EFECTO DE LA ROTACIN DE CULTIVOS SOBRE LA DIVERSIDAD DE LAS COMUNIDADES MICROBIANAS DEL SUELO CUANTIFICADA MEDIANTE PCRTRFLP

Prez Brandn, C. (1); J. Huidobro (1); C. Conforto (2); J. L. Arzeno (1); G. March (2); J. Meriles (3) & S. Vargas Gil (2) (1) INTA EEA Salta, Ruta Nacional 68 km. 172 C.P. 4403 Cerrillos, Salta, cpbrandan@gmail.com, jhuidobro@correo.inta.gov.ar, jarzeno@correo.inta.gov.ar (2) INTA-IFFIVE, Camino 60 Cuadras km. 5,5 Crdoba C.P. 5119 ecconforto@yahoo.com.ar, gmarch@iffive.inta.gov.ar, svargasgil@iffive.inta.gov.ar (3) jmeriles@efn.uncor.edu, RESUMEN: Las prcticas culturales determinan la presencia y actividades de las poblaciones microbianas que habitan en el suelo. Los microorganismos son importantes indicadores de la calidad del suelo debido a que cumplen funciones vitales en el reciclado de nutrientes, supresin de patgenos, transformacin de residuos, degradacin de contaminantes, entre otras. El objetivo de este trabajo fue cuantificar el efecto de la rotacin de cultivos sobre la diversidad de poblaciones de bacterianas y fngicas del suelo. Se tomaron muestras de suelo rizosfrico a partir de un ensayo establecido en la EEA INTA Salta, en el que se combinan los cultivos de soja, poroto y maz en rotacin, y sus correspondientes monocultivos. De las muestras de suelo tomadas se realiz la extraccin de ADN, se amplific mediante PCR y los productos fueron colocados en un secuenciador automtico en el que se detectaron picos de fluorescencia que fueron correlacionados con la abundancia de las especies de bacterias y hongos. Los resultados obtenidos mostraron que la mayor diversidad de poblaciones microbianas se obtuvo en el sistema de soja/maz, mientras el monocultivo de poroto present la menor biodiversidad. En el tratamiento soja/maz se registraron aproximadamente 400% ms especies fngicas, y 283% ms especies bacterianas que en el monocultivo de poroto. Esto se debe a que la rotacin de cultivos proporciona mayor variedad de nutrientes al suelo favoreciendo el desarrollo de comunidades microbianas ms diversas, lo que contribuye a mejorar el crecimiento de las plantas en ese suelo. Palabras clave: microorganismos, suelo, rotacin de cultivos INTRODUCCIN Es indispensable la conservacin del recurso suelo para mantener a largo plazo la sustentabilidad de los agroecosistemas. Para poder conocer el nivel de deterioro de un suelo, como tambin el efecto que est produciendo el manejo cultural sobre la calidad del suelo, se pueden cuantificar los parmetros qumicos, fsicos y biolgicos. Los parmetros biolgicos representan propiedades del ambiente o impactos al ambiente, pudiendo referirse a la diversidad funcional o estructural de una comunidad microbiana (Nielsen et al., 2002). En la rizsfera la actividad microbiana es elevada, y tanto en cantidad como en diversidad las poblaciones de microorganismos se encuentran en cambio dinmico a travs de la interaccin suelo-planta, de manera que la biodiversidad responde a las condiciones qumicas y fsicas del suelo como producto de los manejos del ambiente (Nannipieri et al., 2003; Nielsen et al., 2002). Debido entonces a la capacidad que tiene la microflora edfica para responder rpidamente a los cambios ambientales, los bioindicadores son ideales para cuantificar la salud del suelo (Tasar-Cepeda et al., 2000; van Bruggen et al., 2000). El tipo de cobertura vegetal (restos de cosecha, enmiendas orgnicas) determinado por el cultivo realizado y el manejo de los rastrojos, son algunos de los factores que afectan la

magnitud de la poblacin de microorganismos, y en consecuencia la intensidad de la actividad biolgica (Abril et al., 1993; Alvarez et al., 1991). La rotacin de cultivos involucra la alternancia temporal de diferentes cultivos en el mismo espacio, lo cual tiene varios efectos positivos en el sistema productivo. Desde el punto de vista de la fertilidad del suelo, la rotacin hace un uso balanceado de nutrientes comparado con el monocultivo, evitando desequilibrios qumicos de importancia, aunque se complemente con fertilizacin qumica que contemple las diferentes necesidades de cada cultivo (Bending et al., 2002; Costantini et al., 1995). Desde el punto de vista de las condiciones fsicas del suelo, las rotaciones favorecen su estructura, pues distintos sistemas radiculares de los cultivos exploran diferentes estratos del perfil, permitiendo la colonizacin del suelo con races de diferente arquitectura (Belloso et al., 2002). Finalmente, tan importante es esta prctica para la sanidad de los cultivos, que su efecto sobre los microorganismos del suelo es explcitamente reconocido como efecto rotacin de los cultivos, siendo la ms importante herramienta de manejo de enfermedades empleada en el mundo (Mathre et al., 1999). El objetivo del presente trabajo fue comprender el efecto de los sistemas productivos sobre la diversidad microbiana del suelo y su dinmica. MATERIALES Y MTODOS Se utiliz un ensayo de larga duracin que se encuentra en la Estacin Experimental Agropecuaria INTA Salta. El ensayo cuenta con parcelas de 1,8 ha, totalizando una superficie total de 9 ha. El diseo del mismo es en bloques completos al azar con tres repeticiones de soja, maz y poroto en monocultivo y soja/maz. Se tomaron muestras de suelo provenientes de los 5 primeros cm. De cada parcela se tomaron seis muestras de suelo compuestas, siguiendo un diseo en V. Los muestreos se efectuaron 15-20 das antes de la cosecha de los cultivos. Las muestras fueron colocadas a -20C hasta su posterior empleo en el laboratorio. Para la cuantificacin de hongos y bacterias universales, se extrajo el ADN del suelo mediante un kit de extraccin, se cuantific la concentracin de ADN obtenido, se diluy y se realizaron a continuacin las reacciones de PCR. Para esta amplificacin se emplearon primers marcados con fluorescencia (PET ITS 1f e ITS 4r) que permitieron la separacin de los fragmentos de restriccin luego de que los productos de PCR fueron hidrolizados con endonucleasas (HhaI y MspI), para producir fragmentos de ADN de diferentes longitudes. El anlisis de TRFLP se llev a cabo en un secuenciador automtico (ABI Applied Biosystems), que detect los diferentes fragmentos a travs de la fluorescencia generada por los primers marcados, emitiendo diferentes picos, segn la longitud de los fragmentos de restriccin. Se analizaron los resultados con el programa Gel Compar II. RESULTADOS Los resultados encontrados mostraron mayor diversidad de poblaciones microbianas en el sistema soja/maz, en comparacin con los monocultivos de soja, poroto y maz (Figura 1). Segn se observa en la Figura 1, segn el porcentaje de picos de fluorescencia generados a partir del secuenciador, el monocultivo de poroto fue el sistema en el que se observ menor diversidad tanto fngica como bacteriana. En el tratamiento soja/maz se registraron aproximadamente 400% ms especies fngicas y 283% ms especies bacterianas que en el monocultivo de poroto.

Figura 1. Diversidad de especies fngicas y bacterianas cuantificada mediante PCR-TRFLP, segn diferentes sistemas de rotacin de cultivos, a partir de un ensayos de larga duracin establecido en la EEA INTA Cerrillos, Salta. DISCUSIN Segn los resultados obtenidos, la rotacin de cultivos muestra claramente un efecto positivo sobre las poblaciones microbianas, aumentando su diversidad en el suelo. Esto se debe a que la presencia de diferentes cultivos a lo largo del tiempo proporciona mayor variedad de nutrientes al suelo favoreciendo el desarrollo de comunidades microbianas ms diversas, lo que contribuye a mejorar el crecimiento de las plantas en ese suelo (Vargas Gil et al., 2009), situacin opuesta a lo que se observa para el monocultivo. Justamente los rastrojos de diferentes cultivos contienen en general las mismas clases de compuestos orgnicos, pero la proporcin de cada uno depende de cada especie vegetal, lo que determinar la tasa de degradacin de los residuos. Segn Bandick & Dick (1999), cada residuo de cultivo tiene caractersticas que lo hacen nico, de forma tal que determinan diferencialmente las actividades especficas de los microorganismos asociados a ellos. A su vez, Galantitni & Rosell (2006) afirman que los microorganismos son controlados por el flujo de C y N, a travs de los residuos de cultivo. Es decir que segn los cultivos que se alternen en la rotacin se determinar el tamao, la diversidad y las actividades de los microorganismos en el suelo, dependiendo del tipo y cantidad de residuos que sean incorporados al sistema (Vargas Gil et al., 2009). CONCLUSIN La rotacin de soja con maz favorece el desarrollo de poblaciones microbianas ms diversas en el suelo, en comparacin con el monocultivo de soja, poroto y maz. Financiamiento: INTA Proyecto PNHFA1123. Coordinadora Ing. Agr. Susana Garca Medina. Tambin el British Council a travs de una beca para pasanta de investigacin en la Universidad de Warwick, Inglaterra. BIBLIOGRAFA Abril, A; M Acosta; O Bachmeier & A Rollan. 1993. Efecto de la cobertura vegetal sobre la actividad biolgica de un suelo en zona rida. Rev. Argentina de Microbiologa 25 (1): 1526. Alvarez, DP; AG Luque; J Alvarez; JC Papa & ML Gamberale. 1991. Aislamiento de la micota total, celuloltica y queratinoltica de suelos cultivables con abonos verdes y fertilizantes. Ciencia Suelo 9: 62-67.

Bandick, AK & RP Dick. 1999. Field management effects on soil enzyme activities. Soil Biol. Biochem. 31: 1471-1479. Belloso, C. 2002. El maz y su importancia en la rotacin. AAPRESID Revista de maz 2002. Bending, GD; MK Turner & JE Jones. 2002. Interactions between crop residue and soil organic matter quality and the functional of soil microbial communities. Soil Biol. Biochem. 34: 1073-1082. Costantini, A; A Segat & D Cosentino. 1995. The effect of different soil management procedures on carbon cycle components in an entic hapludoll. Comm. Soil Sci. Plant Anal. 26: 2761-2767. Galantini, J & R Rosell. 2006. Long-term effects on soil organic matter quality and dynamics under different production systems in semiarid Pampean soils. Soil Till. Res. 87: 72-79. Mathre, DE; RJ Cook & NM Callan. 1999. From discovery to use. Traversing the world of commercializing biocontrol agents for plant disease control. Plant Dis. 83: 972-983. Nannipieri, P; J Ascher; MT Ceccherini; L Landi; G Pietramellara & G Renella. 2003. Microbial diversity and soil functions. Eur. J. Soil Sci. 54: 655-670. Nielsen, NM; A Winding; S Binnerup; BM Hansen & N Kroer. 2002. Microorganisms as indicators of soil health. National Environmental Research Institute (NERI). Technical report No. 388. Tasar-Cepeda, C; MC Leirs; S Seoane & F Gil-Sotres. 2000. Limitations of soil enzymes as indicators of soil pollution. Soil. Biol. Biochem. 32: 1867-1875. van Bruggen, AHC & AM Semenov. 2000. In search of biological indicators of soil health and disease suppression. Appl. Soil Ecol. 15: 13-24. Vargas Gil, S; A Becker; C Oddino; M Zuza; A Marinelli & G March. 2009. Soil biological, chemical and physical responses to the impact of tillage intensity, fertilization, and cattle grazing in a long-term field trial. Environ. Management 44: 378-376. Vargas Gil, S; J Meriles; C Conforto; G Figoni; M Basanta; E Lovera & GJ March. 2009. Field assessment of soil biological and chemical quality in response to crop management practices. World J. Microbiol. Biotech. 25:439448