Mtodo cromognico para la identificacin de Salmonella spp.

con el empleo del medio CromoCen SC

BioCen, cdigo 4226

El mtodo incluye una fase de identificacin presuntiva con el empleo del medio cromognico CromoCen SC para la deteccin, aislamiento, diferenciacin y/o recuento de Salmonella (excepto S. Typhi y coliformes totales de otras !acterias "ram#negativas en muestras de heces fecales y otras muestras cl$nicas% "aranti&a los resultados en '(#)' h y re*uiere la confirmacin adicional con las prue!as serolgicas% Tipos de muestras ue pueden ser procesadas por este mtodo! coprocultivos, hemocultivos, o cual*uier otro tipo de muestra donde se sospeche la presencia de los microorganismos diana% Resumen de la aplicacin El medio !asa su funcionamiento en la com!inacin de una reaccin cromognica para detectar la actividad #galactosidasa de los coliformes y una reaccin !io*u$mica de degradacin de fuentes de car!ono por las Salmonella no pertenecientes al grupo Typhi y +aratyphi *ue produce una disminucin del p,, con el consiguiente cam!io de color del indicador incluido en la formulacin% -a com!inacin de !ases nutritivas utili&adas permite el crecimiento adecuado de los microorganismos de inters, en presencia de inhi!idores para los microorganismos "ram#positivos% -a utili&acin de un agente *ue proporciona opacidad, posi!ilita un me.or contraste de colores y me.or o!servacin de las respuestas% Procedimiento (/er el es*uema general del mtodo % -a recogida y preparacin de las muestras de heces fecales se e.ecuta seg0n los procedimientos esta!lecidos para la toma, transportacin y recepcin% 1tili&ando los cultivos procedentes del Caldo Selenito recomendado para muestras de heces fecales o cultivos procedentes de otros medios de enri*uecimiento, como el Caldo 2appaport# /assiliadis (C2/ , inocule con la ayuda del asa la superficie de la placa de medio CromoCen SC y del 3gar S%S% (4odificado (o en otro medio recomendado para la identificacin presuntiva de Salmonella Typhi y +aratyphi , sem!rando por estriado (agotamiento del inculo en las placas% 2ealice tantas rplicas como sean necesarias a partir de cada uno de los medios de enri*uecimiento selectivo% +ara o!tener una respuesta presuntiva m5s r5pida, puede sem!rar directamente con un asa la muestra so!re la superficie del medio CromoCen SC y en el medio 3gar S%S% (4odificado % 6ncu!e las placas en posicin invertida a )7 ' 8C (CromoCen SC y 3gar S%S% (4odificado , agr0pelas en no m5s de ( placas por columnas% Con posterioridad a la incu!acin, examine las placas para determinar la presencia de colonias t$picas de Salmonella y las at$picas (sospechosas *ue pudieran considerarse Salmonella. +ara la confirmacin, tome una colonia considerada como t$pica o sospechosa de cada placa de cada medio selectivo% 9e resultar el aislamiento negativo, seleccione otras ( colonias sospechosas% Si una placa muestra menos de 7 colonias sospechosas, seleccione todas las t$picas para la confirmacin% Estr$e las colonias seleccionadas en la superficie del medio agar nutriente con la superficie previamente secada% 6ncu!e las placas por espacio de '( ) h a ): ; 8C% (+ara el Caldo 2appapot# /assiliadis incu!e a (;,7 ; 8C durante ;<#'( h % 1tilice cultivos puros tanto para las prue!as !io*u$micas, como para la serolog$a% En el caso de las colonias sospechosas en el medio CromoCen SC puede aplicar directamente las prue!as serolgicas, siempre y cuando la colonia est !ien aislada% Interpretacin El crecimiento t$pico de Salmonella (Typhimurium, Choleraesuis, Enteritidis, y otras, excepto S. Typhi y +aratyphi , se expresa como colonias de rosa fucsia con diferentes intensidades a ro.as con el centro m5s oscuro y !ordes, generalmente, regulares% En el caso de los coliformes, excepto Klebsiella y Citrobacter, se presentan como colonias de coloracin a&ul#verdosa% -as colonias de Klebsiella y Citrobacter se o!servan de color violeta% Cuando se sospeche de la presencia de Pseudomonas en las muestras, por la presencia de colonias de color rosado a naran.a, opacas, con !ordes, generalmente irregulares, se proceder5 a diferenciarlas por su actividad citrocromo oxidasa (positiva % -as colonias incoloras o con pigmentacin propia corresponden a otras !acterias "ram#negativas% -os microorganismos "ram#positivos resultan inhi!idos en el medio% En el caso de muestras en las cuales no sea detectado crecimiento de colonias sospechosas en el medio CromoCen SC, se proceder5 a ensayar las colonias sospechosas provenientes de otros medios de aislamiento seg0n los procedimientos tradicionales esta!lecidos% 9e manera similar, se proceder5 a identificar las colonias *ue pudieran ser consideradas como at$picas en el medio CromoCen SC%

Aplicacin en muestras clnicas

Ventajas

45s r5pido% -a identificacin de Salmonella spp% y coliformes se reali&a en un per$odo m5ximo de )' h% -a deteccin directa y simult5nea de varias actividades en&im5ticas en un mismo medio eleva la exactitud del an5lisis% Esto permite la identificacin presuntiva directa y la confirmacin con las prue!as serolgicas sin la confirmacin !io*u$mica, cuyos resultados no presentan diferencia con la identificacin por los mtodos tradicionales%

+osi!ilidad de reali&ar los ensayos de suscepti!ilidad antimicro!iana para los coliformes por el mtodo de difusin a partir de su!cultivos de las colonias coloreadas en el medio, ya *ue stas est5n constituidas por !acterias *ue retienen en su interior el cromforo insolu!le procedente de sustrato derivado del indoxilo%

45s f5cil de utili&ar% =o necesita esterili&acin durante su preparacin% 9isminucin de la carga de tra!a.o asociada al procesamiento de los coprocultivos% 45s preciso% Sus Sensi!ilidad y Especificidad diagnsticas son superiores a las de los medios convencionales destinados al mismo propsito para todos los microorganismos de inters% 45s confia!le% El contraste de colores no permite confusin%

Composicin y preparacin de los medios de cultivo y reactivos ". Medio CromoCen# SC Composicin> ?ases nutritivas#;;,@ gA 4e&cla cromognica# 7,(A 3gar# ;7,@ g% "." $reparacin 3dicione el suplemento l$*uido +-" (cd% ('B; a ; - de agua destilada o desioni&ada% 4e&cle !ien% Suspenda );,( g del medio !ase y agite suavemente% Caliente hasta e!ullicin repetidas veces, si fuera necesario, hasta la total fusin del agar% =o caliente a temperaturas mayores de ;@@ 8C% Enfr$e hasta (7 8C% %o esterili&ar en autocla'e% ".2 $reparacin de las placas del Medio CromoCen# SC. Transfiera inmediatamente a un !aCo con temperatura de (( a (: DC% 9ispense el medio en placas, agitando suavemente para homogenei&ar, y de.e solidificar% 6nmediatamente ante de su uso, se*ue las placas en posicin invertida en el horno a temperatura entre )7#77 DC, por un tiempo suficiente hasta *ue la superficie del medio est seca% Almacenamiento del Medio CromoCen SC 4antener el frasco con el medio deshidratado hermticamente cerrado en lugar seco, fresco, protegido de la lu&, a temperatura de ;7 a )@ DC Se podr5 almacenar las placas listas para el uso por un per$odo de )@ d$as a temperatura de ' a < DC protegidas de la lu&% Para mayor informacin dirigirse a: 9epartamento de ventas> 6ng% Carlos +rendes, tel% <#<;#:@#'(, e#mail> prendesE!iocen%cu 3sistencia tcnica> 9rC 2aisa Fhur!enGo, tel% @(:#B<#'((;, e#mail> raisaE!iocen%cu

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(iagrama de flu)o para la determinacin de Salmonella spp. en muestras clnicas An*lisis de +eces fecales

Muestra

SC
24 h

S.S. mod.
24 h

Caldo Selenito, CRV

8h

Serologa

Kligler, LIA
Imagen Salm. 24-48 h

SC S.S.mod. S.S.
24 h

Urea, glicerol
3h

Serologa

Sist,. ident.*
18-24 h

Serologa