UNIVERSIDAD ANDINA DEL CUSCO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

GUÍA DE PRÁCTICAS

DE

BIOLOGÍA GENERAL Y DE
LA BOCA

Blgo JOSÉ F. FRANCO NAVIA

CUSCO SEMESTRE - 2009-I I

PERÚ
INDICE

• PROLOGO
• INFORMACIÓN GENERAL
• NORMAS DE LABORATORIO Y BIOSEGURIDAD
• INSTRUMENTOS Y APARATOS DE LABORATORIO
• MICROSCOPIA ÓPTICA
• EL AGUA Y MEDIDA DEL pH
• CARBOHIDRATOS Y LÍPIDOS
• PROTEÍNAS Y ENZIMAS
• ÁCIDOS NUCLEICOS
• CÉLULA PROCARIOTICA Y EUCARIOTICA
• CICLO CELULAR Y DIVISIÓN MITÓTICA
• DIVISIÓN MEIOTICA
• ESPERMATOGENESIS.
• HERENCIA MENDELIANA (FACTOR Y GRUPO SANGUÍNEO)
• EXPERIMENTOS CON LA MOSCA DE LA FRUTA
• CROMATINA SEXUAL Y CARIOTIPO
 PROLOGO

La presente guía de prácticas de Biología, está destinado a los

estudiantes de Ciencias de la Salud y es la segunda edición mejorada y
corregida, que alberga temas fundamentales y básicos de la asignatura,
vinculando los tópicos experimentales con la formación profesional de
los alumnos, por lo que se resaltan las aplicaciones clínicas que
corresponde, pese a que estos son temas tróncales. La Biología es la
asignatura teórica fundamental sobre la que se basa las ciencias médicas
(Ciencias de la salud), puesto que no se debe al azar, el que numerosos
progresos alcanzados por los laboratorios de biología tengan
repercusiones y trasciendan, en la medicina clínica, como es el caso de la
estomatología.
Para los profesionales y estudiantes de Ciencias de la salud, la biología
no debe considerarse como una asignatura secundaria, pues la medicina
en general es una parte de la Biología.
Por estas razones, esta guía de prácticas del curso de “Biología
general y de la boca”, intenta teniendo en cuenta los fines didácticos,
presentar una secuencia de trabajos y demostraciones experimentales
de la asignatura basándose en el syllabus vigente de la asignatura
teórica y tomando como base la experiencia ganada con los alumnos de
ciclos pasados, lo que nos permite enfocar de acuerdo a la realidad
académica de la Universidad Andina.
No es fácil amoldar en forma justa y perfecta todos los tópicos
considerados en el curso teórico, por motivos de espacio, tiempo y otras
limitaciones que esperamos superar gradualmente en el futuro.
Gran parte de los experimentos, que proponemos, han sido
estandarizados y estudiados por el autor por medio de numerosos
trabajos de investigación en los cuales se utilizo como modelos
experimentales, representantes de la flora y fauna regional, lo que
consideramos una ventaja para el aprendizaje de esta fascinante
disciplina.

José F. Franco Navia

BIÓLOGO
INFORMACIÓN GENERAL
Las practicas de la asignatura de Biología general y de la Boca, están
Programadas como complemento de la asignatura teórica impartida en
la
curricular básica de la carrera profesional de estomatología. El
laboratorio es
curso experimental diseñado para la mencionada carrera el mismo que
introduce a las técnicas básicas de manejo de equipo de laboratorio y
material biológico; además, motiva al estudiante a la observación y a la
búsqueda de respuestas a través del método científico. El laboratorio de
Biología General y de la Boca es complemento del curso de teoría; por
consiguiente es obligatorio que el estudiante desarrolle ambos en forma
paralela.
Las prácticas están conformadas por 14 experimentos secuenciales
correlacionados en orden didáctico que tienen como objetivos servir de
complemento a los diferentes capítulos teóricos.
En términos generales el peso de las prácticas constituirán un 25%
que
Será complementado con los 75% de la teoría, para la evaluación se
tomara en cuenta los siguientes aspectos:

a). Exámenes prácticos: 02 Parciales

b). Informes de Practicas: 14 Informes
c). Asistencia Obligatoria
d). Seminario de Practica Opcional

La nota final será el promedio de todas las evaluaciones, siendo la nota

aprobatoria mínima de 14 puntos y la máxima de 20 puntos.
Los informes de cada práctica se entregaran en un cuaderno anillado
Desarrollado íntegramente a mano alzada, no se aceptaran trabajos en
Computadora.
Asistencia obligatoria con mandil blanco y materiales requeridos.
Seminarios y trabajos grupales son opcionales

BIOSEGURIDAD Y MATERIALES E INSTRUMENTOS DE

LABORATORIO

I Sesión de Laboratorio
A.- NORMAS DEL LABORATORIO DE BIOLOGÍA

INGRESO AL LABORATORIO:

* Los alumnos (as) deben esperar fuera del laboratorio hasta que llegue el maestro
o instructor (a). Una vez dentro del laboratorio los alumnos deberán solicitar
permiso al instructor (a) para salir de este.

* Si el maestro o instructore, no se presentan al laboratorio, las prácticas no

podrán realizarse. Es responsabilidad de los técnicos administrativos (as) que los
alumnos permanezcan fuera del laboratorio hasta la llegada del instructor, así
como la de comunicar al Departamento, por escrito la razón de la suspensión de
prácticas.
* Una vez que el instructor ingrese al laboratorio se cerrarán las puertas y no se
permitirá el acceso de alumnos.
* Al inicio del curso el alumno (a) deberá aportar el material que le sea solicitado.
El material requerido, de acuerdo a la práctica.
* Los alumnos (as) que no aporten el material que les sea solicitado para alguna
de las prácticas no podrán entrar al laboratorio.
* Si faltan más del 50% de alumnos de un grupo, no se realizara la práctica, por lo
que el profesor dara por dictada la practica y sancionara a los alumnos, si no
justifican su actitud

MEDIDAS DE SEGURIDAD:

*Los alumnos (as) deben usar mandil BLANCO, LARGO y LIMPIO para entrar al
laboratorio. Deben ponerse la bata en la zona designada para ello.
* Los alumnos (as) no deberán comer, beber, masticar chicle, fumar y en general
llevarse objetos a la boca dentro del laboratorio. Así como tampoco deberán usar
teléfonos inalámbricos dentro del laboratorio.
*El aseo del laboratorio es de primordial importancia, por lo que los alumnos (as)
deberán cooperar en el mantenimiento de la limpieza de su mesa de trabajo y del
material que así lo requiera. Deberán limpiar con solución desinfectante (fenol,
benzal, presep, etc.) el área de trabajo ANTES de empezar y al TERMINAR la
práctica.
* La basura debe colocarse en los recipientes correspondientes. No deberá ser
guardada en cajones y/o vertederos. Así como no deberán tirarse residuos o
desperdicios a los lavabos.
Deposite los residuos peligrosos biológico-infecciosos generados durante la
práctica en los recipientes adecuados y en las áreas designadas al inicio del curso
en cumplimiento con la normatividad vigente. Todo el material no contaminante
como algodón, pipetas, envolturas, etc. deberá ser depositado en los recipientes
destinados para este .
* Los alumnos (as) deberán abstenerse de colocar sobre las mesas de trabajo
cualquier material que no sea el requerido para la realización de la práctica (por
ejemplo: ropa, bolsas de mano, libros, etc,) Todos los objetos personales deberán
ser guardados en las áreas designadas.
* En caso de romper o derramar material contaminado AVISE al personal técnico o
al instructor .

* Los alumnos (as) no podrán permanecer dentro del laboratorio después de que
el instructor haya salido.
* Los alumnos (as) deben lavarse las manos con agua y jabón al finalizar cada
práctica (y/o antes de salir del laboratorio).

EXAMEN PREVIO:

* Los alumnos (as) deben presentarse al laboratorio adecuadamente preparados.

Esto incluye con la práctica a realizarse impresa en papel, para lo cual deberán
consultar con anterioridad la guía de practicas, preparándose en el fundamento
teórico existente.
* El alumno (a) debe leer con detenimiento la técnica a seguir, en caso de existir
dudas consultar con el instructor ANTES de iniciar la práctica.

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:

*Los alumnos (as) deben mantener el orden dentro de los laboratorios.

Al inicio de cada práctica se designará un alumno (a) como responsable de
seguridad para verificar que se cumplan las normas de este reglamento.
*El profesor y alumnos deben planear su trabajo de manera que la práctica se
complete puntualmente, y puedan salir del laboratorio 10 minutos antes de la
próxima clase o práctica, previendo el tiempo que utilizarán para recoger, ordenar
el material y limpiar su mesa.
*No se permite el desarrollo de actividades diferentes a la práctica durante la
estancia en el laboratorio, esto incluye estudiar otras materias o realizar trabajos.
*No se permiten visitas personales por parte de los alumnos (as).

AL FINALIZAR LA PRÁCTICA:

*Los alumnos (as) deberán enjuagar el equipo utilizado y disponer de los residuos
generados de la manera apropiada.
*Los alumnos (as) deberán colocar el material utilizado en la zona designada para
recolección de equipo..

REPORTES DE PRÁCTICA DE LABORATORIO:

*El reporte de la práctica deberá ser entregado en la siguiente semana de su

realización.
*El reporte deberá ser entregado antes del inicio de la siguiente práctica. El
alumno (a) tiene la obligación de colocarlo en el fólder designado para ello. Dicho
fólder será cerrado antes de iniciar la siguiente práctica.
*El profesor (a) anotará en el formato correspondiente la constancia de la
recepción del reporte. Es responsabilidad del alumno (a) revisar dicha constancia
en cada uno de sus reportes. Por ningún motivo se recibirán reportes
extemporáneos
*El reporte de prácticas se considera como un trabajo original generado por cada
alumno (a). El contenido de la práctica deberá ser redactado íntegramente por el
alumno, cuando se utilicen citas textuales, deberá indicarse la fuente.

ESTRUCTURA DEL INFORME DE PRACTICAS:

Los informes de practicas se desarrollaran íntegramente a mano alzada, no se

aceptara
Trabajos digitados en computadora, todas las graficas y dibujos se desarrollara
en el acto
Y se concluirá en la casa. Toda practica deberá contener la siguiente
secuencia:
Introducción, Objetivos, Hipótesis , Materiales y Métodos, Resultados
Conclusiones y
Bibliografía consultada. El informe se entregara a la siguiente práctica siendo
esta
Personal.

SANCIONES:

El incumplimiento a estas normas será sancionado por el profesor o instructor

(a).
La falta a tres practicas consecutivas por el alumno(a),inhabilitan
automáticamente al alumno y por lo tanto no tiene derecho a continuar en la
asignatura, caso especial justificación autorizada por el docente de teoría,
previa evaluación .

B) .- INSTRUMENTOS DE LABORATORIO

I. OBJETIVOS

• Identificar los materiales y equipos de laboratorio estableciendo las diferencias

que existen entre ellas.
• Conocer la importancia y uso que estos tienen en la investigación
II. FUNDAMENTO

La biología al estudiar la vida y las leyes que la rigen se desarrolla y amplia por el
esfuerzo constante del hombre por conocerse a si mismo y al medio que lo rodea
por lo cual ha sido indispensable auxiliarse de materiales y equipos que permitan
disponer de un laboratorio adecuadamente implementado, sin el cual hubiera sido
imposible llegar a identificar elementos orgánicos; conocer la morfología,
estructura y fisiología de la materia viva así como la estructura celular y los
componentes químicos que lo conforman.

ALGUNOS MATERIALES DE LABORATORIO

Materiales de Vidrio

Tubo de Ensayo: Se utiliza para mezclar sustancias, calentar, y ejecutar

reacciones.
Beaker: Se usan para preparar, disolver o calentar directamente sobre rejillas o
planchas de calentamiento.
Kitazato: Es un matraz de pared gruesa con un una conexión lateral, mediante
una manguera que conecta a una trompa de vació y su función es filtra sustancias
pastosas y sólidos de tamaño pequeño de partícula.
Matraz de fondo plano: Se utiliza para calentar liquido.
Matraz de fondo redondo: Se utiliza para poner volúmenes exactos de solucion.
Embudo de decantación: Se utiliza para la separación de líquidos miscible e
inmiscible para extraer él liquido menos denso separando del menos denso.
Vidrio de Reloj: Se utiliza para cubrir recipientes, pesar, transferir sólidos,
evaporar líquidos a temperatura ambiente.
Matraz Aforado: Sirve para preparar volúmenes exactos de concentraciones.
Bureta: Son tubos de vidrios calibrados que suelen terminar en una llave y sirven
para medir volúmenes de líquidos con mayor preescisión y exactitud.
Caja de Petri. En ella se cultivan microorganismos, como hongos o bacterias;
también puede usarse para seleccionar muestras de animales.
Frasco gotero. Con él se dosifican líquidos, como colorantes.
Frasco de boca y tapón esmerilados. Se usa para conservar y almacenar
sustancias.
Portaobjetos. Son laminillas de cristal que pueden ser cóncavas, en ellas se
depositan sustancias para su observación.
Cubreobjetos. Cubren y protegen las preparaciones u objetos que se observarán
al microscopio e impiden que se desprendan o muevan al ser observados.
Mechero de alcohol. Se emplea como fuente de calor cuando se requiere
calentamiento lento. Al usarla debe cuidarse que la mecha esté limpia y recortada
para que el calor que proporcione sea adecuado.
Mechero de gas o de Bunsen. Se emplea para el calentamiento rápido de
sustancias.
Balanza. Con ella se conoce el peso de objetos.
Microscopio. Hace visibles al ojo humano objetos diminutos. Es de suma
importancia en un laboratorio. Con él se han hecho avances notables en medicina,
química, biología, etc.
Agitador de vidrio. Están hechos de varilla de vidrio y se utilizan para agitar o
mover sustancias, es decir, facilitan la homogenización
Baño María. Es un dispositivo que permite calentar sustancias en forma indirecta,
es decir, sustancias que no pueden ser expuestos a fuego directo.
Vasos de precipitados. Permite calentar sustancias y obtener precipitados de
ellas.
Pipetas. Este material existe en dos presentaciones:
a. Pipetas aforadas.
b. Pipetas volumétricas.
Las primeras permiten medir diversos volúmenes según la capacidad de esta, las
segundas no están graduadas y sólo permiten medir un volumen único.
Probeta. Este material permite medir volúmenes las hay de vidrio y de plástico y
de diferentes capacidades.
Piceta. Es un recipiente que se utiliza para contener agua destilada, este utensilio
facilita la limpieza de electrodos .
Materiales de porcelana
Cápsula de porcelana: Sirve para calentar y evaporar líquidos, fundir cristalizar
sólidos.
Crisol: Sirve para calcinar sustancias, fundir sólidos.
. Mortero: Sirve para triturar, pulverizar y mezclar sólidos.
. Espátula: Sirve para trasegar sólidos y tomar nuestras de sólidos.
Materiales de metal
Soporte universal: Pieza básica en el montaje de los sistemas y aparatos como
pinzas y anillos de metal.
Rejilla de Metal con Centro de Asbesto: Sirve para calentar indirectamente ya
que la llama del mechero se concentra en el anillo.
Trípode: Soporte de vaso de precipitado, matraces, etc.
Pinza para tubo de ensayo: Se utiliza para sujetar tubos de ensayos calientes.
Gradilla: Se utiliza para colocar los tubos de ensayo.
Soporte para Embudo: Sirve para la fijación de instrumentos de vidrio
2.2 Algunas reglas a observar en el trabajo y laboratorio de biología

RECOMENDACIONES PARA EL TRABAJO EN LABORATORIO

a. Orden
Al momento de iniciar el trabajo disponer todo en forma ordenada para evitar
confusión y perdida de tiempo. Cuando es necesario, se etiqueta el material.
Devolverlo a su lugar correspondiente después de haberlo usado; dejar en orden y
limpio la mesa de trabajo.
b. Limpieza
En todo momento el trabajo del trabajo es necesario mantener la limpieza, al final
del trabajo de la jornada debe limpiarse todo lo ensuciado, lavarlo
convenientemente cuando sea necesario. Tal vez en ciertas ocasiones sea preciso
la esterilización . Evite que en el lavadero se depositen desechos sólidos que
puedan obstruirlos.
c. Cuidado con los instrumentos y aparatos
La mayoría de los instrumentos, aparatos y cualquier tipo de material de
laboratorio son muy costosos y por ello es necesario un especial cuidad en su
manejo y conservación.

ALGUNOS INSTRUMENTOS DE LABORATORIO

MICROSCOPIA ÓPTICA

II Sesión de Laboratorio
MICROSCOPIA ÓPTICA

OBJETIVOS: Al finalizar la práctica el estudiante conocerá:

a) El manejo adecuado del microscopio óptico, observará laminillas e identificará

diferentes tipos de muestras biológicas.
b) Estará en capacidad de ejecutar correctamente la limpieza del microscopio
óptico

FUNDAMENTO:

El microscopio es un instrumento óptico que amplifica la imagen de un objeto

pequeño, siendo el instrumento más utilizado en los laboratorios donde se estudian
microorganismos. Si bien las lentes de aumento han sido conocidas desde muy
temprano en la historia, sólo se le utilizó en biología con el advenimiento del
microscopio de luz moderno. Desde su invención, el microscopio ha sido una
herramienta valiosa en el desarrollo de la teoría científica. En general, un
microscopio está compuesto de dos elementos, los cuales constituyen un sistema
similar a un telescopio: a) lentes primarias amplificadoras
y b) lentes secundarias. Estos sistemas se denominan objetivo y ocular,
respectivamente, y están montados en los extremos opuestos de un tubo cerrado,
de forma que el primero se encuentra en el punto focal del segundo. Entonces, la luz
que pasa por un objeto es focalizada por ambos sistemas de lentes, de manera que
cuando se mira a través del ocular se ve una imagen virtual aumentada de la imagen
real (Figura 1).
Actualmente existen muchos tipos de microscopios, entre los que se cuentan el
microscopio óptico, el electrónico, el de sonda de barrido y el láser. No obstante, el
microscopio más utilizado es el óptico, el cual se sirve de la luz visible para crear
una imagen aumentada del objeto.

EL MICROSCOPIO ÓPTICO

Los microscopios ópticos pueden clasificarse en simples y complejos,

diferenciándose en su capacidad amplificadora y en la complejidad del sistema de
lentes asociado. La principal ventaja de un microscopio óptico es que permite
observar organismos vivos y tejidos. Su principal desventaja, es que su potencia
amplificadora está limitada por la longitud de onda de la luz visible.
MICROSCOPIO SIMPLE:
El microscopio óptico más simple es la lente convexa doble, cuya distancia focal es
corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. También se les
denomina microscopios de bajo poder. Existen al menos dos tipos de microscopios
de bajo poder: monoculares y binoculares (Figura 2). Los microscopios monoculares
tienen muy bajo poder amplificador, siendo utilizado esencialmente por niños. Los
microscopios binoculares, estéreo microscopios o lupas, en cambio, proveen un
aumento mayor. Se
caracterizan, porque presentan dos objetivos, de modo que el objeto se puede ver
en forma estereoscópica o tridimensional.
MICROSCOPIO COMPUESTO:
Los microscopios complejos disponen de varias lentes con las que se consiguen
aumentos mayores,pudiendo inclusive aumentar un objeto más de 2.000 veces.
Estos microscopios son, en general, los más utilizados. En este caso, el objetivo
está compuesto de varias lentes que crean una imagen real
Aumentada del objeto examinado. El aumento total del microscopio depende de las
longitudes focales de los dos sistemas de lentes.

III. COMPONENTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO BINOCULAR

Como se observa, un microscopio óptico binocular consta de: base, pedestal, cabeza.
En la base se ubica la fuente de luz. En el pedestal se ubican macro y micrométrico y la
platina; sobre la platina se ubican las pinzas, y el foco coaxial, mientras que bajo ésta se
ubica el diafragma. En la parte superior del pedestal se ubica el revólver, pieza que
porta los objetivos. En la cabeza se ubican los oculares y el sistema regulador de la
distancia focal.
�Base: Corresponde a la parte inferior del instrumento, utilizada como soporte.
� Pedestal o brazo: pieza que soporta al tubo que contiene el sistema de lentes y
que le conecta con la base.
� Cabeza: pieza, generalmente móvil, sobre la que se ubican los oculares y el
sistema regulador de la distancia focal.
� Fuente de luz: corresponde a una ampolleta u otra fuente luz activada por
corriente o pila.
Antiguamente se utilizaba un espejo que concentraba la luz ambiental.
� Macrométrico: tornillo que permite el ajuste grosero de la muestra a observar. Se
complementa con el uso del micrométrico.
� Micrométrico: tornillo que permite un ajuste fino de la muestra a observar.
� Platina: pieza dispuesta horizontalmente y sobre la cual se ubican las pinzas y el
foco coaxial. Platina,
pinzas y foco coaxial permiten ubicar una muestra para ser observada. La muestra
debe estar dispuesta sobre un portaobjeto y protegida por un cubreobjeto). Bajo la
platina se encuentran el diafragma y el filtro.
� Pinzas: Piezas prensiles que permiten sujetar la muestra, contenida en un
portaobjeto, contra la platina.
�Foco coaxial: Sistema compuesto por dos ejes de desplazamiento horizontal, los
cuales, dispuestos perpendicularmente entre sí, permiten ajustar una muestra para
ser observada al microscopio. Un eje desplaza la muestra en sentido lateral
(izquierda - derecha del observador) y el otro en sentido frontal
(alejando - acercando la muestra del observador). Ambos movimientos se realizan
en el plano que
define la platina.
� Diafragma: Sistema que controla la cantidad de luz que llega al objeto. El
diafragma permite controlar intensidad de luz y el tamaño del cono de luz proyectado
sobre la muestra.
� Condensador: Conjunto de lentes que focalizan la luz sobre la muestra. La
lentes condensadoras más útiles poseen poderes superiores a los 400x y más. El
uso de condensador permite mejorar la
observación de la muestra. Cuando está presente en el instrumento, el condensador
se ubica
generalmente bajo la platina .
� Filtro: Algunos microscopios portan filtros o un sistema de éstos, los que
corresponden a lentes de distinto color que permiten enfatizar la observación de
determinadas partes de la muestra,
generalmente destacadas con tinciones.
� Revólver: Mecanismo giratorio sobre el cual se disponen los objetivos. El
revólver permite cambiar el aumento con que se observa una muestra determinada.
Un revólver generalmente porta cuatro objetivos: 4x, 10x, 40x y un objetivo de
inmersión (100x).
� Objetivos: Conjunto de lentes responsables de aumentar y resolver (distinguir las
distintas partes) de la muestra a observar.
� Objetivo de inmersión: El objetivo de inmersión permite lograr una mejor
resolución en un microscopio óptico mediante el uso de las propiedades de
refracción de luz del aceite de inmersión. Requiere de la disposición de una gota de
este aceite sobre la muestra, ya sea en el caso de preparaciones frescas o
preparaciones fijas; el objetivo de inmersión debe acercarse a la muestra de modo
que toque la gota de aceite. En la Figura 8 se compara la observación de una
muestra con y sin el objetivo de inmersión.
� Oculares : Conjunto de lentes especializadas en aumentar la imagen
previamente formada por el
objetivo. Puede desmontarse e intercambiarse por otros con distintos aumentos o
funciones: agujas para señalar, retículos para recuentos u otros.
� Sistema regulador de la distancia focal: Sistema que permite ajustar la distancia
focal de los oculares con la distancia focal del observador.

PROPIEDADES

Poder de resolución
Es la capacidad del instrumento de dar imágenes bien definidas de puntos situados
muy próximos entre sí.
Límite de resolución
Es la distancia que puede existir entre dos puntos para que puedan ser definidos
como tales. Es importante recordar que el límite de resolución (mínima distancia) es
la inversa del poder de resolución (máxima capacidad) de manera que cuanto mayor
es el poder de resolución menor es el límite de resolución. Esto último es el
resultado de deducciones matemáticas que no es el caso tratar aquí y usted debiera
estudiarlo en aquellos cursos que involucren física. Si se usan sistemas de gran
apertura numérica e iluminación con longitud de onda corta (luz ultravioleta por
ejemplo) se obtendrá el máximo de detalles ya que se ha aumentado el poder de
resolución.
Poder de definición
Consiste en la capacidad del microscopio de dar imágenes claras de contornos
precisos. Reside en la
corrección de las aberraciones propias de las lentes.
Poder de penetración
Así como el poder de resolución permite averiguar detalles colocados a la misma
altura, el poder de
penetración permite averiguar hasta qué límite están estructuras situadas en
diferentes planos (i.e., niveles distintos con un mismo enfoque).
 Recursos materiales (reactivos, equipo, muestras):
a) Microscopio óptico.
b) Laminillas con diferentes tipos celulares.
c) Laminillas de cromosomas ,células tejidos, etc
d) Papel y líquido para limpieza de lentes de microscopio.
e) Aceite de inmersión.
f) Imágenes representativas de las diferentes muestras de células tejidos ,etc
En juego de fotografías.

DESCRIPCIÓN DE LA PRACTICA
a).- El instructor demostrará los elementos más importantes de un
microscopio óptico.
Se observaran diferentes laminillas bajo el microscopio con el siguiente
procedimiento:
a) Coloque la laminilla sobre la platina, en el centro, deslizando los clips
sujetadores.
b) Verifique que el objetivo que esté colocado para la visualización sea el
de menor aumento.
c) Coloque mediante el movimiento de la platina la muestra de estudio en
el centro.
d) Mediante el ajuste macrométrico, y bajo la visión directa de la platina,
acercar la platina al objetivo hasta alcanzar una distancia de 2 mm.
aproximadamente entre el cubreobjetos y el objetivo.
e) Posteriormente viendo a través del ocular y usando el ajuste
micrométrico, enfocar la muestra a observar. Ajustar el diafragma para
mejorar la iluminación.
f) Una vez observando las características de la muestra con el objetivo
menor, cambiar el objetivo por el siguiente de mayor aumento. Enfocar la
imagen con el ajuste micrométrico y observar la diferencia.
g) “Barrer” la muestra a través de movimientos de arriba hacia abajo en
forma de ondas o bien horizontalmente, siguiendo las líneas de una “S”
imaginaria. Familiarícese con estos movimientos.
h) Cambie nuevamente el objetivo hacia el de mayor aumento. Ajuste
nuevamente la imagen con el ajuste micrométrico y ajuste el diafragma
para mejor iluminación.

ES IMPORTANTE EL SEGUIMIENTO DE ESTOS PASOS PORQUE DE

ESTO DEPENDE EL ÉXITO DE LA OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO.

Los alumnos (as) observarán las laminillas que contienen cromosomas teñidos mediante la
técnica para identificación de bandas G.
El instructor (a) demostrará imágenes representativas de cada una de las técnicas
avanzadas de microscopía.
 Conclusiones: Consignar en el reporte las conclusiones relativas a la
importancia del microscopio óptico en la investigación biomédica y práctica
clínica.
El uso de las diferentes técnicas de microscopía avanzada.

PROCEDIMIENTO PARA GUARDAR EL MICROSCOPIO

Terminada la observación hay que cuidar de:

a. Dejar limpios los objetivos y oculares.

b. Dejar limpia la platina.
c. Dejar el microscopio en posición de reposo que consiste en:
e. Objetivo de menor aumento en posición de enfoque.
f. Diafragma abierto y condensador en el tope inferior.

Mecanismo de evaluación:

a) Conducta, actitud y destreza en la práctica

b) Calidad de las notas de su cuaderno de prácticas
c) Calidad del reporte.

Fig. 1. MICROSCOPIO BIOLÓGICO ÓPTICO.

Partes de un microscopio óptico

Fig.2. MICROSCOPIO ESTEREOSCÓPICO DE DISECCIÓN
EL AGUA Y MEDIDA DEL pH

III Sesión de Laboratorio

EL AGUA, SOLUCIONES Y MEDIDA DEL pH.

OBJETIVOS
• Determinar algunas propiedades del Agua
• Demostrar la ionización de ClNa en el agua destilada
• Preparar soluciones, Mesclas y emulsiones

FUNDAMENTO
La vida, tal como se conoce en la Tierra, se desarrolla siempre en medio
acuoso. Incluso en los seres no acuáticos el medio interno es básicamente
hídrico. La inmensa mayoría de las reacciones bioquímicas se desarrollan
en el seno del agua y obedecen las leyes fisicoquímicas de las
disoluciones acuosas. Por todo ello no es de extrañar que el agua sea el
principal componente de los seres vivos en cuanto a su cantidad. El
cuerpo humano, por ej., está formado por término medio por un 75% de
agua, aunque los tejidos que necesitan mucha actividad como el nervioso
son agua en un 90%. Sólo los tejidos esqueléticos y las semillas de las
plantas presentan una baja proporción de agua.
El agua reúne una serie de características que la convierten en
un disolvente único e insustituible en la Biosfera. En cuanto a sus
propiedades fisicoquímicas cabe destacar:
1.- La molécula de agua tiene un marcado carácter
dipolar. Aunque tiene una carga total neutra (posee el mismo número de
protones y de electrones), presenta una distribución asimétrica de sus
electrones: alrededor del O se concentra una densidad de carga negativa
(�-) debido a que es un elemento mucho más electronegativo que el H,
por ello los núcleos de H quedan desnudos, desprovistos parcialmente de
sus electrones y manifiestan, por tanto, una densidad de carga positiva
(�+). Este carácter dipolar de la molécula de agua es de trascendental
importancia y tiene múltiples consecuencias: La más relevante es que se
pueden establecer interacciones dipolo-dipolo entre las propias moléculas
de agua formando uniones electrostáticas llamadas puentes o enlaces de
H: la carga parcial negativa del O de una molécula ejerce atracción
electrostática sobre las cargas parciales positivas de los átomos de H de
otras moléculas adyacentes. Aunque son uniones débiles, el hecho de que
alrededor de cada molécula de agua se dispongan otras 3 moléculas
unidas por puentes de H permite que se forme en el agua (líquida o sólida)
una estructura reticular, responsable de su comportamiento anómalo y de
la peculiaridad de sus propiedades fisicoquímicas. Todas las restantes
propiedades del agua son, pues, consecuencia de ésta.
2.- El amplio margen de temperaturas en que permanece en fase
líquida (0º-100º) proporciona variadas posibilidades de vida, desde los
organismos psicrófilos que pueden desarrollarse a temperaturas próximas
a 0º, hasta los termófilos que viven a 70º-80º.
3.- La anómala variación de la densidad con la temperatura, con
una densidad máxima a 4ºC, determina que el hielo flote en el agua
líquida actuando como aislante térmico y, en consecuencia, posibilitando
el mantenimiento de la gran masa de agua de los océanos en fase líquida
albergando a la mayor parte de la Biosfera.
4.- El agua es el líquido que más sustancias disuelve (disolvente
universal). Esta propiedad, tal vez la más importante para la vida, se
debe a su capacidad para formar puentes de H, además de con otras
moléculas de agua como se dijo anteriormente, con otras sustancias
polares (grupos -OH de alcoholes y azúcares, grupos -NH2 de
aminoácidos, proteínas, ácidos nucleicos, etc.), pues se disuelven
cuando interaccionan con las moléculas del agua.
MATERIALES

A). Tubos de Ensayo

B). Pipeta pasteur
C). Mortero
D). Probeta.
E). Becker
F). Agua destilada
G). Cloruro de Sodio
H). Cloruro de Potacio
I). Aceite comercial
J). Bencina (opcional)
K). Glicerina (Opcional)
l). HCl (Opcional)
M). Na (OH) (Opcional)
METODOLOGIA:

1. Desarrollar una solución, mezclando en un tubo de ensayo

agua destilada y
NaCl, KCl, C6H12O6,
2. Preparar una emulsión de aceite con agua destilada.
3. Explicar las diferencias en los dos experimentos.
4. Medir el pH de las sustancias, antes y después de preparar
cada solución

DETERMINACIÓN DEL pH

OBJETIVOS
• Familiarizarse con el uso de la cinta indicadora del pH
* Familiarizarse con el manejo del Potenciómetro..

FUNDAMENTO
El termino pH es la expresión de la concentración de H+ por medio de una
función logarítmica. El termino pH puede definirse así:
pH = log 1
H+
El pH 7 representa la neutralidad, un valor inferior a 7 representa solución
ácido y superior a 7 solución alcalina. La escala pH es logarítmica, en una
solución de pH 6 hay 10 veces hidrogeniones que en una cuyo pH es 7, y
un pH 5 indica que esa relación es de 100 a 1 respecto a la solución de pH
7. La diferencia de concentración de hidrogeniones entre el pH 5 y 5,1 es
mucho mayor que la existente entre 5,9 y 6,0. Los métodos que se utilizan
más actualmente es mediante el papel indicador y el aparato
(Potenciometro).
1. POTENCIOMETRO
En 1909, el químico danés Sorensen definió el potencial hidrógeno ( pH )
como
el logaritmo negativo de la concentración molar ( mas exactamente de la
actividad
molar ) de los iones hidrógeno. Esto es:
pH = - log [H + ]
Desde entonces, el término pH ha sido universalmente utilizado por la
facilidad de su uso, evitando asi el manejo de cifras largas y complejas.
Por ejemplo, una concentración de [H+] = 1x10-8 M ( 0.00000001) es
simplemente un pH de 8 ya que : pH= - log[10 -8] = 8 La relación entre pH
y concentración de iones H se puede ver en la siguiente tabla, en la que se
incluyen valores típicos de algunas sustancias conocidas:

DETERMINACIÓN DE pH

El electrodo de vidrio es relativamente inmune a las interferencias del

color, turbidez, material coloidal, cloro libre, oxidantes y reductores. La
medición se afecta cuando la superficie de la membrana de vidrio esta
sucia con grasa o material orgánico insoluble en agua, que le impide hacer
contacto con la muestra, por lo anterior se recomienda la limpieza
escrupulosa de los electrodos.
La temperatura tiene dos efectos de interferencia, el potencial de los
electrodos y la ionización de la muestra varían. El primer efecto puede
compensarse haciendo un ajuste en el botón de la " temperatura" que
tienen todos los aparatos. El segundo efecto es inherente de la muestra y
solo se toma en consideración, anotando la temperatura de la muestra y
su pH; para más exactitud, se recomienda que la muestra esté a 25 ° C,
que es la temperatura de referencia para la medición del pH.
. PAPEL INDICADOR DE pH
Para la determinación de pH el papel indicador con el papel indicador. Este
método se basa en el cambio de color de ciertas sustancias en función de
la variación de la magnitud del pH. El uso del papel indicador de pH es un
valor cercano a lo real. Se emplea generalmente papeles o cartulinas con
los colores patrón para efectuar la comparación. Estos abarcan valores de
pH de 1- 14.

Fig. 4 CINTA INDICADORA DEL pH

INDICADORES DE pH CASEROS
A continuación se describe el procedimiento para obtener un indicador de
pH, basado en la diferente coloración que adquieren algunos compuestos
naturales (antocianinas, curcumina) o sintéticos (fenolftaleína) en función
del pH. Con este indicador casero se puede determinar el carácter ácido o
básico de muchas sustancias y realizar algunas experiencias curiosas y
sencillas, relacionadas con las reacciones ácido-base.

Antocianinas
Las antocianinas (o antocianos) constituyen un grupo de pigmentos
hidrosolubles (son solubles en agua, en ácido acético y en alcohol, pero no
en aceites) responsables de la coloración roja, azul o violeta de muchas
flores, frutas, hortalizas, etc. Se usan como colorantes en la alimentación
(E-163), obteniéndose, en este caso, sólo a partir de comestibles, tales
como fresas, cerezas, ciruelas, col lombarda, cebollas rojas, berenjenas,
uvas, etc (BOE, 1996). Las antocianinas son muy sensibles a las
variaciones de pH. En general, adquieren un color rojo en medio ácido y
cambian de color a azul oscuro cuando el pH se hace básico, pasando por
el color violeta. De hecho, antiguamente se empleaban estas sustancias
naturales como indicadores del pH (Accum, 1836).
En los extractos vegetales pueden encontrarse varios tipos de
antocianinas juntas, las cuales confieren a cada extracto particular
diferentes cambios de color frente al pH.
Seguidamente se describe el procedimiento a seguir para obtener el
indicador de pH basado en las antocianinas obtenidas a partir de col
lombarda (brássica olerácea capitata rubra) y el Lirio Inka Speroccyphyun
herrera estudiado por el Dr. Oswaldo Baca Mendoza. En la figura se
muestra una col lombarda. Esta hortaliza es similar a la col normal
(orepollo) pero de color morado. Es más fácil encontrarla en el mercado
durante los meses de invierno, aunque actualmente puede adquirirse
durante casi todo el año.

REPOLLO MORADO LIRIO INKA

Es conveniente observar los colores de estos extractos con la luz solar o
con la luz de una bombilla de filamento incandescente (normal o
halógena), ya que la luz de las bombillas de bajo consumo o la de los
tubos fluorescentes puede alterar el tono del color. Para obtener el
extracto de col lombarda y determinar posteriormente el carácter ácido o
básico de algunas sustancias sólo se necesitan un par de hojas de col
lombarda y agua o alcohol etílico, dependiendo de cómo se vaya a
obtener el extracto; en esta experiencia y en las sucesivas no es necesario
usar alcohol etílico farmacéutico, se puede usar el cosmético, que se
vende en supermercados y es bastante más barato.
Lógicamente, para observar los cambios de color del extracto se necesitan
sustancias básicas, tales como amoniaco (NH3), sosa cáustica (hidróxido
sódico, NaOH), lejía (hipoclorito sódico, NaClO), etc., y sustancias ácidas,
tales como agua fuerte (ácido clorhídrico, HCl), vinagre (ácido acético,
CH3-COOH), etc. También conviene disponer 92 de varios vasos, un
cuchillo, una cucharilla de acero inoxidable, papel de filtro de café y un
embudo. Además, si se obtiene el extracto con agua hirviendo se necesita
un cazo y un hornillo, mientras que si se obtiene el extracto con alcohol
etílico se necesitará una maza y un mortero. Conviene que los vasos
usados sean incoloros y transparentes con el fin de observar claramente
los colores del indicador.
El procedimiento a seguir es el siguiente. En primer lugar se trocea
finamente un par de hojas de col lombarda y se introducen en el cazo. Se
agrega agua y se calienta al fuego. Se mantiene en ebullición durante
unos 10 minutos y posteriormente se retira del fuego para dejarla enfriar.
A continuación se filtra el líquido de las hojas usando un embudo con
papel de filtro. El líquido que se ha obtenido es el indicador de pH, que
tendrá un intenso color violeta. Los restos de las hojas de col lombarda
han perdido el color violeta y ahora tienen una tonalidad verdosa;
principalmente las hojas externas, que son las expuestas a la luz y las que
poseen más clorofilas. El extracto obtenido mediante este procedimiento
es algo turbio debido a que el agua ha extraído de la col lombarda otras
sustancias además de las antocianinas. Otra forma de obtener el extracto
es machacar con un mortero las hojas de col lombarda finamente
troceadas con unos 100 ml de alcohol etílico, en lugar de hervirlas con
agua. Luego se filtra el extracto con el embudo y el papel de filtro. De esta
forma el extracto que se obtiene no tiene turbidez. Aunque el
procedimiento en el que se hierve la col con agua tiene la ventaja de que
se puede cocer una col entera, obtener una gran cantidad de extracto y
luego podemos comernos la col; incluso puede hervirse usando una olla a
presión.
Conviene destacar que si se obtiene el extracto con agua hirviendo, al
dejarlo unos días a temperatura ambiente comenzará a descomponerse y
perderá el color debido a la acción de microorganismos. Para conservarlo
más tiempo se puede congelar o bien agregarle una octava parte de su
volumen de alcohol etílico. Se puede impregnar tiras de papel de filtro de
café con el extracto y dejarlo secar. También se puede concentrar el
extracto hirviendo la disolución o poniéndola al baño María. Si
concentramos el extracto hasta que se vuelva sólido podemos extraer con
alcohol etílico el colorante y separarlo de aquellas sustancias no solubles
en alcohol que sí estaban presentes en el agua. Esta disolución será
mucho más estable, ya que a los microorganismos les cuesta más
desarrollarse en ella. Además se han eliminado sustancias que enturbian
la disolución. En cualquier caso, con el paso del tiempo estos indicadores
de pH se degradan y pierden su color.

Comprobación del carácter ácido o básico de algunas sustancias

Para observar los cambios de color que se producen en los extractos
obtenidos al variar el pH, se coloca un poco de agua en tres vasos
transparentes e incoloros. A continuación se agrega a cada uno de los
vasos un poco del extracto que queramos estudiar. El vaso central se
usará como patrón, mientras que los dos vasos restantes se usarán para
determinar las variaciones de color al agregarles diversas sustancias,
tanto ácidas como básicas. En principio, no tiene por qué conocerse el
carácter de las sustancias empleadas. Conviene destacar que es más fácil
observar los colores colocando un folio blanco debajo de los vasos.

ACIDO NEUTRO ALCALINO

FIGURA Algunos de los colores que adquiere el extracto de col lombarda

al
cambiar el pH. El pH de la disolución aumenta hacia la derecha.
CARBOHIDRATOS Y LÍPIDOS

IV Sesión de Laboratorio
 CARBOHIDRATOS Y LÍPIDOS
OBJETIVOS
• Determinar algunas propiedades de los carbohidratos y lípidos
• Reconocer los Monosacáridos y polisacáridos
• Desarrollar la saponificación de los ácidos grasos

MATERIALES

- Tubos de ensayo
- Gradilla
- Pinzas
- Mechero
- Pipetas
- Solución de Lugol
- Solución de Fehling A y B (Opcional)
- Solución alcalina (sosa, potasa, bicarbonato, etc.)
- - ClH diluido
- Solución de Benedic

TÉCNICA

. Poner en los tubos de ensayo 3ml de la solución de glucosa, maltosa,

lactosa fructosa o sacarosa (según indique el profesor).
. Añadir 1ml de solución de Fehling A (contiene CuSO4) y 1ml de Fehling
B (lleva NaOH para alcalinizar el medio y permitir la reacción)
. Calentar los tubos a la llama del mechero hasta que hiervan.
. La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo y será
negativa si queda azul o cambia a un tono azul-verdoso.
. Observar y anotar los resultados de los diferentes grupos de prácticas
con las distintas muestras de glúcidos.
. Mesclar una solución de glucosa con reactivo de Benedit, anotar el
cambio de coloración.

Sacaros
Glúcido Glucosa Maltosa Lactosa Fructosa
a
Reduct
or
 INVESTIGACIÓN DE POLISACÁRIDOS (ALMIDÓN)

FUNDAMENTO
El almidón es un polisacárido vegetal formado por dos componentes: la
amilosa y la amilopectina. La primera se colorea de azul en presencia de
yodo debido no a una reacción química sino a la adsorción o fijación de
yodo en la superficie de la molécula de amilosa, lo cual sólo ocurre en
frío. Como reactivo se usa una solución denominada lugol que contiene
yodo y yoduro potásico. Como los polisacáridos no tienen poder
reductor, la reacción de Fehling da negativa.

TÉCNICA
. Colocar en un tubo de ensayo 3ml de la solución de almidón.
. Añadir 3 gotas de la solución de lugol.
. Observar y anotar los resultados.
. Calentar suavemente, sin que llegue a hervir, hasta que pierda el color.
. Enfriar el tubo de ensayo al grifo y observar cómo, a los 2-3 minutos,
reaparece el color azul.

RECONOCIMIENTO DE LÍPIDOS

MATERIALES

- Tubos de ensayo - Solución de NaOH al

- Gradilla 20%
- Varillas de vidrio - Solución de Sudán III
- Mechero - Tinta china roja
- Vasos de precipitados - Eter, cloroformo o
- Pipetas acetona
- Aceite de oliva
SAPONIFICACIÓN DE ÁCIDOS GRASOS

Las grasas reaccionan en caliente con el hidróxido sódico o

potásico descomponiéndose en los dos elementos que las integran:
glicerina y ácidos grasos. Éstos se combinan con los iones sodio o potasio
del hidróxido para dar jabones, que son en consecuencia las sales sódicas
o potásicas de los ácidos grasos. En los seres vivos, la hidrólisis de los
triglicéridos se realiza mediante la acción de enzimas específicos (lipasas)
que dan lugar a la formación de ácidos grasos y glicerina.
 TÉCNICA
. Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%.
. Agitar enérgicamente y colocar el tubo al baño María de 20 a 30
minutos.
. Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior
clara que contiene la solución de sosa sobrante junto con la glicerina
formada, otra intermedia semisólida que es el jabón formado y una
superior lipídica de aceite inalterado.

TINCIÓN

FUNDAMENTO
Los lípidos se colorean selectivamente de rojo-anaranjado con el
colorante Sudán III.

TÉCNICA
. Disponer en una gradilla 2 tubos de ensayo colocando en ambos 2ml de
aceite.
. Añadir a uno de los tubos 4-5 gotas de solución alcohólica de Sudán III.
. Al otro tubo añadir 4-5 gotas de tinta roja.
. Agitar ambos tubos y dejar reposar.
. Observar los resultados: en el tubo con Sudán III todo el aceite tiene
que aparecer teñido, mientras que en el tubo con tinta, ésta se irá al
fondo y el aceite no estará teñido.

2.3. SOLUBILIDAD

FUNDAMENTO
Los lípidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en
ella se dividen en pequeñísimas gotas formando una emulsión de
aspecto lechoso, que es transitoria, pues desaparece en reposo por
reagrupación de las gotitas de grasa en una capa que, por su menor
densidad, se sitúa sobre el agua.
Por el contrario, las grasas son solubles en disolventes orgánicos, como
el éter, cloroformo, acetona, benceno, etc.

TÉCNICA
. Poner 2 ml de aceite en dos tubos de ensayo.
. Añadir a uno de ellos 2ml de agua y al otro 2ml de éter u otro
disolvente orgánico,
. Agitar fuertemente ambos tubos y dejar reposar.
. Observar los resultados: Se verá cómo el aceite se ha disuelto en el
éter y, en cambio no lo hace en el agua y el aceite subirá debido a su
menor densidad.

CUESTIONES

1. ¿Qué son los jabones?

2. ¿Cómo se pueden obtener los jabones?
3. ¿Por qué en la saponificación la glicerina aparece en la fase acuosa?
4. ¿Qué enzima logra en el aparato digestivo la hidrólisis de las grasas?
5. Indica lo que ocurre con la mezcla aceite-Sudán III y aceite-tinta y
explica a qué se debe la diferencia entre ambos resultados.
6. ¿Qué ocurre con la emulsión de agua en aceite transcurridos unos
minutos de reposo?¿Y con la de benceno y aceite?¿A qué se deben las
diferencias observadas entre ambas emulsiones?
PROPIEDADES DE LAS PROTEINAS Y
ENZIMAS

VI Sesión de Laboratorio
 PROTEÍNAS Y ENZIMAS____________

PROTEÍNAS

OBJETIVOS
• Determinar algunas propiedades de las proteínas
• Demostrar la desnaturalización de una proteína.
• Reconocer la actividad enzimática frente a un sustrato.

DESNATURALIZACION DE PRÓTIDOS

MATERIALES

- Tubos de ensayo - Solución de HCl

- Gradilla concentrado
- Mechero - Alcohol etílico
- Vasos de precipitados - Solución de SO4Cu al
- Pipetas 1%
- NaOH al 20%
- Clara de huevo o leche
- Solución de albúmina
al1-2%

FUNDAMENTO

Las proteínas debido al gran tamaño de sus moléculas forman

con el agua soluciones coloidales que pueden precipitar formándose
coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a 70ºC o al ser
tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc.
La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se
debe a su desnaturalización por los agentes indicados que al actuar sobre
la proteína la desordenan por destrucción de sus estructuras secundaria y
terciaria.

TÉCNICA
. Colocar en tres tubos de ensayo una pequeña cantidad de clara de
huevo (puede diluirse en un poco de agua para obtener una mezcla
espesa) o 2-3ml de leche.
. Calentar uno de los tubos al baño María, añadir a otro 2-3ml de HCl
concentrado y al otro añadir solucion de K (OH) concentrada
REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET)

FUNDAMENTO
Entre las reacciones coloreadas específicas de las proteínas, que
sirven por tanto para su identificación, destaca la reacción del Biuret.
Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas, pero no los
aminoácidos ya que se debe a la presencia del enlace peptídico CO-
NH que se destruye al liberarse los aminoácidos.
El reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre(II) y sosa, y el Cu, en un
medio fuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptídicos
formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de
color depende de la concentración de proteínas.

TÉCNICA
. Colocar en un tubo de ensayo 3ml de solución de albúmina al 1-2%.
. Añadir 4-5 gotas de solución de SO4Cu al 1%.
. Añadir 3ml de solución de NaOH al 20%.
. Agitar para que se mezcle bien.
. Observar los resultados.

CUESTIONARIO:
*¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de la clara de huevo?
*¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de
desnaturalización?
*¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una
proteína?
*¿Qué coloración da la reacción del Biuret?
*¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret?
*Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la
Glicina ¿es positiva o negativa? ¿Por qué?

ENZIMAS

FUNDAMENTO

En los seres vivos se están desarrollando continuamente una serie

de reacciones químicas que, si se realizaran en un laboratorio, sólo
podrían llevarse a cabo mediante altas temperaturas, descargas
eléctricas u otras fuentes de energía que las células no podrían
resistir. Por ello, las reacciones que tienen lugar en los organismos no
pueden ser violentas, lo cual se consigue gracias a la existencia de los
 biocatalizadores, entre los cuales el lugar más destacado lo ocupan
los enzimas.
Para que una reacción se lleve a cabo es necesario que la/s
sustancia/s que van a reaccionar (sustratos) reciban una determinada
cantidad de energía que las active, denominada energía de
activación. Los catalizadores son pues aquellas sustancias que, al
disminuir las necesidades de energía de activación de una reacción, la
facilitan y la aceleran. Los catalizadores no intervienen en la reacción
que catalizan, de tal manera que, una vez terminada ésta, quedan
libres y pueden volver a ser utilizados, no se consumen durante la
reacción.
Todos los enzimas conocidos son proteínas de gran solubilidad en los
medios líquidos del organismo. Salvo raras excepciones son solubles
en agua. Según su composición se clasifican en dos grupos:
• Enzimas holoproteínas: Constituidos solamente por
secuencias de aminoácidos. Son poco frecuentes, pudiéndose citar como
ejemplos la ribonucleasa y la lisozima.
• Enzimas heteroproteínas: La mayoría de los enzimas son
de este tipo. Están formados por dos componentes, uno de naturaleza
proteica llamado apoenzima y otro no proteico, el grupo prostético, que
puede ser inorgánico, cofactor, o bien orgánico, en cuyo caso se
denomina coenzima. El conjunto de los dos componentes, apoenzima y
coenzima, forma el enzima completo que se llama holoenzima. Tanto el
apoenzima como el coenzima son inactivos por si mismos, han de estar
unidos para que el enzima (holoenzima) sea activo.

APOENZIMAS: El apoenzima sirve de soporte al coenzima y está

exclusivamente formado por secuencias de aminoácidos. Es el que
determina la especificidad de la reacción enzimática. En el apoenzima
se distinguen 4 tipos de aminoácidos según la función que
desempeñen en la actividad enzimática:
• No esenciales: No contribuyen ni directa ni indirectamente
en el proceso catalítico, por lo que pueden ser eliminados de la cadena
polipeptídica sin que se pierda actividad enzimática.
• Estructurales: Son los que mantienen la estructura
terciaria de la proteína enzimática.
• De unión o fijación: Sujetan el apoenzima al sustrato.
• Catalíticos: Son los responsables directos de la actividad
enzimática y forman el llamado “sitio catalítico”. Además, junto con los
de unión, forman el centro activo del enzima que es una oquedad
tridimensional cuya forma depende de la estructura terciaria de la
molécula proteica del apoenzima y que ocupa una pequeña parte de
ésta.
 . COENZIMAS: Difiere del apoenzima en que es de bajo peso
molecular y no es de naturaleza proteica aunque sí es orgánico. Es el
responsable del tipo de reacción enzimática que realiza el enzima. Por
esta circunstancia, el número de coenzimas no es muy elevado ya que
pueden ser comunes a muchos enzimas uniéndose a diferentes
apoenzimas, desempeñando todos ellos la misma acción enzimática y,
sin embargo, siendo específicos para las distintas reacciones
enzimáticas según el apoenzima al que están unidos. Muchos
coenzimas son vitaminas, lo cual significa que no pueden ser
sintetizados por el organismo y deben ser incorporados en la dieta
como tales o como sustancias transformables en vitaminas, es decir,
provitaminas.

DEMOSTRACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

MATERIALES:
A). Tubos de ensayo
B). Pipetas Pasteur
C). Almidon de trigo
D). Agua destilada
E). Saliva humana
F). Lugol
G). Incubadora a 37ºC

PROCEDIMIENTO
• Preparar en un tubo de ensayo una solución de almidón en
agua destilada (Testigo).
• Preparar otra solución de almidón en saliva humana en otro
tubo de ensayo e incubar a 37ºC por 20 minutos.
* Colocar en ambos tubos unas gotas de lugol
* Comparar los resultados.
* Explicar las diferencias.
EXPERIMENTO COMPLEMENTARIO
ACTIVIDAD DE LA CATALASA EN HÍGADO DE POLLO:
• En un tubo de Ensayo que contiene 10 a 20 ml de Peróxido
de Hidrogeno
 Coloque un trozo de hígado de pollo cosido.
• En otro tubo similar introduzca en el peróxido de hidrogeno
un trozo de
Hígado de pollo crudo
• Utilizando un termómetro controle la temperatura cada 2
minutos
• Explique los fenómenos.

ÁCIDOS NUCLEICOS

VII Sesión de Laboratorio

ÁCIDOS NUCLEICOS

FUNDAMENTO

La moderna ciencia de la Genética se originó cuando Gregor

Mendel descubrió que las características hereditarias estaban
determinadas por unidades hereditarias que se transmitían de una
generación a la siguiente de manera uniforme y predecible. Se inició
en este momento (finales s.XIX) una carrera científica cuyo objeto
primordial era solucionar dos problemas, en principio muy distintos,
pero, como se vio más tarde, muy relacionados entre sí.
El primer problema fue el de identificar exactamente el
material genético, su localización y su naturaleza química. El
desarrollo de esta línea de investigación ha dado lugar a una rama de
la Genética denominada Genética Molecular.
El segundo problema consistía en descubrir el modo en que
se transmiten y se heredan de generación en generación las
manifestaciones de ese material hereditario, es decir, los caracteres
biológicos. Se creó así otra rama de la Genética llamada en honor de
Mendel Genética Mendeliana.
En cuanto al primer problema, un paso previo a iniciar la
búsqueda e identificación del material genético consiste en establecer
los requisitos que debe cumplir. Se establecen 4 requisitos generales
que se espera que cumpla el material genético:
1.- Que se replique exactamente antes de la duplicación
celular.
2.- Que su estructura sea lo suficientemente estable para que
los cambios hereditarios (mutaciones) sólo se produzcan raramente.
3.- Que pueda llevar cualquier tipo de información biológica
necesaria.
4.- Que transmita la información a la célula.
REPLICACIÓN DEL ADN
La necesidad de que el material genético se autoduplique
exactamente es la primera exigencia que debe cumplir. Ya en el
modelo de Watson y Crick se planteaba la posibilidad de que las
hebras de la doble hélice se separaran y cada una sirviera de matriz
para formar la cadena complementaria. Este proceso recibió el nombre
de replicación. Tal y como se había descrito hasta ese momento debía
ser semiconservativo, es decir, cada doble hélice de ADN resultante
sólo llevaba una de las dos hebras del ADN original, mientras que la
complementaria era de nueva formación. Esto se demostró
concluyentemente con los experimentos de Meselson y Stahl:
cultivaron bacterias E.coli en un medio que contenía como única
fuente de nitrógeno cloruro amónico marcado con 15N hasta que llegó
un momento en que el ADN sólo presentaba en sus bases
nitrogenadas 15N. Posteriormente cambiaron el medio de cultivo por
otro con 14N normal. Las bacterias de la primera generación
presentaban en su ADN 14N y 15N en igual cantidad.
El proceso de replicación es similar tanto en los organismos
procariotas como en los eucariotas, pero es en los primeros donde
más se conocen los detalles; en concreto la más estudiada es la
replicación en E.coli.
Es un proceso complejo en el que intervienen más de 50
proteínas distintas agrupadas en complejos multienzimáticos. El
enzima principal se denomina ADN-polimerasa y para que actúe es
necesario que existan en el medio iones Mg2+ y una mezcla de 4
desoxirribonucleótidos-trifosfato (dATP, dGTP, dCTP y dTTP). Es
suficiente con que falte uno de los cuatro para que no actúe la ADN-
polimerasa. Básicamente este enzima realiza dos funciones:
1.- Recorre las hebras del molde y selecciona en cada momento el
desoxirribonucleótido-trifosfato que tenga la base complementaria
(G-C, A-T). Una vez localizado, la ADN-polimerasa cataliza su
 hidrólisis separando un grupo pirofosfato (P-P) y uniendo el resto
(desoxirribonucleótido-monofosfato) a la cadena de ADN que se
está formando mediante un enlace fosfodiéster. La energía
necesaria para esta unión se obtiene de la hidrólisis del grupo
pirofosfato. Ésta es la función polimerizadora de la ADN-polimerasa.
2.- La ADN-polimerasa es también autocorrectora ya que
después de unir cada nucleótido comprueba si se han producido
errores antes de incorporar el nucleótido siguiente. Si detecta un error,
elimina el último nucleótido colocado y lo sustituye por el correcto.
Sin embargo la ADN-polimerasa debe resolver dos problemas
relacionados con su actividad catalítica:
1.- La ADN-polimerasa es capaz de ir leyendo las hebras que
actúan de molde en sentido 3'--5' y va sintetizando la nueva cadena en
sentido 5'--3'. Esta última hebra recibe el nombre de hebra
conductora. Sin embargo, la hebra molde complementaria discurre en
sentido antiparalelo, es decir, 5'--3' y la ADN-polimerasa es incapaz de
leerla en ese sentido. Para solucionar este problema, la ADN-
polimerasa sintetiza pequeños fragmentos de ADN llamados
fragmentos de Okazaki que crecen en sentido 5'--3' igual que la
hebra conductora y más tarde se unen para formar la hebra completa,
que en este caso se llama hebra retardada porque se sintetiza más
lentamente.
2.- Otro problema que plantea la actividad catalítica de la
ADN-polimerasa es que es incapaz de iniciar por sí sola la síntesis de
una nueva cadena de ADN y necesita un corto fragmento de ARN,
llamado ARN-cebador, que actúe como iniciador de las réplicas y que
se elimina posteriormente del ADN formado.

En resumen, el proceso completo de la replicación del ADN

en E.coli es el siguiente:
El paso previo para que pueda actuar la ADN-polimerasa es
el desenrrollamiento y apertura de la doble hélice de ADN. La
separación de las cadenas comienza en puntos concretos llamados
puntos de iniciación. A partir de ellos se van separando las dos hebras
de ADN formando la llamada burbuja de replicación. Los dos extremos
de la burbuja por donde continua la separación reciben el nombre de
horquillas de replicación.
La síntesis de las cadenas complementarias comienza con la
síntesis del ARN cebador que es una corta cadena de ARN con una
secuencia complementaria de una de las porciones de las hebras del
ADN y frente a la cual se coloca. En la hebra que tiene el sentido 3'--5'
la ADN-polimerasa va colocando nucleótido tras nucleótido a
continuación del ARN cebador. Esta hebra complementaria que va
creciendo en sentido 5'--3' es la hebra conductora. En la hebra
opuesta del ADN original no se puede realizar el mismo proceso
porque discurre en sentido 5'--3'. Por tanto, a continuación del ARN
cebador se coloca un fragmento de Okazaki y, después de éste, un
nuevo ARN cebador seguido de otro fragmento de Okazaki.
En este momento actúa una ribonucleasa que elimina el
ARN cebador que está entre dos fragmentos de Okazaki. El hueco que
queda es rellenado por la ADN-polimerasa. El proceso continuaría con
la colocación de un nuevo ARN cebador, otro fragmento de Okazaki,
eliminación del ARN cebador y llenado del hueco por la ADN-
polimerasa. Y así sucesivamente. La hebra que se sintetiza de esta
manera es la retardada y crece en sentido 3'--5'.
La replicación llevada a cabo por la ADN-polimerasa es un
proceso muy exacto, sobre todo por su actividad autocorrectora. Sin
embargo, aún así se produce un error de apareamiento de bases por
cada 107 pares de bases. En una bacteria esto podría resultar
suficiente debido a que su cromosoma sólo posee 3·103 pares de
bases. Sin embargo en el ADN humano existen 3·109 pares de bases y
durante el desarrollo embrionario, a partir del zigoto el ADN humano
se duplica 1015 veces, por lo que la información genética pronto se
perdería.
Para aumentar más todavía la perfección de la replicación del
ADN existe un complejo enzimático que detecta el nucleótido mal
emparejado, lo elimina y regenera la secuencia correcta. De este
modo se logra alcanzar una perfección de un error cada 1010 pares de
bases. Este proceso se conoce con el nombre de corrección
postreplicativa.

OBJETIVOS
• Determinar algunas propiedades de los Ácidos Nucleicos
• Demostrar la presencia del ADN
• Demostrar la Presencia de RNA

RECONOCIMIENTO DE ADN Y RNA

 MATERIALES:
A). Catafila de cebolla.
B). Portaobjetos.
C). Cubreobjetos.
D). Solución de Feulgen
E). Solución de HCl al 0.1N.
F). Camara oscura de Madera.

PROCEDIMIENTO:

•Colorear directamente las catafilas de cebolla con la

solución Feulgen
En condiciones de oscuridad, por 30 minutos.
• Observar al microscopio las células.
• Interpretar la reacción de Schiff.
CELULA PROCARIOTICA Y
EUCARIOTICA

VIII Sesión de Laboratorio

CELULA PROCARIOTICA Y EUCARIOTICA
FUNDAMENTO

La materia viva puede entenderse como el resultado de la interacción

de componentes, los cuales están organizados de un modo particular,
que la hace reconocible. De acuerdo con la naturaleza, número de
unidades constituyentes y tamaño de los componentes es posible
reconocer distintos niveles de organización de la materia viva.
El conjunto integrado de procesos generados a partir a partir de la
organización de los componentes, que se conoce como la "vida", se
materializa en una unidad fundamental, la célula. Es en la célula
donde es posible reconocer, desde el punto de vista morfológico, la
presencia de agregados supramoleculares y organelos, los que
pueden ser estudiados, ya sea aprovechando algunas de las
propiedades de las macromoléculas que las componen, o bien
mediante el uso de instrumentos ópticos cuyo poder de aumento y
resolución permite la visualización directa de las estructuras celulares.
Dado que el ojo humano sólo es capaz de resolver dos puntos
separados por más de 0.1 mm (10 μm) y como la mayoría de las
células son de tamaño mucho menor, es imprescindible hacer uso del
poder de resolución del microscopio óptico (0.2 μm). Los diversos tipos
de microscopios de luz se basan fundamentalmente en su capacidad
para detectar pequeñas diferencias de índice de refracción de las
estructuras celulares. Los colorantes utilizados en citología e histología
acentúan estas diferencias permitiendo un mayor contraste de las
estructuras observadas.
Para estudiar la morfología celular, es posible estudiar las células
directamente, in vivo, o bien, después de un proceso que implica la
muerte celular por medio de fijación.

OBJETIVOS
• Observar las células procarióticas
• Observar las células eucarióticas
• Determinar las diferencias entre célula procariótica y
 La célula eucariótica

CÉLULA PROCARIOTICA

OBJETIVOS

Conocer y evaluar algunas técnicas que se utilizan comúnmente para

observar células procarioticas al microscopio óptico.

REALIZACIÓN

1. Preparar los frotis bacterianos.

2. Teñir con cristal violeta 1min.
3. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
4. Cubrir con Lugol 1min.
5. Lavar con agua el exceso de Lugol.
6. Decolorar con alcohol-acetona o simplemente con alcohol hasta que la
preparación deje de perder color (30seg)
7. Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente.
8. Teñir con safranina 1min.
9. Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste.
10. Secar la preparación.
11. Examinar al microscopio fijándose sobre todo en el color de cada
preparación.

Los tiempos de exposición a los colorantes son orientativos. Cada vez que se
prepara la batería de colorantes para realizar la tinción Gram presentan algunas
diferencias respecto a los preparados en otro momento, por lo que puede ser
necesario ajustar los tiempos.
En un laboratorio de Microbiología, cada vez que se preparan los colorantes, se
suelen hacer pruebas con cultivos patrón de los dos tipos (Gram+ y Gram-) para
ajustar así los tiempos y tener la certeza de que el resultado de todas las tinciones
que se hagan mientras duren esos colorantes son fiables.

Otra posibilidad es adquirir el equipo completo de colorantes ya preparados, pero

es mucho más caro.

CÉLULA EUCARIOTICA VEGETAL

MATERIALES SUMINISTRADOS AL ALUMNO

Microscopio, colorante, portaobjetos y cubreobjetos, tallo de planta
verde, hojas de afeitar.

CÉLULAS BACTERIANAS TINCIÓN GRAM

CÉLULAS DE CIANOFITAS NOSTOC

 MATERIALES QUE EL ALUMNO DEBE TRAER

Lápiz grafito; Lápices de colores; Goma blanda

DESARROLLO PRÁCTICO

Algunos métodos para estudiar la morfología de la célula.

Examen inmediato. Es la observación directa al microscopio de luz
de tejidos o células sin la utilización previa de tratamientos y técnicas.
Observación de hojas de Elodea (Elodea sp)
Observe al microscopio hojas de Elodea. En ella reconozca los
cloroplastos. Aumente el nivel de luz y vea cómo los cloroplastos se
mueven (Ciclosis). Haga esquemas. Anote los aumentos. DIBUJE Y
ROTULE!!!

. Observación de una preparación de epidermis de Tradescantia

virgineana. Para montar su muestra
desprenda la epidermis. La técnica de desprendimiento se explicará
durante la actividad práctica. Haga esquemas. Anote los aumentos.
DIBUJE Y ROTULE!!!

Un estoma corresponde a una abertura pequeña en la epidermis de

las hojas y tallos, rodeada por
células oclusivas, a través de la cual difunden los gases. La vacuola
es un organelo limitado por una
membrana (tonoplasto) llena de fluido, situado en el citoplasma de una
célula
. Examen mediato. Los tejidos y células a observar son procesados
previamente a la observación.
Observación de un corte histológico transversal de tejido vegetal
(tallo).
Observe esta preparación histológica con los tres aumentos de su
microscopio. Haga un esquema con el
aumento mediano (DIBUJE Y ROTULE). Compare con el examen
inmediato y haga una breve discusión sobre lo observado.
 CELULA ANIMAL OOCITO DE ORESTIAS

Células Vegetal

- Haga una preparación fresca de una hoja de Tradescantia

virgineana. Observe las vacúolas (Aquellas que están teñidas de un
color rosado-violeta, por la presencia de un pigmento llamado
Antociano).
Agregue gotas de agua de mar (solución hipertónica) en un borde del
cubreobjetos y mediante un trozo de papel filtro aplicado al borde
opuesto, extraiga el agua haciendo penetrar de este modo, el agua de
mar a la preparación.
Observe las células. Reemplace el agua de mar por agua destilada
usando el mismo procedimiento anteriormente indicado. Note los
cambios en la célula y explíquelos. Esquematice.

CUESTIONARIO
Para responder el cuestionario consulte la literatura necesaria.
Recuerde que en los controles futuros debe conocer la respuesta a
estas preguntas.
1. ¿Por qué el agua, siendo una molécula polar, puede difundir
libremente a través de la membrana plasmática?
2. ¿Qué funciones puede cumplir la membrana plasmática?
3. ¿Qué moléculas se encuentran participando en la estructura de la
membrana plasmática?
4. ¿Cuáles son las diferenciaciones de la membrana que permiten
comunicación con otras células y su entorno?

CÉLULA VEGETAL CATAFILO DE CEBOLLA

 OBSERVACION DE CELULAS ANIMALES
SANGRE
MATERIALES

• Microscopio • Lanceta
• Portas y cubre-objetos • Alcohol
• Soporte de preparaciones • Metanol

• Cubeta • Giemsa
Sangre obtenida por un pinchazo en el pulpejo del dedo

TECNICA

1. Limpiar el pulpejo del dedo con una gota de alcohol, hacer una punción
para conseguir una gota de sangre.
2. Depositar la gota de sangre, en un lado y en el centro de un porta bien
limpio.
3. Seguidamente, con el empleo de un porta de borde esmerilado se hace un
frotis o extensión de sangre.
4.
El porta con el que se hace la extensión debe deslizarse bien colocado y lo
más perfectamente aplicado en su borde contra el otro porta sobre el que
se hace la extensión. Sólo debe pasarse una vez, de forma continua e
ininterrumpida.

5. Es conveniente realizar dos o tres extensiones, con el fin de seleccionar

para la tinción la mejor lograda.
Las extensiones o frotis deben secarse al aire lo más rápidamente posible.
La desecación se facilita con movimiento en forma de abanico, nunca
 soplando o por calor. La rápida desecación evita la deformación de los
glóbulos sanguíneos.

COLORACION

1. Depositar el porta con la extensión de sangre encima del soporte de

tinciones y éste sobre la cubeta.
2. Dejar caer sobre la extensión unas gotas de metanol y esperar que el
alcohol se evapore, con lo que se consigue el fijado.
3. Depositar cubriendo toda la extensión, unas gotas de Giemsa, evitar la
desecación y dejar actuar el colorante unos cinco minutos.
4. Lavar la preparación, hasta que arrastre todo el colorante.
5. Tomando el porta por los cantos secar aireando el porta, o bien al calor muy
lento de la llama del mechero.

OBSERVACION AL MICROSCOPIO

1. Con débil aumento explorar la preparación para localizar la zona en la que

el frotis es más perfecto. Los lugares más aptos son aquellos en los que la
extensión de los glóbulos se ha conseguido en una sola capa, están bien
teñidos y no se han producido precipitados de los colorantes. Cuando se
observe una zona apta, pasar a aumentos más fuertes.
2. En el campo del microscopio, se verán con un dominio predominante los
glóbulos rojos, hematíes o eritrocitos , teñidos en color rojo. No tienen núcleo y
son más delgados por el centro que por los bordes. Los glóbulos blancos o
leucocitos de identifican fácilmente por la presencia de núcleo. Hay varias
clases de glóbulos blancos:
o los linfocitos algo mayores que los glóbulos rojos, con un núcleo muy
voluminoso que ocupa casi todo el glóbulo, aparece fuertemente teñido en
color violeta oscuro.
o los monocitos son los leucocitos mayores, poco frecuentes
normalmente, hay que desplazarse por la preparación para encontrar
alguno. Tienen un núcleo muy grande y redondeado que aparece teñido en
color violeta.(Es bueno que recuerdes su función que es la de fagocitosis).
o los polinucleares presentan el núcleo como fragmentado o con
aspecto arrosariado.
o los eosinófilos, con granulaciones abundantes de color rojizo y el
núcleo teñido de color azul marino. Estos glóbulos aumentan su número en
caso de parasitosis o procesos alérgicos.
o los basófilos presentan un núcleo teñido de rojo y las granulaciones
del citoplasma de color muy oscuro.

Las plaquetas aparecen como pequeños fragmentos teñidas de color violeta.

Estas células intervienen en el proceso de coagulación sanguínea.
3. Si la extensión ha salido bien, merece la pena conservarla. Para ello, añadir
una gota de euparal, dpx, u otro producto similar y colocar un cubre-objeto.
4. El número promedio de glóbulos rojos en el hombre es de 5.000.000 por
mm3 de sangre. La cifra media de glóbulos blancos es de 7.000 a 8.000 por
mm3. Hay por tanto un glóbulo blanco por cada 600 ó 700 glóbulos rojos. Por lo
tanto para ver todos los tipos de glóbulos blancos debes buscarlos en distintos
campos de la preparación. El número de plaquetas es de unas 250,000 por
mm3
CICLO CELULAR Y MITOSIS

IX Sesión de Laboratorio
DIVISIÓN CELULAR MITÓTICA

FUNDAMENTO:
La división celular es un proceso por el cual a partir de una célula madre se
producen dos células hijas que genética, estructural y funcionalmente son iguales
entre sí e iguales a la propia célula madre. Ello se debe a que han recibido,
excepto en el caso de procesos anormales, la misma información genética de la
célula madre y, por lo general en la mayoría de los organismos la misma cantidad
de citoplasma y orgánulos.
Este fenómeno se produce tanto en procariotas como en eucariotas. En los
procariotas y eucariotas unicelulares o de vida libre la división celular es el
proceso por el cual se propaga la información genética y aumenta el número de
individuos de la población, mientras que en los organismos pluricelulares la
división celular es esencial para el desarrollo del organismo a partir del zigoto y
para la reparación de las células que han muerto por desgaste o por lesiones
ocurridas en los tejidos.
Existen diferencias entre la división celular de procariotas y eucariotas derivadas
de la distinta estructura y de la diferente cantidad de ADN que poseen estos tipos
de células. En las células eucariotas el proceso de división es más complejo
debido a la existencia de un núcleo en el que se almacena la cromatina
condensada en forma de cromosomas que, en algunos casos, pueden ser muy
numerosos.
El mecanismo utilizado para la división celular se denomina mitosis, aunque es el
mecanismo que afecta al material genético. Normalmente este mecanismo se
continúa con la división del citoplasma denominada citocinesis.
El objeto de la presente práctica es identificar las células que se encuentran en
mitosis y las distintas fases de ésta mediante la tinción y observación de
meristemos de raíz de cebolla. Una vez identificadas las fases de la mitosis, se
puede calcular el índice mitótico y la distribución porcentual de cada una de las
fases mitóticas de meristemos de raíz de cebolla crecidos en diferentes
condiciones. Con estos datos realizaremos un informe a modo de trabajo de
investigación explicando la metodología utilizada, los objetivos, resultados y
comentarios al respecto.

CICLO CELULAR
El ciclo celular es una secuencia regular y repetitiva de crecimiento y división
celulares que sufren todas las células. La duración de este ciclo es variable y
depende del tipo celular, del organismo y de factores externos como la
temperatura, factores de crecimiento, nutrientes y toxinas.
El ciclo celular consta de cinco fases: G1, S, G2, mitosis y citocinesis (Figura 5.1).
Las tres primeras fases se agrupan en lo que se denomina interfase durante la
cual la célula se prepara para realizar la división celular formada por las dos
últimas fases.
La función de las fases de la interfase quedan resumidas de la siguiente forma:
Fase G1.- Durante esta fase se desarrolla una alta actividad bioquímica
cumpliendo con las distintas funciones que la célula presente en el organismo.
Normalmente, en un organismo pluricelular, las células, que no se dividen
normalmente salvo en presencia de ciertos factores de crecimiento, se enquistan
en una subfase denominada G0. La fase G0 indica únicamente que las células no
se encuentran en un ciclo contínuo de crecimiento y duplicación. En un organismo
diploide, la cantidad de ADN en el núcleo es de 2n.
Fase S.- Cuando las células se encuentran en un ciclo contínuo de crecimiento y
división celular o reciben una señal extracelular adecuada, pasan a duplicar la
cantidad de ADN y sintetizar una serie de proteínas encargadas de la
compactación del ADN. Por lo tanto, al final de la fase S, una célula de un
organismo diploide ha pasado a tener una dotación doble de ADN. No se puede
decir que sea tetraploide (4n) sino que sigue siendo diploide pero con cada uno de
los cromosomas duplicados, las indicaremos como 4c.
Fase G2.- Las células han terminado la síntesis de ADN (4c) y se preparan para
sufrir el complejo proceso de la división celular. En esta fase se sintetizan las
proteínas necesarias para llevar a cabo la mitosis y se concluye la duplicación y
separación del centriolo en células animales.

ESQUEMA DEL CICLO CELULAR

La regulación del ciclo celular es muy importante en organismos pluricelulares ya

que un descontrol de la velocidad del ciclo podría descompensar y alterar el
equilibrio funcional del organismo dando lugar a consecuencias tan negativas
como el cáncer.

MITOSIS

1.1.Profase
 La cromatina comienza a condensarse y espiralizarse formando los
cromosomas. Durante toda la profase los cromosomas van acortándose debido a
este proceso progresivo de espiralización. Los cromosomas desde el principio
aparecen formados por dos cromátidas hermanas que son, genética y
morfológicamente idénticas. Ambas cromátidas se mantienen unidas por el
centrómero. Mientras la membrana nuclear esté intacta y el o los nucleolos sean
visibles, se dice que la célula está en profase.
Al final del periodo profásico el nucleolo o nucleolos se desorganizan y la
membrana nuclear se desintegra. Los cromosomas quedan libres en el espacio
celular. Mientras tanto, en el citoplasma, los centriolos se han duplicado y cada
diplosoma (par de centriolos), ha emigrado a un polo de la célula. Entre ambos se
forma y se extiende el huso acromático o mitótico, constituido por filamentos
(fibras del áster), en los que se insertan los cromosomas por el centrómero y
comienzan a emigrar hacia la placa encuatorial. Este período desde que
desaparece la membrana nuclear hasta que los cromosomas se localizan en el
plano ecuatorial se denomina prometafase.
1.2.Metafase
Los cromosomas han alcanzado su máximo grado de espiralización. Se disponen
en círculo en la placa ecuatorial con los centrómeros perfectamente orientados,
con cada cromátida hacia un polo celular. Esta orientación asegura la correcta
separación en la fase siguiente.
La acción de determinados tratamientos como la colchicina, la colcemida, la
mescalina, la hidroxiquinoleína, el bromonaftaleno, el paradiclorobenceno etc..o
agua con hielo, inhiben la formación de los microtúbulos y por tanto la migración
hacia los polos en anafase. Estos tratamientos se utilizan en citogenética
experimental para acumular células en metafase, que resultan apropiadas para el
análisis cariotípico.
1.3.Anafase
En esta fase las cromátidas de cada cromosoma se separan y emigran hacia los
polos, de manera que a cada uno van 2n cromátidas. Este movimiento se realiza
gracias al huso acromático. Como ambas cromátidas son idénticas, porque se
formaron por duplicación de la fase S de la interfase, los polos celulares reciben,
exactamente el mismo material genético. La anafase concluye cuando todos los
cromosomas han alcanzado los polos.
1.4.Telofase
Las cromátidas han terminado su migración hacia los polos. La membrana nuclear
se reconstruye alrededor de las cromátidas, los nucleolos vuelven a formarse y las
cromátidas se desespiralizan volviendo a formar la cromatina. Se han formado 2
núcleos hijos.
 ETAPAS DE LA MITOS

4 Mitosis2.Citocinesis
La citocinesis es el proceso por el cual el citoplasma de la célula madre queda
distribuido entre las 2 células hijas y estas se independizan por la formación de la
membrana celular. La separación de las 2 células hijas es diferente en células
animales y vegetales.
En las células animales se produce la plasmocinesis, en la que a partir de la
periferia de la célula el citoplasma se va estrangulando hasta que las células hijas
se ponen en contacto.
En las células vegetales se forman vesículas membranosas en la zona
comprendida entre los núcleos hijos. Estas vesículas se fusionan unas con otras
dando origen a la membrana plasmática, quedando entre las membranas el
contenido de las vesículas que constituirá la pared celular.

Lamina 5.- Celulas de meristemo radicular de cebolla en interfase

 Profase mitótica Metafase mitótica

Anafase mitótica Telofase mitótica

Células de meristemo radicular de cebolla en interface

 TRABAJO PRÁCTICO

Observación de distintas fases de la mitosis en ápices radiculares de cebolla.

1. Obtención del material.

Se cortan raíces jóvenes de cebolla, aproximadamente unos 20 mm,

comprobando que conservan el ápice radicular, que se distinguirá por el cambio
de color.

2.Fijación.

Se prepara la mezcla fijadora. Existen diversos fijadores:

-3 Etanol:1 Acético (Carnoy).
-3 Metanol:1Acético
-7 Metanol:3 Acético
-3 Metanol:1 Propiónico
-4 Etanol:1 Acético:1 Cloroformo
Según el fijador utilizado el tiempo y temperatura de la fijación varía. Las raicillas
de cebolla se han fijado en 3 Metanol:1 Acético a 4ºC.

3.Conservación

Se lava el material varias veces con la mezcla fijadora y se conserva a 4ºC.

4.Preparación

Las raicillas de cebolla que se hallan en mezcla fijadora se hidrolizan en HCl 1N

durante 10 minutos a 60ºC.
Transcurridos los 10 minutos de la hidrólisis, se lavan las raicillas en agua
destilada y se colocan las raicillas sobre una gota de orceína acética o de orceína
lactopropiónica para su tinción, durante 10 a 15 minutos. A continuación se realiza
la preparación. Primeramente, se toma una raicilla y se coloca sobre un vidrio
portaobjetos y se corta el ápice radicular con un bisturí. Para realizar esta
operación se utiliza la lupa. Este ápice radicular se corta a su vez en 4 fragmentos,
se hace un corte longitudinal y otro transversal. Se separan los cuatro trozos y a
continuación se añade una gota del colorante. Seguidamente se coloca un
cubreobjetos sobre el material que deseamos observar. Con la ayuda de un
bastoncillo de madera se golpea y extiende el material. A continuación se presiona
con el dedo pulgar y se retira el exceso de colorante con un papel de filtro.

5.Observación.
Se observa al microscopio empezando con el objetivo de menor aumento. No es
necesario utilizar el objetivo de inmersión. Se deben distinguir y dibujar, tal y como
se ven, todas las fase s de la mitosis.

Cuestionario de practicas

1.Dibuje cada una de las distintas fases de la mitosis, además de la interfase.

2.¿Por qué se encuentra mayor número de células en interfase que en división en
las preparaciones de raíz de cebolla?
3.La cebolla Allium cepa es una especie vegetal con 2n=16 cromosomas
¿Cuántas cromátidas recibe cada polo en anafase?
4.¿Cuántas cromátidas tiene uno de los cromosomas de cebolla en telofase?
5.Un individuo diploide y homocigótico AA, ¿Cuántas copias del alelo A tiene en el
periodo G1 de la interfase y cuántas en metafase?
6.Un individuo diploide y heterocigótico Aa, ¿Cuántas copias del alelo A tiene en el
periodo G1 de la interfase y cuántas en metafase?
6.¿Existe alguna diferencia entre endomitosis y endorreduplicación?
7.¿Por qué se bloquea la continuación de la mitosis en metafase en especies que
presentan haplocromosomas?.
DIVISIÓN CELULAR MEIOSIS

X Sesión de Laboratorio
 DIVISIÓN MEIOTICA

FUNDAMENTO

La meiosis es un proceso celular, ligado a la reproducción sexual,

por el cual, la célula madre de naturaleza diploide, da origen a los
gametos de naturaleza haploide, de tal manera que en la fecundación
se reestablece el número diploide de cromosomas. Así, mientras la
mitosis es un proceso de división celular con formación de dos núcleos
hijos con el mismo número de cromosomas que la célula original, en la
meiosis en cambio hay dos divisiones celulares con reducción del
número de cromosomas a la mitad.
Fases de la meiosis
La meiosis es un proceso citológico que comprende dos divisiones
celulares. En la primera división meiótica ocurre una serie de
intercambios de material genético entre los cromosomas homólogos.
Este fenómeno es un proceso complejo que comprende una larga
profase en la que, para su mejor estudio y comprensión, se distinguen
los estadíos: Leptoteno, Cigoteno, Paquiteno, Diploteno y Diacinesis.

Profase I
Leptoteno. El comienzo de la profase I de la célula se caracteriza
porque los cromosomas que se encuentran completamente
desenrollados en el núcleo, debido a los procesos de síntesis de los
momentos premeióticos, comienzan a estructurarse según un doble
modelo de espiralización, que conduce en definitiva a un aumento del
volumen nuclear.
Cigoteno. La célula diploide presenta en estos momentos 2n
cromosomas homólogos completamente espiralizados (contraídos), los
cuales se aparean cada uno con su homólogo. Es una sinapsis
perfecta, cromómero a cromómero, formando por tanto n bivalentes.
Paquiteno. En este estadío se terminaliza el apareamiento de los
cromosomas homólogos n-bivalentes se visualizan engrosados, y
cada uno de los cromosomas compuestos de dos cromátidas, hace
que el bivalente se presente como una tétrada.
Diploteno. Las dobles parejas de cromátidas homólogas comienzan a
separarse, permaneciendo unidas por ciertos puntos que son los
quiasmas, los cuales constituyen la visualización citológica del
mecanismo de intercambio de material genético denominado
sobrecruzamiento (crossing-over).
Diacinesis. En este estadío las tétradas aparecen muy condensadas
con bucles unidos por los quiasmas; al mismo tiempo que se
terminalizan hacia los extremos de la tétrada

Metafase I
A lo largo de la profase I, los centriolos duplicados se orientan dos a
dos, hacia cada uno de los polos de la célula, visualizándose ya en la
metafase I el aparato mitótico, al mismo tiempo que las tétradas se
disponen en la placa ecuatorial del aparato mitótico.
Anafase I
En este estadío ocurre la rotura y desaparición de la membrana
nuclear y la migración de n cromosomas a cada polo. Es importante
señalar en primer lugar que la repartición de n cromosomas
homólogos a cada polo ocurre al azar, y en segundo lugar que a
diferencia con la mitosis, en esta primera división meiótica no hay
división longitudinal del centrómero, y por lo tanto separación de las
cromátidas, sino que éstas permanecen unidas por sus respectivos
centrómeros. Por lo tanto, esta división meiótica I es una división
reduccional
Telofase I
Ocurre la individualización de las dos células de la división meiótica I,
con la aparición de la membrana plasmática que las separa, y la
reaparición de la membrana nuclear.
Figura 6. Células del testículo del saltamontes Chorthippus jucundus teñidas con orceína lacto-propiónica. A.-
Núcleo de una espermatogonia en interfase. El cromosoma sexual ha sido señalado con una X. B.- Metafase
espermatogonial. C.- Núcleo prepaquiténico. Posiblemente corresponde a un núcleo en leptotene. D.- Paquitene
medio. E.- Paquitene tardío. F.- Diplotene. Se ha señalado la posición de los quiasmas (cabezas de flecha) en un
bivalente monoquiasmático (M7), en uno con dos quiasmas (M4) y en un tercero que presenta cuatro (L1
División meiótica II
Entre la telofase I y el comienzo de la segunda división meiótica, a
diferencia con la mitosis, no hay un período de síntesis y duplicación
del ADN, por lo demás la división meiótica II, tiene lugar como la
mitosis normal en cada una de las células haploides (meiocitos de
segundo orden), resultantes de la división meiótica I.
Profase II
En este estadío los centriolos aparecen duplicados y migran dos a dos
hacia los polos, constituyendo el huso mitótico.
Metafase II
Los n cromosomas de cada una de las células hijas, se disponen en la
placa ecuatorial del huso, al mismo tiempo que desaparece la
membrana nuclear
Anafase II
Ocurre la división longitudinal del centrómero y repartición al azar de n
cromátidas a cada uno de los polos, de modo que las cromátidas
hermanas (que no serán idénticas por el sobrecruzamiento) van
siempre a lados opuestos.
Telofase II
En esta fase tiene lugar la individualización de las cuatro células hijas,
con aparición de las membranas plasmáticas y nuclear. Ahora bien, a
diferencia con la mitosis, las dos células resultantes de cada meiocito
de segundo orden son diferentes, porque sus cromátidas han
intercambiado material genético previamente en la profase I. A
continuación, ocurre la desespiralización de las cromátidas y el
periodo de síntesis y duplicación del ADN. No obstante, se presentan
numerosas excepciones a este esquema general de la meiosis, según
sean los ciclos haplontes, diplontes o diplohaplontes de las especies, o
en una misma especie en la espermatogénesis y ovogénesis.
 Espermatocitos de Chorthippus jucundus teñidos con orceína lacto-propiónica. A.- Diplotene
tardío-diacinesis. B.- Metafase-I. C.- Anafase-I. El cromosoma sexual X migra completo al polo superior de esta
célula. D.- Telofase-I. E.- Intercinesis/Profase-II. La célula de la parte superior de la fotografía posee el
cromosoma X, mientras que la de la parte inferior carece de él.
 Células del testículo de Chorthippus jucundus teñidas con orceína lacto-propiónica. A.- Metafase-II. Se
observa la disposición radial de los cromosomas. B.- Anafase-II. Las cromátidas están comenzando a separarse. C.-
Anafase-II. D.- Telofase-II. E.- Espermátidas tempranas. La situada en la parte superior de la fotografía posee el
cromosoma sexual (X), mientras que la de la parte inferior carece de él. F,G,H- Espermátidas en diferentes
estados de maduración: redondeada, lanceolada, alargada…
1.- TECNICA DE PREPARACION MEIOTICA EN TESTICULOS DE SALTAMONTES

Seleccionamos testículos de ortópteros fijados en etanol y ácido acético 3:1 al menos

con una semana de antelación y los colocamos en agua destilada para su hidratación
durante 10 minutos. A partir de este momento conviene realizar todo el proceso en el
mismo recipiente, preferiblemente plástico y no vidrio. No utilizar ningún elemento
metálico.
Hidrolizar los testículos en HCl 5N durante 30 min. Transcurrido este tiempo se lavan
abundantemente en agua destilada. Posteriormente se introducen en colorante de orceina
acetica durante 10 minutos a temperatura ambiente. Este proceso es preferible realizarlo
en oscuridad. Se lavan los testículos, que tendrán un color rojo, en agua sulfurosa y
posteriormente en agua del grifo, donde se almacenarán hasta la confección de los
aplastados.
Separamos un par de túbulos seminíferos del testículo y los colocamos sobre un
portaobjetos. Sobre ellos se coloca inmediatamente una gota de ácido acético al 50% en
agua destilada y se deja un par de minutos (¡Cuidado, no dejar secar el material!).
Se coloca sobre el túbulo un cubreobjetos y utilizando la punta de un lápiz y con presión
muy suave se dispersa el material.
Con un trozo de papel de filtro se elimina el acético que ha rebosado por los laterales del
cubreobjetos y, con cuidado de no moverlo, se realiza el aplastado presionando
fuertemente con el dedo pulgar sobre una superficie completamente plana.
Observar los aplastados en el microscopio tratando de determinar las diferentes etapas
del proceso meiótico, así como las espermátidas en los diferentes estadíos de la
espermiogénesis.

TÉCNICA DEL GOTEO Y COLORACIÓN GIEMSA

a- Con ayuda del microscopio estereoscopio, aislar los testículos de saltamontes.

b.- Fijar los testículos en solución carnoy por 5 a 10 minutos.
c.- Disgregar los testículos ,con aguda de estiletes y suspender en solución de
Tripsina.
d.- Incubar por 15 minutos .
e.- Colocar la suspensión celular en tubos y centrifugar a 1000 r.p.m. por 5 minutos
f.- Decantar la tripsina y resuspender en carnoy
g).- Centrifugar a 1000 r.p.m. por 5 minutos.
h.- Eliminar el carnoy. y agregar al paquete celular 2 0 5 ml de fijador, agitar con la
pipeta ,hasta homogenizar la suspensión celular.
i.- Dejar caer una gota de suspensión en una lamina y secar al aire .
j.- Colorear con Giemsa al 2% por 10 minutos

CUESTIONARIO

1-Dibuje cada una de la fases de la meiosis

2-¿Qué es un bivalente? ¿En qué fase o fases se observa?.
3-¿Qué diferencia existe entre una anafase I y una anafase II?
4-La cebada tiene 2n = 14 cromosomas, ¿cuántos cromosomas tiene una célula de
cebada en una metafase de una mitosis, en una metafase I y II de una meiosis?
5-Si tiene una preparación en la que observa células anafásicas en las que se separan
cromátidas ¿cómo sabrá si se trata de una anafase de una mitosis o de una anafase II de
una meiosis?
 ESPERMATOGENESIS EN
INVERTEBRADOS

X Sesión de Laboratorio
ESPERMATOGENESIS EN INVERTEBRADOS

FUNDAMENTO

Existe un proceso celular destinado a producir células idénticas genéticamente: la mitosis. Por el
contrario,la mayoría de los organismos vivos utilizan parte de su vida o tejidos especializados para
producir células esencialmente diferentes de las progenitoras en cuanto a las
combinaciones posibles de su material hereditario.
Este mecanismo celular está enclavado en un proceso especial de división celular: la meiosis.
En organismos superiores la meiosis tiene lugar en los órganos sexuales tanto masculinos como
femeninos, dentro de un proceso general que se denomina respectivamente espermatogénesis y
ovogénesis. Tanto uno como otro no sólo producen células diferentes genéticamente, sino que
reducen el número de cromosomas de las células a la mitad y las modifica para poder ser
fecundadas o fecundar dependiendo del sexo donde se realice.

ESPERMATOGÉNESIS

Ham, discípulo de Leuwenhoek, observa por primera vez en 1677 en el semen humano la
presencia de unos "animáculos" móviles que muchos científicos de la época consideraron como
parásitos o simbiontes. En 1780 Spallanzani comprueba que si del semen eran eliminados estos
cuerpos móviles, éste perdía su capacidad fertilizante. Pero fue en la segunda mitad del siglo XIX
cuando se concluyó que estos "animáculos" eran los gametos masculinos, y se les denominó
espermatozoides.
De esta forma se estableció que los espermatozoides se originaban en los testículos y que
poseían núcleo y citoplasma: eran células.
Desde este momento y hasta nuestros días la morfología de los espermatozoides y de las células
que les dan origen ha sido ampliamente estudiada. En una primera etapa de la citología clásica,
empleando cortes en parafina, no sólo se describen gran cantidad de formas distintas de
espermatozoides, sino que también se pone gran interés en el estudio de los tejidos en los que se
originan. Posteriormente, con el avance de la técnica y la aparición del microscopio electrónico, se
determina la ultraestructura de los espermatozoides y de las células intermedias en su formación.
La introducción de nuevas técnicas de estudio como pueden ser las citoquímicas para
microscopía óptica y electrónica, la aplicación de microscopía de barrido, el empleo de anticuerpos
marcados a nivel morfológico y ultraestructural, la microscopía confocal o metodologías puramente
bioquímicas han ayudado a un mejor conocimiento del proceso de formación de los gametos
masculinos, la espermatogénesis.
Desde antiguo recibió gran atención el proceso de cómo se formaban estas células,
ya que a partir de una célula prácticamente indiferenciada, la espermatogonia, se produce una
complicada y a veces dramática serie de cambios morfofuncionales que desembocan en la
formación del espermatozoide: la espermatogénesis. Podríamos definir la espermatogénesis como
el conjunto de cambios que ocurren en una célula prácticamente indiferenciada, espermatogonia, y
que tienen como final la formación de una célula altamente especializada, con un número “n” de
cromosomas recombinados, una carga “c” de ADN y que es capaz de fecundar: el
espermatozoide.
Teniendo en cuenta los cambios que se producen en la espermatogonia, y por tanto los nuevos
tipos celulares y los procesos en los que participan, podemos dividir a la espermatogénesis como
proceso en las siguientes etapas:
a) Proliferación.
b) Crecimiento y meiosis: recombinación, división y reducción.
c) Espermiogénesis
 A) ESPERMATOGONIAS B) Y C) ESPERMATOCITOS D)ESPERMATIDES

a) Proliferación. Este período comprende el desarrollo de las espermatogonias, las cuales se

dividen no sólo aumentando la población celular sino manteniendo la población troncal existente.
Las divisiones de población espermatogonial llegan en algunas especies hasta ocho. Así, partiendo
de una espermatogonia inicial, van surgiendo por divisiones sucesivas grupos de ellas que,
normalmente, se encuentran interconectadas por sus citoplasmas. El número final de gonias
presentes en un cisto, indicará por lo tanto las veces que se han dividido a partir de la
espermatogonia primordial. De esta forma un cisto con doscientas cincuenta y seis gonias revela la
existencia previa de ocho divisiones mitóticas.
En esta fase de divisiones rápidas y continuas es fácil observar el cariotipo de la especie.

b) Crecimiento y meiosis. La meiosis se caracteriza por presentar dos divisiones sucesivas del
material hereditario (División I y División II) precedidas por un único período S (de síntesis de
ADN). La profase de la primera división meiótica es extremadamente larga pudiendo durar desde
días (en machos) hasta años (generalmente en hembras). Para su estudio, se ha dividido en base
a la morfología del núcleo celular en varias etapas:
. Durante la prometafase los bivalentes experimentan movimientos de congresión hasta alinearse
finalmente en placa en la metafase. En la primera anafase meiótica los cromosomas homólogos,
que previamente se han recombinado, migran completos a polos opuestos. Tras una interfase muy
corta y a veces inexistente denominada intercinesis, se efectúa la segunda división meiótica. Ésta
es esencialmente igual que una división mitótica convencional con la excepción de que cada célula
solamente posee un complemento cromosómico de la especie ya recombinado. El resultado final
es la formación, por cada una de las células que entró en la profase I, de cuatro células con “n”
cromosomas y una carga "c" de ADN: las espermátidas.

c) Espermiogénesis. Se conoce con este nombre a toda la serie de cambios tanto citoplásmicos
como nucleares que sufren las espermátidas hasta convertirse en espermatozoides. Estos cambios
morfofuncionales son muy variables y dependen de la especie estudiada. No obstante, y como
rasgos generales, podemos decir que se centran en la compactación de la cromatina en el núcleo,
la pérdida de casi la totalidad del citoplasma, la génesis de una vesícula acrosómica y la
adquisición de un aparato locomotor por parte de la célula.

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
En esta práctica se utilizarán dos tipos diferentes de material de trabajo así como dos metodologías
completamente distintas. Por una parte se analizarán las diferentes fases de la espermiogénesis en
preparaciones obtenidas mediante la técnica de aplastado a partir de testículos de ortópteros
fijados en etanol y ácido acético en proporción 3:1. Por otra, estudiaremos la organización de las
células que cursan la espermatogénesis y el túbulo seminífero en cortes de testículo de
saltamontes fijado con Bouin e incluido en parafina.

1.- Aplastados de testículo de ortóptero teñidos con Feulgen.

Seleccionamos testículos de ortópteros fijados en etanol y ácido acético 3:1 al menos con una
semana de antelación y los colocamos en agua destilada para su hidratación durante 10 minutos. A
partir de este momento conviene realizar todo el proceso en el mismo recipiente, preferiblemente
plástico y no vidrio. No utilizar ningún elemento metálico.
Hidrolizar los testículos en HCl 5N durante 30 min. Transcurrido este tiempo se lavan
abundantemente en agua destilada. Posteriormente se introducen en reactivo de Schiff durante 30
minutos a temperatura ambiente. Este proceso es preferible realizarlo en oscuridad. Se lavan los
testículos, que tendrán un color fucsia, en agua sulfurosa y posteriormente en agua del grifo, donde
se almacenarán hasta la confección de los aplastados.
Separamos un par de túbulos seminíferos del testículo y los colocamos sobre un portaobjetos.
Sobre ellos se coloca inmediatamente una gota de ácido acético al 50% en agua destilada y se
deja un par de minutos (¡Cuidado, no dejar secar el material!).
Se coloca sobre el túbulo un cubreobjetos y utilizando la punta de un lápiz y con presión muy suave
se dispersa el material.
Con un trozo de papel de filtro se elimina el acético que ha rebosado por los laterales del
cubreobjetos y, con cuidado de no moverlo, se realiza el aplastado presionando fuertemente con el
dedo pulgar sobre una superficie completamente plana.
Observar los aplastados en el microscopio tratando de determinar las diferentes etapas del proceso
meiótico, así como las espermátidas en los diferentes estadíos de la espermiogénesis.
El análisis de cortes de parafina supone la realización de tres procesos: la inclusión del material
en un medio sólido, el corte y desparafinado del mismo y la tinción de los cortes (ver el anexo).
Las secciones de testículo se observarán en el microscopio determinando la disposición de los
túbulos seminíferos en el conjunto, así como las zonas apicales y basales de los túbulos.
ESPERMATOZOIDES
HERENCIA MENDELIANA (FACTOR Y
GRUPO SANGUÍNEO)

X Sesión de Laboratorio
FACTOR Y GRUPO SANGUINEO
FUNDAMENTO

El fundamento de esta práctica se encuentra en los glóbulos rojos. Los glóbulos

rojos o hematíes son células sanguineas, por lo tanto todos los tenemos. Sin
embargo, en la membrana de los glóbulos rojos pueden existir unas proteínas
especiales: son las glucoproteínas A y B. Así, un glóbulo rojo puede tener proteína
A, proteína B, tener ambas o no tener ninguna. De manera que un individuo tendrá
grupo sanguíneo A si sus glóbulos rojos tienen la glucoproteína A en su
membrana, siguiendo el mismo criterio para el resto de los grupos (si no existe
proteína, entonces será de grupo sanguineo O). Estas proteínas corresponderían
a lo que denominan antígenos.

Ahora bien, en el plasma sanguineo tenemos anticuerpos. Evidentemente, un

individuo del grupo A no podrá tener anticuerpos anti-A, pues ésto no sería viable
(la sangre coagularía).

Así :

• los individuos A tendrán anticuerpos anti-B

• los individuos B tendrán anticuerpos anti-A
• los individuos AB no tendrán anticuerpos de este tipo
• los individuos O tienen los dos tipos de anticuerpos.
• los individuos O tienen los dos tipos de anticuerpos.

Grupo sanguineo A B AB O

Glóbulos rojos

En la membrana Antígeno B Antígenos A y No antígenos

Antígeno A
B
Anti-A y
En el plasma Anti-B Anti-A No anticuerpos
Anti-B
De la misma manera, el factor Rh es otra proteína que existe en los glóbulos rojos
de algunas personas. Su nombre viene del mono en el que fue descubierta, el
macacco rhesus. El factor Rh positivo es un factor hereditario dominante.

Este asunto tiene especial importancia en donaciones de sangre. Como hemos

visto, un individuo A tiene en su plasma anticuerpos anti-B, así que no podrá
recibir sangre de un individuo B, pues estos anticuerpos provocarían la
coagulación de la sangre del donante en los vasos sanguineos de la persona
receptora.
En la siguiente tabla vemos las compatibilidades a la hora de donar y recibir
sangre.
Como vemos, el grupo AB puede recibir de cualquier otro grupo y de sí mismo, así
que se llama "receptor universal". El grupo O ,sin embargo, puede donar a
cualquier grupo, así que se conoce como "donante universal"

RECEPTOR
D grupo A grupo B grupo AB grupo O
O grupo A SI NO SI NO
N grupo B NO SI SI NO
A
N grupo AB NO NO SI NO
T
grupo O SI SI SI SI
E

OBJETIVOS

1. Que cada alumno y alumna del grupo conozca su grupo sanguineo y el

factor rh.
2. Presenciar la técnica que se utiliza para determinar el grupo sanguineo.
(Esta determinación debe ser realizada por el profesor o profesora)
3. Interpretar dicha técnica

MATERIALES

• Solución anti-A • Material punzante estéril

• Solución anti-B • Algodón
• Solución anti-D(anti Rh) • Agua oxigenada

• Tarjetas de identificación • Una gota de sangre

TECNICA
1. Colocar en la tarjeta una gota se suero anti-A, una de anti-B, una mezcla de
anti-A y anti-B, y una gota de anti-D, cada una en su casilla
correspondiente, como se indica en la FIGURA 1.

FIGURA 1

2. Pinchar la yema del dedo, previa desinfección con alcohol o agua

oxigenada. Depositar una gotita de sangre en cada casilla y mezclar con los
sueros. FIGURA 2.

FIGURA 2

3. Observar los resultados. El grupo sanguineo del individuo corresponderá

con el de la casilla en la que la sangre haya coagulado. Si el individuo es
del grupo AB, la sangre coagulará en las tres primeras casillas. Además, si
la sangre coagula en la casilla "anti-D", el individuo será Rh positivo, de lo
contrario será Rh negativo.
Personalmente, prefiero hacer la determinación del factor Rh en un porta,
en el que puedo observar mejor la coagulación sanguinea. FIGURA 3.
 FIGURA 3

� En las tarjetas de la
FIGURA 4, se puede observar
el aspecto que presentan dos
casos opuestos. En la tarjeta
superior se observa que no
existe coagulación en ninguna
casilla. Las tres primeras
corresponden a los sueros del
grupo sanguineo, por lo que
interpretamos que esta
persona pertenece al grupo
O, la cuarta es la del factor
Rh, y al no existir coagulación
interpretamos que es Rh
negativo.
En la tarjeta inferior, vemos
coagulacion en todas las
casillas, por lo que de una
forma similar interpretamos
que el alumno es del grupo
sanguineo AB y Rh positivo.
(Nota: El grupo sanguineo AB es
poco frecuente, y en el análisis a 45
alumnos y alumnas, solamente salió
en una alumno)
FIGURA 4
 • los individuos O tienen los dos tipos de anticuerpos.

Grupo sanguineo A B AB O

Glóbulos rojos

En la membrana Antígeno B Antígenos A y No antígenos

Antígeno A
B
Anti-A y
En el plasma Anti-B Anti-A No anticuerpos
Anti-B
De la misma manera, el factor Rh es otra proteína que existe en los glóbulos rojos
de algunas personas. Su nombre viene del mono en el que fue descubierta, el
macacco rhesus. El factor Rh positivo es un factor hereditario dominante.

Este asunto tiene especial importancia en donaciones de sangre. Como hemos

visto, un individuo A tiene en su plasma anticuerpos anti-B, así que no podrá
recibir sangre de un individuo B, pues estos anticuerpos provocarían la
coagulación de la sangre del donante en los vasos sanguineos de la persona
receptora.
En la siguiente tabla vemos las compatibilidades a la hora de donar y recibir
sangre.
Como vemos, el grupo AB puede recibir de cualquier otro grupo y de sí mismo, así
que se llama "receptor universal". El grupo O ,sin embargo, puede donar a
cualquier grupo, así que se conoce como "donante universal"

RECEPTOR
D grupo A grupo B grupo AB grupo O
O grupo A SI NO SI NO
N grupo B NO SI SI NO
A
N grupo AB NO NO SI NO
T grupo O
SI SI SI SI
E
EXPERIMENTOS CON LA MOSCA DROSOPHILA

XI Sesión de Laboratorio
EXPERIMENTOS CON LA MOSCA DROSOPHILA
FUNDAMENTO
La mosca del vinagre, Drosophila melanogaster, es un
organismo eucariótico de experimentación en Genética. Tiene
las siguientes ventajas: 1) un ciclo vital relativamente corto a
temperatura ambiente, entre 10-14 días; 2) es fácil de criar en
botellas o tubos de vidrio con un medio de cultivo barato y
sencillo de preparar; 3) una gran productividad, una pareja
produce varios cientos de descendientes; 4) un número
cromosómico bajo, 4 pares de cromosomas; y 5) un gran
número de caracteres heredables que afectan la morfología
del adulto.
Los objetivos de este práctico es introducir al estudiantes en
aspectos de la biología y genética en D. melanogaster. Se
realizarán cruzamientos genéticos para estudiar el modo de
herencia,ubicación y mapeo de un locus incógnita en D.
melanogaster. El practico permitirá elaborar un informe final
en base a las observaciones y el análisis de los datos de los
cruzamientos realizados
en clase y discutidos por el grupo participante. Dada la
dinámica de los prácticos de Drosophila, se recomienda LEER
el protocolo antes de asistir a clase. Se trabajará en grupos de
tres a cuatro estudiantes.

OBJETIVOS

En este práctico se observará distintos aspectos del

_ objetivos generales del práctico
_ ciclo de vida,
_ reconocimiento de los sexos,
_ comportamiento sexual,
_ observación de mutantes que afectan el fenotipo del adulto,
y
_ técnica de anestesia, manejo y observación de las moscas.
Ciclo de Vida
D. melanogaster (Clase: Insecta; Orden: Diptera) es un insecto
holometábolo, su ciclo vital consta de cuatro estadios: huevo,
larva, pupa y adulto (o imago) (FIGURA 1).
Las hembras comienzan a depositar los huevos alrededor del
tercer día de vida del imago y continúa hasta su muerte. Los
huevos son puestos en la superficie del alimento (o medio de
cultivo). A simple vista los huevos se ven como un objeto
pequeño, blanco y oblongo, con un par
de filamentos anteriores. El desarrollo del huevo comienza
con la fecundación y consta principalmente de la formación de
los tejidos larvales. Después de un día o dos, las larvas
emergen de los huevos y comienzan a introducirse en el
medio de cultivo. Como la cutícula de los insectos no es
elástica, la larva muda periódicamente. Existen tres estadíos
larvales, separados por las mudas correspondientes. Durante
el tercer estadio larval, la larva se alimenta hasta estar pronta
a pupar, en ese momento, se dirige fuera del medio de cultivo
hacia un lugar seco donde se detiene.
.Durante el estadio pupal ocurre una reorganización de tejidos
(metamorfosis) y a los 4 días emerge el adulto de la cubierta
pupal. En buenas condiciones de cultivo y a 25°C transcurren
alrededor de 10 días desde la puesta de los huevos hasta la
emergencia del imago; el adulto puede
sobrevivir y permanecer fértil por un mes. Si la temperatura
permanece entre 22°C y 27°C, se producirá una nueva
generación de moscas en aproximadamente 2 semanas (por
ello el practico se realiza cada 15 días, para sincronizar con el
ciclo de vida).
Medio de cultivo
Las moscas se pueden cultivar en un medio compuesto por
agar-levadura-harina de maíz-glucosa. A la papilla se le
agrega un conservante conocido como nipagin.
Este medio se dosifica en tubos o botellas de vidrio o plástico.
Los tubos son identificados con el tipo de cruzamiento, fecha
ynombre del grupo.
Procedimiento para anestesiar las moscas
Para adormecer las moscas utilizaremos los vapores de
trietilamina (=TE). Se procederá así:
1) Dosifique entre 10 y 15 gotas de trietilamina (TE) en una
piseta con algodón dentro. Note que los vapores que saldrán
estarán impregnados de fuerte olor.
2) Transfiera las moscas a un tubo de plástico (Falcon)
anestesiador (=TA),, tape el mismo con un tapón de polifom y
dosifique vapores de TE dentro de dicho tubo por el orificio del
tapón.
3) Una vez que TODAS las moscas estén inmovilizadas,
deposítelas inmediatamente sobre una tablilla. Las moscas
permanecerán anestesiadas por 45’. La exposición prolongada
a TE puede matar las moscas y se presentarán con alas y
patas extendidas en ángulo recto del cuerpo y
Mutante incógnita en D. melanogaster – 2006

4 algunos caracteres fenotípicos, como los ojos, se

oscurecerán y deformarán, en tal caso descarte las moscas
muertas.
4) En caso de utilizar las moscas anestesiadas para realizar un
cultivo o cruzamiento, disponga el frasco de cultivo en forma
horizontal hasta que las moscas se despierten.
Identificación de los sexos
Se pueden utilizar varios criterios para distinguir los sexos en
los adultos (FIGURA 2)
1. Tamaño del adulto. La hembra es generalmente más
grande que el macho.
2. Forma del abdomen. El abdomen de la hembra se curva y
termina en punta; el abdomen del macho es redondeado y
más corto.
3. Marcas en el abdomen. Bandas claras y oscuras alternan en
la porción posterior de la hembra; mientras que en el macho
están fusionados y forman una banda oscura.
4. Apariencia del peine sexual. En los machos existe un
pequeño penacho de setas en el segmento basal del tarso en
el primer par de patas llamado “peine sexual”, es el único
carácter sexual secundario que diferencia los machos jóvenes
de las hembras. El "peine sexual" también sirve para sexar
individuos en pupas.
5. Genitalia externa del abdomen. La genitalia es un carácter
sexual primario y característico de cada sexo. En las hembras
se encuentra el ovipositor en la punta del abdomen. En el
macho existen ganchos pigmentados, ordenados en forma
circular y localizados en el extremo caudal.
6. Órganos sexuales durante el estadio larval. Los sexos en
larvas se diferencian por el tamaño de los testículos (más
grandes) que los ovarios ubicados en el tercio posterior de la
larva y distinguidos a través del tegumento en larvas de
tercer estadio. En moscas recién emergidas de la carcasa
pupal, el color es grisáceo, las bandas dorsales del abdomen
se oscurecerán más tarde, las alas pueden no estar
extendidas y aparecerán como una estructura oscura y
húmeda, las alas luego se secan y despliegan. El proceso se
acelera bajo el calor de la luz del microscopio. Podrán ver las
alas desplegadas en un período de 5-10 minutos. Utilice un
pincel o espátula para mover las moscas.
Comportamiento sexual
Todos los insectos muestran una compleja repuesta a
estímulo sexual; Drosophila no es la excepción.
El apareamiento comienza con el golpeteo del macho sobre el
abdomen de la hembra, con su pata
anterior, cono conocido como la primera respuesta del cortejo
del macho hacia la hembra. Este es el modo de identificar su
propia especie. Se aproxima a la hembra desde adelante y
realiza círculos
alrededor de ella efectuando medias vueltas. Extiende un ala
que hace vibrar por unos segundos. Si la hembra es receptiva
resulta la cópula. Los espermatozoides del macho son
depositados en el útero de la hembra y retenidos allí en el
receptáculo seminal y la espermateca. Puede existir más de
un apareamiento.
¿Cómo podemos observar el cortejo de Drosophila
melanogaster?
Para observar el comportamiento de cortejo, se debe emplear
hembras vírgenes ya que el macho puede aparearse muchas
veces. Para ello se les proporcionarán hembras vírgenes y
machos jóvenes. Observe las diferentes etapas del cortejo y la
copula.
Procedimiento para observar las moscas al microscopio
Mutante incógnita en D. melanogaster - 2006
5
Ajuste el microscopio MENOR aumento, haga FOCO. Si es
necesario, aumente la magnificación.
Coloque las moscas anestesiadas en fila horizontal sobre la
tablilla blanca.
No coloque la luz muy cerca de las moscas, el calor excesivo
las deshidratará y acabará
matándolas.
Identifique la morfología de las moscas y el reconocimiento de
los sexos con la ayuda de la FIGURA 2 Y 3.
Cabeza
La cabeza está compuesta de seis segmentos fusionados.
1. Antenas, cada una consiste de tres segmentos
2. Aristas. ramificadas y surgiendo cerca de la base del
segmento distal de cada antena.
3. Proboscis. lengua.
4. Ojos compuestos, constituidos por un gran número de
facetas separadas (omatidia).
5. Ocelos, ojos simples en número de tres ubicados entre los
ojos compuestos sobre la superficie dorsal de la cabeza.
6. Setas. Vibrillas, orbitales, ocelares, verticales,
postverticales.
Torax
El tórax está compuesto de tres segmentos fusionados.
1. Protórax, consiste de húmeros pares, y el primer par de
patas (cada pata consiste de coxa,trocánter, fémur, tibia y 5
articulaciones tarsales; recuerde que el "peine sexual" está
presente solamente en el segmento proximal del tarso en los
machos).
2. Mesotórax, consiste del mesonoto ubicado dorsalmente y el
escutelo, la mesopleura ubicada lateralmente, la pteropleura
y la esternopleura; las alas (observe la posición general de las
venas longitudinales y de los nudos); y el segundo par de
patas.
3. Metatórax, consiste en el mesonoto, hipopleura y los
balancines (alas posteriores modificadas) y el tercer par de
patas.
4. Espiráculos torácicos, en número de dos.
5. Setas: dorsocentrales, notopleurales, presuturales, supra-
alares, postalares, escutelares.
Abdomen
El abdomen consiste de siete u ocho segmentos visibles en la
hembra y cinco ó seis en el macho.
1. Tergitos, escleritos dorsales (placas tegumentales) una por
segmento.
2. Esternitos, escleritos ventrales, uno por segmento (numero
diferente entre los sexos)
3. Espiráculos abdominales, siete en cada lado del abdomen.
4. Región genital, arco genital en machos.
LOS CARACTERES HEREDITARIOS
Antes de observar los mutantes, uno necesita familiarizarse
con el aspecto del tipo salvaje de Drosophila, es decir, el más
frecuentemente encontrado en poblaciones naturales. Se
conocen miles de mutaciones en Drosophila pero se
enumerarán solo aquéllas relevantes a esta práctica.
Ojos Tipo salvaje: rojos, de forma oval y con muchas facetas.
Mutantes: cambios en el color, forma y número de facetas.
Alas Tipo salvaje: bordes lisos, venación uniforme, se
extienden más allá del abdomen.
Mutantes: cambios en tamaño y forma; ausencia de venas
específicas; cambios en la posición de las alas en la posición
de descanso.
Setas Tipo salvaje: Largas y suaves (nótese la distribución en
la cabeza y el tórax).
Mutantes: más cortas, gruesas ó deformadas, pueden cambiar
su distribución. Mutante incógnita en D. melanogaster - 2006
6
Color del cuerpo Tipo salvaje: básicamente gris, con un
patrón de áreas claras y oscuras. Mutantes: negro (variando
los grados), amarillo, el color mutante puede ser determinado
mas
claramente observando el color de las venas de las alas, cetas
del cuerpo y las patas.
EL GENOMA DE DROSOPHILA
D. melanogaster tiene cuatro pares de cromosomas:
los cromosomas sexuales X/Y y los autosomas 2, 3 y 4.
El cuarto cromosoma (o”dot”) es el más pequeño.
El par sexual en hembras es XX, y en machos XY.
Individuos X0 son machos, pero estériles aunque su
aspecto sea normal, mientras que individuos XXY
producen hembras normales y fértiles
El tamaño del genoma de Drosophila es alrededor de 165
millones de bases y estimado unos 14.000 genes (por
comparación, el genoma humano tiene 3.300 mb y unos
70.000 genes). El genoma ha sido completamente
secuenciado y esta en curso la secuenciación y anotación del
genoma de otras 11 especies de Drosophila.
La posición relativa de muchos genes de D. melanogaster a lo
largo de los cromosomas ha sido identificada y mapeada
basándose en la frecuencia de recombinación con los genes
vecinos. Esta ubicación se denomina mapa de ligamiento o
mapa genético.

CROMOSOMAS POLITENICOS
CROMATINA SEXUAL Y CARIOTIPO HUMANO

XI Sesión de Laboratorio
CROMATINA SEXUAL Y CARIOTIPO HUMANO
FUNDAMENTO

Pasaron muchos años antes de que pudiera establecerse una diferencia entre
las células masculinas y las femeninas durante la interfase. Pero gracias a los
trabajos experimentales en neurofisiología, de Barr y Bertram (1949), se observó
por primera vez una diferencia morfológica entre las células de las gatas y los
gatos. Las primeras, presentan un pequeño corpúsculo de una a dos micras de
diámetro, adherido a la membrana nuclear, que no aparece en las células
masculinas normales y que durante mucho tiempo se denominó corpúsculo de
Barr. Por las relaciones que guarda con la presencia de los cromosomas X, a este
cromocentro se le llama actualmente cromatina X. Muy rápidamente, las
observaciones realizadas por Barr se replicaron en otros tejidos por diferentes
investigadores, lo que condujo al mejoramiento de los métodos de estudio de esta
cromatina en individuos sanos y enfermos. De estos últimos, se realizaron
estudios en individuos que presentaban alteraciones o fallas en la diferenciación
sexual con síndromes como el Turner y klinelfelter
El desarrollo de estos métodos permitió además, estudiar una gran diversidad de
células para la observación de la ahora llamada cromatina sexual, tal es el caso de
los neutrófilos, las neuronas, la mucosa vaginal y como en el caso de esta práctica
células de la mucosa bucal.

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL
• Observar la cromatina sexual en células humanas masculinas y femeninas

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

• Reconocer el cuerpo de Barr en células de la mucosa bucal.

• Comprender la importancia de la cromatina sexual en aquellos síndromes que
cursan con problemas de diferenciación sexual.

MATERIALES
• Espátula metálica o de madera con extremo redondeado
• Solución fijadora: 3 partes de etanol al 95% + 1 parte de ácido acético glacial.
• Cubetas de coloración
• Aceto-orceína
• Papel filtro
• Láminas y laminillas.
• Gasa
PROCEDIMIENTO
1. Limpie la mucosa de la cavidad oral con un pedazo de gasa. El paciente debe
mantener la boca abierta y disponer la lengua en el lado opuesto al que va a ser
frotado.
2. Para el frotis de la mucosa se utiliza la espátula. Este debe hacerse con presión
moderada, asegurándose de obtener una capa de material blanquecino.
3. El material de la espátula se extiende delgada y suavemente sobre una lámina y
ésta se sumerge inmediatamente en la solución fijadora. Pueden obtenerse tres
láminas de cada lado de la boca.
4. Las láminas pueden permanecer en el fijador entre un minuto y una semana.
5. Las láminas se colocan en una cubeta de coloración y el colorante aceto-
orceína se aplica por 10 minutos. Sí solo cuenta con orceína en el laboratorio,
entonces adicione a 1gramo de esta 45 mL de ácido acético concentrado; caliente
hasta ebullición, deje enfriar y filtre para obtener la aceto-orceína.
6. Se dispone una laminilla sobre la lámina y el colorante en exceso se remueve
aplicando papel de filtro y ejerciendo firme presión.
7. Observe inmediatamente con el objetivo de menor aumento, para buscar áreas
donde las células estén bien extendidas.
8. Observe con el objetivo de mayor aumento (o inmersión) e identifique las
estructuras ligeramente alargadas o plano-convexas, adyacentes a membrana
nuclear de coloración oscura en comparación con el resto del núcleo.

CUESTIONARIO
�Consulta, que otras patologías diferentes a los síndromes de Turner y klinelfelter,
están relacionados con la cromatina sexual.
� ¿Cual es el patrón de herencia de las patologías consultadas?.
� Investiga acerca de los genes holándricos y su importancia Biomédica.
� ¿Que otros métodos diferentes al utilizado en esta práctica, se pueden utilizar
para identificar cromatina sexual?.
� Investiga sobre las aplicaciones que en medicina legal tiene la determinación
de cromatina sexual.

CUERPO DE BAR
Cariotipo
Las características más importantes que identifican los cromosomas durante la
mitosis son su número, tamaño relativo, estructura, comportamiento y
organización interna.
Cariotipo es el complemento o conjunto cromosómico típico del individuo o de la
especie en el que se describe el número, forma y tamaño de los mismos. El
cariotipo se perpetúa normalmente en la progenie (Battaglia, 1953). Es decir, en
términos generales, se admite la constancia en forma, tamaño y número de los
cromosomas, en todas las células que componen el núcleo de un individuo y en
los individuos de cada especie.
En el cariotipo se ordenan los pares de homólogos en series, de acuerdo a su
longitud, en forma creciente.
La representación esquemática del cariotipo se conoce con el nombre de
Idiograma.
El análisis de la morfología cromosómica se lleva a cabo en el estado de metafase
que es el momento en el que los cromosomas presentan el mayor grado de
espiralización, y compactación. Es en este estado también cuando muestra las
mejores condiciones de tinción con tintes que presentan afinidad por los ácidos
nucleicos; razón que favorece aún más el estudio citogenético de una determinada
especie en esta fase del ciclo de división celular.
Para confeccionar un cariotipo se deben tener en cuenta:
1.-Número básico de cromosomas.
2.-Morfología cromosómica
1.-Número básico de cromosomas
En principio, todos los individuos de una especie tienen el mismo número de
cromosomas. Dos especies distintas pueden tener el mismo número de
cromosomas.
2.-Morfología de los cromosomas
En la morfología de los cromosomas distinguimos:
2.1.-Posición del centrómero
2.2.-Localización de satélites y constricciones secundarias
2.3.-Distribución de regiones hetero y eucromáticas

2.1.-Posición del centrómero

La morfología depende de la posición del centrómero. Según sea la posición del
centrómero: Posición media, submedia, subterminal o terminal los cromosomas se
clasificarán en:
a)metacéntricos o isobraquiales (centrómero equidistante de los extremos,
brazos de igual longitud).
b)submetacéntricos o heterobraquiales (centrómero muy próximo al centro)
acrocéntricos o cefalobraquiales (centrómero muy próximo a un extremo)
d)telocéntricos (centrómero terminal, no se puede hablar propiamente de
constricción, ni de brazos, sólo existe un brazo)
La posición del centrómero o constricción primaria se calcula teniendo en cuenta
los siguientes parámetros:
c= largo total del cromosoma
l= largo del brazo mayor
s= largo del brazo menor
y la posición será igual a: c = l + s d = c – s
El índice centromérico es:
i = (s x 100)/ c

95
c)

96
PRACTICA
. La lámina 1 representa un cariotipo humano.
. Recorta cada uno de los cromosomas.
. Agrúpalos de acuerdo con su tamaño, forma y bandas de tinción.
. Identifica cada pareja de homólogos ayudándote del cariotipo ordenado de
la lámina 2.
. Pega cada pareja en la plantilla vacía de la ficha del alumno.
.

LAMINA PARA RECORTAR

PRACTICA
. La lámina 1 representa un cariotipo humano.
. Recorta cada uno de los cromosomas.
. Agrúpalos de acuerdo con su tamaño, forma y bandas de tinción.
. Identifica cada pareja de homólogos ayudándote del cariotipo ordenado de
la lámina 2.
. Pega cada pareja en la plantilla vacía de la ficha del alumno.

97
 ESTUDIO DEL CARIOTIPO HUMANO
FICHA DEL ALUMNO___________________________________________
CURSO______

1. ¿Cuántos pares de cromosomas tiene la especie humana?

2. ¿Cuál es el sexo del individuo cuyo cariotipo has investigado? Razona la
respuesta.
3. ¿A qué se denominan autosomas?
4. ¿Tiene algo que ver el número de cromosomas de una especie con su tamaño?
Pon ejemplos.
5. ¿Qué es una anomalía cromosómica?

BIBLIOGRAFIA

98
-De Robertis ,Rojas J. Saez F. 1995. Biología celular y Molecular
Edith. El Ateneo. Buenos Aires. 956 pp.

-Bachmann K. 2003. Biología para médicos. Edith. Reverte

España. 520 pp.

-Berkaloff. A., 2000. Biología y Fisiología celular. I. Membrana

Plasmática. Edit. OMEGA.

- Berkaloff. A., 2000. Biología y Fisiología celular. Il. Aparato

De Golgi,lisosomas,mitocondrias celulas
Y virus Edit. OMEGA.

-Berkaloff. A., 2000. Biología y Fisiología celular. Ill. Cloroplas-

Tos ,peroxisomas ,división celular Edit.
OMEGA.

--Berkaloff. A., 2000. Biología y Fisiología celular. IV. Cromoso-

mas, nucleolo ,envoltura celular Edit.
OMEGA.

- Sousa J. 1999. Manual de operación y cuidado de Equipo

De laboratorio. San salvador. 350p

-- Ananias F. 2006. Técnicas de obtencao de cromosomas

Mitoticos e meioticos. SECIFRAN.
Brasil

-Spinet B. & F. Sole 2005. Guia de Investigaciones de laboratorio

(Biología). Univ. De la Plata. Argentina.

-Franco J. 2004. Manual practico de Histología Vegetal. Fac.

Biol. UNSAAC. 98 pp.

- CNEB 1999. Biología. Investigaciones de Laboratorio y

Campo. Edit. CECSA. Mexico.

-Gaviño G. 1990. Técnicas Biológicas, selectas de Laboratorio

Y Campo. Edith. Limusa. Mexico.

99
- Biologycal Res. 1997. Biología. Guia I al X del Profesor.
10 Volúmenes. Omega España.

- BSCS. 1999. Biología. Interacciones de Experimentos e

Ideas. Edith Omega España.

-Torres A. 2001. Manual de Laboratorio para Biología

General. Man. Nº 401. Ser. Biología.
UTHEA. Mexico.

-Landete M. 2003. Didáctica experimental de la Biología.

Edith. Univiversitaria. La habana, Cuba

- Cuevas C. 2006. Guía de practicas de Biología celular y

Molecular. Univ. Austral de Chile. Valdivia

-Descailleaux. J. et. Al. 1980. Manual de técnicas en Citogene-

tica humana y de mamíferos. UNMSM.

-Talledo D. 1993. Introducción al análisis cromosómico en

en vegetales. Univ. Ricardo palma.

- Manya W. 2005 Guia de practicas de Biología general.

Fac. Biol. UNMSM. Multicopiado. Lima.

-Tresierra A. 2001. Practicas de Biología. Univ. Nac. Trujillo.

Multicopiado.
-Drets M. 2005. Manual de Citogenética Humana. Fac. de
Medicina. Univ. La Republica. Montevideo
Uruguay 468 pp.
-Montero R. 1999. Guia de Laboratorio de Zoología. Univ. De
Tucuman. Argentina 350pp.
-Gallardo M. 2001. Guia de Trabajos practicos de Biología
Molecular. Univ. Austral de Chile. Concepción.

100
 RELACION DE PAGINAS WEBS RELACIONADAS CON LA BIOLOGIA
CELULAR
COMPILACION: J FRANCO
http://gened.emc.maricopa.edu/bio/bio181/BIOBK/BioBookTOC.html
Curso general sobre biología
http://www.whfreeman.com/lodish/
Página del libro “Molecular cell biology”, con buenas imágenes, esquemas y videos
http://www.cbs.dtu.dk/dave/roanoke/biology101_unit1.html - 28_Jan_98
Completo curso de biología celular, con numerosos esquemas, fotografías y enlaces
http://cellbio.utmb.edu/cellbio/cellsch.htm
Curso interactivo sobre biología celular con numerosos esquemas y microfotografías
http://www.cytochemistry.net/Cell-biology/
Atlas de microanatomía y biología celular (muy buenas fotos y esquemas)
http://www.mblab.gla.ac.uk/~julian/Dict.html
Completo diccionario en línea de biología celular
http://www.my-edu2.com/eduframe.htm
Colección de enlaces relacionados con la biología
http://www.ultranet.com/~jkimball/BiologyPages/T/TOC.html
Curso de biología celular
http://www.unl.edu/CMRAcfem/glossary.htm - lens
Glosario de términos relacionados con la microscopía, con algunos esquemas y enlaces
http://ntri.tamuk.edu/cell/
Curso sobre biología celular, con numerosos esquemas y microfotografías
http://www.kean.edu/~biology/lab_help.html
Curso general sobre biología
http://www.life.uiuc.edu/help/courses.html
Cursos sobre biología
http://web.idirect.com/~klg/biology.html
Colección de enlaces sobre biología
http://www.biology.arizona.edu/default.html
Curso de biología incluyendo biología celular, bioquímica, desarrollo, etc
http://esg-www.mit.edu:8001/esgbio/
Hipertexto de biología celular
http://www.cbc.umn.edu/~mwd/cell_www/cell.html
Curso en línea de biología celular
http://highered.mcgraw-
hill.com/sites/0070271348/student_view0/chapter27/elearning.html
Curso sobre Biología con muy buenos documentales para visualizar con Real Player
Biology
Interesante página que acumula gran cantidad de animaciones sobre procesos biológicos
básicos
http://www.lifesign.ac.uk/public/catalogue/default.asp?cat=Biochemistry
Colección de documentales y animaciones (algunos de casi una hora de duración) sobre
importantes procesos en Biología Celular, Bioquímica, Microscopía, etc.
http://www.ibiblio.org/virtualcell/index.htm
Página sobre una visita virtual a la célula, con muy buenos dibujos y animaciones. Incluye
además un “libro virtual” sobre química orgánica y biología celular. Puede descargarse
completa en un archivo comprimido e instalarla en el propio ordenador.
http://www.ulb.ac.be/sciences/biodic/index.html
Galería de imágenes ultraestructurales

101
 http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/jairo/celular/cell2.htm
Completo curso en español sobre biología celular
http://www.bioanim.com/
Interesante página la que se pueden encontrar numerosos modelos interactivos en 3D
sobre biología celular e histología
http://www2.uah.es/biologia_celular/LaCelula/Celula.html
Página dedicada al estudio de los componentes celulares
http://www.life.uiuc.edu/plantbio/cell/
Visita virtual a una célula vegetal, recorriendo todos sus orgánulos

http://www-sci.lib.uci.edu/~martindale/MedicalAnatomy.html
Completa colección de enlaces con todo lo relacionado con histología, anatomía, técnicas,
etc
http://www.kumc.edu/instruction/medicine/anatomy/histoweb/
Página atlas de histología con imágenes comentadas de diversos tejidos y órganos al
microscopio óptico
http://biodidac.bio.uottawa.ca/info/browse.htm
Colección de imágenes macro y microscópicas y esquemas de animales y vegetales
http://teaching.anhb.uwa.edu.au/mb140/
Completa página atlas de histología con descripciones de las imágenes, acompañada de
preguntas de examen. También incorpora un microscopio virtual para practicar el manejo
y un resumido curso de estereología
http://www.uni-mainz.de/FB/Medizin/Anatomie/workshop/EM/EMAtlas.html
Atlas al microscopio electrónico de citología, histología y organografía microscópica.
Incluye imágenes y videos del Visible Human, así como un completo glosario. Algunas de
las subpáginas están en alemán.
http://www3.usal.es/histologia/histologia.htm
Completo programa para la enseñanza de la histología y organografía, a base de dibujos
y microfotografías
http://www.mc.vanderbilt.edu/histo/
Página con texto e imágenes comentadas al microscopio óptico y electrónico de diversos
tejidos y órganos
http://medocs.ucdavis.edu/CHA/402/course.htm
Atlas histológico con variadas microfotografías comentadas. Contiene laboratorios c
imágenes interactivas al microscopio electrónico
http://www.unomaha.edu/~swick/index.html
Página para la enseñanza de la histología y organografía con texto e imágenes
comentadas
http://www.med.uiuc.edu/histo/atlas/index.htm
Completa página interactiva de enseñanza de la histología con numerosas imágenes
comentadas al microscopio óptico y electrónico, sobre las que se puede hacer zoom y
obtener información de cada zona, interactivamente con el ratón
http://www.meddean.luc.edu/lumen/index.html
Página para la enseñanza de la histología, mediante imágenes al microscopio óptico y
electrónico, con sus correspondientes comentarios
http://online-media.uni-marburg.de/histologie/introhis/HIS/his.htm
Muy buenas imágenes al microscopio electrónico de citología e histología humana. Otras
al óptico, a manera de atlas, con breves explicaciones de cada una
http://www.medinfo.ufl.edu/year1/histo/glossary.html - reticular_fiber
Completo glosario de términos de histología, con imágenes al microscopio óptico
http://www.uq.edu.au/nanoworld/images_1.html

102
 Catálogo de numerosas imágenes, tanto de zoología como de botánica, al microscopio
electrónico de transmisión y barrido, con sus comentarios
http://www.udel.edu/Biology/Wags/histopage/histopage.htm
Atlas de imágenes histológicas al microscopio óptico y electrónico (numerosas), además
de esquemas en dos y tres dimensiones de cada tejido y órgano
http://www.medinfo.ufl.edu/year1/histo/
Tutorial de histología con texto e imágenes, expuesto en forma de preguntas de examen
http://www.medsch.wisc.edu/anatomy/histo/htm/toc.htm
Atlas con imágenes de los diversos tejidos y órganos al microscopio óptico, comentadas e
ilustradas
http://www.bu.edu/histology/m/index.htm
Atlas de histología con numerosas imágenes interactivas y esquemas de los diferentes
aparatos y sistemas
http://www.vh.org/Providers/Textbooks/MicroscopicAnatomy/MicroscopicAnatomy.html
Completo atlas de histología y organografía, acompañado de una parte donde se
comentan las principales técnicas de preparación de muestras y tinción
http://casweb.cas.ou.edu/pbell//Histology/Outline/contents.html
Atlas de histología y organografía, con muy buenas imágenes al M.O. incluyendo
manuales de tinción y manejo del microscopio
http://www.anatomohistologia.uns.edu.ar/index.asp
Página en español sobre histología, microscopía y técnicas, descritas en una serie de
módulos, con numerosas imágenes.
http://www.e-histologia.unileon.es/1inicio/home/Inicio800x600.html
Página en español sobre histología y organografía mciroscópica animal. Con numerosas
imágenes interactivas muy didácticas. Incluye además un apartado de técnicas y una
interesante autoevaluación, para comprobar los conocimientos adquiridos
http://www.uniovi.es/~morfologia/Atlas/es/download.htm
Página de la Universidad de Oviedo, desde donde se puede descargar (HTTP) Instalador
Windows (40MB) un atlas interactivo de histología. Seguidamente se intala en el
ordenador y se puede consultar cuando se desee
http://escuela.med.puc.cl/paginas/Cursos/segundo/histologia/HistologiaWeb/indice
General.html
Completa página sobre histología, con abundante texto e imágenes de buena
calidad
http://www.sct.ub.es:801/Galeria/Galeria.htm
Galería de imágenes de microscopía electrónica y confocal, con algunas
animaciones de éste último

http://www.botany.uwc.ac.za/sci_ed/pupil/angiosperms/index.htm
Anatomía e histología vegetal, con dibujos, microfotografías y preguntas
http://atlasveg.ib.usp.br/
Atlas interactivo de histología vegetal
http://koning.ecsu.ctstateu.edu/Plant_Biology/schedule.html
Curso sobre anatomía y fisiología vegetal
http://www.biologie.uni-hamburg.de/b-online/e00/contents.htm
Microscopía, citología, histología y bioquímica vegetal, con numerosas imágenes al ME y
modelos moleculares en 3D, que pueden girarse en el espacio
http://images.botany.org/
Colección de microfotografías comentadas sobre histología vegetal
http://www.life.umd.edu/classroom/bsci124/main.html

103
 Citología y fisiología vegetal
http://149.152.32.5/Plant_Physiology/schedule.html
Cursos sobre anatomía y fisiología vegetal
http://128.171.207.10/faculty/webb/BOT410/anatweb/pages/default.htm
Una de las mejores páginas sobre histología vegetal, incluyendo además tutoriales para
manejo de microscopio y algunas aplicaciones informáticas
http://www.esb.utexas.edu/mauseth/weblab/
Colección de microfotografías sobre histología vegetal
http://www.wisc.edu/botit/img/bot/130/
Amplio directorio de micro y macrofotografías
http://www.unex.es/botanica/presenta.htm
Curso sobre botánica, incluyendo histología, con numerosos esquemas y dibujos
animados
http://bugs.bio.usyd.edu.au/2003A+Pmodules/
Atlas de histología vegetal
http://www.cas.muohio.edu/~meicenrd/ANATOMY/syllabus.html
Curso sobre histología vegetal, con numerosos esquemas y microfotografías
http://www.cas.muohio.edu/~meicenrd/tcourses.htm
Acceso a varios cursos sobre botánica e histología vegetal
http://157.88.160.17/web/materiales/web/histologia/inicio_real.htm
Atlas histológico interactivo, en español, con abundante texto y numerosas
imágenes
http://www.biologia.edu.ar/plantas/indplantas.htm
Curso sobre citología, histología, organografía y fisiología vegetal, con texto
explicativo, esquemas, imágenes y algunas animaciones. En la misma página
pueden encontrarse varios cursos sobre otros temas biológicos
http://www.dipbot.unict.it/tavole/index.html
Atlas interactivo con gran cantidad de imágenes e información complementaria. En
italiano
http://botit.botany.wisc.edu/images/130/
Completo atlas de histología vegetal
http://www.inea.uva.es/web/materiales/web/histologia/inicio_real.htm
Completa página sobre citología, histología y organografía vegetal con muy
buenas imágenes
http://www.biologia.edu.ar/botanica/index.html
Completo curso sobre histología y organografía vegetal
http://anubis.ru.ac.za/virtualplant/ANATOMY/B1PR2000.htm
Completo curso sobre citología, histología y organografía vegetal. Cuenta con
sesiones prácticas con imágenes comentadas de preparaciones microscópicas
http://botweb.uwsp.edu/anatomy/
Atlas fotográfico de anatomía vegetal. Incluye numerosas macro y microfotografías
http://www.euita.upv.es/varios/biologia/programa.htm
Extensa colección de apuntes de histología vegetal, con numerosos esquemas
ilustrados

INSTRUMENTOS Y TÉCNICAS
http://www.itg.uiuc.edu/technology/atlas/
Microscopía confocal y de fluorescencia

104
 http://www.leica-microsystems.com/llt_index.html
Página de la casa Leica, sobre fundamentos de este microscopio y modelos
http://www.denniskunkel.com/
Curiosas microfotografías con microscopía de barrido y posibilidad de manejar
virtualmente uno de estos microscopios
http://www.nottingham.ac.uk/pathology/default.html
Completa colección de técnicas de tinción, con sus correspondientes protocolos
http://www.cs.ubc.ca/spider/ladic/intro.html
Página de introducción al funcionamiento del microscopio confocal, preparación de
muestras y procesado de las imágenes
http://bris.ac.uk/pathandmicro/cpl/lablinks.html
Manual de técnicas de preparación de muestras y tinción
http://wwwcivm.mc.duke.edu/civmGallery/L1Gallery.html
Fundamentos de la microscopía de resonancia magnética y completa galería de imágenes
animadas
http://micro.magnet.fsu.edu/primer/index.html
Una de las mejores páginas sobre microscopía, con amplios textos sobre los diversos
tipos de microscopios y su funcionamiento. Numerosos tutoriales en java sobre el manejo
de distintos microscopios. Se puede descargar un completo manual sobre microscopía en
formato Acrobat.
http://www.mos.org/sln/sem/
Descripción y funcionamiento del microscopio electrónico de barrido y galería de
imágenes
http://www.mse.iastate.edu/microscopy/home.html
Fundamentos del microscopio electrónico de barrido, descripción del funcionamiento con
numerosos esquemas. Galería de imágenes
http://em-outreach.sdsc.edu/web-course/toc.html
Completo tratado sobre microscopía electrónica: fundamentos, microscopios, preparación
de muestras y procesado digital de las imágenes
http://www.btrip.mednet.ucla.edu/bri/homepage.htm
Fundamentos teóricos de microscopía óptica, fluorescencia y confocal
http://www.unl.edu/CMRAcfem/em.htm
Descripción y fundamento de los microscopios electrónicos de transmisión y barrido
http://www.library.cornell.edu/preservation/tutorial-spanish/contents.html
Completo tutorial de digitalización de imágenes, donde se explican los términos
básicos
http://www.scioncorp.com/frames/fr_download_now.htm http://rsb.info.nih.gov/ij/
Direcciones desde donde pueden descargarse dos programas de análisis de
imagen (Scion Image e ImageJ) respectivamente
http://www-medlib.med.utah.edu/WebPath/HISTHTML/HISTO.html
Se describen numerosos protocolos de tinción y otras técnicas histológicas
http://swehsc.pharmacy.arizona.edu/exppath/index.html
Página con numerosos enlaces relacionados con microscopía y técnicas
http://olan.marseille.inserm.fr/confocal/plus-conf.html#principe
Principios sobre la microscopía confocal y la fluorescencia
http://www.udel.edu/Biology/Wags/b617/b617.htm
Completa página sobre técnicas relacionadas con la microscopía electrónica y
digitalización de imágenes
http://www10.uniovi.es/spi/tutoriales.htm

105
 Tutoriales sobre el fundamento de la microscopía confocal y de fluorescencia y el
procesado digital de imágenes
http://www.uniovi.es/bos/Asignaturas/TecnicasImagen/index.html
Incluye abundante información sobre técnicas histológicas, de microscopía y
análisis de imagen, además de numerosos enlaces con otras interesantes páginas
http://nobelprize.org/physics/educational/microscopes/1.html
Presenta los fundamentos de los diferentes microscopios, además de la
posibilidad de utilizarlos de forma virtual, explorando diferentes muestras con gran
realismo
http://www.gonda.ucla.edu/bri_core/homepage.htm
Principios de microscopía óptica, electrónica, de fluorescencia y confocal.
http://photonics.cnb.uam.es/Photonic_sp/Review/formacion.htm
Completa página en español con información sobre fundamentos de análisis de
imagen y fundamentos de diversas técnicas de microscopía avanzada.
http://www.sct.ub.es:801/Galeria/Galeria.htm
Galería de imágenes de gran calidad, obtenidas con microscopios confocal y
electrónicos.

ANEXO PREPARACION DE REACTIVOS

1. Acido-Alcohol: (decolorante para tinción Ziehl-Neelsen)

o Ácido clorhídrico
concentrado ..........................................................3 ml
o Etanol
95% ....................................................................................97
ml
2. Azul de metileno: Colorante de contraste para tinción de flagelos.
o Azul de
metileno................................................................................1
g
o Agua
destilada...............................................................................10
0 ml
3. Azul de metileno de Loeffler: Tinciones simples.
o Solución de hidróxido potásico al
1%.................................................1 ml
o Azul de metileno, sol. saturada en etanol al
95%...............................30 ml
o Agua
destilada...............................................................................10
0 ml
4. Colorante para esporas:
o Solución acuosa saturada de verde malaquita

106
5. Colorante para flagelos de Leifson:
o Solución A
 Fucsina
básica .........................................................................1,
2g
 Etanol
95%.............................................................................10
0 ml
o Solución B
 Ácido
tánico..............................................................................
..3 g
 Agua
destilada.........................................................................
100 ml
o Solución C
 Cloruro
sódico..........................................................................1,
5g
 Agua
destilada.........................................................................
100 ml
Para preparar la solución de uso, se mezclan
cantidades iguales de las soluciones A, B y C y se
guarda en frasco cerrado herméticamente en la nevera
donde es estable durante varias semanas.
6. Cristal violeta: Para tinción Gram y tinción simple.
o Cristal violeta (violeta de
genciana)....................................................0,5 g
o Agua
destilada.................................................................................1
00 ml
7. Eosina: Para observación de células sanguíneas.
o Eosina.......................................................................................
........0,3 g
o Ácido acético
glacial......................................................................0,025 ml
o Agua
destilada...................................................................................
100 ml
8. Fucsina diluida: Para tinción Gram y tinción simple.
o Fucsina fenicada de Ziehl-
Neelsen......................................................10 ml
o Agua
destilada.................................................................................1
00 ml

107
9. Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen: Para tinción ácido-alcohol
resistente.
o Fucsina
básica......................................................................................
1g
o Etanol
95%........................................................................................1
0 ml
o Fenol 5% en solución
acuosa............................................................100 ml
10. Hematoxilina: Para observación de células sanguíneas.
o Hematoxilina............................................................................
.............2 g
o Agua
destilada...................................................................................
...1 l
11. Lactofenol: Para preparaciones microscópicas en fresco de
mohos.
o Ácido
láctico.....................................................................................1
00 ml
o Fenol.........................................................................................
.......100 g
o Glicerol.....................................................................................
........200 ml
o Agua.........................................................................................
........100 ml
12. Lactofenol al Azul Algodón: Para preparaciones en fresco y
tinciones de mohos.
o Solución de azul algodón
 Sol. saturada de azul algodón (azul anilina
soluble)......................10 ml
 Glicerol............................................................................
.........10 ml
 Agua................................................................................
.........80 ml
Mezclar esta solución con lactofenol a partes iguales
13. Lugol: Solución de yodo para tinción Gram.
o Yodo.........................................................................................
..........1 g
o Yoduro
potásico..................................................................................2
g
o Agua
destilada.................................................................................3
00 ml

108
14. Orceína A: Tinción de cromosomas.
o Orceína.....................................................................................
...........2 g
o Ácido
acético.....................................................................................
45,8 ml
o Ácido clorhídrico 1
mol/l......................................................................8,3 ml
o Agua.........................................................................................
.........45,8 ml
15. Orceína B: Tinción de cromosomas.
o Orceína.....................................................................................
...........2 g
o Ácido
acético.....................................................................................
55 ml
o Agua.........................................................................................
.........55 ml
16. Safranina: Colorante de contraste para tinción Gram (preferible a
la fucsina) y esporas.
o Safranina..................................................................................
.......0,25 g
o Agua
destilada..................................................................................
100 m
17. Sudán III: Tinción específica de grasas.
o Alcohol
etílico...................................................................................10
0 ml
o Sudán
III...................................................................................hasta
saturación

18. Verde de metilo acético: Igual composición que la eosina (num.

7)

109