UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA FACULTAD DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE FISIOLOGA Y BIOQUMICA

MANUAL DE LABORATORIO HEMOGRAMA

INTRODUCCION

la cual necesita extraerse del organismo y en ocasiones separarse en sus diferentes componentes: prasma, suero y clulas, para ser analizados en
bsqueda de alteraciones en dichos componentes.

HEMATOLOGIA: Es el estudio de los tejidos hematopoyticos y de la sangre,

VELOCIDAD DE SEDTMENTACTN qLOBULAR (VSG) ERTTROSEDTMENTACTN (ESD)

OBJETIVO Determinar

eritrocitos

complemento diagnstico en enfermedades hematolgicas y no hematolgicas.

en unidades de longitud y tiempo la propiedad que tienen los glbulos rojos para formar pilas de monedas. sirve como

FUNDAMENTO La VSG se realiza por el mtodo de Westergreen, considerado como el mtodo de referencia internacional. La sangre antioagulada con EDTA se coloca en una pipeta de vidrio en forma vertical y se dela en reposo durante una hora. Los eritrocitos tienden a caer al fondo dd la columna y las protenas plasmticas (fibringeno, gammaglobulinas y otras) hacen resistencia a la cada. El valor de la VSG corresponde al punto done las clulas se separan del plasma. En los individuos sanos la VSG ocurre lentamente y en pr.otero. patolgicos ocurre ms rpidamente. En algunos casos es proporcional a la gravedad de la enfermedad. GONSULTE: como estar la vsG en un individuo con anemia?

MATERIALES sangre con EDTA. (consulte qu es el EDTA y cul es su mecanismo de accin) Pipeta de Westergreen. Gradilla para sedimentacin (Westergreen). Reloj o timer. La pipeta es un tubo recto de 300 mm de longitud y 2.5 mm de dimetro y est graduada de 0-200 mm. Se coloca en forma vertical en la gradilla de su mismo nombre.

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FACTORES QUE NTERVIENEN EN LA VSG En general la sedimentacin est afectada por propiedades de los eritrocitos, del plasma y por factores de tipo tcnico. Entre ellos se encuentran: . Tamao y forma de los eritrocitos. . Aglutinacin de los eritrocitos. . Composicin del plasma. . Viscosidadsangunea. '. Calibre y longitud del tubo. Cantidad y calidad del anticoagulante. . Efecto de la temperatura y tiempo.

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METODOLOGiA Mezclar suavemente la muestra por inversin del tubo.

utilizando el micropipetiador, aspirar la sangre llenar la pipeta de Westergreen hasta la marca cero (0). Llevar inmediatamente a la gradilla y fijar la pipeta evitando que se derrame la sangre. Poner a correr el cronmetro durante t hora y leer exactamente cuando se cumpla este tiempo.

IMPORTANGIA CLNICA: La VSG se utiliza como prueba de rutina en el diagnstico inicial y seguimiento de mltiples enfermedades, es importante en la deteccin de entiadJs ocultas especialmente de origen neoplsico, en el seguimiento de enfermedades como la fiebre reumtica, tuberculosis e infarto al miocardio y para establecer diagnsticos diferenciales. Por corresponder a un reactante de fase aguda se convierte en un marcador inespecfico no asociado a ninguna enfermdad en concreto, pero su elevacin implica la existencia de un proceso inflamatorio, infeccioso o neoplsico. cifras mayores de 100mm/h se han asociado con enfermedades malignas (ca coln, Linfoma, ca de mama, entre otros).

MEDGIN DEL HEMATOCRITO

OBJETIVO Expresar en porcentaje (%) volumen de sangre total.

el nmero de clulas rojas empacadas en

un

MToDo El hematocrito corresponde al volumen ocupado por los glbulos rojos en relacin con el volumen total de sangre. Puede obtenerse por centrifugacin (micromtodo o microhematocrito) o por mtodos electrnicos. por micromtodo, se determina aplicando una fuerza centrfuga de 3.000 r.p.m. durante 3 minutos a una muestra de sangre total que est contenida en un
capilar especialmente diseado para esta prueba. MATERIALES Sangre anticoagulada con EDTA. Capilar. Plastilina. Centrfuga. Tabla de lectura de capilares de microhematocrito.

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METODOLOGA Mezcle cuidadosamente la sangre anticoagulada por un minuto para obtener una buena homogenizacin. Llene el capilar con sangre aproximadamente % partes. Selle el extremo inferior con plastilina. Llevar a la centrfuga durante 3 minutos a 3000 r.p.m. Despus de centrifugar, retire el capilar proceda la lectura del hematocrito en Ia tabla correspondiente. En, el capilar se observan las clulas rojas empacadas, una , capa blanquecina que corresponde a los glbulos blancos y plaquetas (que slo

alcanzan

un valor de

0.5 1 mm en condiciones

normales)

el

'

sobrenadante correspondiente al plasma (en l pueden observarse cambios en el color, normalmente = amarillo claro, lctrico = amarillo fuerte, hemolizado = rojizo, lipmico = lechoso). El volumen de clulas se lee desde cero (0) hasta donde termina la capa de glbulos rojos y empieza la capa de blancos, la cual no se incluye en la lectura.

GONSULTE: Como estar el HTO en un individuo con hemorragia?

MEDIGIN DE LA HEMOGLOBINA OBJETIVO cuantificar la cantidad de hemoglobina presente en los glbulos rojos.

sea por mtodos manuales o automatizados.

MToDo Mtodo de la cianometahemoglobina: Al medir la hemoglobina se determina la suma de todas las formas de hemoglobina presentes en el eritrocito (oxihemoglobina, carboxihemoglobina, metahemoglobina y otras), Iisando los glbulos rojos para obtener un compuesto estable conocido como cianometahemoglobina, que puede ser medido en un espectrofotmetro, ya

FUNDAMENTO La mezcla de reactivo de Drabkin (clANURo) con la sangre, transforma la hemoglobina en cianometahemoglobina. La intensidad Of color de esta reaccin se mide en un fotocolormetro o espectrofotmetro.

Pasos de la reaccin: 1. Hemoglobina + ferrocianuro potsico = metahemoglobina. 2. Metahemoglobina + cianuro potsico = cianometaemoglobina.
MATERIALES Sangre venosa anticoagulada con EDTA o sangre obtenida por puncin capilar. Tubos de ensayo. Pipeta de Sahli (20 landas = 0.02 ml) o pipeta automtica.

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Tapones de caucho o papel parafinado. Fotocolormetro debidamente catibrado. Cubetas para el Fotocolormetro. Reactivo de Drabkin.

rA El reactivo de Drabkin es txico, contene cianuro.

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Evite el contacto con ojos, piel, mucosas.

INSTRUCCIONES DE PROCEDIMIENTO Deposite 5 ml del reactivo de Drabkin en eltubo de ensayo. Mida exactamente 20uL (0.02 mr) de sangre en la pipeta de sahli. Limpie los excedentes de sangre por fuer de la pipeta. Lleve la pipeta hasta el fondo del tubo y deposite la sangre expulsando y aspirando varias veces para lavar internamente las parees Tape eltubo y mezcle suavemente por nversin. Deje el tubo en reposo durantg 10 minutos para que se produzca la hemlisis total de las clulas rojas y se complete la reaccin. Deposite la solucin en la cubeta del Fotocolormetro. Lea la solucin obtenida, usando como blanco el reactivo de Drabkin.

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r La concentracin de hemoglobina se
MToDoS ELEGTRNIcoS

absorbancia por una constante que resulta de la calibracin del mtodo. Ejemplo: Absorbancia de la muestra x24.g= hemoglobina en g/dl

calcula multiplicando

la

En todos los analizadores semiautomatizados o automatizados, la hemoglobina determina con misma fundamentacin mtodo manual (cianometahemoglobina), utilizando un hemoglobinmetro incorporado al instrumento.

se

la

del

La OMS estableci como lmites inferiores de normalidad valores: En et hombre 13 gr/dL y en mujeres 12 gr/dL. por debajo de estos valores se considera anemia.
GONSULTE: cuanto es el mnimo de Hb que indique transfusin? CONSTANTES GORPUSCULARES I,OICCS DE WINTROBE

corpuscular medio (vcM), hemoglobina corpuscular media (HGM) y concentracin de la hemoglobina corpuscular media (CHCM). Estos :tres promedios o constantes corpusculares de Wintrobe se constituyen en pilares para la clasificacin MORFOLGICA de las anemias.

hemoglobina, el hematocrito y el recuento de eritrocitos por mm3'Determinan el tmao y el contenido de hemoglobina de los eritrocitos bajo los conceptos del volumen

son el resultado matemtico de la relacin entre la

1. v.c.M = volumen corpuscular medio. Tambin llamado promedio de

Volumen Corpuscular (PVG)

Se refiere al tamao de los eritrocitos, se expresa en fentolitros (fl-)t y se obtiene al relacionar el volumen de clulas rojas empacadas (Hicl) y el
recuento de glbulos rojos, con la siguiente frmula: VCM PVC

Hro

(%)

-x
Rto de G.R./ milln

10

Valor de Referencia 80-10ofl

Una de las desventajas en el mtodo clsico o manual es la variabilidad y el error en el conteo de los glbulos rojos. Pero el VCM obtenido por mtoos automatizados es mucho ms confiable. En el neonato el VCM vara de la siguiente forma: En el recin nacido 106 fL; a la semana de nacimiento 101 fL, y durante la tercera y cuarta semana despus del nacimiento alcanza los varores normales del adulto.

2. HcM = Hemoglobina corpuscular

media. Tambin llamada promedio de Hemoglobina Gorpuscular (pllC)

Representa la cantidad de hemoglobina presente en cada eritrocito, expresada en picogramos (pg) como unidad de peso. Relaciona la

concentracin de Hb y el recuento eritrocitario por milmetro cbico, a travs de la siguiente frmula:

HCMPHC=

Hb

----X10

Valor Referencia
28-32p9

Rto G.R. en millones

3. cHcM = concentracin de hemoglobina corpuscular media. Tambin llamada Promedio de la concentracin de Hb Gorpuscular (pcHG)
Relaciona el peso de la hemoglobina en un volumen total de eritrocitos (HTO). Nos da una visin global de los niveres de hemoglobina y se expresa en porcentaje (%). Se obtiene de la siguiente frmula:

cHcM pcHc

= ::l::1":]:1f]::l- x 100 varor Rererencia

Hematocrito (%)
32-36%

Las constantes corpusculares se utilizan para determinar el tipo morfolgico de las anemias, de acuerdo al dimetro del glbulo rojo y su contenioo oe hemoglobina. Es importante interpretar estos promedios de acuerdo con la eval,uacin morfolgica de los glbulos rojos, que se realiza por microscopa en un extendido de sangre perifrica.

CLASIFICACIN DE LA ANEMIA Normoctica Normocrmica Macroctica N ormocrmica Microctica H ipocrmica

VCM. HCM.CHCM
>105fl - >32p9 <75'fl - <27p9 80-100f1

- 28-32p9- 32-36%
32-36Yo <32o/o

La anemia microctica hipocrmica tpicamente se asocia con deficiencias de y talasemias. La anemia macroctica normocrmica se asocia en muchos casos con anemias megaloblsticas por deficiencia de vitamina 812 y/o cido flico. La anemia normoctica normocrmica puede relacionarse con hemorragia aguda, anemias hemolticas, hemoglobinopatas, insuficiencia renal crnica.

hierro

RETICULOCITOS

Son .eritrocitos jvenes que se diferencian de los glbulos rojos maduros puesto que conservan en su citoplasma remanents de RNA ribosomal, mitocondrias, aparato de golgi, los cuales pueden ser identificados mediante colorantes vitales (azul de cresilo brillante), haciendo que dicho RNA se precipite en forma de grnulos.
VALORES NORMALES Valores relatvos: .Adulto: 0.5 - 2.5 o/o . Recin nacidos: 2.6 - 6.s% (en dos semanas alcanza el valor de adulto).

Valor absoluto. 22,5

147,5 x 10e/L

INTERPRETACIN El conteo de reticulocitos es importante porque refleja la cantidad de clulas rojas viables que se producen en mdula sea (M.o). una disminucin en el nmero de reticulocitos se asocia con anemia aplstica y con disminucin en la produccin de clulas rojas en M.O. Los reticulocitos se encuentran aumentados en anemias hemolticas, anemias por deficiencias de hierro que reciben tratamiento, talasemias, anemias sideroblsticas y prdida de sangre aguda o crnica.

La produccin de reticulocitos se puede estimar basados frmula: ndice de Produccin de Reiiculocitos (lpR)
%reticulocitos x HTO (paciente)
IPR

en la siguiente

Hematocrito normal (45%) x das de maduracin (2)

El valor obtenido es evidencia de la respuesta medular a las necesidades del individuo, cuanto ms severa es la anemia mas inmaduro el reticulocito y por ende la respuesta medular debe ser mayor. Los valores del lpR permiten estimar los niveles de respuesta de la medula sea. si el valor es < 2 se considera que es una medula hipoproliferativa y si es > 2 es hiperproliferativa.