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DATOS Vivas Muertas Total % viabilidad Clulas/mL CONTEO 66 51 117 56,41% 2925000 Vivas Muertas Total % viabilidad Clulas/mL

CONTEO 47 25 72 65,28% 1800000


DESVIACION 9,5 13 22,5 4.435 562500

PROMEDIO Vivas Muertas Total % Viabilidad Clulas/ mL


56,5 38 189 60,845 2312500

La muestra analizada en la prctica, se obtuvo a partir de un cultivo celular en proliferacin, del cual se sacaron dos alcuotas. Una de ellas se someti a un bao Mara a 80C durante 5 minutos, las clulas presentes en esta alcuota han perdido su funcionalidad ya que las altas temperaturas afectan la membrana celular, provocando la muerte de la clula. La otra alcuota no fue sometida a ningn proceso. Como se juntaron las clulas de ambas alcuotas (una de clulas vivas y una de clulas muertas), la viabilidad esperada es de un 50%, para distinguir entre las clulas vivas y las clulas muertas, se utilizara el azul de tripano; la funcin de la membrana celular es restringir el paso de ciertas molculas, cuando est pierde su funcin la clula muere, permitiendo el paso de las molculas; el azul de tripano entrara en la membrana de las clulas muertas tindolas de color azul, mientras en las clulas vivas no se observara ninguna coloracin.

CAUSAS DE ERROR: Con respecto a la muestra, obtuvimos una viabilidad de 60,845%, la cual se excede al porcentaje esperado debido a diferentes causas, como: ERROR POR CARGA INCORRECTA DE LA CMARA DE NEUBAUER. Es bastante comn cargar la cmara de Neubauer con una cantidad de muestra ligeramente superior o inferior a 10 microlitros. En el primer caso, el cubreobjetos se levanta ligeramente para alojar el exceso de lquido ; en el segundo caso, la cmara alojar menos de 10 microlitros introduciendo un error. ERRORES HUMANOS COMO: - No visualizando correctamente la muestra, dejando de contar clulas o contando artefactos confundindolos con clulas. - Se conoce que los recuentos celulares manuales, como los realizados con cmara de neubauer se encuentra actualmente en desuso debido al amplio margen de error de la tcnica. PREGUNTAS. 1. Explique en que consiste y como se realiza los ensayos de viabilidad con loduro de propido. Yoduro de propidio es una molecula fluorescente utilizada para teir clulas. Se utiliza como una mancha de ADN, tanto para citometra de flujo, para evaluar la viabilidad celular o contenido de ADN en el anlisis del ciclo celular, y la microscopa para visualizar el ncleo y otro ADN que contiene orgnulos. Se puede utilizar para diferenciar las clulas necrticas, apoptticas y normal. Se necesitan nucleasas para distinguir entre la tincin del ADN y el ARN. Se utiliza generalmente para identificacin de clulas muertas. Yoduro de propidio es el tinte mas utilizado para evaluar cuantitativamente el contenido de ADN. La membrana celular tiene permeabilidad selectiva, en las clulas muertas esta membrana pierde su funcin, por lo que el ioduro de propidio se intercala entre las bases del ADN y ARN

2. Consultar mtodos de evaluacin de viabilidad celular por inclusin celular. Los ensayos de inclusin evalan la integridad de la membrana celular, siendo los ms utilizados el Diacetato de Fluorescena (FDA) o la calcena. Estos se caracterizan por atravesar la membrana plasmtica, se hidrolizan por las esterasas y dan lugar a una fluorescencia dentro de la clula, siempre que sta se encuentre en estado funcional. 3. Explique en que consiste el ensayo de viabilidad celular con sales de tetrazolium. Dichas sales son reconocidas inicialmente por su efecto de teir bacterias. La reduccin de una sal de tetrazolium causa la formacin de un precipitado insoluble de coloracin intensa, conocido con el nombre de formazn. Hoy da su utilizacin se extiende a: pruebas de viabilidad de semillas, presencia y enumeracin de bacterias, pruebas de motilidad bacteriana en agar semislido y deteccin de sistemas enzimticos de deshidrogenasas. Las sales de tetrazolium presentan diferencias en grado de solubilidad en grasas, tamao de los cristales de formazn que generan al reducirse y la rapidez con que se produce la reaccin de reduccin. La prueba con estas sales, indica tejidos vivos y muertos. Dicha prueba, no evalua la capacidad de divisin celular y desarrollo. 4. Consultar el efecto de la temperatura sobre la membrana celular. La temperatura alta produce la ruptura de la membrana celular, daando severamente su estructura y originando la muerte de la clula, por ende, la termo-estabilidad de la membrana celular es un factor importante en la tolerancia a la temperatura alta. El aumento de la temperatura aumenta la energa cintica entre las molculas y, por lo tanto, el movimiento de las colas hidrocarbonadas. Esto lleva a una disminucin de las interacciones atractivas entre las mismos y a un aumento de los movimientos de rotacin y de difusin lateral. Si la temperatura desciende significativamente, la membrana puede llegar a cristalizarse, con la prdida consiguiente de muchas

funciones vitales de la membrana. Otros factores que afectan la membrana celular son: El pH. Concentracin de iones. El tamao de las molculas. La liposolubilidad. El tamao de los poros.

5. Qu cree que pasara si en vez de utilizar clulas animales se utilizar levaduras para realizar este experimento? En este caso, se puede usar cualquier colorante conocido. Si se usa el azul de metileno hay que tener en cuenta que se hace ms difcil el contaje porque mancha mucho de azul la solucin por lo que habr que diluirlo antes de mezclarlo con la muestra a analizar o bien utilizar rodamina. sta tiene un color rosado suave por lo que hace ms simple el recuento. Ambos colorantes pintan las levaduras muertas. El conteo de las levaduras se debe realizar en el cuadro del centro.

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