OPERACIONES UNITARIAS DE SEPARACION Y ESTABILIZACION Te Tericos Prof. G.

Pic Pic 2013 Clase 4

CRISTALIZACION

Para que se cristaliza una sustancia ?

- Eliminar el solvente (agua) y otros cosolutos. - Se incrementa el periodo en que puede ser almacenada y transportada

- Se aumenta la estabilidad termodinmica (caso de macromolculas) - Se mantiene prcticamente intacta su actividad biolgica. - Es criterio de pureza - Se disminuye el empleo de estabilizantes

LA CRISTALIZACION SIRVE PARA PURIFICAR y ESTABILIZAR UNA MOLECULA

En la formacin del estado slido

Formacin de un cristal Formacin de un vidrio

El cristal de una sustancia pura, el cuerpo con mayor orden y por lo tanto con menor contenido entrpico

ESTADO DE GRAN DESORDEN (gaseoso, liquido, solucin)

Significativa disminucin de la entropa y entalpa del sistema

Cristalizacin de un soluto disuelto en un solvente,

separacin de fases.
No es un proceso espontneo. Debe estar acoplado a otro proceso espontneo Soluto (sol) Soluto (solido- cristal)

El proceso de cristalizacin de un soluto en solucin

TERMODINAMICAMENTE: Se debe romper la interaccin soluto-solvente

H >> 0 y S >> 0
Este proceso no puede ocurrir espontneamente ya que H >> -(T S) Se debe acoplar otra evolucin de manera que el G resultante de ambas sea negativo

Soluto (solucin)

Agregacin G>>0

EFECTO EXTERNO G<<<0

El soluto pierde solvente y sus molculas entran en contacto entre si, producindose la agregacin

LOS METODOS DE FORMACIN DE UN CRISTAL

SOLUTOS (solucin)

FORMACION DE AGREGADOS

TEMPERATURA ELIMINANDO SOLVENTE AGREGANDO UN COSOLUTO

FACTORES EXTERNOS
7

Como cristalizar un soluto disuelto en un solvente ? Hay que lograr sobresaturacin de un soluto en solucin 1- Disminucin de la TEMPERATURA
Diagrama de solubilidad de un soluto vs Temperatura

Solubilidad (mg / mL)

B (zona inestable)

A (zona estable)

Temperatura ( C)

2- Eliminacin parcial el solvente

A Temperatura constante

Solubilidad (mg / mL)

B (zona inestable)

A (zona estable)

Temperatura ( C)

3- Disminucin del volumen disponible para el soluto por agregado de un cosoluto

Solubilidad (mg / mL)

ZONA SOBRESATURADA

ZONA ESTABLE

Concentracin de Cosoluto

MECANISMO MOLECULAR DE LA FORMACIN DE UN CRISTAL PRIMERA ETAPA: EL PROCESO DE NUCLEACIN

NUCLEACION NUCLEACION
Es la formacion de nucleos donde antes no haba.

NUCLEACION SECUNDARIA
Se debe a la presencia de nucleos que facilitan la formacin de cristales

PRIMARIA

HOMOGENEA

HETEROGENEA

TERMODINAMICA DE LA FORMACION DE LOS NUCLEOS

G = Gs + Gv
solucin

(1)

cavidad

Superficie del cristal

Soluto ( solucin) Soluto( slido)

GV :cambio de energa libre debido a la formacin de una cavidad (favorable) Gs cambio de energa libre debido a la formacin de una superficie (cristal)(desfavorable).

TERMODINAMICA DE LA FORMACION DE LOS NUCLEOS

G = Gs + Gv

(1)
Gs = A
G s cambio de G debido a la
formacin de una superficie No expontneo

(2) (3)

Gv = n ( solucion fase slida)

solucion = o + RT ln asolucin fase slida = o + RT ln asolido

reemplazando : asolucin asolido

Radio de los ncleos

Gv = nRT ln asolucin =S asolido

Gv cambio de G DEBIDO A LA FORMACION DE UNA CAVIDAD

Proceso expontaneo

finalmente G = RT ln S + A

(4)

4 G = 3 r 3 RT ln S + 4 r 2

(5)

en la situacin : G =0 r G = G * ( r = r * ) 16 2 3 G = 3 ( RT ln S ) 2
*
Cambio de energa libre crtica Los ncleos han adquirido un tamao donde pueden crecer solos

( 6) (7 )

Depende inversamente de la T y la concentracin de soluto

En el proceso global de formacin del cristal

Energa libre por creacin de la interfase

G =0 r

G = Gs + Gv
Proceso espontneo

(1)

Radio crtico

Radio

Energa libre por creacin de volumen

Dependencia de G de formacin de ncleos con la concentracin de soluto

G * =

16 2 3 3 ( RT ln S ) 2

(7 )

r
Disminuye S

Dependencia de G de formacin de ncleos con la Temperatura, Hay que tener en cuenta que la solubilidad y la temperatura estn variando La demostracin matemtica de este proceso es mas complicada

VELOCIDAD DE NUCLEACION 1. EFECTO DE LA SATURACION DEL SOLUTO

MUCHOS NUCLEOS CRISTALES PEQUEOS E IMPERFECTOS

SOLUBILIDAD

POCO NUCLEOS CRISTALES GRANDES Y PUROS

TEMPERATURA

La agregacin tumultuosa y desordenada conduce a la formacin de dos fases: con gran contenido de solvente: coalescencia

VELOCIDAD DE NUCLEACION 2. EFECTO DE LA VISCOSIDAD DE LA SOLUCION

Formacin de vidrio
16 14

D=

kB T A R

Formacin de cristales

velocidad (unidades arbitrarias)

viscosidad Crecimiento de los nucleos

12 10 8 6 4 2 0

Crecimiento de los cristales

50

100

150

200

Temperatura (grados C)

10

VELOCIDAD DE CRISTALIZACION
Luego que el nucleo se form, el crecimiento del cristal depende de: DIFUSION SOLUTO A TRAVES DEL SOLVENTE HACIA LA SUPERFICIE DEL CRISTAL x
solido

dw/dt
solucin
CA

= KdA(c - ci)
ci Kd c

CAo

N A = a k (CA Co )

Ks
Modelo de la pelcula

cs

LA VELOCIDAD DE DISOLUCION DEL CRISTAL.

d w/dt = K c -c ) dw/dt=A Ks (C s( i - iCs ) s

dw incremento de peso del cristal en un dt, A area del cristal, c concen. soluto en el seno solucion, ci is the solute concentration at the crystal/solution interface, Cs concentracion de la solucion sobre saturada, Kd coeficiente de difusion en la interfase, Ks coeficiente del proceso opuesto

PROCESO DE MADURACION O ENVEJECIMIENTO DEL CRISTAL

IMPUREZAS

Cristales conteniendo impurezas

CRISTAL PERFECTO

- EL CRISTAL PIERDE SOLVENTE Y OTRAS MOLECULAS NO PROPIAS. PROCESO LENTO - HAY UN INTERCAMBIO DINAMICO DE PARTICULAS ENTRE LOS CRISTALES IMPERFECTOS Y LAS AGUAS MADRES - LOS CRISTALES AUMENTAN DE TAMAO SE DEBE DEJAR EL PRECIPITADO JUNTO CON SU AGUA MADRE POR LO MENOS 12 Hs

11

LA CRISTALIZACION DE MACROMOLECULAS

MACROMOLECULA EN SOLUCIN DISMINUCION DE SU SOLUBILIDAD

Sales Polmeros Solventes Orgnicos

Formacin de Complejos: Polielectrolitos- Protenas

Cristalizacin

LA CRISTALIZACION DE ENZIMAS Y OTRAS MACROMOLECULAS

LA PRIMERA ENZIMA CRISTALIZADA

Journal Biological Chemistry 1926

12

EL METODO DE 1926
J. Biological Chemistry (1926)

Polvo de poroto de soja previamente desengrasado

Extraccin con solucin acuosa de acetona 31,6%

FILTRACIN POR DECANTACION

SOLUCIN 12 HS REPOSO EN FRIO

Cmo se cristaliza una protena?

Condiciones que se requieren 1- Modificar la temperatura PROHIBIDO 2- Eliminacin parcial del solvente por evaporacin NO !!! 3- Concentracin de la solucin de macromolcula por ultrafiltracin
Presin

Solucin de protena

Membrana de poro controlado

Filtrado: solvente + solutos de bajo peso molecular

13

4- Cambio de pH

Z 2 e 2 N S ln = So 2 D RT (1 + a )

8 N 2 I 1000 D k T
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REPULSION

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Solubilidad (mg/ mL)

I = (Ci Z )
2 1

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REPULSION

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Salting in
(-)

AGREGACION

Salting out pH isoelectrico

pH

5- Modificacin de la concentracin y tipo de sales

Solubilidad (mg / mL) Cloruro de sodio Sulfato de magnesio Fosfato de sodio

Fuerza inica

6- Modificacin de la constante dielctrica del medio: agregado de etanol a bajas concentraciones: 10%

ln

1 S 1 = k 2 2 So Dw Dm

14

Solubilidad (mg / mL)

7- Agregado de un cosoluto: sales, polmeros, solventes

ZONA SOBRESATURADA ZONA META ESTABLE

ZONA DE PRECIPITACION

SALES SOLVENTES POLIMEROS

Concentracin de Cosoluto
ZONA ESTABLE

cosoluto

EL MECANISMO MOLECULAR MEDIANTE EL CUAL OCURRE LA PRECIPITACIN DE UNA PROTEINA POLIMEROS: disminuyen el volumen de solvente disponible para que la protena se ubique, deshidratan. Se favorece la agregacin SOLVENTES ORGANICOS: inducen la perdida de agua en la protena, disminuye la constante dielctrica del medio SALES: modifican la interaccin solvente protena
SALES Sulfato de amonio Sulfato de sodio Cloruro de sodio Nitrato de amonio Sulfato de Litio SOLVENTES Etanol Acetona Butanol Dimetl sulfoxido Metanol POLIMEROS Polietilenglicoles Polivinil alcoholes

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EQUIPOS DE CRISTALIZACION INDUSTRIAL

Salida vapor

4
SOLUBILIDAD

4
Entrada solucin

Descarga de los cristales

1 2

2
TEMPERATURA

RENNET: mucosa del estomago de neonato o ternero pH 5,0 + NaCl saturacin (3,3M) (precipitacin con sales)

Sobrenadante descartar

PRECIPITADO Disuelto con agua pH 6,0

Se repite 4 veces, usando cada vez la mitad de volumen

Acidificar con HCl hasta pH 4.5 Cristaliza la renina (precipitacin por pH = pI )

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