Enzimas

Las Enzimas Son Catalizadores

Poderosos
Enzimas son protenas que pueden acelerar
reacciones bioqumicas en factores de 10
5
to
10
17
! Esto es mucho mayor que catalizadores
qumicos.
Enzimas pueden ser extremadamente
especficas en trminos de sustratos y
productos en las reacciones.
Enzimas catalizan reacciones bajo condiciones
moderadas (e.g. pH 7.4, 37C).
La actividad cataltica de muchas enzimas
pueden ser regulada por efectore alostricos.

Caractersticas
Casi todas enzimas son protenas.
Son termosensibles
Son hidrosolubles
Pueden ser precipitadas por reactivos que precipitan las
protenas
Contienen el 16% de su peso como nitrgeno.
Clasificacin
Nombres caprichosos.
Pepsina, tripsina, quimotripsina.
Luego se agrego el sufijo asa.
En funcin de la reaccin que catalizan o el sustrato
sobre el cual actan.
Lactasa acta sobre su sustrato lactosa.
Clasificacin
La Unin Internacional de Bioqumica y Biologa
Molecular (IUBMB).
Sistema de nomenclatura para las enzimas.
El nombre comienza con EC,
Primer digito representa la clase
Segundo digito significa la subclase
Tercer digito es la subsubclase o subgrupo
Cuarto digito da el numero de la enzima particular en la
lista
Clasificacin
1. Oxidorreductasas: Transferencia de hidrgeno o
adicin de oxigeno. (Lactato deshidrogenasa)
2. Transferasas: Transferencia de grupos diferentes del
hidrgeno. (aminotranferasas)
3. Hidrolasas: Ruptura de enlace con adicin de agua.
(Tripsina)
4. Liasas: Ruptura sin adicin de agua. (Aldolasa)
5. Isomerasas: Transferencia intramolecular. (triosa
fosfato isomerasa)
6. Ligasas: Condensacin de dos molculas ATP
dependiente. (acetil CoA carboxilasa)
Ejemplo
Alcohol deshidrogenasa
Alcohol-NAD-oxidorreductasa (IUBMB)
EC.1.1.1.1

Diagramas de Energa Libre
K
eq
= e
G/RT

For A A


[A]

/[A]
o
= e
G/RT

[A]

= [A]
o
e
G/RT
K
eq
= constante de equilibrio
[A]

= concentracion de las moleculas con la energia de activacion
[A]
o
= concentration total
G

= cambio en la energia libre estandar de la energia de activacion

Efecto de un Catalizador en la Energa de
Activacin
Catalizador no afecta G
A
(inicial) o G
B
(final) por lo que no afectan el cambio de
enregia libre (G = G
B
- G
A
) o la constante de equilibrio K
eq
.
Concentracion en el equilibrio de A y B es determinada por el cambio en energia
libre.
Catalizadores solamente afectan G

, disminuyendo la energia de activacion.

Aceleran ambos sentidos de las reacciones en sentido hacia la derecha y la
reaccion inversa (incrementando la constante cinetica k
1
and k
-1
).
Intermediarios en una Reaccion de
Multiples Pasos
Cintica Enzimtica
Efecto de la Concentracion del Sustrato
en la Velocidad de Reaccion
Cintica de Michaelis-Menten (1)
v = k
2
[ES]
(Nota: k
2
tambien se le llama k
cat
)

[Enzima]
total
= [E]
t
= [E] + [ES]

Como encontrar [ES]?

1. Asumir el equilibrio, si k
-1
>> k
2
:
K
S
= k
-1
/k
1
= [E][S]/[ES]
or
2. Asumir estado estacionario:
d[ES]/dt = 0
(Michaelis y
Menten, 1913)
(Briggs y
Haldane, 1925)
E = enzima, S = sustrato,
ES = complejo enzima-sustrato,
P = producto
Cintica del Estado Estacionario en
Enzimas
Nota: Esto significa que v en
v = k
2
[ES] debe ser la
velocidad inicial, v
o
, la
velocidad de la reaccion
despues del estado pre-
estacionario y al inicio del
estado estacionario, i.e.,
antes de que ~10% del
sustrato sea convertido a
producto.
Cintica de Michaelis-Menten Continua (2)
Porque se asume el estado estacionario:
d[ES]/dt = k
-1
[ES] + k
2
[ES] - k
1
[E][S] = 0

Por lo que: k
1
[E][S] = k
-1
[ES] + k
2
[ES]

Rearreglo: [ES] = (k
1
/(k
-1
+ k
2
))[E][S]

Sustituyendo (constante de Michaelis = K
M
= (k
-1
+ k
2
)/k
1
) = K
S
+ k
2
/k
1
:
[ES] = ([E][S])/K
M

Entonces:

K
M
[ES] = [E][S]
Cintica de Michaelis-Menten Continua (3)
Sustituyendo ([E] = [E]
t
- [ES]):
K
M
[ES] = [E]
t
[S] - [ES][S]

Rearreglo: [ES](K
M
+ [S]) = [E]
t
[S]

Entonces: [ES] = [E]
t
[S]/(K
M
+ [S])

Ahora podemos sustituir por [ES] en la ecuacion de
velociad v
o
= k
2
[ES], entonces


Ecuacion de Michaelis-Menten
v
o
= k
2
[E]
t
[S]/(K
M
+ [S])

or

v
o
= V
max
[S]/(K
M
+ [S])

(Ya que V
max
= k
2
[E]
t
cuando [S] >> K
M
)
Lineweaver-Burk (Doble Reciproco)
Eadie-Hofstee
Reaccion de Multiples Pasos
E + S ES EP E + P


v
o
= k
cat
[E]
t
[S]/(K
M
+ [S])
k
2
k
3
k
1
k
-1


(k
cat
= constante de velocidad
general que incorpora k
2
y

k
3
)




Eficiencia Catalitica (k
cat
/K
M
)
=> Enzima Perfecta

Limite de reaccion
controlada por Difusion:
10
8
-10
9
M
-1
s
-1
Preferencia de
sustrato de la
quimotripsina
Dependencia del pH para la Actividad de
la Enzima

Reacciones de Bisustratos Catalizadas
por Enzimas: Dos Ejemplos
Reacciones de Bisustratos
S1 + S2 P1 + P2

A-X + B A + B-X (en reacciones de
transferasas)

Union secuencial de S1 y S2 antes de la catalisis:
Union aleatoria del sustrato Ya sea S1 o S2
pueden enlazarse primero, y luego el otro se une.
Union ordenada del sustrato - S1 debe unirse
primero que S2.
Reaccion de Ping Pong primero S1 P1, P1 es
liberado antes de que S2 se una, entonces S2 P2.


E


E



Reaccion de Ping Pong
Union secuencial
Complejo Ternario
Indicativo de la formacion de un complejo ternario y un
mecanismo secuencial
Indicativo de un mecanismo de Ping Pong