Cromatografa de Gases

En la cromatografia de gases (GC), la muestra se vaporiza y se inyecta en la entrada de la columna.La elusion se efecta con un gas inerte (He) o no reactivo respecto de la muestra (N2 o H2).

La fase mobil no interacta con el analito, solo lo lleva. El analito pasa a la fase movil por su presin de vapor, que es funcion de la temperatura y de la afinidad que tenga por la fase estacionaria. La fase estacionaria es un slido, donde el analito se adsorbe o mas comunmente una capa fina de liquido sobre un soporte slido donde se disuelve el analito.

El gas carrier
El gas carrier suele ser He, H2 o N2. Viene normalmente en un tubo a presion (150 atm) que se conecta con reguladoras de presin, valvulas aguja (de caudal) y medidores de presin y de flujo. Se le suele poner un filtro con tamiz molecular para eliminar el agua y alguna impureza que el gas pueda tener.
N2 He

H2

Sistema de inyeccin
la inyeccin debe ser rpida y ocupar lo menos posible en el inicio de la columna (como cuando se siembra en una capa bien fina en una columna separativa manual).

Lo mas comun es inyectar con una jeringa dentro de un septum de goma o silicona, pero tambien se usan llaves de 6 vias como las de HPLC que tienen mayor repetibilidad que una jeringa.

Sistemas de inyeccin
Hay 3 tipos basicos de inyeccion: Sin divisin (non split) Con divisin (split injection) Directa o en columna (column injection)

Para bajas relaciones de division (splitting), las areas se vuelven no lineales y no se puede cuantificar bien.

http://www.sge.com/support/training/injection

Ventajas y desventajas:
La inyeccion con division sirve para analitos en concentracion apreciable, ya que diluye mucho la muestra. Es la que da los picos mas finos y la mejor separacion. Mal limite de deteccin y baja repetibilidad para analisis cuantitativo. La inyeccion sin division es para analitos en muy baja concentracion y no diluye la muestra. Baja repetibilidad. Baja separacion, y si no se tiene cuidado con al atrapamiento del disolvente enfriando el inicio de la columna, los picos salen muy anchos. La inyeccion directa en columna es la mejor para cuantificar (no se pierde analito). Tambin hay que atrapar el disolvente. Util cuando no se puede calentar el analito por descomposicion. La calidad de separacion es intermedia.

Tipos de columnas
hay dos tipos bsicos de columnas: las empaquetadas (partculas dentro de la columna como en HPLC) y las capilares o abiertas, que solo tienen fase estacionaria en la superficie interior.

Las longitudes varan entre 2 y 100m. Se hacen de acero inoxidable, de vidrio, de silica fundida y de teflon. Suelen venir enrolladas para que entren dentro del horno del equipo de CG.

Columnas empaquetadas
Se hacen de vidrio, acero inoxidable, cobre, aluminio o teflon. Tienen 2-3 metros de largo y diametros interiores de 2 a 4 mm. Estan llenas de un soporte solido recubierta por una capa fina (0.05 - 1 m) de la fase estacionaria lquida. Tienen baja separacion, pero admiten mucha cantidad de muestra. Se van usando cada vez menos a medida que las capilares se hacen mejores.

Tipos de columnas abiertas (capilares)

Comparacion entre tipos de columnas

La fase estacionaria
Salvo en las columnas tipo PLOT, que son solamente slidas, la fase estacionaria es in liquido que esta cubriendo al soporte slido.

Esa fase lquida debe tener las siguientes propiedades: (1) baja volatilidad (punto de ebullicin al menos 100oC mas alto que la maxima temperatura de la columna. (2) estabilidad trmica y qumica. (3) no sangrar de su soporte slido, para lo cual se suele unir covalentemente al soporte mediante alguna reaccin.

La fase estacionaria
Para separar diversos componentes, se usan fases afines con los analitos a resolver: lo similar disuelve lo similar. Las fases polares tienen grupos funcionales como CN, -CO- and OH. Las no polares son de tipo hidrocarburos o dialquilsiloxanos.

El horno
La temperatura de la columna debe ser posible de cambiar a voluntad, en lo posible de forma programada. La programacion de temperatura variable puede usarse para mejorar la separacion, como los gradientes de solventes en HPLC. Una temperatura apenas arriba del promedio de los puntos de ebullicion de la muestra suele dar tiempos de elusion razonables (2-30 min). Para muestras con analitos de rango amplio de volatilidad casi siempre hay que usar temperatura programada.

Detectores para GC El detector ideal tiene: 1. Buena sensibilidad 2. Buena estabilidad y reproducibilidad. 3. Respuesta lineal de varios ordenes de magnitud. 4. Rango de temperaturas de 25oC a 400 oC. Ningun detector es ideal !

Flame Ionization Detectors (FID)

El detector de ionizacion en llama es el mas ampliamente usado. Se aplica a casi todas las muestras. La salida de la columna se mezcla con aire (y si es necesario H2) y se enciende mediante una chispa. La mayoria de los compuestos orgnicos producen iones y electrones al ser pirolizados con la llama de H2/aire, aumentando la conductividad de la llama que se mide con una fuente de alta tensin. Los carbonilos y carboxilos no producen casi iones, y por lo tanto no se ven, bajando la sensibilidad para cetonas, aldehidos y acidos carboxilicos.

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Flame Ionization Detectors (FID)

Se aplica un potencial de 100-500 volts en la llama producida que contiene el analito. Se mide la corriente en la llama (~10-12 A). El detector FID tiene alta sensibilidad (~10-13 g/s), amplio rango lineal (~107), y bajo ruido. Es destructivo para la muestra.

Thermal Conductivity Detectors(TCD)

El detector mas universal y uno de los mas antiguos es el de conductividad termica. El elemento sensor es una resistencia calefactora chiquita, que disipa su energia en el gas que va saliendo. Si la conductividad termica aumenta por la presencia de algun analito en el gas, la temperatura en la resistencia baja, y se detecta el analito. Para la resistencia se usa un alambre de Pt, Au, W o un termistor NTC de semiconductor.

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Thermal Conductivity Detectors(TCD)

La ventaja es la universalidad (detecta todo) y la simplicidad. Gran rango dinmico (~105), y que no es destructivo, asi que se pueden colocar otros detectores detras o hasta colectar la muestra (GC preparativa). La desventaja es que tiene baja sensibilidad (~10-8 g/mL de gas carrier ), de 104 a 107 veces menos que otros detectores. Esta sensibilidad la mayoria de las veces no alcanza para usarse con una columna capilar fina.

Thermal Conductivity Detectors(TCD)

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Electron-Capture Detectors(ECD)
El detector de captura de electrones se volvio uno de los mas usados en muestras ambientales porque detecta selectivamente compuestos con halgenos, como pesticidas y PCBs. La salida de la columna pasa cerca de un emisor de partculas , usualmente niquel-63. Esto causa la ionizacin del gas carrier y la produccion de muchos electrones secundarios. En ausencia de analito estos electrones producen una corriente electrica constante de fondo. La corriente disminuye fuertemente em presencia de substancias orgnicas, que pueden capturar electrones.

Electron-Capture Detectors(ECD)
difusor

El ECD es selectivo hacia analitos que contengan grupos fuertemente electronegativos como halogenos, peroxidos, quinonas y grupos nitro. No detecta grupos funcionales como aminas o alcoholes. Se usa mucho para detectar insecticidas clorados.

aislador

fuente radiactiva

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Atomic Emission Detectors (AED)

En el detector de emisin atmica la salida de la columna se coloca en un plasma de helio energizado a microondas que lo calienta hasta atomizarlo y emitir luz. la luz se colecta con un espectrofotometro de matriz de diodos.

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Thermionic Detectors (TID)

El detector termoinico tambien llamado de llama alcalina es un FID modificado poniendole una bolita de vidrio que contiene RbSO4. Su respuesta a atomos de P y N esta aumentada de 104 a 106 veces respecto a C. Comparado con un FID normal, es 500 veces mas sensible a compuestos conteniendo P y 50 veces mas para compuestos conteniendo N. Eso lo hace muy util para detectar medicamentos, pesticidas y herbicidas que suelen tener estos elementos. Obviamente, no se puede usar N2 como gas carrier.

Anlisis cualitativo
La CG se usa mucho como criterio de pureza de compuestos orgmicos. Los contaminantes aparecen como picos adicionales. Las areas bajo los picos dan una estimacion gruesa de la cantidad de contaminacion presente. Tambien se usa para evaluar procedimientos de purificacin y de avance de reacciones. Los tiempos de retencion tR son utiles para la identificacion de compuestos incognita presentes en una muestra, pero es preferible usar para informar los indices de retencion.

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El indice de retencion
El indice de retencion I fue propuesto por Kovats para identificar analitos en un cromatograma. Se basa en el hecho de que existe una relacion entre el logaritmo del tiempo de retencion tR y el numero de carbonos de una molecula en una serie anloga. Como estandar se usa la serie de los n-alcanos. El hexano tiene (convencion) I=600, el heptano I=700, el nonano I=900, etc. El I de un compuesto cualquiera se determina encerrandolo entre dos alcanos y aplicando la formula:

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Ventaja: Mientras que los tiempos de retencin son muy variables de acuerdo a la columna y temperaturas empleadas los indices de retencion son bastante independientes de las condiciones de la cromatografa.

Esto permite que existan tablas de Indices de retencion para miles de compuestos que facilitan la identificacion de incognitas. Por supuesto, NO ES INFALIBLE ni es una prueba determinante de identidad quimica.

Anlisis cuantitativo
Como en HPLC, la seal del detector se puede usar para cuantificar. Mediante un procedimiento cuidadoso se logra 1% de exactitud y buena repetibilidad. La mejor medida de la cantidad de analito es el area bajo la curva. La integracion se hace normalmente con computadora (estos conceptos se ven en el laboratorio). Dado que la inyeccin suele tener poca repetibilidad, es conveniente usar un estandar interno.

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Interfase con espectrometro de masa

La cromatografia de gases es muy adecuada para ser acoplada a un MS. De esta forma se tiene una identificacion quimica de la molecula. El uso de indices de retencion + espectroscopia de masa da mucho fundamento para establecer la naturaleza del analito, permitiendo de una vez hacer un analisis cualicuantitativo completo.

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