13/2/2014

Replicao: O RNA iniciador da sntese de DNA Biologia Molecular

Biologia Molecular

Replicao: O RNA iniciador da sntese de DNA

Como j visto nas sees anteriores da Replicao do DNA (Replicao e Sentido da sintese de DNA), a atividade de sntese das polimerases do DNA adicionar nucleotdeos na extremidade 3OH livre de uma cadeia em crescimento. Isso quer dizer que as polimerases do DNA requerem a presena de uma extremidade 3OH livre de um nucleotdeo corretamente emparelhado cadeia molde, para poderem atuar. Assim, as polimerases do DNA no conseguem iniciar uma sntese, ou seja, adicionar um primeiro nucleotdeo sobre uma cadeia molde. Mas, ento, como a sntese do DNA iniciada?

A primase do DNA e a sntese do primer de RNA

Para que a polimerase III do DNA comece uma polimerizao necessrio que uma outra enzima adicione os primeiros nucleotdeos. Essa enzima uma polimeraze especial que catalisa a sntese de um pequeno fragmento de RNA sobre a cadeia molde do DNA, o qual atua como inciador para a polimerase III do DNA adicionar desoxirribonucleotdeos. O fragmento de RNA iniciador de uma cadeia de DNA que, em bactria, tem cerca de 2 a 3 nucleotdeos, chamado de primer de RNA e a enzima que catalisa sua sntese denominada primase do DNA. A primase do DNA atua no incio da replicao, sintetizando o primer necessrio para comear a sntese da cadeia leading, e tambm, durante todo o processo, sintetizando os primers necessrios para o incio da sntese de cada fragmento de Okazaki. Isso necessrio porque aps completar um fregmento de Okazaki, a polimerase do DNA da cadeia lagging precisa iniciar a sntese de um novo fragmento. Os primers de RNA so feitos a intervalos regulares sobre a cadeia molde da cadeia lagging e so, em seguida, alongados pela polimerase III para gerar os fragmentos de Okazaki. A sntese de cada fragmento de Okazaki termina quando a polimerase do DNA atinge o primer de RNA ligado extremidade 5 do fragmnento sintetizado anteriormente. Clicando no link a seguir, voc poder ver uma animao ilustrando o processo da replicao do DNA, mostrando a ao da primase e da polimerase III, sintetizando a cadeia leading e os fragmentos de Okazaki na cadeia lagging.

A substituia do primer por um segmento de DNA

Nas proximidades da forquilha de replicao, a cadeia lagging constituda, portanto, por fragmentos de Okazaki, ligados seus respectivos primers de RNA, dispostos linearmente ao longo da cadeia molde. Os primers de RNA precisam ser removidos e substitudos por segmentos de DNA, antes dos fragmentos de Okazaki serem unidos entre si. A eliminao dos primers feita pela atividade exonucleotdica 5 => 3 de uma enzima que pode ser tanto uma Rnase H quanto a polimerase I do DNA. A Rnase uma enzima que degrada especificamente molculas de RNA que formam hbridos com DNA, ou seja, cadeias de RNA emparelhadas a cadeias de DNA. Assim, elas podem detectar o primer de RNA, que
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se encontra emparelhado cadeia molde de DNA, e degrad-lo. Quando isso ocorre, cria-se uma falha entre dois fragmentos de Okazaki contiguos, a qual preenchida por ao de uma polimerase de reparo de DNA, a polimerase I do DNA.

Caractersticas da polimerase I do DNA

A polimerase I do DNA uma cadeia polipeptdica nica com trs atividades enzimticas: 1 polimerizao no sentido 5 => 3 2 atividade exonucleotdica no sentido 3 => 5 3 atividade exonucleotdica no sentido 5 => 3 Existem proteases que cortam a polimerase I em dois fragmentos polipeptdicos de tamanhos diferentes. O maior, denominado fragmento Klenow, conserva a capacidade de polimerizao e a atividade exonucleotdica 3 => 5. J o fragmento menor, que no recebe denominao especial, mantm a atividade exonucleotdica 5 => 3.

A reao de deslocamento do corte

Graas a sua capacidade de alongamento de cadeia polinucleotdica e sua atividade exonucleotdica 5 => 3, a polimerase I do DNA capaz de substituir os primers de RNA por segmentos de DNA por meio de um processo denominado deslocamento do corte (do ings nick translation). Nesse processo, a polimerase I reconhece um corte (nick ) na cadeia do DNA, isto , ausncia de ligao fosfodister entre a extremidade 3 de um resduo de nucleotdeo e a extremidade 5 do resduo vizinho, que, nesse caso, o incio do primer de RNA. Uma vez conhecido o nick , a enzima se liga extremidade 3OH livre e, por meio de sua atividade exonucleotdica 5 = 3, remove por hidrlise o primeiro ribonucleotdeo do primer do fragmento de okazaki seguinte. Enquanto isso ocorre, a atividade polimerizadora da enzima, adiciona, extremidade 3OH do fragmento de Okazaki ao qual ela est ligada, um desoxirribonucleotdeo no lugar do ribonucleotdeo que foi removido. Desse modo, o nick se desloca um nucleotdeo no sentido 5 => 3 e o processo se repete. A polimerase I do DNA realiza em sequncia cerca de 10 a 12 ciclos de hidrlise e polimerizao antes de se dissociar do DNA. Isso mais do que suficiente para substituir todo o primer de RNA por DNA. Essa reao chama-se nick translation, pelo fato da atividade da enzima mover o nick entre dois fragmentos de Okazaki. Tagged as: Biomol, Cincia, DNA, Replicao Comments on this entry are closed. Previous post: Replicao: O Sentido da Sntese do DNA

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