VIRUS QUE AFECTAN A LAS ABEJAS Dra. Karina Antnez IIBCE, Uruguay karina@iibce.edu.

uy

Instituto de Investigaciones Biolgicas Clemente Estable

www.iibce.edu.uy

Ministerio de Educacin y Cultura - Uruguay

URUGUAY

Superficie: 176,214 km2

La actividad apcola involucra a ms de 3.000 productores, quienes poseen unas 500.000 colmenas.

Exportaciones

ANUARIO 2009 - OPYPA

Se exporta aproximadamente un 90% de la miel producida en el pas, particularmente a Alemania (ms del 80 %) seguida por Espaa (alrededor de un 10 %)

PATGENOS QUE AFECTAN A LAS ABEJAS

Dadas sus condiciones de vida y cuidado

comunal, las abejas melferas son blanco de una

gran variedad de patgenos, entre ellos:

caros: Varroa destructor

Es un ectoparsito

hematfago, que se encuentra

distribuido en todo el mundo

(excepto en Australia).

archive.ermanz.govt.nz

news.bbc.co.uk

welshhoney.com

caros: Acarapis woodi

sel.barc.usda.gov

Hongos:

Nosema ceranae (A) y Nosema apis (B)

Fries et al., 2006. Journal of Apicultural Research 45: 230-233

Hongos:

N.ceranae y N. apis

Distribucin: Ambas tienen distribucin mundial, aunque N. ceranae tiene una prevalencia mucho mayor. Virulencia N. ceranae es ms virulento que N. apis.

Rango de hospedador: N. ceranae: A. mellifera, A. cerana, A. florea, A. dorsata, Bombus spp. N. apis: A. mellifera & A.cerana

Efecto de la temperatura en su crecimiento: Ambas crecen a 33C N. ceranae tambin puede crecer a menores y mayores temperaturas

Respuesta inmune:

N. apis: el sistema inmune de la abeja rpidamente activa mecanismos de defensa, para aliminar al agente patgeno. N. ceranae: pasa desapercibido, la respuesta inmune es suprimida.

Antnez et al., 2009

Diagnstico mediante PCR

Mtodo disponible en el IIBCE

Es posible detectar rpidamente la presencia de N. apis y N. ceranae en abejas, mediante PCR.

N. ceranae

N. apis

Mtodo de Martin Hernandez et al., 2007. Applied and Environmental Microbiology.73:3321-6338

Bacterias: Paenibacillus larvae (Loque Americana)

www.iibce.edu.uy

Es una de las ms serias enfermedades que afecta a las larvas de las abejas. Se encuentra distribuida mundialmente.

Aislamientos en la regin:
www.iibce.edu.uy

Argentina (1992)

Uruguay (2000)
Brasil (2004)

Chile (2005)

Ocasiona la disminucin de la poblacin de abejas y por lo tanto merma la produccin de miel.

El uso preventivo o teraputico de antibiticos genera residuos en

la miel y favorece la emergencia de cepas resistentes.

Las esporas pueden persistir viables en los materiales de las colmenas y en el ambiente por dcadas.

Diagnstico en el campo Sntomas clnicos: panal de cra con celdillas vacas alternadas con celdas operculadas, oprculos hundidos, oscuros. larvas de color marrn y aspecto gomoso.
stevesullam.com

Diagnstico mediante PCR

Mtodo disponible en el IIBCE

Es posible detectar rpidamente la presencia de P. larvae mediante PCR.

Aislamientos de los diferentes departamentos
M 1Kb 9 10 Plus M 1Kb 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

Especificidad

700 pb

700 pb

1)P.l. pulvifaciens 2)P. alvei 3)P. macerans 4)B. subtilis 5)B. cereus

6)B. brevis 7)B. megaterium 8)B. licheniformis 9)C. propinquum 10)P. larvae

1) 6 (Paysand) 2) 14 (Maldonado) 3) 16 (Flores) 4) 26 (Tacuaremb) 5) 37 (Colonia) 6) 44 (Durazno) 7) 46 (T. y Tres) 8) 73 (Ro Negro)

9) 83 (Florida) 10)87(Canelones) 11)92 (San Jos) 12)99 (Lavalleja) 13)106 (Salto) 14)M3 (Soriano) 15)control negativo 16)control positivo

Prevencin

Estrategias para prevenir la aparicin de brotes:

- reemplazo regular de los panales de la cmara de cra,

- desinfeccin de materiales,
- retiro de las colonias enfermas de los apiarios, - destruccin mediante fuego.

No erradican la bacteria pero controlan el n de esporas.

Antibiticos: no efectivos contra esporas, generan resistencia

bacteriana y pueden quedar residuos en la miel.

Alternativas naturales ???

Propleos

Producto natural producido por las abejas a partir de la recoleccin de resinas de rboles y plantas.
Es utilizado para sellar las paredes y la entrada de las colmenas, constituyendo una defensa contra infecciones de diversa ndole.

Actividad antibacteriana del EXTRACTO ETANLICO DE PROPLEOS en laboratorio.

Evaluacin de la toxicidad del EEP en abejas

No result txico para las abejas.

Actividad antibacteriana del propleos en el campo

Apiario con antecedentes de Loque Americana. Muestreo preliminar de miel para determinar el n de esporas de P. larvae.

Divisin de las colmenas en grupos y aplicacin de tratamientos.

El tratamiento de colmenas infectadas con esporas de P. larvae con EEP mediante asperjado o alimentador, determinan una disminucin del n de esporas en miel.
EEP alimento EEP asperjador

Este tratamiento se recomienda en Uruguay como medida "complementaria" a las recomendadas por el MGAP: - vigilancia para obtener un diagnstico precz - eliminacin de las colonias que presenten sntomas - aislamiento de colmenas y materiales que tuvieron contactos con las colmenas eliminadas - esterilizacin de material - no alimentacin con miel - lavado de la palanca entre el manejo de una colmena y otra

Virus ARN
Se han descrito y caracterizado ms de dieciocho virus que afectan a las abejas melferas.

Virus de la parlisis crnica (CBPV)

Uno de los virus ms estudiados y que ocasiona mayores inconvenientes.

Afecta a las abejas adultas.

Causa parlisis de las abejas, las que tiemblan y dejan de volar.

Olivier et al., 2008. Veterinary Research 132: 59-68

Algunas veces se encuentran abejas negras, brillosas, sin pelo, rondando la entrada de la colmena.

B. Ball

Los brotes de este virus se relacionan con el confinamiento de las abejas ocasionado por malas condiciones climticas y con el aumento en la densidad de colmenas en un rea geogrfica determinada.
Ribiere et al., 2010. Journal of Invertebrate Pathology 103: S120-S131

Virus de la parlisis aguda (ABPV)

B. Ball

Las abejas infectadas en el laboratorio desarrollan sntomas de forma ms rpida que el virus de la parlisis crnica, de ah su nombre.

A pesar de que est ampliamente distribuido en las colmenas, no ocasiona por si mismo mayor dao en el campo. Sin embargo, al coinfectar colmenas con V. destructor su virulencia aumenta.
news.bbc.co.uk

Se ha visto que V. destructor juega un papel esencial en la diseminacin del virus entre colmenas as como para desencadenar la multiplicacin del mismo.

Virus de la parlisis aguda Israeli (IABPV) y Kashmir (KBV)

Ambos virus, junto con el virus de la parlisis aguda forma un complejo de virus relacionados que afectan slo a las abejas adultas, causando su rpida muerte. Pueden estar presentes en las colmenas en bajos ttulos sin causar mayores inconvenientes, pero cuando aumenta el ttulo viral se tornan extremadamente virulentos. Este aumento se debe tambin a la presencia de V. destructor, quien acta como vector y como activador de la replicacin.
www.beeologics.com

news.bbc.co.uk

Virus de las alas deformadas - DWV

Causa una enfermedad bien definida, caracterizada por la presencia de alas deformadas, atrofiadas o ausencia de las mismas. A pesar de afectar a las abejas adultas, se ha detectado en huevos, larvas y pupas.

www.ars.usda.gov

Este virus tambin se ha vinculado con la presencia de V. destructor, siendo la coexistencia entre estos dos patgenos una de las probables causas del colapso de colmenas.
news.bbc.co.uk

Genersch et al., 2006. The Veterinary Journal 169: 121-123

Virus de la cra ensacada (SBV)

Afecta a las larvas de las abejas.

www.ars.usda.gov

Las larvas infectadas cambian su color, tornndose amarillas, y el fluido se acumula bajo su piel formando una bolsa, sntoma que es claramente reconocible en el campo.
Tambin se detecta en abejas adultas aunque no desarrollan sntomas.

www.ent.uga.edu

Virus de la celda real negra (BQCV)

Afecta a las larvas y prepupas de reinas, las cules se tornan amarronadas. Tambin afecta a las larvas y pupas de las abejas obreras, aunque no desarrolla los sntomas tpicos.

Se detecta en abejas adultas, pero no desarrollan sntomas.

www.vcely.sk

Benjeddu et al., 2002. Journal of General Virology 83, 3139-3146.

Rutas de transmisin de los virus

T. venrea

Transmisin vertical
Vectores, alimento, fecal-oral

T. horizontal

Chen and Siede, 2007. Advances in Virus Research 70.

Si bien muchos de estos virus pueden presentar sntomas caractersticos, pueden existir o incluso coexistir en una misma abeja o colonia, sin provocar la aparicin de

sntomas, en colmenas aparentemente sanas.

Deteccin de los virus mediante RT-PCR:

Muestras de abejas de diferentes regiones geogrficas de Uruguay.

SBV

DWV

BQCV

ABPV

CBPV

Antnez et al., 2005; 2006

IMPORTANTE: Toma de muestra para anlisis de virus

Las abejas se deben tomar vivas y mantener vivas hasta llegar al laboratorio, o mantenerse refrigeradas o en nitrgeno lquido.
Recuperacin de ARN total

Ej. Amplificacin de virus Kashmir

4C (heladera) -20C (freezer) -80C (freezer)

RNA later alcohol

Chen et al, 2007. Journal of Apicultural Research 46: 81-87.

Mtodo disponible en el IIBCE

Deteccin y cuantificacin de los virus mediante PCR en tiempo real:

Curva de amplificacin: Curva de desnaturalizacin:

Esta herramienta permite detectar y cuantificar la carga de cada virus presente en una muestra.

La importancia de los virus en la salud de las abejas ha llamado la atencin durante los ltimos aos, especialmente debido a los problemas de prdidas de colmenas que estn ocurriendo en pases del hemisferio norte, especialmente en Estados Unidos y Europa.

Collony Colapse Disorder

Definicin: progresiva despoblacin de colonias que no son capaces de desarrollarse normalmente y que acaban muriendo sin sntomas asociables a alguna patologa en particular.

Caractersticas: Rpida prdida de la poblacin adulta de una colmena

No se encuentran abejas muertas

Presencia de celdas operculadas

Presencia de reservas (miel y polen)

La abeja reina est presente, y rodeada de abejas jvenes En Estados Unidos, se lo ha relacionado ha la presencia del virus de la parlisis Israeli.

Por otro lado, tambin se lo ha relacionado a la presencia de Nosema ceranae en conjunto con virus.
El CCD es slo uno de los motivos de la prdida de colmenas. En diferentes pases las prdidas se colmenas se deben a diferentes factores.

Mapa de la despoblacin de colmenas

Neumann y Carreck, 2010.

Despoblacin de colmenas de Europa

Neumann y Carreck, 2010.

Desnutricin?

Antibioticos?

Movimiento de colmenas?

POSIBLES CAUSAS

Inmunodepresin del sistema inmune?

Organismos genticamente modificados?

Patgenos?
Pesticidas y funguicidas?

Relacin entre la presencia de virus y sntomas de mortalidad de colmenas

BQCV-SBV-DWV

100% Infectadas
ABPV CBPV Sntomas

Situacin en Uruguay, 2006

Anlisis de 20 muestras de diferentes zonas

Antnez et al., 2005; Antnez et al., 2006

Relacin entre la presencia de virus y la presencia de otros patgenos

Nosema spp.
% de colmenas infectadas
100,0
90,0 80,0 70,0 60,0 50,0 40,0 100,0 90,0 80,0 70,0 60,0 50,0 40,0 30,0 20,0 10,0 0,0 OTOO INVIERNO PRIMAVERA VERANO

V. destructor
% de colmenas infectadas

30,0
20,0 10,0 0,0

OTOO

INVIERNO

PRIMAVERA

VERANO

. La especie de Nosema spp. ms prevalente en Uruguay es N. ceranae *

BQCV
% de colmenas infectadas
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 OTOO INVIERNO PRIMAVERA VERANO 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 OTOO

SBV
% de colmenas infectadas

INVIERNO PRIMAVERA VERANO

ABPV
% de colmenas infectadas
100 90 80 70 100 90 80 70

DWV
% de colmenas infectadas

60
50 40 30 20 10 0 OTOO INVIERNO PRIMAVERA VERANO

60
50 40 30 20 10 0 OTOO INVIERNO PRIMAVERA VERANO

Los virus IAPV y KBV no se detectaron en estos apiarios apiarios, no existiendo reportes, hasta el momento, de su presencia en el pas ni en Sudamrica Sudamrica.

La presencia y co-existencia de los diferentes patgenos probablemente est involucrado en las prdidas de colmenas y en la disminucin de la produccin reportadas en Uruguay.

PROYECTOS EN CURSO:

Despoblacin de colmenas: determinacin de sus causas en Uruguay (2009-2011)

Financiado por INIA (Uruguay)

Microbiologa, IIBCE Karina Antnez Matilde Anido Beln Branchiccela Pablo Zunino Apicultura, DILAVE Jorge Harriet Juan Camp Etologa, F. CIENCIAS Ciro Invernizzi

Si bien no se han registrado episodios masivos de despoblacin de colmenas similares a los reportados en Estados Unidos, Espaa u otros pases de Europa, se han detectado episodios puntuales donde la mortalidad es mayor a la esperada.
El objetivo es valuar la prevalencia y distribucin estacional de patgenos de importancia apcola en apiarios con antecedentes de prdidas de colmenas, en Uruguay.

Epidemiologa de los principales patgenos de inters apcola (2011-2012) Financiado por ANII(Uruguay)
Microbiologa, IIBCE Matilde Anido Karina Antnez Beln Branchiccela Pablo Zunino Apicultura, DILAVE Jorge Harriet Juan Camp Centro Agrario de Marchamalo Mariano Higes Raquel Martin Hernndez

El objetivo general del trabajo de tesis es estudiar la prevalencia y distribucin en Uruguay de los principales patgenos apcolas a partir de muestras recolectadas de todo el pas.

Tesis de Maestria de Lic. Matilde Anido

Resistencia de las abejas melferas al micorsporidio Nosema ceranae (2011-2012) Financiado por ANII (Uruguay)
Apicultura, INIA Yamand Mendoza Etologa, F. CIENCIAS Ciro Invernizzi Microbiologa, IIBCE Karina Antnez

El presente proyecto pretende estudiar la posibilidad incrementar la resistencia de las abejas a la nosemosis. Para tal fin se propone: a) estudiar si existe un componente gentico asociado a la tolerancia de las abejas a la Nosemosis; b) analizar la respuesta del sistema inmune de las abejas en colonias con distinto grado de susceptibilidad a la enfermedad; c) determinar si hay virus asociados a la nosemosis.

de

Tesis de Maestra de Ing. Agr. Yamand Mendoza

Deteccin de Nosema ceranae en Bombus spp.

Etologa, F. CIENCIAS N. Arbulo E. Santos S. Salvarrey C. Invernizzi

Microbiologa, IIBCE Karina Antnez

Centro Agrario de Marchamalo Mariano Higes

El objetivo de este trabajo es determinar la presencia de N. ceranae, N. apis y N. bombi estn presentes en las especies de abejorros nativos de Uruguay: Bombus atratus and Bombus bellicosus.

Tesis de Maestria de Lic. Natalia Arbulo

Deteccin de virus de las abejas en Espaa

Centro Agrario de Marchamalo

Raquel Martn-Hernndez Encarna Garrido-Bailn Cristina Botas Amparo Martnez-Salvador Mariano Higesb

Microbiologa, IIBCE Karina Antnez Matilde Anido Pablo Zunino

El objetivo de este trabajo es determinar la prevalencia de virus ARN en abejas de Espaa.

Deteccin de virus de las abejas y su asociacin con otras patologas apcolas en Chile

Universidad de Concepcin Microbiologa, IIBCE Marta Rodrguez Karina Antnez Tesis de Doctorado de Ing. Agr. Marta Rodriguez
UNIVERSIDAD DE CONCEPCION PROGRAMA DE DOCTORADO EN CIENCIAS AGRARIAS CAMPUS CHILLN

Grupo de Investigacin en Sanidad Apcola, Departamento de Microbiologa, IIBCE

Dr. Pablo Zunino Jefe del Departamento Lic. Matilde Anido Investigadora Gdo.1 Estudiante de maestra

Dra. Karina Antnez Investigadora Gdo. 2

Lic. Daniela Arredondo Colaboradora honoraria

Bach. Beln Branchiccela Becaria

Uruguay Microbiologa, IIBCE Apicultura, MGAP Facultad de Ciencias, UdelaR Seccin Apicultura, INIA
Brasil APTA-Secretaria Agricultura do Estado de So Paulo. Espaa Centro Agrario de Marchamalo

Argentina Facultad de Ciencias Veterinarias, Tandil.

Universidad Nacional de Mar del Plata, Mar del Plata

Red Iberoamericana para el estudio de la Sanidad Apcola???

MUCHAS GRACIAS