es la precisin de una metodologa cuando se realiza bajo las mismas condiciones, en la misma muestra, por el mismo analista, en el mismo laboratorio, con los mismos equipos y reactivos en un mismo da. 4.9.2. PRECISIN INTERMEDIA: Expresa la variacin dentro del mismo laboratorio, en diferentes das, con diferentes analistas o equipos diferentes. 4.9.3. EXACTITUD: la proximidad que existe entre el valor hallado en el anlisis y el valor verdadero. La exactitud de un mtodo analtico se expresa como el porcentaje de recuperacin luego de la adicin de cantidades conocidas del Principio activo al placebo de la muestra por medio de la aplicacin de la tcnica analtica. 4.9.4 SENSIBILIDAD: La sensibilidad de un mtodo analtico corresponde a la mnima cantidad de principio activo que puede producir un resultado significativo. Los parmetros a definir al evaluar la sensibilidad de un mtodo son los lmites de Deteccin y de Cuantificacin. Lmite de Deteccin: Es la concentracin ms baja de Principio Activo que puede detectarse, pero no necesariamente cuantificarse, bajo las condiciones experimentales establecidas, el clculo del lmite de deteccin es aceptable cuando el valor de la relacin seal ruido es de 3:1. Lmite de Cuantificacin: Es la menor concentracin del Principio Activo que puede determinarse con precisin y exactitud aceptables en una muestra, bajo las condiciones experimentales establecidas, el clculo del lmite de cuantificacin es aceptable cuando el valor de la relacin seal ruido es de 10:1, Se define como: S/N = 2H/h Dnde: H: Altura del pico. h: Ruido 4.9.5. LINEALIDAD: Capacidad de un mtodo analtico de obtener resultados que sean directamente, proporcionales a las concentraciones de los Principios Activos en las muestras dentro de un rango determinado. Linealidad del sistema: capacidad del mtodo analtico para obtener resultados directamente proporcionales a la concentracin o cantidad del analito en un rango determinado. Prueba que se realiza con la materia prima. Linealidad del Mtodo: capacidad del mtodo analtico para obtener resultados directamente proporcionales a la concentracin o cantidad del analito en un rango determinado. Prueba que se realiza con el placebo cargado. (Placebo + materia prima). 4.9.6 RANGO O INTERVALO: Verifica que el procedimiento analtico proporciona precisin y exactitud en los extremos del intervalo de la linealidad.

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4.9.7. ROBUSTEZ: Es la medida de la capacidad de la tcnica para permanecer inalterada frente a pequeos pero deliberados cambios, en los parmetros de la tcnica y provee un indicio de confianza de la misma durante el anlisis rutinario. En HPLC las variaciones tpicas son: Influencia en la variacin de pH en la fase mvil. Influencia en la variacin de la composicin de la fase mvil Diferente columna (diferente lote o proveedor) Diferente temperatura Diferente flujo Diferente Longitud de Onda 5.0. DESARROLLO En el siguiente procedimiento se indica el mtodo a seguir en la validacin de una tcnica analtica por HPLC o por UV, la cual es efectuada Analista de estabilidades y validaciones. ASPECTOS VALIDADOS: De acuerdo a las siguientes categoras en las que se encuentre la tcnica analtica a validar se realizarn los diferentes parmetros. CATEGORA I: Los mtodos analticos para la cuantificacin de materias primas, principios activos (incluyendo persevantes) en productos farmacuticos terminados, se encuentran bajo la categora I. CATEGORA II: Los mtodos analticos para la determinacin de impurezas en las materias primas o productos de degradacin en los productos farmacuticos terminados, se encuentran bajo la categora II. CATEGORIA III: Los mtodos analticos para la determinacin de las caractersticas de desempeo, como disolucin y desintegracin. CATEGORIA IV: Pruebas de identificacin. (Se realiza una especificidad/selectividad) En la tabla 1 se encuentran los parmetros a validar de acuerdo a la categora en la que se encuentra el mtodo analtico a validar.

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TABLA No. 1 PARAMETROS USUALMENTE EVALUADOS EN LA VALIDACIN DE TECNICAS ANALTICAS DE ACUERDO A LA CATEGORA CATEGORA PARAMETRO ANALITICO CATEGORIA II CATEGORA CATEGORIA ENSAYO III I CUANTITATIVO LIMITE S S S No No S S S S S No S S S * No S S No No * * S * * * * *

EXACTITUD PRECISIN SELECTIVIDAD LIMITE DE DETECCIN LIMITE DE CUANTIFICACIN LINEALIDAD RANGO

5.1. CONFORMIDAD DEL SISTEMA Preparar un estndar al 100% de la concentracin y determinar la eficacia del sistema operativo final antes de iniciar la validacin, determinarla realizando 5 inyecciones de la solucin estndar. Criterios de Aceptacin Parmetro de Conformidad Eficiencia de la columna (N) Factor de cola (T) Desviacin estndar relativa Resolucin

Criterio de aceptacin No menos de 1000 Menor a 2 Menor al 2% Mayor a 2

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A menos que la monografa individual especifique otra cosa. 5.2. ESPECIFICIDAD/SELECTIVIDAD Preparar soluciones de placebo, placebo cargado y estndar al 100% de la concentracin de trabajo y someterlos a los siguientes procesos de estrs para generar los compuestos potencialmente interferentes: Termlisis: preparar las soluciones a la concentracin de trabajo y someterla a una temperatura de 60C durante 1 hora. Fotlisis: preparar las soluciones a la concentracin de trabajo y someterla a la accin de la Luz U.V. (254 nm) durante 1 hora. Hidrlisis cida: preparar las soluciones a la concentracin de trabajo y someterla a la accin de cido Clorhdrico 3N y a una temperatura de 60C durante 1 hora. Hidrlisis Bsica: preparar las soluciones a la concentracin de trabajo y someterla a la accin de Hidrxido de sodio 3N y a una temperatura de 60C durante 1 hora. Oxidacin: prepara las soluciones a la concentracin de trabajo y someterlas a la accin de Perxido de Hidrogeno al 30%. Criterios de Aceptacin Las muestras de especificidad / selectividad no deben degradarse ms del 30% respecto a la muestra control. Ausencia de interferencias entre las seales cromatogrficas de los solventes utilizados en la preparacin de la fase mvil y el diluente. Ausencia de interferencias entre los productos de degradacin forzada y el principio activo puro. Si se generan otras seales cromatografcas deben ser distintas a la del tiempo de retencin del analito. 5.3. PRECISION DEL SISTEMA Preparar un estndar al 100% de la concentracin y realizar 6 inyecciones de la solucin estndar. Criterios de Aceptacin El coeficiente de variacin debe ser igual o menor al 2%. 5.4. PRECISION DEL METODO Preparar 6 muestras independientes con placebo cargado al 100% de la concentracin de trabajo y realizar inyecciones por duplicado de cada muestra. Criterios de Aceptacin El porcentaje obtenido debe estar entre el 98.0 y El 102% y el coeficiente de variacin entre muestras debe ser igual o menor al 2%.

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5.4.1 Precisin Intermedia: La precisin intermedia para el mtodo se realizara en dos das de la siguiente manera: Analista 1 y analista 2 da 1: preparar 3 muestras independientes con placebo cargado al 100% de la concentracin de trabajo y realizar inyecciones por duplicado de cada muestra, esta accin la realizara cada analista. Analista 1 da 2: preparar 3 muestras independientes con placebo cargado al 100% de la concentracin de trabajo y realizar inyecciones por duplicado de cada muestra. Criterios de Aceptacin El porcentaje obtenido debe estar entre el 98.0 y El 102% y el coeficiente de variacin entre muestras entre analistas y entre das debe ser igual o menor al 2%. 5.5. LINELIDAD DEL SITEMA Preparar una solucin madre del estndar al 200% de la concentracin de trabajo y realizar diluciones de tal manera que se obtengan concentraciones del 50, 80, 100,120 y 150% del principio activo, realizar inyecciones por triplicado de cada uno de los puntos de la linealidad. 5.6. LINEALIDAD DEL METODO Preparar una solucin madre del placebo cargado al 200% de la concentracin de trabajo y realizar diluciones de tal manera que se obtengan concentraciones del 50, 80, 100,120 y 150% del principio activo, realizar inyecciones por triplicado de cada uno de los puntos de la linealidad. Criterios de Aceptacin Coeficiente de correlacin ( r2 ) 0,99 Pendiente distinta de cero Intercepto cercano a cero 5.7. EXACTITUD Preparar 3 muestras independientes con placebo cargado a concentraciones del 50 ,100 y 150 de la concentracin de trabajo y realizar inyecciones por duplicado para cada una de las concentraciones. Criterios de Aceptacin El porcentaje de recuperacin debe estar entre 98,0 102,0% Obtener un t exp < t tabla para la recuperacin.

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r2 0,99 para la curva de recuperacin. 5.8. LIMITE DE DETECCION Y CUANTIFICACION De la solucin madre del 200% de la linealidad del sistema realizar diluciones de tal manera que se obtengan concentraciones del 10%, 20% y 40% del principio activo, realizar inyecciones por triplicado por cada uno de los puntos.

Criterios de Aceptacin lmite de deteccin es aceptable cuando el valor de la relacin seal ruido es de 3:1. lmite de cuantificacin es aceptable cuando el valor de la relacin seal ruido es de 10:1 El lmite de deteccin y cuantificacin debe estar alejado y fuera de la concentracin de trabajo. 5.9. ROBUSTEZ Se debe especificar las variables con las cuales se probar la robustez del mtodo analtico, Estas variables pueden ser:

Influencia en la variacin de pH en la fase mvil: dependiendo de la naturaleza del analito el pH puede variar 0.2 unidades del valor o intervalo especificado. Influencia en la variacin de la composicin de la fase mvil 10% del valor absoluto Diferente columna (diferente lote o proveedor) Diferente temperatura 10C Diferente flujo 50% Diferente Longitud de Onda 3nm Para el parmetro de robustez se trabajaran 3 variables que se determinaran en el momento de la validacin dependiendo del analito. 6.0 ANEXOS Anexo 1: Modelo de informe para la validacin del mtodo analtico, este puede variar dependiendo del analito y del nmero de analitos que se trabajen.

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