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Tecnologa Enzimtica
Sistemas de anlisis acoplados con enzimas inmovilizadas --------------------------------------------------------------------------------Enzima Sustrato analizado glucosa Compuesto detectado cromforo Detector

--------------------------------------------------------------------------------glucosa oxidasa peroxidasa espectrofotmetro

hexoquinasa glucosa & fosfato dehidrogenasa glucosa lactato dehidrogenasa alcohol dehidrogenasa nitrato reductasa ureasa luciferasa luciferasa $acteriana a. lactico etanol nitrato urea A# NADH

NADH NADH NAD H azocompuesto C!" luz luz

espectrofotmetro espectrofotmetro espectrofotmetro espectrofotmetro respirmetro luminmetro luminmetro

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Tecnologa Enzimtica
Estrategia de produccin Comercialmente una enzima es un preparado que, adems de la proten enzimtica, contiene cantidades variables de materia contaminante proteica no proteica, e!cipientes preservantes" En razn de los costos de puri#icacin, los preparados para uso industrial $an tenido el mnimo de pureza soportado por el proceso en que se aplican" En aplicaciones cient#icas, m%dicas analticas, el m!imo de pureza es conveniente" El origen $asta la #ec$a es e!clusivamente celular, a sea proveniente de te&idos animales o vegetales o de microorganismos procariotas eucariotas" ' pesar del auge de las enzimas microbianas, a(n se produce un n(mero importante de enzimas provenientes de te&idos animales vegetales" )as enzimas de te&idos requieren de un es#uerzo para romper las c%lulas" )a e!traccin, a di#erencia del caso de las enzimas microbianas intracelulares, es una operacin simple de ba&a incidencia en el costo de produccin" )as c%lulas animales, desprovistas de

pared celular se pueden e!traer #cilmente" )a produccin por microorganismos El dise+o del medio de cultivo es mu importante, a que necesitamos una buena biomasa que a su vez e!ista el mecanismo de induccin necesario para acumular la enzima" ,or otra parte $an ocurrido avances en el dise+o de equipos para propagacin de c%lulas, lo que reducir los costos de produccin" Tambi%n se $an logrado avances importantes en los m%todos de propagacin e!istiendo la posibilidad de cultivar c%lulas ad$eridas a soportes, pudiendo en tal caso utilizarse tecnologas similares a la #ermentacin con microorganismos"

Enzimas de relevancia industrial ---------------------------------------------------enzimas origen aplicacin

---------------------------------------------------Car$ohidrolasas al#a, beta, amilasa cereales cervecera, licores al#a amilasa $ongo pani#icacin, dulces al#a amilasa bacteria te!tiles, dulces glucoamilasa $ongo edulcorantes, cerveza pectinasa $ongo vinos, #rutas celulasa $ongo #armacia, te!tiles lactasa $ongo lctea a galactosidasa $ongo az(car de remolac$a invertasa levadura edulcorantes roteasas papana bromelana papana renina proteasa proteasa alcalina Hidrolasas penicilina acilasa aminoacilasa lipasa pancreatina !xidoreductasas glucosa o!idasa catalasa %somerasas glucosa isomerasa vegetal vegetal animal animal $ongos bacteria bacteria bacteria bacteria, animal $ongo bacteria bacteria cerveza, carnes, medicinas #armaceutica #armaceutica, pan quesos pani#icacin detergentes #armaceutica alimentos #orti#icados lacteos, pan, #armacia #armacia, curtiembre alimentos, bebidas lctea edulcorante, medicinas

E/012'S

E/012'S

E4T5'CE)6)'5ES 7ermentacin Torta celular Sep slido-lquido concentracin

1/T5'CE)6)'5ES 7ermentacin Sep slido-lquido almacenamiento te&ido vegetal animal

' puri#icacin #ormulacin

E!traccin Sep slido-lquido concentracin ' puri#icacin #ormulacin

Situacin industrial en produccin enzimas

utilizacin de

El mercado mundial de enzimas es di#cil de estimar

por cuanto una #raccin signi#icativa de las mismas es utilizada por los mismos productores" ' pesar de la e!istencia de grandes empresas productoras, esta tendencia parece en aumento" El mercado de enzimas parece modesto en comparacin a otros productos biotecnolgicos" )as enzimas representaron un mercado de 239 millones de 6S : en 1;;9 contra 199,999 t de antibiticos por un valor en e!ceso de los 19, 999 millones de 6S:" <istribucin del mercado de enzimas en = del total
1ndustria 2undial 'limentaria 89 <etergentes 23 7armace(tica 19 ?tras @te!til, papel A 3 EE66 8* 18 13 8 7rancia 32 .9 nd B C$ile 3> .9 nd *

<istribucin del mercado de enzimas de uso alimentario @millones de 6S:A ------------------------------------1;B3 1;;9

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------------------------------------Clucosa isomerasa >3"3 ;2". al#a amilasa bacteriana 3."; 8>"B Clucoamilasa 3."; 83"8 5eninas *1"B .2"3 ,apana 18"3 1B"2 ,rincipales empresas productoras de enzimas -------------------------------------Empresa ,as = del mercado /ovo <inamarca .9 Cist-Drocades Eolanda 29 2iles EE66 19 Eansen <inamarca 3 Sano#i 7rancia 3 7inis$ sugar 7inlandia 3

1nmovilizacin de enzimas Se entiende por ello la enzima que est asociada o contenida en un soporte o matriz que no interviene en la reaccin" Se desarroll como un modelo de comportamiento

in vitro de enzimas asociadas a te&idos" ,uede vaticinarse que las venta&as de este sistema sern ma ores en la medida que el costo de inmovilizacin sea sensible al costo del catalizador enzimtico" Si la enzima es de ba&o costo el uso del sistema no es tan atractivo" Estructura de costos del proceso de resolucin de mezclas rac%micas de aminocidos mediante la enzima aminoacilasa -----------------------------------Costo relativo = Enzima en solucin Enzima inmov" 2ateria prima 32 .9 Enzima 23 2 2ano de obra 29 8 Combustible * 3 Soporte 2 desventa&as de enzimas inmovilizadas como catalizadores de procesos -------------------------------------Fenta&as <esventa&as -------------------------------------<esarrollo de sistemas Costo adicional de

Fenta&as

continuos 2a or estabilidad 6so ms e#iciente 'utomatizacin 5eactores

soportes Costo de inmovilizacin ,%rdida de actividad al inmovilizar 2a or pureza 5estriccin di#usin

E#luente libre de no substrato insoluble enzima ----------------------------------------

2%todos de inmovilizacin de enzimas

&nin a soportes Enlace qu'mico Entrecruzamiento %nclusin en matrices adsorcin enlace co(alente puro asociado

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Confinamiento )etencin por mem$ranas microc*psulas fi$ras huecas reactores de ultrafiltracin

'dsorcin 6nin de la enzima a un soporte que no $a sido activado para enlace covalente" 1nclu e #uerzas de Fan der Gaals enlaces de tipo inico" )a estabilidad del catalizador es ba&a" Enlace covalente )a unin covalente se produce entre grupos #uncionales de un soporte residuos aminoacdicos de la mol%cula enzimtica" @grupos ?E, SE, /E2, C??EA la reacciones son acilacin, alquilacin, diazolacin, disul#uracin la activacin a trav%s de sales de metales" El m%todo es comple&o caro pero la estabilidad del catalizador es

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alta" Entrecruzamiento" El entrecruzamiento molecular mediante reactivos bi#uncionales @glutaralde$ido, diisocianatoA es una t%cnica de uso #recuente en la inmovilizacin de enzimas" El reactivo bi#uncional puede actuar agregando las mol%culas proteicas entre s $asta la #ormacin de partculas insolubles" 1nclusin en geles )a enzima se inclu e entre las cadenas de una red polim%rica, compacta como para retener la enzima, pero permite el #lu&o de reactantes" En la actualidad resulta ms adecuada para inmovilizar c%lulas" Se usan geles de alginato, poliacrilamida almidn 5etencin por membrana )a enzima permanece libre, separada del substrato por una membrana que impide el paso de la enzima pero permite el paso de reactantes"

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7ermentacin al estado slido 6na t%cnica mu antigua que inclu e el ensilado, el composta&e, la maduracin de quesos" 2erece especial atencin por sus posibilidades sus problemas especiales" Es una t%cnica apropiada para la produccin de enzimas, $arinas enriquecidas, antibiticos, etc" )a principal di#erencia radica en la #orma como se presentan los slidos" En una solucin o suspensin se podra tener la misma $umedad que en el estado slido" )as principales di#icultades son la agitacin, #alta de $omogenizacin la trans#erencia de masa" ,ara e&emplicarlo )a produccin de $arinas enriquecidas" ,ara usos de alimentacin animal, tenemos la produccin de $arina de banano o uca #ermentada

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con biomasa de Aspergillus niger 'l preparar la $arina queda un material alto en almidn que tiene alta capacidad de retener agua" )a $umedad necesaria para satis#acer esto de&ar a(n agua libre para metabolismo a la vez no entorpecer la trans#erencia de masa, es de 83 =" Con este nivel de agua, la 'H es ba&a solo los $ongos pueden crecer" El reactor utilizado para este sistema es como sigue

El reactor cuenta con sistema automtico de control de temperatura" Cuando la temperatura sube por e#ecto del crecimiento aerbico, un control agita el reactor, dispara un c$orro de aire, con ello se logra en#riar la carga" ,ero este en#riamiento se logra a

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costa de evaporar agua, por lo que una bomba dispara un sistema de aspersin a la vez que agita" 2ientras ms velocidad de crecimiento $a a, ms #recuente es el aumento de temperatura" <e esta #orma se logra dar un seguimiento a la curva de crecimiento" El sistema tiene el problema de incentivar muc$o la respiracin, que convierte CE? a C?2 con la p%rdida de peso subsiguiente" ,or otra parte este es el sistema que logra la concentracin de protena" En general, cuando se tiene la produccin de A. niger, no se tiene problema de acidi#icacin e!cesiva" <e todas #ormas un sistema de proporcionar el nitrgeno necesario mediante una mezcla de urea sul#ato de amonio, logra me&or equilibrio del pE" El <r 7" 0adrazil en el Dodeninstitute, Draunsc$Heig, 'lemania, desarroll otro reactor para aplicarlo a crecimiento de basidiomicetos sobre pa&as bagazo de ca+a

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En 7rancia en ) on se desarrollo por el <r" Dlanc$ard un modelo inspirado en los reactores para malteado de la cebada

7inalmente el me&or reactor de tipo comercial es de la compa+a 7u&iHara de ?saIa, Japn usado para diversas #ermentaciones Ko&i con $arinas de so a arroz"