UNIVERSIDAD TCNICA DE AMBATO FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERA EN ALIMENTOS CARRERA DE INGENIERA BIOQUMICA

VALIDACIN DEL MTODO ANALTICO PARA LA DETERMINACIN DE MERCURIO EN MUESTRAS DE AGUA NATURAL, RESIDUAL Y DE CONSUMO POR MEDIO DE ESPECTROSCOPA DE ABSORCIN ATMICA CON TCNICA DE VAPOR FRO.

Trabajo de Investigacin (Graduacin). Modalidad: Trabajo Estructurado de Manera Independiente (TEMI). Presentado como Requisito Previo a la Obtencin del Ttulo de Ingeniero Bioqumico, otorgado por la Universidad Tcnica de Ambato, a travs de la Facultad de Ciencia e Ingeniera en Alimentos

AUTOR: Cristina Fernanda Alarcn Quinapanta Tutor: Dr. Romn Rodrguez Ph.D.

AMBATO ECUADOR 2011

Dr. Romn Rodrguez Ph.D TUTOR

CERTIFICA:

Que el presente trabajo investigativo: VALIDACIN DEL MTODO ANALTICO PARA LA DETERMINACIN DE MERCURIO EN MUESTRAS DE AGUA NATURAL, RESIDUAL Y DE CONSUMO POR MEDIO DE ESPECTROSCOPA DE ABSORCIN ATMICA CON TCNICA DE VAPOR FRO, desarrollado por la egresada Cristina Fernanda Alarcn Quinapanta; contempla las orientaciones metodolgicas de la Investigacin Cientfica

Que ha sido dirigida en todas sus partes, cumpliendo con las disposiciones por la Universidad Tcnica de Ambato, a travs de la Facultad de Ciencia e Ingeniera en Alimentos

Por lo expuesto:

Autorizo su presentacin ante los organismos competentes para la aprobacin del mismo.

Ambato, diciembre del 2011

Dr. Romn Rodrguez Ph.D

APROBACIN DEL TUTOR DE TESIS

Dr. Romn Rodrguez Ph. D.

En mi calidad de Tutor del Trabajo de Investigacin realizado bajo el tema: VALIDACIN

DEL MTODO ANALTICO PARA LA DETERMINACIN DE MERCURIO EN MUESTRAS DE AGUA NATURAL, RESIDUAL Y DE CONSUMO POR MEDIO DE ESPECTROSCOPA DE ABSORCIN ATMICA CON TCNICA DE VAPOR FRO de la

egresada Cristina Fernanda Alarcn Quinapanta; considero que dicho trabajo investigativo rene los requisitos y mritos suficientes para ser sometido a la evaluacin del Jurado Examinador designado por el H. Consejo Directivo de la Facultad de Ciencia e Ingeniera en Alimentos.
Ambato, diciembre de 2011

Dr. Romn Rodrguez. Ph. D. TUTOR DE TESIS

AUTORA DE LA INVESTIGACIN

La responsabilidad del contenido del Proyecto de Investigacin, corresponde exclusivamente a Cristina Fernanda Alarcn Quinapanta egresada; Dr. Romn Rodrguez Ph.D, Tutor del Proyecto de Investigacin; y el Laboratorio de Servicios Analticos HAVOC; con el tema: VALIDACIN DE UN MTODO ANALTICO PARA DETERMINAR MERCURIO EN MUESTRAS AMBIENTALES POR MEDIO DE ESPECTROFOTOMETRA DE

ABSORCIN ATMICA CON TCNICA DE VAPOR FRIO y el patrimonio intelectual de la misma a la Universidad Tcnica de Ambato y al Laboratorio de Servicios Analticos HAVOC Cia. Ltda.

Cristina Alarcn Autor

Dr. Romn Rodrguez Ph.D Tutor Proyecto

APROBACIN DEL TRIBUNAL DE GRADO

UNIVERSIDAD TCNICA DE AMBATO FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERA EN ALIMENTOS CARRERA DE INGENIERA EN ALIMENTOS

Los miembros del Tribunal de Grado aprueban el presente Trabajo de Graduacin de acuerdo a las disposiciones emitidas por la Universidad Tcnica de Ambato. Ambato, diciembre del 2011 Para constancia firman:

PRESIDENTE DEL TRIBUNAL

MIEMBRO DEL TRIBUNAL

MIEMBRO DEL TRIBUNAL

Dedicatoria
Al Seor, por el amor reflejado a lo largo de todo este tiempo. A mis padres por su gran apoyo, comprensin y proteccin interminables todos estos aos y porque sin su ejemplo de lucha no hubiera llegado hasta aqu. A mis hermanos Marco, Mnica y Manolo por su confianza y apoyo firme. A mis amigos que han estado apoyndome y respaldndome siempre aqu.

Agradecimiento
Aunque la nobleza vive de la parte del que da, el agradecer est de parte del que recibe. Y pues, ya dar es sabio, ya tengo con nombre honroso el nombre del generoso. Djame el de agradecido, pues lo puedo conseguir siendo agradecido, cuanto libera, pues honro tanto el dar como el recibir. (Pedro Caldern de la Barca) Por ello, es inevitable agradecer, ms an cuando hay tantas personas a quienes decirles Gracias. A mis padres y hermanos por su gran amor, comprensin, confianza y soporte durante toda mi vida y por hacer que esta sea ms alegre y llevadera. A todas las autoridades y profesores que presiden la Universidad Tcnica de Ambato y en especial al Ing. Rommel Rivera quien de manera desinteresada ha empleado esfuerzo y tiempo para materializar uno de mis ms grandes objetivos, la culminacin de mi carrera. Al Dr. Roman Rodrguez por su enseanza, preocupacin, motivacin y amistad a lo largo de esta hermosa profesin. A Alexandra Brito por su invaluable amistad, colaboracin y apoyo desde el da en el que comenzamos este largo trayecto. Quien adems ha sido la verdadera creadora de este trabajo que ahora se consuma. A Marco Roberto, por ser mi apoyo sentimental y mi fortaleza todo este tiempo. Y por darme fuerzas para salir hacia adelante en todo momento. A mis amigos Osmany, Carmita, Aracelly, Andreina, Verito, Cristy, Noris, Lily, Anglica, Santy, Moni, David, Mafer, por demostrarme todo este tiempo la verdadera amistad. A todos ustedes, el mayor reconocimiento, pues su actitud positiva y su cario me han permitido seguir adelante. Muchas gracias y mil bendiciones.

INDICE GENERAL DE CONTENIDOS CAPTULO I 1. 1.1 1.2 1.2.1 1.2.2 1.2.3 1.2.4 1.2.5 1.2.6 1.3 1.4 1.4.1 1.4.2 CAPTULO II 2. 2.1 2.1.1 2.1.2 2.1.3 2.1.4 2.1.5 2.2 2.3 2.4 2.4.1 2.5 2.5.1 2.5.2 2.6 2.6.1 2.6.2 Marco Terico Antecedentes Investigativos Los Metales Pesados en el Medio Ambiente La Intervencin de Mercurio (Hg) en el Ecosistema Origen y Clases de Contaminacin del Agua Tcnicas de Deteccin de los Niveles de Contaminacin Proceso de Validacin de Mtodos Analticos Fundamentacin Filosfica Fundamentacin Legal Categoras Fundamentales Grfico de inclusin Hiptesis Hiptesis Nula Hiptesis Alternativa Sealamiento de Variables Variable Independiente Variable Dependiente 9 9 9 10 16 17 21 25 26 27 27 27 27 28 28 28 28 EL PROBLEMA DE LA INVESTIGACIN Tema de la Investigacin Planteamiento del problema Contextualizacin (macro, meso, micro) Anlisis Crtico Prognosis Formulacin del problema Interrogantes Delimitacin del objeto de investigacin Justificacin Objetivos General Especficos 1 1 1 2 4 6 6 7 7 7 8 8 8

CAPTULO III 3. 3.1 3.1.1 3.2 3.2.1 3.2.2 3.2.3 3.3 3.3.1 METODOLOGA Modalidad Bsica de la Investigacin Experimental Tipo de la Investigacin Exploratoria Descriptiva Asociacin de Variables Mtodo y Tcnica de Investigacin Alcance de Condiciones ptimas para el Equipo de Generacin-Vapor Fro 3.3.2 3.3.3 3.4 3.4.1 3.5 3.5.1 3.5.2 3.6 3.7 CAPTULO IV 4. 4.1 4.1.1 4.1.2 4.1.3 4.1.4 4.2 4.2.1 4.2.2 4.2.3 4.2.4 4.3 CAPTULO V 5. 5.1 CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES Conclusiones 56 56 ANLISIS E INTERPRETACIN DE RESULTADOS Anlisis de los Resultados Condiciones de Operacin del Generador de Vapor Fro Validacin del Mtodo Analtico Determinacin de los Rangos de trabajo Estudio de las Matrices de Anlisis con Adicin de Estndar Interpretacin de Datos Condiciones de Operacin del Generador de Vapor Fro Validacin del Mtodo Analtico Determinacin de los Rangos de trabajo Estudio de las Matrices de Anlisis con Adicin de Estndar Verificacin de Hiptesis 46 46 46 47 49 49 50 50 50 54 54 54 Mtodo Analtico Empleado para la Determinacin de Mercurio Validacin del Mtodo Analtico Poblacin y Muestra Diseo Experimental Operacionalizacin de Variables Variable Dependiente: Variable Independiente: Recoleccin de Informacin Procesamiento y Anlisis 30 31 35 42 42 44 44 44 45 45 29 29 29 29 29 29 30 30

5.2 CAPTULO VI 6. 6.1 6.2 6.3 6.4 6.4.1 6.4.2 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9

Recomendaciones

57

PROPUESTA Datos Informativos Antecedentes de la Propuesta Justificacin Objetivos General Especficos Anlisis de Factibilidad Fundamentacin Metodologa Administracin Previsin de la Evaluacin

59 59 60 60 61 61 61 62 63 64 65 66

MATERIALES DE REFERENCIAS BIBLIOGRAFA ANEXOS ANEXOS 1 TULAS Norma de Calidad Ambiental y de Descarga de Efluentes ANEXOS 2 Preparacin de Reactivos ANEXOS 3 Equipos Utilizados ANEXOS 4 Tabla de Resultados y Anlisis Estadstico ANEXOS 5 Grficos 72 76 79 82 96 67

INDICE DE TABLAS CAPTULO II Tabla N 2.1 Tabla N 2.2 Tabla N 2.3 Tabla N 2.4 CAPTULO III Tabla N 3.1 Factores y niveles de estudio para las mejores condiciones de operacin del equipo de generacin de vapor fro para la determinacin de concentraciones de mercurio. Tabla N 3.2 Obtencin de los tratamientos resultantes de la correlacin de los factores de estudio para las mejores condiciones de operacin del equipo de generacin de vapor fro para la determinacin de concentraciones de mercurio. Tabla N 3.3 Tabla N 3.4 CAPTULO VI Tabla N 6.1 Tabla N 6.2 Tabla N 6.3 Tabla N 6.4 ANEXO 1 TABLA 1. Lmites mximos permisibles para aguas de consumo humano y uso domstico, que nicamente requieren tratamiento convencional. TABLA 2. Lmites mximos permisibles para aguas de consumo humano y uso domstico que nicamente requieran desinfeccin. TABLA 6. TABLA 8. TABLA 11. Tabla N 1 Tabla N 2 Criterios de calidad admisibles para aguas de uso agrcola Criterios de calidad para aguas de uso pecuario Lmites de descarga al sistema de alcantarillado pblico Preparacin de Estndares de Calibracin Resultados Obtenidos de la Experimentacin con el Equipo de Generacin de Vapor Fro Tabla N3 Resultados Medios de la Experimentacin con el Equipo de Generacin de Vapor Fro Tabla N 4 Tabla N 5 Porcentajes de Recuperacin - Equipo de Generacin de Vapor Fro Resultados del Clculo de ANOVA de la Experimentacin con el 84 84 85 83 73 74 74 75 83 73 Recursos Econmicos Estimados para la Propuesta Planteada Modelo Operativo (Plan de accin) Administracin de la Propuesta Previsin de la Evaluacin de la Propuesta 62 64 65 65 Variable Dependiente Variable Independiente 43 44 44 42 Propiedades Fsico-Qumicas Consumo de mercurio en Pases Industrializados Parmetros de Validacin de un Mtodo Analtico Fases de Validacin de Mtodos Analticos 11 15 23 25

Equipo de Generacin de Vapor Fro Tabla N 6 Resultados del Contraste Mltiple de Rangos para Absorbancia segn Factor A Tabla N 7 Resultados del Contraste Mltiple de Rangos para Absorbancia segn Factor B Tabla N 8 Tabla N 9 Tabla N 10 Tabla N11 Tabla N12 Resultados de la Prueba de Tukey para la interaccion AB Reporte de ABS obtenidas en la curva de Calibracin Comprobacin de la Concentracin de los Estndares de Calibracin Valores Promedios para la Determinacin de la Curva de Calibracin Porcentajes de Recuperacin de las Soluciones Estndar del Analito de Estudio Tabla N 13 Tabla N 14 Tabla N 15 Tabla N 16 Tabla N 17 Tabla N 18 Tabla N 19 Tabla N 20 Tabla N 21 Tabla N 22 Tabla N 23 Tabla N 24 Datos obtenidos del Estudio del Material de Referencia Datos obtenidos del Estudio del Material de Referencia Valores de F obtenidos Reproducibilidad Medias por Niveles de Concentracin Repetibilidad de los tres das Repetibilidad entre Das Porcentaje de Recuperacin-Exactitud Porcentaje de Recuperacin-Exactitud Incertidumbre del Mtodo Rangos de Trabajo Reporte de ABS obtenidas de la determinacin de los niveles de mercurio en muestras de anlisis Tabla N 25 Reporte de Datos de Adicin de Estndares en muestras de agua residual Tabla N 26 Tabla N 27 95 94 89 89 90 91 92 92 92 93 93 93 94 94 86 86 87 87 88 85

Reporte de Datos de Adicin de Estndares en muestras de agua natural 95 Reporte de Datos de Adicin de Estndares en muestras de agua de consumo 95

INDICE DE GRAFICOS E IMAGENES CAPTULO I Grfico 1.1 Grfico 1.2 CAPTULO II Grfico 2.1 Grfico 2.2 Grfico 2.3 Grfico 2.4 Procesos de adsorcin de metales pesados Modelo conceptual del ciclo del mercurio en el medio ambiente Esquema de equipo de absorcin atmica Esquema del proceso de determinacin de mercurio por generacin de vapor fro Grfico de inclusin ANEXO 3 Imagen 1. Imagen 2. Imagen 3. ANEXO 5 Grfico 1. Grfico 2. Grfico 3. Esquema de la Preparacin de Estndares de Calibracin. Condiciones de Operacin del Equipo de Generacin de Vapor Fro Representacin grafica del Factor A en relacin con los valores de absorbancia Grfico 4. Representacin grafica del Factor B en relacin con los valores de absorbancia Grfico 5. Representacin del intervalo de la prueba de Tukey al 95% para el Factor A. Grfico 6. Representacin del intervalo de la prueba de Tukey al 95% para el Factor B. Grfico 7. Grfico 8. Grfico 9. Grfico 10 Comportamiento de la interaccin de los Factores de estudio. Curva de Calibracin de Mercurio Determinacin de los Lmites de Confianza Mximos y Mnimos Determinacin de las Fuentes de Incertidumbre en Estndares entre 0.02mg/L y 0.06mg/L y el Material de Referencia Grfico 11. Determinacin de las Fuentes de Incertidumbre en Estndares entre 0.001mg/L y 0.003mg/L y el Material de Referencia 102 101 99 100 100 101 99 99 98 97 98 Fotografa del Equipo SHIMADZU GHV-1 Fotografa del Mechero y Celda de Cuarzo Fotografa de los Equipos SHIMADZU GHV-1 y SHIMADZU AA680 80 80 81 19 27 10 13 18 Actividad Minera en el Ecuador rbol de Problemas para el anlisis crtico 3 4

INDICE DE ABREVIATURAS AAS, Espectroscopa de Absorcin Atmica ABS, Absorbancia ANNCY, Laboratorio de Servicios Analticos APHA, American Public Health Association BBC, British Broadcasting Corporation CESAQ, Centro de Servicios Ambientales y Qumicos CESECCA, Centro de Servicio para el Control de Calidad CFL, Compact Fluorescent Lamp COPs, Contaminantes Orgnicos Persistentes EDTA, Ethylenediaminetetraacetic acid EPA, Environmental Protection Agency EU, European Union FC-GVF-EAA, Flujo Continuo con Generacin de Vapor Fro por Espectroscopa de Absorcin Atmica FDA, Food and Drug Administration GRUENTEC, Compaa de Servicios Ambientales HAZWAT, Tratamiento, Transporte y Disposicin Final de Residuos Especiales y Peligrosos INEN, Instituto Ecuatoriano de Normalizacin INP, Instituto Nacional de Pesca INSAT, Instituto Nacional de Salud de los Trabajadores IR, Radiacin Infrarroja ISAT, Instituto de Salud y Trabajo ISO, International Organization for Standardization IUPAC, International Union of Pure and Applied Chemistry NEMA, Asociacin Nacional de Fabricantes Elctricos Norteamericana OAE, Organismo de Acreditacin Ecuatoriana OMS, Organizacin Mundial de la Salud ONU, Organizacin de Naciones Unidas OSP, Oferta de Servicios y Productos PNUMA, Programa de las Naciones Unidas para el Medio Ambiente ppb, Partes Por Billn ppm, Partes Por Milln ppt, Partes Por Trilln PUCE, Pontificia Universidad Catlica del Ecuador RF, Radiofrecuencias

STEL, Short-Term Exposure Limits (Lmite de exposicin a corto plazo) TLV, Thresold Limite Value (valores lmite umbral) TULAS, Texto Unificado de Legislacin Ambiental Secundaria TWA, Time-weighted Average (Media ponderada en el tiempo) SWISS-CONTACT, Fundation for Technical Cooperation UNITAR, United Nations Institute for Training and Research UV, Ultravioleta

INDICE DE NOMENCLATURA Y NOTACIN QUMICA Hg Mercurio Hg0 Mercurio Elemental O Puro Hg(I) Mercurio Monovalente Hg(II) Mercurio Divalente HgO xido De Mercurio HgS Sulfuro De Mercurio HgCl2 Cloruro De Mercurio CH3Hg+ In Metil-Mercurio CH3Hg++ In Di-Metil-Mercurio SnCl Cloruro De Estao NaBH4 Borohidruro De Sodio Ar Argn N2 Nitrgeno Cs Cesio Sr Estroncio K Potasio HCl cido Clorhdrico H2SO4 cido Sulfrico HNO3 cido Ntrico KMnO4 Permanganato De Potasio

RESUMEN EJECUTIVO

Para la humanidad, a lo largo de la historia, el mercurio ha sido un elemento muy importante, puesto que posee caractersticas especiales que le permiten ser materia prima para muchos procesos industriales; pero su uso industrial ha llevado a la alteracin de su ciclo normal, con lo cual se producen altas concentraciones del mismo especialmente en aquellos relacionados con su extraccin y transformacin. La contaminacin del agua, el aire, el suelo y los alimentos, tanto a nivel del ambiente general como del ocupacional, resultado de su presencia bien sea natural o antropognica, ha demostrado la vulnerabilidad del hombre ante el poder txico del mercurio. A continuacin se describe un procedimiento adecuado y econmico para determinar el contenido de mercurio en muestras de agua natural, residual y de consumo, mediante la generacin de vapor fro (GVF) y deteccin por espectroscopa de absorcin atmica (EAA). La tcnica de flujo continuo fue usada para la introduccin de la muestra y los dems reactivos. Con este diseo todo el mercurio es reducido para formar vapor de mercurio elemental usando un reductor. Mediante la curva de calibrado se determin que la altura de picos mxima se incrementa linealmente con la concentracin de mercurio expresada por la ecuacin: y = 7,6337x + 0,0058; un lmite de correlacin de r2 = 0,9984, un lmite de cuantificacin de 0,0140mg/L y lmite de deteccin = 0,0025mg/L. Con el mtodo propuesto, se determin el contenido de mercurio en las muestras de anlisis con adicin de estndar, se logr establecer que tanto el agua natural como el agua de consumo no presentan niveles de contaminacin de mercurio, mientras que la matriz de agua residual present una concentracin de 0,002mg/L de mercurio, tomando en cuenta que el proceso de concentracin y digestin no presenta interferencias para la determinacin del mercurio contenido en la muestra.

CAPTULO I

1. EL PROBLEMA DE LA INVESTIGACIN 1.1 Tema de la Investigacin Validacin del mtodo analtico para la determinacin de mercurio en muestras de agua natural, residual y de consumo por medio de espectroscopa de absorcin atmica con tcnica de vapor fro. 1.2 Planteamiento del problema En la humanidad, a lo largo de la historia, el mercurio ha sido un elemento importante, puesto que posee caractersticas especiales que le permiten ser materia prima para muchos procesos industriales, lo que a travs del tiempo ha llevado a la alteracin de su ciclo normal, encontrndose altas concentraciones del elemento en lugares circunscritos, especialmente en aquellos procesos relacionados con la extraccin y transformacin de oro (Seplveda et al. 2006). Se coincide con Alexander (2005) cuando plantea que, el mercurio es considerado un contaminante universal. Se ha demostrado la vulnerabilidad del hombre ante su poder txico al ser emitido a la atmsfera influyendo su contaminacin a travs del agua, el aire, el suelo y los alimentos. Al transformarse de mercurio en metilmercurio en medios acuticos, genera una potente neurotoxina que se acumula en ciertos tejidos vivos, principalmente el tejido nervioso, evitando su metabolismo lo cual provoca un efecto multiplicador en la concentracin del contaminante, efecto conocido como bioacumulacin. Este efecto se presenta en peces y otros animales, y luego en los seres humanos al pasar a formar parte de la cadena alimenticia, lo que representa un grave problema para la salud humana y ambiental. En tal sentido, es necesario e importante la implementacin de mtodos analticos capaces de precisar las concentraciones de mercurio, especialmente cuando ste se encuentra en cantidades muy pequeas, del orden de mg/kg o g/kg, en diversos tipos de matrices, para lo cual se requiere una previa extraccin cuantitativa, purificacin y concentracin del extracto obtenido antes de su deteccin y cuantificacin (Alexander, 2005). 1.2.1 Macro La produccin mundial de mercurio en el ao de 1985 fue de 7100 toneladas mtricas y en el ao 2000 fue reducida a 1800, evidencindose su disminucin, en especial, en pases del Contextualizacin (macro, meso, micro)

primer mundo (Espaa, Italia, Rusia, China, Estados Unidos y Yugoslavia) donde se han establecido prohibiciones. En promedio, se han producido aproximadamente 4000 toneladas de mercurio por ao emitidos directamente al ambiente en los ltimos 20 aos (PNUMA, 2005). Meso La extraccin de oro es considerada en Amrica Latina la fuente ms importante de contaminacin por mercurio. En 1996, en Amrica Central y Amrica del Sur se emple un estimado de 100 toneladas de Hg para la extraccin de oro artesanal. Segn la literatura consultada, entre 1977 y 1992 se descargaron alrededor de 1500 a 3000 toneladas de Hg en el ecosistema del Amazonas. Esto revela la contaminacin del sistema hdrico y el ecosistema a lo largo de las cuencas de Bolivia y Brasil. Tambin se reportan actividades de extraccin de oro artesanal en Colombia, Guyana, Nicaragua, Per, Suriname y Venezuela, generalizando el problema de contaminacin por Hg en Amrica Latina (Maisonet, 2002). Micro El Grfico 1.1 revela que el Ecuador posee yacimientos de oro dispersados en todo el pas. Sin embargo, la actividad minera de extraccin de oro se destaca en la zona Sur, en cuatro puntos geogrficos: Ponce Enrquez, Zaruma, Portovelo y Nambija. En este sentido, los datos reportados muestran que por cada gramo de oro extrado se emiten 1.5 gramos de mercurio al ambiente, el 50% de ste mercurio liberado se dispersa en el agua a travs de los relaves descargados en los procesos de lavado y concentrado de oro y el otro 50% se difunde al aire en los procesos de quemado de amalgamas (Ministerio del Ambiente, 2008; UNITAR, 2010). En un informe preliminar realizado por la Direccin de Medio Ambiente del Municipio de Guayaquil, los ros Siete, Tenguel, Gala y Chico, reportan valores de concentraciones de mercurio que fluctan entre 1.03 y 3.56 mg/kg, lo que supera hasta en 2.56 mg/kg el lmite mximo permisible establecido por la Unin Europea (EU), que es 1.0 mg/kg. A su vez, los ros Calera, Puyango y Nambija se encuentran afectados por la influencia de este metal pesado (Ministerio del Ambiente, 2008).

Grfico 1.1 Actividad Minera en el Ecuador Fuente: Ministerio del Ambiente, 2008. Uno de los procedimientos ms empleados para la comprobacin del grado de contaminacin con mercurio presente en el ambiente es mediante determinaciones analticas efectuadas en el tipo de matriz de estudio. Este servicio es ofertado por diferentes laboratorios acreditados por el OAE (Organismo de Acreditacin Ecuatoriana) en el pas. A continuacin, se presenta una lista de laboratorios que determinan la concentracin de mercurio por medio de espectroscopa de absorcin atmica (OAE, 2010). Laboratorio OSP, Oferta de Servicios y Productos, Facultad de Ciencias Qumicas Universidad Central del Ecuador. Laboratorio de Anlisis Qumico y Microbiolgico Instituto Nacional de Pesca INP. Laboratorio del Centro de Servicio para el Control de Calidad-CESECCA, Universidad Laica de Manab. Centro de Servicios Ambientales y Qumicos CESAQ-PUCE.

Laboratorios ANNCY. Laboratorio GRUENTEC Ca. Ltda. 1.2.2 Anlisis Crtico El anlisis crtico se sustenta a travs del rbol de problemas, el cual permite conocer las causas y efectos que se generan para la investigacin planteada (Ver Grfico 1.2). EFECTOS

Mayor Bioacumulacin de Mercurio

Falta de Laboratorio de Ensayos Acreditados

Incremento en los Niveles de Contaminacin

Desconocimiento del Cuidado de los Recursos Renovables

PROBLEMA

Carencia de Mtodos Analticos Validados

Inexperiencia en el Control de Residuos Txicos Excesiva Explotacin y Transformacin Contaminacin del Agua por efecto del Mercurio

Escasez de Normas Legales

CAUSAS

Aurfera

Grfico 1.2 rbol de Problemas para el Anlisis Crtico. Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011 Relacin Causa-Efecto Causa: Carencia de Mtodos Analticos Validados. Efecto: Falta de Laboratorios de Ensayo Acreditados.

El mercurio en bajas cantidades forma parte natural de la litsfera. Las actividades agrcolas e industriales del hombre moderno han aumentado los niveles normales de este metal en la atmsfera e hidrsfera, originando, en algunos casos, graves intoxicaciones en ncleos importantes de la poblacin (Ministerio del Ambiente, 2008). Por ejemplo, en la baha de Minamata, ubicada al sur-este de Japn, una fbrica de plsticos verti aguas residuales con un contenido de 0.1 ppb (partes por billn) de mercurio. Las aguas de la baha contenan 2 ppb, concentracin apta para beber. El plancton tomaba el agua con mercurio pero no lo eliminaba. Los peces pequeos que se acumulaban de plancton, tampoco lo excretaban, lo que gener una concentracin de mercurio de 200 ppb. Por la accin de la cadena alimenticia, los grandes peces acumularon un nivel de mercurio entre 4.000 y 20.000 ppb. En el ao 1956 se detect el primer caso de una enfermedad cuya causa no pudo ser demostrada sino hasta 1959, donde se atribuy a la ingesta de peces contaminados por mercurio. En tal sentido, el estudio mdico determin que el mercurio metilado en los sedimentos por accin bacteriana origin el sndrome txico conocido como enfermedad de Minamata de la cual muchos resultaron lisiados, paralizados, perdieron su visin, capacidades mentales o murieron (EPA, 1997). En realidad todas las formas de mercurio son potencialmente txicas, el rango de toxicidad vara considerablemente. Alrededor del 80% del vapor de mercurio presente en la atmsfera puede difundirse a travs de los pulmones hasta la sangre y luego hasta el cerebro, donde puede causar daos importantes prolongados en el sistema nervioso central y efectos perjudiciales en los sistemas digestivo, respiratorio e inmunitario y en los riones, donde, su semiperodo biolgico de permanencia dura aproximadamente dos meses, adems de provocar daos pulmonares, promueve la prdida de Ca y Mg, y es perjudicial por absorcin cutnea (Espaol, 2001). El mercurio y sus interacciones qumicas hacen que en la naturaleza se cumpla un ciclo, capaz de formar compuestos orgnicos, donde el xido de mercurio o sulfuro de mercurio (HgO o HgS) son metilados a metil o dimetil mercurio con la participacin de ciertos microorganismos, estos compuestos se caracterizan por ser altamente estables, con niveles de toxicidad superiores a las formas inorgnicas. Debido a ste efecto nocivo, an de pequeas concentraciones, resulta indispensable conocer en trminos cuantitativos su presencia en el medio ambiente (Saucedo et al, 2007). Los efectos adversos de la exposicin al mercurio para la salud pueden ser: temblores, trastornos de la visin y la audicin, parlisis, insomnio, inestabilidad emocional, deficiencia del crecimiento durante el desarrollo fetal y problemas de concentracin y retraso en el desarrollo durante la infancia. Estudios recientes parecen indicar que el mercurio tal vez carezca de umbral por debajo del cual no se producen algunos efectos adversos (Lauwery, 2010).

El mercurio inorgnico se excreta principalmente por las heces y la orina. Tambin se excretan pequeas cantidades por las glndulas salivares, lacrimales y sudorparas. En condiciones de exposicin crnica existe, una relacin entre la intensidad de la exposicin reciente al vapor de mercurio y la concentracin de mercurio en sangre u orina. Esta concentracin puede variar en funcin del consumo de pescado y del nmero de empastes dentarios con amalgama de mercurio (EPA, 1997). Es por ello que la incidencia de mercurio en el medio ambiente genera la implementacin de mtodos de anlisis especficos, desarrollados en laboratorios de anlisis qumico para obtener resultados cuantitativos rpidos, selectivos y sensibles. Estos suministran evidencia objetiva, obtenida en un determinado anlisis que proporciona datos confiables siendo un requisito importante para el alcance de la validacin de los mtodos (Bedoya, 2009). 1.2.3 Prognosis La obtencin de datos para la determinacin de mercurio por medio de espectroscopa de absorcin atmica por generacin de vapor fro, es el resultado de un proceso que comienza con la seleccin y validacin de un mtodo analtico, cuya ejecucin a de ser permanentemente controlada. Para su correcta seleccin es necesario considerar todos aquellos factores que pueden influir en la validez del resultado (extraccin, eliminacin de interferencias y determinacin). A su vez, es determinante conocer la dificultad que presentar la ejecucin del mtodo analtico, pues trabajar con lmites de determinacin muy bajos limita la obtencin de una precisin y exactitud adecuada a esos niveles. Cualquier mtodo analtico antes de ser utilizado debe ser validado; es decir, se deben realizan las comprobaciones que aseguran que el mtodo es cientficamente correcto en las condiciones en que va a ser aplicado. Segn Hanlon (2007), en el proceso de validacin se comprueban caractersticas tcnicas en cuanto a selectividad, especificidad, sensibilidad, linealidad, lmites de deteccin, cuantificacin, exactitud y precisin, siguiendo las Normas Internacionales establecidas. En este sentido, al no obtenerse la validacin del mtodo de anlisis para la determinacin de mercurio, se presenta un problema relacionado con la acreditacin del laboratorio y el control de calidad, originando una falencia al momento de servir de gua para los laboratorios que utilizan ensayos en reas relacionadas con la qumica ambiental. 1.2.4 Formulacin del problema Existen varios tipos de anlisis capaces de determinar mercurio en muestras de agua. Sin embargo, es preciso seleccionar un mtodo analtico capaz de establecer concentraciones

que puedan alcanzar determinaciones de mercurio hasta de 200 partes por trilln (ppt). La utilizacin de espectrofotometra de absorcin atmica con tcnica de vapor fro, favorece la trasformacin de la matriz de estudio, permitiendo establecer caractersticas de desempeo de los procedimientos, tales como: selectividad, exactitud, precisin, repetibilidad,

reproducibilidad, linealidad, lmites de deteccin y cuantificacin, medicin de la incertidumbre, sensibilidad, robustez y recuperacin, basadas en las exigencias expuestas por la INEN ISO/IEC 17025. 1.2.5 Interrogantes Es necesario implementar la validacin de mtodos analticos para la deteccin de mercurio mediante la tcnica de vapor fro por medio de espectroscopa de absorcin atmica? Cules son las probables interferencias que presenta el analito? Qu rango de incertidumbre debe presentar el mtodo analtico? Qu beneficio aportar a la comunidad, la validacin de un mtodo analtico que permita determinar la concentracin de mercurio en agua natural, residual y de consumo? 1.2.6 Delimitacin del objeto de investigacin rea Sub-rea Sector Sub-sector : Investigacin Aplicada : Qumica Analtica : Validacin : Mercurio

Situacin Geogrfica : Quito/Laboratorio de Servicios Analticos HAVOC Ca. Ltda. Espacial 1.3 Justificacin La presencia de mercurio en el ambiente tiene implicaciones importantes por los efectos txicos que produce en los seres vivos, debido a su acumulacin en los tejidos blandos, lo que provoca enfermedades irreversibles e incluso la muerte (Castellucci, 2005). A medida que aumenta la influencia del hombre sobre la naturaleza y aparecen nuevas necesidades como consecuencia de la vida en sociedad, el medio ambiente se deteriora cada vez ms (Saucedo et al, 2007). En tal sentido, el hombre debe armonizar entre el desarrollo tecnolgico, el avance de la civilizacin y el mantenimiento del equilibrio ecolgico, siendo de este modo indispensable : Julio de 2010 Febrero 2011

proteger los recursos renovables y no renovables a ms de tomar conciencia de que el saneamiento ambiental es fundamental para la vida sobre el planeta (Nebel, 1999). En tal sentido, es importante determinar los niveles de concentracin de mercurio en muestras de agua residual, natural y de consumo, a fin de identificar oportunamente posibles focos de contaminacin mediante el reporte de resultados confiables, con elevada sensibilidad, precisin, confiabilidad y bajos lmites de deteccin. Debido a esto, es significativo que el laboratorio de ensayos pueda disponer de procedimientos analticos adaptables a las condiciones del laboratorio, sin dejar de lado, el cumplimiento de los requerimientos establecidos en la Norma NTE INEN-ISO/IEC 17025:2005; lo cual demuestra la competitividad tcnica para la ejecucin del mtodo analtico en el pas. 1.4 1.4.1 Objetivos General Validar un mtodo analtico para la determinacin del mercurio en muestras de agua natural, residual y de consumo por medio de espectroscopa de absorcin atmica con tcnica de vapor fro. 1.4.2 Especficos Descubrir las mejores condiciones de gas de arrastre y agente reductor en las que el equipo de generacin de vapor fro se desempee de manera sobresaliente. Determinar el lmite de cuantificacin y de deteccin a travs del mtodo para el anlisis de mercurio en muestras de agua natural, residual y de consumo. Conocer el nivel de incertidumbre que se genera durante la ejecucin del proceso analtico. Corroborar que el mtodo analtico propuesto para la determinacin de mercurio en muestras de agua natural, residual y de consumo proporciona datos confiables.

CAPTULO II

2. Marco Terico 2.1 Antecedentes Investigativos Los laboratorios deben demostrar que sus mtodos analticos ofrecen resultados fiables, pues las decisiones que se toman estn basadas en la informacin que estos proporcionan. En este sentido, la validacin de las metodologas junto a otras actividades englobadas en el control del aseguramiento de la calidad permite demostrar a los laboratorios que sus mtodos analticos proporcionan resultados con un alto grado de confianza. Segn la norma NTE INEN-ISO/IEC 17025, los laboratorios deben validar todos los mtodos que estos utilicen, tanto los empleados por ellos mismos como aquellos procedentes de fuentes bibliogrficas o desarrolladas por otros laboratorios. Adems, es necesario que se validen los mtodos de referencia, as como todo el procedimiento analtico, teniendo en cuenta el intervalo de concentraciones y matrices de las muestras de rutina (Maroto, 2002). Los niveles de concentracin de mercurio se han obtenido utilizando espectrofotometra de absorcin atmica con tcnica de vapor fro en distintos tipos de matriz. Por ejemplo, se ha realizado la evaluacin de los aspectos bsicos del sistema de calidad implantado en el laboratorio de riesgos qumicos del Instituto Nacional de Salud de los Trabajadores (INSAT) de la Habana - Cuba en el ao 2005 (Novas et al, 2006). A su vez, un estudio realizado en Arequipa - Per ha establecido los niveles de exposicin ambiental, ocupacional y estado de salud de los nios de la comunidad minera artesanal de oro en el sector de Mollehuaca con el uso de esta tcnica en muestras biolgicas (orina) (ISAT, 2001). En muestras de agua, la validacin de un mtodo para determinar mercurio total y mercurio inorgnico se realiz en 2003 en Crdova (Valiente, 2005), adems se determin el impacto ambiental por la contaminacin de mercurio en aguas, peces y sedimentos en la cuenca del ro San Jorge, con el aval del Centro de Investigaciones de la Universidad de Crdoba (Marrugo & Ceballos, 2006). 2.1.1 Los Metales Pesados en el Medio Ambiente Los metales pesados son componentes naturales de la corteza terrestre, los cuales tienen una concentracin inferior al 0.01%. El trmino de metal pesado, refiere a cualquier elemento qumico metlico que tenga una relativa densidad alta y sea txico o venenoso en concentraciones bajas. En el Grfico 2.1, se observa que tanto en el suelo, agua y aire existen metales pesados que se encuentran en bajas concentraciones y tienen la capacidad de provocar cambios evolutivos debido a sus efectos dainos en elementos biticos, dado a que tienden a

bioacumularse y no pueden ser degradados o destruidos. La accin provocada por la lluvia cida o la actividad industrial genera la formacin de grietas en los suelos, ocasionando que los metales pesados penetren hacia aguas subterrneas, ros, lagos, mares. En pequeas proporciones se incorporan a los cuerpos por medio del alimento, el agua potable y el aire. Sin embargo, en concentraciones altas pueden conducir a la intoxicacin. El envenenamiento por metales pesados podra resultar, de la contaminacin del agua potable, las altas concentraciones en el aire cerca de fuentes de emisin, o producto de la ingesta de alimentos (Baird, 1999).

Grfico 2.1 Procesos de absorcin de metales pesados Fuente: Kiely, 1999 2.1.2 La Intervencin de Mercurio (Hg) en el Ecosistema. Caractersticas y Propiedades

El mercurio se manifiesta de manera natural en el medio ambiente, ocupa el lugar 67 de abundancia entre los elementos de la corteza terrestre. Rara vez se le encuentra en estado puro, de color blanco plateado y brillante, se caracteriza por ser el nico metal lquido a temperatura ambiente, lo cual no es buen conductor del calor comparado con otros metales, pero s es buen conductor de la electricidad. Se combina fcilmente con muchos otros metales como el oro o la plata produciendo amalgamas. Es insoluble en agua pero soluble en cido ntrico y cido sulfrico concentrado. Es incompatible con el acetileno, el amonaco, el cloro y los metales (Lacerda & Salomons, 2005). El mercurio en su estado ms conocido es bivalente, esto significa que se asocia con slo dos tomos. Es daino por inhalacin, ingestin y contacto: se trata de un producto muy

irritante para la piel, ojos y vas respiratorias (Housecraft y Sharpe, 2006). Si no est encapsulado el mercurio metlico, usualmente a temperaturas por encima de los 40 C se volatiliza parcialmente formando vapores de mercurio que son incoloros e inodoros, txicos y corrosivos, ms pesados que el aire. La emanacin de vapores de mercurio presenta una relacin directamente proporcional con la temperatura, esto es, a mayor temperatura, mayor cantidad de vapores de mercurio emanados (Lacerda & Salomons, 2005). En este sentido, la Tabla N2.1 contiene informacin acerca de las propiedades fisicoqumicas ms importantes del mercurio: Tabla N2.1 Propiedades Fsico-Qumicas
PROPIEDAD
Nombre Nomenclatura Nmero atmico Valencia Estado de oxidacin Electronegatividad Radio covalente () Radio inico () Radio atmico () Configuracin electrnica Primer potencial de ionizacin (eV) Masa atmica (g/mol) Densidad (g/ml) Punto de ebullicin (C) Punto de fusin (C) Slido (at) Dilatacin

DETALLE
Mercurio Hg 80 1,2 +2 1,9 1,49 1,10 1,57 (Xe)4f145d106s2 10,51 200,59 16,6 357 -38,4 7.640 Uniforme

Fuente: Proske et al, 1960 y Lenntech, 2009. El mercurio puede enlazarse con otros compuestos como mercurio monovalente Hg (I) o divalente Hg (II). A partir del Hg (II) se pueden formar diversos compuestos orgnicos e inorgnicos de mercurio. Algunos de los compuestos inorgnicos de mercurio son: sulfuro de mercurio (HgS), xido de mercurio (HgO) y cloruro de mercurio (HgCl2) conocidos como sales de mercurio. La mayora de estos compuestos son polvos o cristales blancos, a excepcin del sulfuro de mercurio, que es rojo y se vuelve negro con la exposicin a la luz. Algunas sales de mercurio como el HgCl2 son lo bastante voltiles para existir como gas atmosfrico. Sin embargo, la solubilidad en agua y reactividad qumica de estos gases inorgnicos de mercurio hacen que su degradacin en la atmsfera sea mucho ms rpida que el mercurio elemental. Esto significa que la vida atmosfrica de los gases de mercurio divalentes son mucho ms corta en relacin al gas de mercurio elemental (Lacerda & Salomons, 2005).

Cuando el mercurio se combina con carbono se forman compuestos conocidos como compuestos "orgnicos" de mercurio u organomercuriales. Existe una gran cantidad de compuestos orgnicos de mercurio como el di-metil-mercurio, fenil-mercurio, etil-mercurio y metil-mercurio que es el ms conocido de todos los compuestos orgnicos por ser generado por microorganismos y procesos naturales. El metilmercurio, es un compuesto particularmente inquietante para la comunidad porque puede acumularse en muchos peces de agua dulce y salada, as como en mamferos marinos comestibles (O'Neill, 2005). 2.1.2.1 Ciclos del Mercurio en el Medio Ambiente En su ciclo global, el mercurio pasa de los continentes, por desgasificacin a los ocanos, gracias a la accin de la lluvia y la escorrenta. El mercurio que llega a los ocanos se volatiliza y se puede depositar nuevamente en los continentes por accin de los vientos o en los mismos ocanos (Seplveda et al, 2006). Por ello, las reacciones de xido-reduccin transforman las sales inorgnicas de mercurio (HgCl2, HgO y HgS). El HgS insoluble, al oxidarse se transforma en sulfitos y sulfato de mercurio solubles, que permiten la ionizacin del metal y su participacin en reacciones qumicas ulteriores. Los vapores de mercurio se oxidan y se transforman en mercurio inico divalente en presencia de agua y oxgeno. El mercurio inico divalente (Hg+2) puede sufrir dos importantes reacciones en el medio. La primera es la reduccin a vapor de mercurio metlico en condiciones reductoras apropiadas con ayuda de algunas bacterias del gnero Pseudomonas. Su biotransformacin permite que el plancton contaminado con metil-mercurio sirva de alimento para pequeos peces y mariscos que bioacumulan este elemento, los peces de mayor tamao y los depredadores, que se alimentan de los de menor tamao, concentran an ms el mercurio en sus tejidos, proceso conocido como biomagnificacin. Estos peces pueden ser comidos por animales superiores como aves o mamferos, incluso el hombre (Valiente, 2005). Este proceso se encuentra evidenciado en el Grfico 2.2. La segunda reaccin es la conversin a compuestos de metil y di-metil-mercurio y las interconversiones entre estos compuestos; dichas metilaciones se producen anaerbica y aerbicamente. La va anaerbica comprende la metilacin de mercurio inorgnico por compuestos de metilcobalamina producidos por bacterias metanognicas en un ambiente moderadamente reductor. En la va aerbica, el metil-mercurio unido a la homocistena, se metila por procesos celulares que, normalmente, dan lugar a la formacin de metionina (Seplveda et al, 2006).

Grfico 2.2 Modelo conceptual del ciclo del mercurio en el medio ambiente Fuente: Valiente, 2005 2.1.2.2 Usos Industriales del Mercurio El mercurio metlico se utiliza para la fabricacin de interruptores elctricos y conmutadores automticos para los refrigeradores como material lquido de contacto, como fluido de trabajo en bombas de difusin en tcnicas de vaco, en la fabricacin de rectificadores de vapor de mercurio, termmetros, barmetros, tacmetros y termostatos. En la manufactura de lmparas de vapor de mercurio y tubos fluorescentes. Se utiliza en la formacin de amalgamas de plata y zinc en odontologa como empastes de dientes. Se usa como ctodo en la produccin electroltica como electrodos de referencia en la medicin de potenciales y en titulaciones potenciomtricas (Carrasquero & Adams, 2002). El HgCl2, precipita protenas y se usa como conservante de tejidos y catalizador qumico. El cloruro mercurioso o calomel se usa en teraputica dermatolgica como mercurio amoniacado antisptico y antipsorisico. El xido rojo de mercurio se emplea en la fabricacin de las pinturas anti-incrustantes que se aplican en los cascos de los barcos y como pigmento rojo. Los xidos sirven tanto para hacer bateras secas de larga duracin como para producir antispticos. Las sales oxomercricas, como el sulfonato de mercurio, sirven de catalizadores en la sntesis de cido actico, cloruro de vinilo y metilestireno (Revelle & Revelle, 1984). El nitrato cido de mercurio (mordiente de piel de conejo para convertirlo en fieltro) para taxidermia y tratamientos especiales de pieles. El fluoruro mercrico para la fluoracin de compuestos orgnicos; las sales en las pinturas protectoras, el tratamiento de la madera y el papel. Las sales mulcionadas son usadas como frmacos dermatolgicos tpicos (psoriasis,

pigmentaciones y antispticos). El fulminato de Hg es detonante de cartuchera, fcilmente absorbible y custico irritante. El acetato de mercurio (alquil) se usa en el tratamiento de granos y simientes, como plaguicida en rboles frutales y como absorbente del etileno. Los fenilmercricos se utilizan en agricultura como antispticos para el tratamiento de la madera y los granos. El mercurocromo, el mercurofn, el timerfonato sdico y el timerosal son frmacos antispticos (Seplveda et al, 2006). 2.1.2.3 Contaminacin Provocada por Mercurio Debido a la toxicidad que presentan los metales pesados es importante mencionar que no se han encontrado mtodos de destruccin o degradacin, por lo cual estos deben ser dispuestos de una forma tal que sean inmovilizados para minimizar su dispersin y las consecuencias de su contaminacin tanto en plantas, agua, aire, suelo, animales y el hombre (Seplveda & Velasco, 2002). El factor a tener en cuenta ante un posible contaminante es su bioacumulacin, ya que cuando este tipo de sustancias penetran en los seres vivos no son metabolizadas (Colombo et al, 2008). La contaminacin existente provocada por la presencia de mercurio en el medioambiente es una afliccin mundial. En el planeta la concentracin de mercurio siempre has sido la misma, as como con el resto de los elementos qumicos naturales, pero la contaminacin surge de la mayor movilizacin que el mercurio sufre desde el comienzo de la era industrial (Snchez, 2005). Las actividades industriales que hoy por hoy continan liberando al ambiente contaminantes mercuriales son, la obtencin de oro y plata a partir de minerales por medio de la formacin de amalgamas mercuriales; bateras; incineradores de residuos domiciliarios; hospitalarios e industriales; la fabricacin de termmetros; barmetros y de contadores directos de corriente elctrica; lmparas elctricas y vlvulas de radio; la produccin de hilo y varillas de tungsteno-molibdeno; la fabricacin de compuestos farmacuticos e instrumentos quirrgicos que contienen sales de mercurio; la tincin de cristales pticos y grabados fotogrficos; el encurtido del cuero y la manufactura de sombreros de fieltro; la identificacin de huellas dactilares mediante el empleo de un polvo de mercurio y yeso y el relleno de cavidades dentarias con amalgamas (Valiente, 2005). En la Tabla 2.2, se pueden apreciar los porcentajes de consumo promedio de mercurio en el grupo de pases llamados industrializados en Amrica, pases denominados desarrollados o industrializados segn la ONU los cuales son: Canad, Estados Unidos y Barbados. De alguna manera, estos pases denotan la dimensin de los riesgos, de acuerdo con cada quehacer industrial (Lacerda & Salomons, 2005):

Tabla N2.2 Consumo de mercurio en Pases Industrializados

ACTIVIDAD INDUSTRIAL
Plantas de compuestos cloro-alcalis Equipo elctrico Usos militares Pintura Sistemas de medicin y control Agricultura Odontologa Laboratorios

CONSUMO DE MERCURIO
25% 20% 20% 15% 10% 5% 3% 2%

Fuente: Manuhan, 2002 y Seplveda et al, 2006. El envenenamiento agudo por mercurio se caracteriza por trastornos de la funcin intestinal y renal, y por alteraciones del sistema nervioso central. Las exposiciones leves estn caracterizadas por prdida de la memoria, temblores, inestabilidad emocional (angustia e irritabilidad), insomnio e inapetencia. A exposiciones moderadas, se observan desrdenes mentales ms importantes y perturbaciones motoras. Las exposiciones breves a altos niveles de vapor de mercurio pueden producir daos pulmonares y la muerte (Valiente, 2005). 2.1.2.1 Lmites de Exposicin Permisibles de Mercurio Los lmites permisibles para el mercurio son segn TLV (valores lmite umbral) en Hg0 de 0.05 mg/m3. En TWA (media ponderada en el tiempo) 0.01 mg/m3. En STEL (Lmite de exposicin a corto plazo) 0.03 mg/m3. En el caso de vapor de mercurio, su exposicin mxima debe ser de 0.05 mg/m3 segn la TWA. La FDA de los Estados Unidos, fij un mximo permisible de 0.5 ppm en los alimentos; la OMS en 1971 fij para la ingesta semanal 0.3 mg de Hg metlico y 0.2 mg de metil-mercurio; y en Espaa el lmite permisible para alimentos es de 1 mg/L (Lacerda & Salomons, 2005). La normativa que controla los lmites permisibles de mercurio en agua, es el TULAS, con lmites mximos permisibles segn el uso que se le dar al agua. En este sentido, el Anexo 1, expone las tablas que confirman la concentracin mxima de Hg en los distintos tipos de agua, tal es el caso de las aguas de consumo humano y uso agrcola los cuales presentan un lmite de 0.001mg/L, para aguas de uso pecuario y de descarga al sistema de alcantarillado con una concentracin de 0.01mg/L y en agua dulce con un lmite de concentracin del 0.005mg/L (TULAS, 2003).

2.1.3

Origen y Clases de Contaminacin del Agua Un hecho que agrava la ya escasa disponibilidad de agua dulce, es la contaminacin a

causa de actividades humanas. Aunque tambin existe la contaminacin natural, que es aquella provocada por algunos fenmenos naturales como las corrientes marinas (Corriente del Nio), las mareas rojas o los aluviones (Snchez, 2005). La contaminacin directa de las aguas por los vertidos incontrolados de algunas industrias a travs de grandes tubos a ros, lagos o mares es la accin que ms afecta a la flora y la fauna acutica, en especial a los peces, que son, ampliamente, el alimento ms sometido a la contaminacin mercurial. Por ejemplo, a medida que se asciende en la cadena trfica o alimentaria, los niveles de contaminacin mercurial son mayores, as, los peces depredadores acumulan ms mercurio que aquellos que estn en niveles ms bajos de la cadena alimenticia (Nebel, 1999). La contaminacin del agua es un problema complejo, que se clasifica en tres tipos que inciden en gran medida sobre el agua, estas son: la contaminacin por residuos industriales como la explotacin minera, forestal y la agricultura, los cuales arrojan residuos industriales lquidos y productos qumicos txicos a las redes de alcantarillado, al suelo o directamente a los cursos de agua. De la misma manera, algunos compuestos orgnicos sintticos producidos en procesos industriales (pulpa y papel, qumicos, relaves mineros, petroqumicos, metalrgicos, textiles) van a parar a ros o al mar (Metcalf & Eddy, 2006). La contaminacin difusa se manifiesta tanto en aguas subterrneas, donde las filtraciones en las capas de la tierra absorben la lluvia con sedimentos, sales de mercurio, fertilizantes y pesticidas, como en las aguas servidas que son utilizadas para riego, provenientes de las actividades agrcola, forestal, acucola o minera (Snchez, 2005). Y la contaminacin por petrleo y otras sustancias txicas donde los derrames accidentales en las costas marinas, el ocano, los ros o lagos provocan un detrimento en el ecosistema, matando especies o provocando efectos duraderos en organismos biolgicos propios de la zona al retener alta concentracin de contaminantes (Tapia & Toharia, 2005). El contenido de las aguas de formacin vara en los diferentes yacimientos, pero puede contener adems de petrleo y aniones, metales pesados como el mercurio (American Petroleum Institute, 2005). A su vez, los contaminantes orgnicos persistentes (COPs) como el metilmercurio o el di-metil-mercurio, resistentes a la desintegracin, se acumulan en los tejidos de organismos vivos, alterando el funcionamiento del sistema hormonal que, a su vez, provoca problemas de infertilidad, induce el cncer, afecta al sistema inmunolgico e incluso puede llegar a provocar la muerte (Nebel, 1999).

Cuando todas estas clases de contaminacin se intensifican, el agua no tiene tiempo suficiente para auto depurarse por vas naturales y requiere de tratamientos especiales que la limpien. Si esto no ocurre, se mantiene contaminada por ms y ms tiempo, amenazando la disponibilidad de agua limpia para el hombre y afectando los sistemas biolgicos naturales de peces y otras formas de vida hidrobiolgica (Revelle & Revelle, 1984). 2.1.4 Tcnicas de Deteccin de los Niveles de Contaminacin Para detectar y medir la concentracin de mercurio en los diferentes estratos de la biosfera se utilizan muchas tcnicas, entre las cuales se destacan; el mtodo colorimtrico de la ditizona, el fotmetro para luz ultravioleta, la absorbimetra atmica, el mtodo de espectrofotometra de absorcin atmica sin llama y el detector de gases (Seplveda & Velasco, 2002). 2.1.4.1 Generalidades de la Espectroscopa de Absorcin Atmica (AAS). Principios y Usos Los mtodos analticos espectroscpicos se fundamentan en medir la cantidad de radiacin que producen o absorben las especies moleculares o atmicas de inters. Es posible clasificar los mtodos espectroscpicos segn la regin del espectro electromagntico utilizado para la medida. Las regiones del espectro que se han utilizado abarcan los rayos gama, rayos X, radiacin ultravioleta (UV), radiacin infrarroja (IR), microondas y radiofrecuencias (RF). La espectroscopa, es conocida como la ciencia que establece las interacciones de la radiacin electromagntica absorbida, dispersada o emitida por tomos, molculas u otras especies qumicas (Skoog et al, 2005). Dado que cada especie posee estados energticos caractersticos, la espectroscopa puede utilizarse para identificarlas y cuantificarlas. Constituye la base del anlisis espectroqumico, donde la interaccin de la radiacin electromagntica con la materia genera informacin cualitativa y cuantitativa acerca de la composicin de una muestra. Dentro del anlisis espectroqumico, la espectroscopa atmica estudia la absorcin y emisin de la radiacin por especies atmicas, las cuales son generadas y examinadas en un medio gaseoso de alta energa, que constituye una fuente de vaporizacin-atomizacin-ionizacin-excitacin, la atomizacin en particular se logra nicamente a altas temperaturas, salvo el caso del mercurio que presenta presin de vapor favorable a temperatura ambiente. (Rouessac & Rouessac, 2007). La espectroscopa atmica se usa ampliamente para analizar tomos metlicos en cantidades traza (ppm, ppb) en minerales, muestras biolgicas, metalrgicas, farmacuticas, aguas, alimentos, suelos y sedimentos. En el Grfico 2.3, se muestra un esquema tpico del equipo de absorcin atmica que consiste en: una lmpara de ctodo hueco, una lmpara de

deuterio para correccin de lectura por absorcin no atmica, un modulador o detector, un atomizador, un monocromador y un transductor o amplificador (Manosalvas, 2005; Harris, 2007).

Grfico 2.3 Esquema de equipo de absorcin atmica Fuente: Castro, 2000. 2.1.4.2 Tcnica de Atomizacin con Generacin de Vapor Fro. La tcnica de atomizacin por vapor fro, es aplicable solo a la determinacin de Hg por ser el nico metal que tiene una adecuada presin de vapor a temperatura ambiente, por ello no es necesario entregarle la energa de una llama a la muestra de anlisis (Antua, 2007). Se convierte todo el mercurio de la muestra en Hg (II) y posteriormente se reduce a Hg0 por adicin de cloruro de estao (SnCl2) o borohidruro de sodio (NaBH4) que actan como agente reductor. El mercurio voltil es acarreado por un gas inerte (Ar o N2) a una celda de cuarzo interpuesta sobre el paso ptico. Dependiendo de la cantidad de Hg que posea la muestra de anlisis, este se abre camino, con la ayuda del gas de arrastre hasta llegar a la celda, absorbiendo la energa proveniente de la lmpara y traducindose en seal de absorbancia como muestra el Grfico 2.4 (Harvey, 2002). La tcnica de generacin de vapor fro a travs de espectroscopa de absorcin atmica consta de tres etapas fundamentales que son: la generacin y volatilizacin del hidruro, la transferencia del mismo y su posterior atomizacin en el espectrmetro de absorcin atmica. La reaccin generada por el borohidruro de sodio (NaBH4), el cido clorhdrico (HCl), y la muestra de anlisis es conducida a travs del equipo de generacin hacia el espectrmetro de absorcin atmica por medio del efecto del flujo del gas de arrastre (Ar o N2), del cual se obtiene: NaBH4 + 3H2O + HCl H3BO3 + NaCl + 8H*

8H* + Am+ AHn + (8-n) 2H2 (exceso) Donde H* es el hidrgeno naciente; A es el elemento formador de hidruro y m su estado de oxidacin (que puede no coincidir con n, el ndice de coordinacin) (Skoog et al, 2005).

Grfico 2.4 Esquema del proceso de determinacin de mercurio por generacin de vapor fro Fuente: Skoog et al, 2005 2.1.4.3 Mtodos de Cuantificacin La cuantificacin se basa en la ley de Lambert-Beer, que expresa lo siguiente: cuando un haz de luz de una longitud especfica pasa a travs de una sustancia, cierta cantidad de radiacin es absorbida por la sustancia y otra porcin se transmite a travs de sta. La cantidad de energa absorbida, depende de la concentracin de sustancia y del trayecto ptico que recorre el haz de luz. La transmitancia (T) de la solucin, es la fraccin de radiacin incidente transmitida por la solucin, que se representa en la ecuacin 2.1 (Harris, 2007). T = I / Io En donde: T= transmitancia I = radiacin transmitida I = radiacin incidente (2.1)

La absorbancia es el logaritmo negativo de la transmitancia, que se exhibe en la ecuacin 2.2:

ABS = - logT

(2.2)

En la ecuacin 2.3 se demuestra que la absorbancia, es directamente proporcional a la longitud de la trayectoria de la radiacin (b) y concentracin de la sustancia absorbente (c). Donde (a) es una constante de proporcionalidad, cuyo nombre est dado por las unidades en que esta constante est expresada. Si sus unidades son litro g-1 cm-1 se llama coeficiente de absorcin, y si son litro mol-1 cm-1 se llama absortividad molar (Harris, 2007). ABS = a*b*c (2.3)

La cuantificacin se puede llevar a cabo mediante una serie de mtodos entre los que se puede citar la construccin de curvas de calibracin y el mtodo de adiciones. El anlisis mediante curvas de calibracin se hace elaborando una grfica de la absorbancia versus la concentracin, midiendo la absorbancia de varios patrones de distintas concentraciones, con lo cual se obtiene una lnea recta que pasa por el origen. La pendiente de esta recta estar dada por el coeficiente de absorcin (a) y el trayecto ptico (b), por lo tanto a medida que aumenta la concentracin (c), aumenta la absorbancia de la muestra (Harvey, 2002). 2.1.4.4 Interferencias Analticas En ciertas determinaciones se pueden presentar problemas en el anlisis, estos pueden ser resueltos en dependencia de la experiencia y conocimientos que tenga el analista, sobre la metodologa a utilizar. En espectrofotometra existen ciertas interferencias analticas las cuales pueden producir errores en la cuantificacin, pero pueden ser corregidas segn su origen. Las interferencias pueden ser de varios tipos: espectrales, qumicas, por ionizacin y de matriz (Harvey, 2002). Las interferencias se producen cuando otro tomo distinto al analito absorbe una longitud de onda con una diferencia de 1nm. Estas interferencias estn ntimamente relacionadas con el poder de resolucin del monocromador, y puede ser minimizada por modulacin de la amplitud de la fuente de radiacin (Haswell, 1991). Estas son ms comunes que las interferencias espectrales, pueden ser minimizadas si se escogen las condiciones de trabajo adecuadas (Harvey, 2002). Existen algunos compuestos que son difciles de disociar, esto significa que no se los puede atomizar con facilidad. El uso de llamas de distintas temperaturas o el uso de agentes liberadores como el EDTA, son formas de corregir estas interferencias (Haswell, 1991). Las interferencias por ionizacin se presentan en llamas muy calientas. A temperaturas elevadas de la flama y del horno, los tomos con bajos potenciales de ionizacin son

efectivamente ionizados. Cualquier ionizacin reduce la poblacin de los tomos libres tanto en el estado basal como en el estado excitado, disminuyendo entonces la sensibilidad de la determinacin (Skoog & West, 2001). Este problema se resuelve rpidamente aadiendo un exceso (aproximadamente de 100 veces) de un elemento ms fcilmente ionizable, como K, Cs o Sr, para inhibir la ionizacin tanto en las soluciones de la muestra como en las de calibracin. Tambin puede ser eliminada al controlar las condiciones de anlisis, como la temperatura de llama y flujo de los gases (Haswell, 1991). Finalmente, las interferencias de matriz, se registran, debido a que cada matriz lquida de una muestra tiene distintas composicin, por lo tanto, la tensin superficial y la viscosidad sern diferentes, estas caractersticas pueden afectar el proceso de nebulizacin y posteriormente la cuantificacin del analito (Harvey, 2002). El principal problema, es que la velocidad de aspiracin de la muestra difiera a la velocidad de aspiracin del estndar. Si estas caractersticas no se controlan de modo que no cambien durante el anlisis, la cantidad de tomos en la llama en un momento dado puede variar y dar lecturas incorrectas. Para evitar este tipo de interferencia hay que tener una composicin igual entre las muestras y los patrones, de modo que estos ingresen y se nebulicen de la misma forma (Haswell, 1991). 2.1.5 Proceso de Validacin de Mtodos Analticos La validacin de mtodos, es una de las medidas universalmente reconocidas como parte necesaria de todo sistema completo de garanta de calidad en la qumica analtica. Es la confirmacin mediante el suministro de evidencia objetiva que revele el cumplimiento de requisitos para una utilizacin o aplicacin especfica de un mtodo de anlisis previsto. En el pasado, ISO, IUPAC y AOAC INTERNATIONAL han cooperado para elaborar protocolos o directivas comunes sobre la realizacin e interpretacin de estudios de la eficiencia de mtodos analticos, sobre ensayos de aptitud, sobre control interno de calidad en laboratorios de qumica analtica, y sobre el uso de datos de recuperacin en las mediciones analticas. La IUPAC, se ha encargado ahora de elaborar protocolos para establecer directrices de validacin de mtodos de anlisis en un solo laboratorio. Dichas directrices ofrecen recomendaciones mnimas sobre los procedimientos que deben seguirse para garantizar una validacin adecuada de los mtodos analticos (Castellucci, 2005). La validacin es necesaria porque proporciona un alto grado de confianza y seguridad en el mtodo analtico y en la calidad de los resultados lo cual permite un conocimiento profundo de sus caractersticas de funcionamiento. Los mtodos analticos deben ser validados para cumplir con las exigencias legales requeridas por organismos de acreditacin (FDA, 2000).

La validacin se aplica a un protocolo definido para determinar un analito especfico y el rango de concentraciones en un tipo de material de prueba particular utilizado para un propsito especfico. En general, la validacin debe comprobar que el mtodo se comporte de forma adecuada para la finalidad perseguida en todo el conjunto de concentraciones del analito y de materiales de referencia a los que se aplica. Por consiguiente, estas caractersticas y los criterios de adecuacin al propsito, deben especificarse en su totalidad antes de realizarse la validacin (Castellucci, 2005). 2.1.5.1 Requerimientos para la Validacin de Mtodos La autora coincide con el criterio que para validar un mtodo analtico se requiere de ciertas normas, que incluyen buena organizacin funcional, el suficiente nmero de analistas capacitados, instalaciones adecuadamente abastecidas con equipos y aparatos apropiados, calificados y en buen estado de funcionamiento para el desarrollo de los procesos analticos, mtodos escritos disponibles, actualizados y certificados, procedimientos adecuados para toma de muestras, utilizacin de reactivos correctos y soluciones valoradas idneas, as como material auxiliar pertinente y en perfectas condiciones de uso, utilizacin de patrones y muestras de referencia, verificacin y supervisin de los resultados obtenidos de cada anlisis y que los registros de dichos anlisis efectuados sean auditables, proporcionar una correcta informacin y comunicacin de los resultados obtenidos, higiene limpieza y seguridad, control y seguimiento de calidad mediante inspecciones y auditoras internas con personal de la propia seccin de trabajo (Norma INEN ISO/IEC 17025, 2005). El laboratorio, debe utilizar los mtodos de ensayo o de calibracin que satisfagan las necesidades del cliente y que sean apropiados para los ensayos o calibraciones que se realizan. Es necesario elaborar un procedimiento que especifique las acciones a realizarse, y todo lo relativo al ensayo, condiciones ambientales, equipo pertinente, reactivos, manipulacin, preparacin de estndares, material de referencia, muestras de anlisis y clculos (Norma INEN ISO/IEC 17025, 2005). La normalizacin de mtodos es una actividad previa a la validacin, para obtener un conocimiento general del mtodo de ensayo; se aplican los pasos para poner el mtodo en funcionamiento de forma razonable y consistente, si no se logran satisfacer los criterios en esta etapa, se puede corregir y hacer ajustes (FDA, 2000). Los parmetros de validacin deben ser entendidos antes de la ejecucin de la misma; si el mtodo es oficial o ya tiene parmetros estadsticos, debe ser verificado en condiciones de laboratorio. En la Tabla 2.3, se enuncian las medidas que un mtodo analtico debe seguir para poder ser validado.

Tabla N2.3 Parmetros de Validacin de un Mtodo Analtico

PARMETRO
Selectividad / Especificidad

DEFINICIN
Capacidad de un mtodo analtico para medir exacta y especficamente un analito sin interferencias.

Funcin de respuesta instrumental conocida como recta de calibrado: Linealidad y = a+bx Donde y es la linealidad Que es la proporcionalidad entre concentracin de analito y el sistema de respuesta. Sensibilidad Considerada como la pendiente de la curva, es la capacidad de un mtodo analtico de registrar ligeras variaciones de la concentracin. Repetibilidad: Precisin de un anlisis donde la nica fuente de variacin es el anlisis de muestras repetidas. Precisin Reproducibilidad: Precisin obtenida cuando se comparan los resultados de distintas muestras, anlisis o mtodos. Lmite de Cuantificacin Lmite de Deteccin Es la ms baja concentracin del analito que puede ser determinada con un nivel aceptable de precisin, repetibilidad y exactitud exigida por la norma o cliente. Mnima concentracin de analito que puede detectarse pero no necesariamente cuantificarse. Es determinado comparando los valores obtenidos con los valores definidos como tericos. Exactitud % Recuperacin = Xobtenido 100 Xte rico

Intervalo o Rango de Trabajo Incertidumbre

Est comprendido entre el lmite de cuantificacin y el valor del mayor patrn usado.

Gama de valores posibles que es razonable esperar de una medida o resultado; abarca todos los errores, tanto sistemticos como aleatorios.

Fuente: Harvey, 2002 y Winefordner, 2003. 2.1.5.2 Estimacin de los Criterios de Aceptacin Los requisitos pueden ser establecidos por la demanda que ha originado la necesidad analtica de determinar lmites de cuantificacin, exactitud y precisin. Si no se dispone de requisitos regulados, la fuente de informacin es bibliogrfica o por la experiencia adquirida durante la normalizacin del mtodo (Colegio Nacional de Qumicos Farmacuticos Bilogos, 2002). La obtencin de la funcin de respuesta instrumental, puede realizarse con seis niveles de concentracin (5 patrones ms un blanco), cinco veces en condiciones de repetibilidad. Para la determinacin de la exactitud (recuperacin) de materiales de referencia, mediantes tres

niveles, con cinco repeticiones. El procesamiento de las muestras se realiza en condiciones de repetibilidad y aplicando el mtodo completo. En el tratamiento estadstico se realiza el anlisis de varianza simple de los resultados obtenidos para el clculo de la precisin por niveles, adems de los lmites de deteccin y cuantificacin, el intervalo de trabajo y la incertidumbre asociada a cada nivel (Norma INEN ISO/IEC 17025, 2005). 2.1.5.3 Exigencias para la Elaboracin de Informes de Resultados Mediante un informe de ensayo validado que resuma los parmetros determinados, se deben recopilar las caractersticas del mtodo. Todos los datos obtenidos de la realizacin deben ser perfectamente auditables en los diarios de laboratorio u hojas de trabajo. Los informes tcnicos emitidos deben incluir las referencias de la calibracin y cualificacin de los instrumentos utilizados, y los resultados de la verificacin de los parmetros de idoneidad, antes de iniciar el estudio de la validacin. En tal sentido, se debe describir el procedimiento del mtodo utilizado, adems, se entregan los resultados de cada parmetro incluyendo esquemas, copias originales de espectros, curvas de calibracin, etc. Un certificado de validacin deber ser firmado por las personas responsables, e incluye un resumen del protocolo y de los resultados obtenidos o bien anexarse al final del informe. Finalmente, los documentos referentes a la validacin se deben archivar adecuadamente durante todo el tiempo de vigencia del mtodo analtico validado (Harvey, 2002; Norma INEN ISO/IEC 17025, 2005). 2.1.5.4 Alcance de los Estudios de Validacin El alcance de la validacin de un mtodo nuevo, modificado o desconocido depende del estatus del mtodo y de la competencia del laboratorio encargado de llevarla a cabo (Castellucci, 2005). Mediante un ensayo colectivo, el laboratorio debe comprobar si es capaz de alcanzar su rendimiento publicado o si es capaz de cumplir los requisitos de las tareas analticas. El laboratorio debe realizar estudios de la fidelidad, del sesgo (incluidos estudios de variacin de la matriz) y posiblemente estudios de la linealidad, aunque puede omitir algunas pruebas, como por ejemplo la de robustez (Colegio Nacional de Qumicos Farmacuticos Bilogos, 2002). En el laboratorio, es necesario utilizar un mtodo validado, pero con una nueva matriz, en un ensayo colectivo que debe ser comprobado. Se contrasta el mismo rango de validacin con la aplicacin de un mtodo emprico. Es decir, la cantidad estimada es simplemente el resultado hallado tras aplicar el procedimiento. Esto difiere de las mediciones que valoran cantidades independientes del mtodo, como la concentracin de un analito particular en una muestra, en las que el sesgo del mtodo es convencionalmente cero y la variacin de la matriz es irrelevante (Winefordner, 2003).

2.1.5.5 Aseguramiento de la Calidad de los Resultados de Ensayo y de Calibracin Los documentos emitidos son una parte esencial de la validacin ya que intervienen en todo el proceso. Consiste en un plan prctico diseado para el desarrollo de la validacin tanto en la parte experimental como en los clculos de la misma. En la Tabla 2.4, se presenta el esquema de un protocolo de validacin (Winefordner, 2003; Norma INEN ISO/IEC 17025, 2005): Tabla N2.4 Fases de Validacin de Mtodos Analticos
ITEMS
Objetivo Responsables

DEFINICIN
Exposicin clara de la finalidad de la validacin y propuesta de fechas de inicio y final. Personas que llevarn a cabo la validacin y quienes aprobarn. Se identificarn los factores de mayor influencia sobre las caractersticas de funcionamiento del mtodo analtico. Se seleccionan en funcin de las caractersticas de la muestra, tipo de mtodo analtico y rango de concentracin del analito. Se realizar de acuerdo con los procedimientos escritos que indican tambin los sistemas de rotulacin y tratamiento previo de las muestras. Se han de identificar los aparatos a utilizar en el proceso de validacin, y comprobar que estn convenientemente cualificados, incluyendo estos datos en el informe de validacin. Existirn mtodos escritos provisionalmente describiendo el procedimiento para la determinacin de parmetros a evaluar, con indicacin de reactivos, patrones, materiales, tcnicas y clculos. Se establecern a priori para cada uno de los parmetros, basndose en las necesidades o finalidad del mtodo y en la informacin recogida durante la fase de desarrollo del procedimiento analtico.

Factores crticos

Parmetros a estudiar

Muestras

Equipos

Mtodos analticos

Lmites de aceptacin

Fuente: FDA, 2000. 2.2 Fundamentacin Filosfica Esta investigacin, se basa en un paradigma positivista que tiene como escenario de exploracin el laboratorio mediante un diseo pre-estructurado y esquematizado; su lgica de anlisis rige lo confirmatorio, reduccionista, evidencial, inferencia e hipottico-deductivo mediante el anlisis de resultados. Adems, la realidad es nica y fragmentable en partes que se pueden manipular independientemente, y la relacin sujeto-objeto es independiente. Para este enfoque la realidad es una muestra exterior, ajena, objetiva que debe ser estudiada y por tanto conocida (Reichart & Cook, 1986).

2.3

Fundamentacin Legal La Legislacin Ambiental y de Seguridad, vigente en el Ecuador establece varias

disposiciones en cuanto al manejo de productos peligrosos, al igual que regula los lmites mximos permisibles en vertidos y emisiones. Cada organismo a cargo de la aplicacin de un determinado cuerpo legal mantiene un sistema de gestin para el control de las disposiciones establecidas. El mercurio y sus compuestos al ser categorizados como peligrosos intervienen en varios aspectos regulados por las leyes establecidas. En la Norma de Calidad Ambiental y de Descarga de Efluentes: Recurso Agua del TULAS se establece los lmites mximos permisibles de concentracin de mercurio establecidos, los cuales proporcionan criterios para evaluar el nivel de contaminacin de un compuesto especfico, en el agua segn el uso que se pretenda. El Anexo 1, se confirman los niveles de incidencia aptos en agua sobre todo del mercurio. En el Reglamento Ambiental Minero, se establecen medidas de prevencin y control de la contaminacin para los procesos en los que interviene el mercurio, estipuladas en el Art. 61.Amalgamacin y Art. 71.- Uso de mercurio. El Reglamento General Sustitutivo de La Ley de Minera en gran parte de su contexto, implanta los aspectos para la prevencin, control y mitigacin de la contaminacin con mercurio, los cuales se encuentran implcitos en diferentes artculos en los captulos 4 y 6. En el Convenio de Basilea, en los Artculos 1 y 4, y en el Anexo I se dispone el anlisis sobre el establecimiento de instalaciones adecuadas para la eliminacin racional de residuos aplicables a la contaminacin con mercurio. En este sentido, varios municipios cumplen con la recoleccin selectiva de pilas y lmparas fluorescentes, la disposicin final se realiza en vertederos de seguridad previo a una encapsulacin. Sin embargo, existen otros municipios que efectan la recoleccin de residuos en forma selectiva (Orgnicos e Inorgnicos) como: Municipio de Cuenca, Loja, Zamora, Otavalo, Espejo (El ngel), Antonio Ante, Suca, Atuntaqui, y algunos de ellos tienen proyecciones para hacer la separacin de residuos peligrosos. En la Ordenanza Metropolitana 213, se estipula en los captulos I y V que el nico gestor autorizado para la gestin de pilas y fluorescentes con mercurio es la empresa HAZWAT, en donde se hace el encapsulamiento y disposicin en un vertedero de seguridad. Existe otro proyecto liderado por SWISS-CONTACT, en el que se hace la destruccin de los tubos fluorescentes, con un equipo especializado en donde el gas se retiene en unos filtros que tienen un perodo de vida dependiendo de la cantidad de tubos destruidos, aproximadamente 1500

unidades. Una vez que los filtros terminan con el tiempo de vida til se los dispone encapsulados en vertedero de seguridad. En tal sentido, la Norma Tcnica de Residuos Peligrosos; mantiene definido el lmite de la concentracin de mercurio en un residuo slido para no considerarlo como peligroso mediante la prueba de lixiviacin. Los compuestos de mercurio se catalogan como compuestos bioacumulantes y persistentes, definindose la carga lmite tolerable para estos compuestos. Las normas tcnicas establecen los lmites mximos permisibles de concentracin de mercurio en el agua residual (UNITAR, 2010). 2.4 2.4.1 Categoras Fundamentales Grfico de Inclusin Superordinacin Subordinacin

Documentacin

Tcnicas de Deteccin de Contaminantes

Alcance

Contaminacin del Agua

Parmetros

Mercurio

Validacin de Mtodos Analticos

Metales Pesados

Variable Independiente

Variable Dependiente

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

2.5 2.5.1

Hiptesis Hiptesis Nula Los tratamientos resultantes producto de la correlacin de los factores de estudio no

presentan buenas condiciones del uso del equipo adems de caractersticas no lineales obtenidas de las respuestas experimentales. 2.5.2 Hiptesis Alternativa Los tratamientos resultantes producto de la correlacin de los factores de estudio presentan las mejores condiciones del uso del equipo adems de caractersticas lineales obtenidas de las respuestas experimentales. 2.6 2.6.1 Sealamiento de Variables Variable Independiente Validacin de mtodos analticos. 2.6.2 Variable Dependiente Determinacin de mercurio.

CAPTULO III

3. METODOLOGA El presente trabajo investigativo ha sido predominantemente cuantitativo puesto que requiri realizar la validacin del mtodo analtico para la determinacin de mercurio por espectroscopa de absorcin atmica con tcnica de vapor fro en muestras de agua residual, natural y de consumo. 3.1 Modalidad Bsica de la Investigacin Se han establecido modalidades de investigacin experimental y bibliogrfica. 3.1.1 Experimental La aplicacin de mtodos de anlisis estadsticos para el mejor acondicionamiento del equipo y para el desarrollo de la validacin de mercurio, permiti principalmente comprobar el nivel de concentracin de este analito en distintos tipos de matriz en aras de interpretar los valores de absorbancia proporcionados mediante la implementacin de la tcnica de generacin de vapor fro mediante espectroscopa de absorcin atmica. 3.2 3.2.1 Tipo de la Investigacin Exploratoria Se analizaron los distintos tipos de matriz de investigacin, y las mejores concentraciones de analito que establecieron una relacin lineal en condiciones instrumentales capaces de optimizar el anlisis siendo comparados con material de referencia certificado. 3.2.2 Descriptiva Se determin la concentracin de mercurio en una misma matriz de estudio, con distintas muestras de anlisis como agua residual, agua natural y agua de consumo, una vez obtenida la curva de calibracin establecida con estndares en concentraciones fijadas, y su posterior comparacin con los datos obtenidos del tratamiento del material de referencia se obtuvieron valores de concentracin de mercurio en las muestras de anlisis con la utilizacin de adicin de estndar en cada una de ellas mediante el empleo de un mtodo especfico de anlisis para mercurio con tcnica de generacin de vapor fro en espectroscopa de absorcin atmica, lo cual permiti el desarrollo de la validacin con la finalidad de emitir datos confiables acerca de los niveles de incidencia de mercurio en este tipo de matriz.

3.2.3

Asociacin de Variables La determinacin del grado de concentracin del mercurio con muestras patrn y el

estudio con material de referencia han permitido evaluar el mtodo analtico empleado, y con ello la validacin del mismo obtenindose de esta manera resultados de calidad. 3.3 3.3.1 Mtodo y Tcnica de Investigacin Alcance de Condiciones ptimas para el Equipo de Generacin-Vapor Fro Las especificaciones que fueron empleadas para la obtencin de las mejores condiciones del rendimiento del equipo de generacin de vapor fro, fueron tomadas del Manual de Manejo SHIMADZU GHV-1 y de la seccin 3114B sobre la determinacin de metales mediante mtodos normalizados del APHA. Se estableci en base a estas fuentes bibliogrficas algunos factores de estudio como, el agente reductor utilizado y el nivel de presin del gas de arrastre, para lo cual, se prepararon cuatro diferentes concentraciones del agente reductor (NaBH4) 0.2%, 0.3%, 0.4% y 0.5% que fueron codificadas en las tablas de resultados como a1, a2, a3, a4 respectivamente (la preparacin de estos reactivos se encuentra en el Anexo 2), y se aplic tres diferentes presiones del gas de arrastre (Ar) de 32.7psi, 46.4psi y 57.6psi y que fueron codificadas en las tablas de resultados como b1, b2, b3 respectivamente (APHA, 2005; SHIMADZU CORPORATION, 2005). 3.3.1.1 Ensamble del Equipo de Generacin de Vapor Fro Se realiz el procedimiento de conexin de mangueras, las cuales fueron enganchadas en las ranuras de la placa del sujetador del tubo, hacindolas correr a lo largo del rotor, se las enganch a las ranuras del costado superior de la placa, para luego sostenerlas con la grapa ubicada junto al rotor en el lado derecho del panel frontal, las mangueras pasaron a travs del agujero superior izquierdo de dicho panel para conectase a los tubos de aspiracin, se coloc en el costado izquierdo las botellas de los reactivos tanto de la solucin de NaBH4 como la solucin de HCl, se verific que la perilla de control de velocidad del rotor se encontrara aproximadamente en 35 revoluciones. Por otro lado, el separador gas/lquido ubicado en la cara izquierda del equipo, se conect a la celda de cuarzo por medio de un tubo de caucho, donde, uno de sus extremos embon en la abertura superior del separador gas/lquido, y el otro extremo se sujet en el pico inferior de la celda de cuarzo, la misma que estaba fijada a un soporte conectado sobre el mechero del equipo de absorcin atmica.

3.3.1.2 Funcionamiento del Equipo de Absorcin Atmica con Generador de Vapor Fro Para su acondicionamiento, el equipo de absorcin atmica se encendi quince minutos antes de la primera lectura, durante este tiempo se siguieron los pasos para la puesta a punto del equipo, en tal sentido, se coloc y acopl la lmpara de mercurio de ctodo hueco en el primer can de la bandeja de 8 lmparas con la que consta el equipo, se encendi el interruptor del mismo para que cada dispositivo reconozca las nuevas indicaciones, se escogi el elemento de la lista de metales de anlisis, correspondiente al mercurio ubicado en la posicin nmero 22, se ajust la longitud de onda () en 253.7nm, y la intensidad de energa de la lmpara de ctodo hueco fue de 4nm, se aline la celda de cuarzo al trayecto luminoso con la ayuda de las perillas ubicadas en la base del mechero. Posteriormente, se encendi la lmpara de deuterio al presionar el interruptor colocado junto al botn de encendido, estas condiciones fueron almacenadas por el equipo, lo que permiti observar en la pantalla del amplificador el inicio de la lectura y se comprob que el procesamiento de la seal estuvo dado en tiempo real al observarse diferencia de absorbancias al momento de interferir en el trayecto luminoso, con este proceso se verific que las condiciones y alineamiento fueron las adecuadas. A continuacin, se encendi el interruptor del generador de vapor fro y se control que el flujo de circulacin de lquidos fuera continuo, para ello, en un recipiente con agua destilada se coloc los tres tubos de aspiracin y se determin que durante 15 minutos la corriente de agua fue estable, tanto en los tubos de aspiracin como en el serpentn de reaccin. Finalmente, se coloc los tubos de aspiracin en los frascos correspondientes para la muestra y los reactivos (NaBH4 y HCl) lo que dio inicio a la lectura del blanco, estndares, muestras y material de referencia. Finalizadas las lecturas de anlisis, se apag el interruptor del generador de vapor fro, se desconectaron todas las mangueras de absorcin para evitar el excesivo estiramiento de las mismas, y se cerr la vlvula del tanque de argn (Ar). Subsiguientemente, se procedi a apagar la lmpara de deuterio, se coloc en cero la intensidad de la lmpara de ctodo hueco y se apag el interruptor del equipo de absorcin atmica. 3.3.2 Mtodo Analtico Empleado para la Determinacin de Mercurio El mtodo analtico empleado para la determinacin de mercurio fue en base a mtodos normalizados recopilados del EPA en el Mtodo 7470A y en el APHA en la seccin 3112B. Los pasos a seguir en los mtodos anteriormente mencionados fueron los siguientes (EPA, 1994; APHA, 2005):

3.3.2.1 Estandarizacin a Partir de la Solucin Patrn Se elaboraron siete muestras estndar preparadas a partir de la solucin patrn de mercurio con una concentracin de 1000 mg/L, de la cual se tom 0,5mL de la solucin patrn con la ayuda de una pipeta volumtrica y se afor con agua acidificada (HNO3 1.5%) en un baln volumtrico de 50mL, se present entonces una concentracin de 10mg/L. Para la segunda dilucin, se parti de la solucin anteriormente preparada (10mg/L) y se tom 5ml, los cuales son aforados con agua acidificada en un baln de 50mL, obtenindose una concentracin de 1mg/L. Esta ltima dilucin sirvi como base para la preparacin de los estndares de calibracin, de concentraciones de 0.02mg/L, 0.03mg/L, 0.04mg/L, 0.05mg/L y 0.06mg/L, para lo cual se tomaron 1mL, 1.5mL, 2mL, 2.5mL y 3mL respectivamente, aforndolos a cada uno con agua acidificada en balones volumtricos de 50mL. Lo anteriormente mencionado se resume en la Tabla 1 del Anexo 4, y se representa en el esquema de preparacin de estndares de calibracin en el Grfico 1 del Anexo 5. A su vez, se tomaron 5mL del estndar de 1mg/L preparado anteriormente, y se coloc en un baln volumtrico de 50mL aforndolo con agua acidificada (HNO3 1.5%) para obtener una solucin estndar de 0.1mg/L, a partir de esta solucin se tom 5mL, 7.5mL, 10mL, 12.5mL y 15mL para preparar soluciones de 0.001mg/L, 0.0015mg/L, 0.002mg/L, 0.0025mg/L y 0.003mg/L respectivamente, cada volumen tomado se coloc en balones volumtricos de 500mL y se aforan con agua acidificada (HNO3 1.5%). 3.3.2.2 Proceso de concentracin al vaco de soluciones a analizar La tcnica de concentracin al vaco por arrastre con vapor fue utilizada como una prueba adicional en el pre-tratamiento de las muestras a ser analizadas, principalmente en los estndares de calibracin, para generar una validacin que se encuentre dentro de los rangos estipulados por el TULAS, en tal sentido, se gener un factor de concentracin de 0,05 para comparar las absorbancias de las soluciones resultantes del proceso de concentracin con las soluciones elaboradas. Para la concentracin de los estndares de calibracin, se utilizaron las soluciones preparadas anteriormente en concentraciones de 0.001mg/L, 0.0015mg/L, 0.002mg/L, 0.0025mg/L y 0.003mg/L, se agit vigorosamente cada una de ellas y se trasvas su contenido (500mL) en un matraz de fondo redondo, que se conect a un sistema de condensacin, a su vez el matraz fue colocado sobre un bao Mara precalentado a 25C, se activ el sistema de concentracin al abrir el flujo de agua de refrigeracin, se regul la presin de la bomba de vaco a 70 psi, y se ajust a 45 revoluciones el rotor del equipo, el proceso dur

aproximadamente 45 minutos y se obtuvo 25mL de la solucin concentrada que fueron aforados en un baln volumtrico previamente rotulado. 3.3.2.3 Proceso de preparacin del material de referencia Los materiales de referencia empleados presentaron concentraciones determinadas en rangos comprendidos entre 0,0144mg/L y 1mg/L, cada ampolla contena 20mL de solucin y deban ser agitados antes de ser usados. Para la preparacin de dichas soluciones se alistaron dos balones aforados de 1000mL limpios y secos cada uno rotulado con la concentracin del material de referencia que contendran, se extrajo con la ayuda de una pipeta volumtrica 10mL de cada uno de las ampollas, se verti en cada baln marcado con el respectivo material de referencia el contenido de cada pipeta volumtrica, se afor con agua acidificada (HNO3 1.5%) y se agit fuertemente. Los dos materiales de referencia fueron concentrados a 0,28mg/L y se realiz una dilucin de 5 para el material de referencia de 0,014mg/L, y una dilucin de 25 para el material de referencia de 1mg/L. 3.3.2.4 Proceso de digestin de las soluciones a analizar Las muestras de anlisis, los estndares de calibracin, el material de referencia y el blanco, fueron digestados del mismo modo para evitar errores de determinacin y comprobar el comportamiento real de las soluciones antes mencionadas. En el Anexo 2, se expone la preparacin de los reactivos referidos en esta seccin. Para la digestin del blanco, se homogeniz la solucin preparada de agua acidificada (HNO3 1.5%) agitndola vigorosamente, se tomaron 25mL de la solucin con la ayuda de una probeta graduada y se trasvas a un frasco autoclavable de 100mL, se le rotul para identificar posteriormente su contenido, ulteriormente se aadi 2.5mL de la solucin de HNO3 al 30%, 2.5mL de la solucin de H2SO4 al 30% con la ayuda de una micropipeta calibrada de 1 a 5mL, y 2 gotas de KMnO4 al 5% con la ayuda de una pipeta Pasteur, se esper durante 30 segundos para desarrollar la determinacin de mercurio. Para la digestin de los estndares de calibracin de 0.02mg/L, 0.03mg/L, 0.04mg/L, 0.05mg/L y 0.06mg/L, se homogeniz la solucin agitndola vigorosamente, se tomaron 25mL de la misma con la ayuda de una probeta graduada, y se le trasvas a un frasco autoclavable de 100mL, se le rotul para identificar posteriormente su contenido. En el caso de los estndares de 0.001mg/L, 0.0015mg/L, 0.002mg/L, 0.0025mg/L y 0.003mg/L, se agit vigorosamente cada baln volumtrico (25mL) y se trasvas su contenido directamente a un frasco autoclavable de 100mL, se le rotul para identificar posteriormente su contenido. Inmediatamente, se aadi a cada uno de los frascos autoclavables 2.5mL de la solucin de HNO3 al 30%, 2.5mL de la solucin de H2SO4 al 30% con la ayuda de una micropipeta calibrada de 1 a 5mL, y 2 gotas de

KMnO4 al 5% con la ayuda de una pipeta Pasteur, se esper durante 30 segundos para desarrollar la determinacin de mercurio. Para la digestin de los materiales de referencia, se homogeniz la solucin agitndola vigorosamente, se tomaron 25mL de la misma con la ayuda de una probeta graduada y se le trasvas a un frasco autoclavable de 100mL, se le rotul para identificar posteriormente su contenido, subsiguientemente se aadi 2.5mL de la solucin de HNO3 al 30%, 2.5mL de la solucin de H2SO4 al 30% con la ayuda de una micropipeta calibrada de 1 a 5mL, y 2 gotas de KMnO4 al 5% con la ayuda de una pipeta Pasteur, se esper durante 30 segundos para desarrollar la determinacin de mercurio. Para la digestin de las muestras de anlisis de agua natural, agua residual y agua de consumo, se procedi de la misma manera, homogenizando cada una de las muestras, agitndolas vigorosamente, se tomaron 25mL de cada una de las muestras de anlisis con la ayuda de una probeta graduada y se le trasvas en frascos autoclavables de 100mL, se le rotul para identificar posteriormente su contenido. As mismo, para la adicin de estndares en este tipo de matriz, se tomaron tres balones volumtricos de 500mL, se coloc 5mL de la solucin estndar de 0,1mg/L (preparada anteriormente para la elaboracin de los estndares de calibracin), y se afor con agua acidificada para posteriormente pasar por el proceso de concentracin hasta que se obtuvo 25mL de la solucin, se homogeniz cada una de las soluciones obtenidas, agitndose vigorosamente y se procedi a verter cada una de ellas en frascos autoclavables de 100mL rotulados para su posterior identificacin. Ulteriormente, se aadi tanto para las muestras de anlisis como aquellas con adicin de estndar 2.5mL de la solucin de HNO3 al 30%, 2.5mL de la solucin de H2SO4, al 30% con la ayuda de una micropipeta calibrada de 1 a 5mL y 2 gotas de KMnO4, al 5% con la ayuda de una pipeta Pasteur, se esper durante 30 segundos para desarrollar la determinacin de mercurio. 3.3.2.5 Anlisis de las Soluciones obtenidas Las soluciones digestadas fueron sometidas al proceso de lectura, donde se ubic en primer lugar el blanco, colocndose el tubo de aspiracin en el interior del frasco autoclavable para confirmar que la absorbancia fue de cero, al observar en la pantalla del equipo de absorcin atmica que no existi la formacin de picos de lectura, mostrndose despus de 25 segundos de absorbida la muestras por el equipo de generacin de vapor fro, se retir el tubo de aspiracin para ser limpiado con papel toalla, evitndose de esta manera que la solucin pueda haberse contaminado despus de varias lecturas.

Posteriormente, se trat con el mismo procedimiento mecnico a las soluciones estndar de calibracin, empezando por la de menor concentracin (0.02mg/L) y su equivalente despus del proceso de concentracin (0.001mg/L), para lo cual se introdujo el tubo de aspiracin, se observ la formacin de picos de lectura que se estabilizaron a los 25 segundos de ingresada la solucin al equipo de generacin, lo que origin una altura especfica que fue registrada por el equipo para generar un valor determinado de absorbancia. Inmediatamente, se limpi y se volvi a colocar el tubo de aspiracin en el blanco, obtenindose un descenso del pico de lectura que lleg a cero. Se repiti el proceso con cada una de las soluciones estndar, con los materiales de referencia, con las muestras de agua y las muestras con adicin de estndar. 3.3.3 Validacin del Mtodo Analtico La validacin del mtodo se realiz segn establece la Norma Internacional ISO/IEC 17025, basado en el procedimiento interno del laboratorio (ISO/IEC 17025, 2005). A continuacin se describe la determinacin de cada parmetro de validacin: 3.3.3.1 Determinacin de la Linealidad La deteccin de la linealidad del mtodo se realiz mediante la curva de calibracin de mercurio; elaborndose a partir de un estndar madre (1000mg/L) del cual, se obtuvieron siete estndares por medio de diluciones con concentraciones determinadas de 10mg/L, 1mg/L, 0.02mg/L, 0.03mg/L 0.04mg/L 0.05mg/L y 0,06mg/L, para lo cual se utiliz la ecuacin 3.1. 1 1 = 2 2 (3.1)

Se realiz las lecturas del blanco y los estndares de calibracin, obtenindose valores de absorbancia de cada uno de ellos por quintuplicado cada da durante tres das, los resultados de absorbancia se promediaron para poder construir la recta de calibracin, la cual se expres mediante la ecuacin 3.2. = + y = variable dependiente x = variable independiente a = constantes de la ordenada b = contante de la abscisa (3.2)

Donde:

Para obtener la concentracin de las soluciones de anlisis (mg/L) a partir de las absorbancias conseguidas, se determin el clculo con ayuda de la ecuacin 3.3:

Donde:

( )

(3.3)

mg/L = concentracin de la muestra de anlisis ABS = valor de absorbancia a = constantes m = pendiente de la recta Fc = factor de concentracin Fd = factor de dilucin Con las cifras obtenidas se represent la curva de calibracin, logrndose reportar y calcular los siguientes datos: E CUACIN DE LA RECTA : = + (3.2)

C OEFICIENTE DE CORRELACIN MNIMO DE : R2 = 0,9950 L MITES DE CONFIANZA DE LA PENDIENTE : = (3.4)

L MITES DE CONFIANZA DE LA ORDENADA AL ORIGEN : = (3.5)

3.3.3.1 Determinacin de la Sensibilidad

Se determin la sensibilidad de calibrado y la sensibilidad analtica: S ENSIBILIDAD DE CALIBRADO : Es la pendiente de la recta; b

S ENSIBILIDAD A NALTICA : Se determin mediante la ecuacin 3.6: =

(3.6)

Donde:

= sensibilidad anal tica m = pendiente de la recta Ss = desviacin estndar de la sensibilidad 3.3.3.2 Determinacin del lmite de deteccin y del lmite de cuantificacin Los lmites de deteccin y de cuantificacin fueron determinados mediante las ecuaciones 3.7 y 3.8 respectivamente. L MITE DE D ETECCIN : = Donde: LDO = Lmite de Deteccin Sy/x = es la desviacin estndar de la recta de calibrado b1 = es la pendiente de la recta de calibrado m = pendiente de la recta N = es el nmero de patrones de calibrado xi = es cada una de las concentraciones de los patrones de calibrado x = es la media de las concentraciones de los patrones de calibrado
1

2 2 ( =1 )

(3.7)

L MITE DE C UANTIFICACIN :

= Donde:

2 2 =1 ( )

(3.8)

LOQ = Lmite de Cuantificacin Sy/x = Desviacin estndar de los residuales de la recta de calibrado k = Constante 10 m = pendiente de la recta N = Nmero de patrones de calibrado xi = Concentraciones de los patrones de calibrado x = Media de las concentraciones de los patrones de calibrado 3.3.3.3 Precisin Se determin mediante la repetibilidad y reproducibilidad. R EPETIBILIDAD : Se calcul utilizando las siguientes ecuaciones: =
2

(3.9) (3.10) (3.11) (3.12) (3.13)

2

V2 = k 1

= =1 =1 =

V1 = k 1

= =1 1
1

(3.14) (3.15)

Donde: V1 y V2 = grados de libertad k = grupos muestrales n = nmero total de elementos p = tamaos de muestra SDCw = desviacin estndar de diferencias cuadrticas DCMw = diferencias cuadrticas medias SDCB = desviacin estndar de diferencias cuadrticas DCMB = diferencias cuadrticas medias R EPRODUCIBILIDAD : Se calcul utilizando los datos de las ecuaciones 3.16 y 3.17: =
1

(3.16) (3.17)

Donde:

= +

SRD = desviacin estndar de la reproducibilidad de diferencias cuadrticas N = nmero total de elementos SDCw = desviacin estndar de diferencias cuadrticas SDCB = desviacin estndar de diferencias cuadrticas SDCT = desviacin estndar de diferencias cuadrticas totales 3.3.3.4 Clculo de ANOVA Para el tratamiento estadstico se realiz un anlisis de varianzas, mediante la prueba de F o del valor estimado de F, para lo cual se utiliz la ecuacin 3.18: =

(3.18)

Donde: F = anlisis de varianzas DCMB = diferencias cuadrticas medias DCMw = diferencias cuadrticas medias Los valores obtenidos se compararon con el valor de F tabulado que es igual a 3.89, en un nivel de confianza del 95%. 3.3.3.5 Determinacin de la Exactitud Se fij al utilizar material de referencia certificado, mediante la ecuacin 3.19: % =
%

A su vez, se realiz la prueba t student, utilizndose las siguientes frmulas: = (3.20) (3.21)

100%

(3.19)

Donde:

texp = valores de t experimentales n = nmero total de elementos Cv = coeficiente de variacin s = desviacin estndar X = promedio del porcentaje de recuperacin Los valores obtenidos se comparan con el valor de t tabulado que es igual a 2.78, en un nivel de confianza del 95%. 3.3.3.6 Determinacin de la Incertidumbre Corresponde a la incertidumbre de calibracin del equipo y la incertidumbre del mtodo.

I NCERTIDUMBRE DE CALIBRACIN DEL EQUIPO = =

+ + 2 + + 2 2 2 2 2

(3.22)

(3.23)

2 2 = +

(3.24)

En donde: ST MADRE = incertidumbre de la solucin stock CSY MADRE = concentracin de la solucin stock VPIPETA = incertidumbre de la pipeta VPIPETA = volumen de la pipeta VBALON = incertidumbre del baln CST = concentracin del estndar PESO = incertidumbre de la balanza P = peso del estndar en mg PUREZA = incertidumbre de la pureza del estndar CST = incertidumbre del estndar 2 ESTANDAR = incertidumbre del estndar 2 RESOLUCION DEL EQUIPO = incertidumbre de la resolucin del equipo K = nivel de confianza C = incertidumbre combinada I NCERTIDUMBRE DEL MTODO
2 2 2 = + +

(3.25)

En donde: 2 CALIBRACIN DEL EQUIPO = incertidumbre de la calibracin del equipo 2 PRECISIN = incertidumbre de la precisin 2 RESOLUCION DEL EQUIPO = incertidumbre de la resolucin del equipo K = nivel de confianza METODO = incertidumbre del mtodo 3.4 3.4.1 Poblacin y Muestra Diseo Experimental 3.4.1.1 Condiciones de Operacin del equipo de Generacin de Vapor Fro Tabla N 3.1 Factores y niveles de estudio para las mejores condiciones de operacin del equipo de generacin de vapor fro para la determinacin de concentraciones de mercurio. Factores Niveles a1: 0,2% a2: 0,3% a. Agente Reductor (NaBH4) a3: 0,4% a4: 0,5% b1: 32.7 psi b. Nivel de Presin de Argn b2: 46.4 psi b3: 57.6 psi Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

Tabla N 3.2 Obtencin de los tratamientos resultantes de la correlacin de los factores de estudio para las mejores condiciones de operacin del equipo de generacin de vapor fro para la determinacin de concentraciones de mercurio. Tratamientos N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Codificacin a1b1 a1b2 a1b3 a2b1 a2b2 a2b3 a3b1 a3b2 a3b3 a4b1 a4b2 a4b3 Factores de Estudio Agente Reductor (NaBH4) 0,2% 0,2% 0,2% 0,3% 0,3% 0,3% 0,4% 0,4% 0,4% 0,5% 0,5% 0,5% Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011 Una vez conocidos el diseo experimental empleado se procedi a la operacionalizacin de variables, en aras de comprender mejor los resultados finales de la investigacin, de las cuales se desprenden indicadores de medicin. Nivel de Presin de Argn 32,7 psi 46,4 psi 57,6 psi 32,7 psi 46,4 psi 57,6 psi 32,7 psi 46,4 psi 57,6 psi 32,7 psi 46,4 psi 57,6 psi

3.5 3.5.1

Operacionalizacin de Variables Variable Dependiente:

Tabla N3.3 Variable Dependiente LO ABSTRACTO Conceptualizacin Categoras Indicadores LO OPERATIVO tem Bsico Ser apropiado realizar una comparacin de la concentracin de Hg en muestras de agua residual, natural y de consumo? Tcnicas Instrumentos

Determinacin de mercurio (Hg) en muestras de agua natural, residual y de consumo.

Pruebas, anlisis y comparaciones a realizarse sobre la Cuantificacin valoracin de de Mercurio. Hg en matrices de agua natural, residual y de consumo.

Diseo Experimental

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011 3.5.2 Variable Independiente:

Tabla N3.4 Variable Independiente LO ABSTRACTO Conceptualizacin Dimensiones Indicadores LO OPERATIVO tem Bsico Se justificar la inversin realizada para lograr el objetivo planteado? Se lograr obtener un mtodo analtico adecuado para la validacin de Hg? Tcnicas Instrumentos

Validacin de mtodos analticos.

Obtencin de resultados seguros y Utilizacin de espectrofotometra confiables de cada parmetro de absorcin de validacin atmica por establecido para generacin de mercurio, segn vapor fro. las exigencias de la normativa.

Diseo Experimental

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

3.6

Recoleccin de Informacin El diseo experimental se bas en conseguir datos reales de la funcin de respuesta

instrumental y del mtodo analtico empleado en las condiciones que indica cada uno de los tratamientos propuestos, por lo cual, se estableci un diseo experimental AxB. Para el estudio de las condiciones de operacin del equipo de generacin de vapor fro, se expusieron 12 tratamientos de estudio con 1 respuesta experimental, obtenindose como resultado 13 pruebas de investigacin. El anlisis experimental se realiz mediante el programa estadstico STATGRAPHICS. Adems, se comprob la exactitud, repetibilidad y reproducibilidad del proceso de validacin mediante el uso de soluciones estndar, material de referencia certificado y muestras de agua natural, residual y de consumo, en las mismas condiciones de anlisis. Todo el proceso experimental fue realizado por un solo analista para la determinacin de mercurio por la tcnica de generacin de vapor fro. 3.7 Procesamiento y Anlisis El procesamiento de la informacin se logr en la fase experimental de la investigacin, corroborndose los resultados a travs de un estudio estadstico mediante el empleo de hojas de clculo, diseadas con ecuaciones matemticas establecidas para cada uno de los parmetros de validacin, as como para la transformacin de las lecturas de concentracin generadas en absorbancias por el equipo. El anlisis de la informacin se basaron en la interpretacin de los resultados obtenidos del estudio estadstico para la validacin del mtodo, sustentado mediante las exigencias de la normativa y los requerimientos que establece el laboratorio, comprobndose de esta manera la hiptesis para establecer conclusiones y recomendaciones sobre la investigacin desarrollada.

CAPTULO IV

4. ANLISIS E INTERPRETACIN DE RESULTADOS 4.1 Anlisis de los Resultados Una vez concluido el desarrollo tcnico se pudo obtener los siguientes resultados experimentales: 4.1.1 Condiciones de Operacin del Generador de Vapor Fro La Tabla N2 del Anexo 4, report valores de absorbancia obtenidos al someter una solucin estndar de mercurio de 0.02mg/L en condiciones especficas segn cada tratamiento propuesto, en donde, al combinar los niveles de concentracin del agente reductor (NaBH4) con los distintos niveles de flujo de presin del gas de arrastre (Ar), se obtuvieron cinco repeticiones de los doce tratamiento. En aras de evaluar los tratamientos del uno al siete, se expone que las lecturas de absorbancia no son los valores ms altos establecidos a simple vista. Sin embargo, se pudo apreciar que cada uno de ellos present repetibilidad, lo cual permiti comprobar que a bajas concentraciones del agente reductor la presin no influye para optimizar la recuperacin de mercurio. Por otro lado, a partir de los tratamientos del diez al doce, se demostr que las lecturas de absorbancia obtenidas presentaron un descenso pese a que la concentracin del agente reductor fue mayor, pues los niveles del flujo de presin del gas no influyeron para que exista manifestacin del analito. Posteriormente, se not una particularidad entre los tratamientos ocho y nueve. El tratamiento ocho present un valor alto de absorbancia con presencia de repetibilidad, mientras que el tratamiento nueve present valores altos y bajos de absorbancia notndose que no existe repetibilidad. En la Tabla N3 del Anexo 4, se report el clculo promedio de los resultados obtenidos con los cuales se esquematiz el rendimiento de cada uno de los tratamientos de estudio presentados en el Grfico 2 del Anexo 5. Y en la Tabla N4 del Anexo 4 se report los porcentajes de recuperacin presentados de la experimentacin en el equipo de generacin de vapor fro. Por otro lado, se realiz el anlisis estadstico utilizando el programa STATGRAPHICS del cual se obtuvieron resultados del anlisis de ANOVA reportado en la Tabla N5 del Anexo 4 donde se establecieron las fuentes de varianza con cada uno de los factores de estudio, el anlisis de las rplicas de estudio, y de sus interacciones, ulterior a este anlisis se realiz el contraste de los

rangos de absorbancia tanto para el Factor A como para el Factor B, los cuales se reportaron en las Tabla N 6 y 7 respectivamente del Anexo 4, adems en los Grficos 3 y 4 del Anexo 5 se mostr el comportamiento tanto del Factor A como del Factor B respectivamente. Adems se report en la Tabla N 8 del Anexo 4 los resultados de la prueba de Tukey que se realiz a la interaccin AB estableciendo la media de los resultados iniciales de las absorbancias obtenidas. Los Grficos 5 y 6 del Anexo 5 expusieron las medias de cada uno de los factores junto con los resultados de la prueba de porcentajes de intervalo de Tukey realizados a un nivel del 95%. Finalmente, el Grfico 7 del Anexo 5 exhibi los comportamientos de las interacciones de los factores de estudio. 4.1.2 Validacin del Mtodo Analtico 4.1.2.1 Determinacin de la linealidad En el Anexo 4, la Tabla N 9, present los valores de absorbancia producto de las lecturas realizadas durante sus rplicas. La Tabla N 10 detall el estudio realizado con las soluciones estndar de calibracin, se report los valores de las lecturas de absorbancia (ABS) y se identific que tanto las soluciones elaboradas directamente como aquellas que pasaron por el proceso de concentracin no difiere con la concentracin final del analito de estudio, lo cual fue corroborado matemticamente con el uso de la ecuacin 4.1 al calcular la concentracin expresadas en mg/L. ( ) = (4.1)

El Grfico 8 del Anexo 5 represent la curva de calibracin obtenida de los valores promedios reportados en el Anexo 4, el grfico consta de los puntos de determinacin de la recta: la representacin grfica de la recta de regresin lineal, la ecuacin de la regresin, y el coeficiente de correlacin, para lo que se efectu un anlisis estadstico mediante la deteccin de la linealidad que estableci una curva de calibracin con una ecuacin de recta de regresin de: y = 7,6337x + 0,0058 En el Anexo 4, la Tabla N11 expuso el promedio de las concentraciones y las absorbancias y en la Tabla N12 se present los porcentajes de recuperacin de cada uno de los estndares de calibracin junto con sus promedios, lo cual establece que el estndar de 0.02mg/L o su equivalente de 0.001mg/L presenta un porcentaje de recuperacin del 102.7%, el estndar de 0.03mg/L o su equivalente de 0.0015mg/L, demuestra un porcentaje de recuperacin del 102.9%, el de 0.04mg/L o su equivalente de 0.002mg/L, indica un porcentaje

de recuperacin del 99.6%, el de 0.05mg/L o su equivalente de 0.0025mg/L, muestra un porcentaje de recuperacin del 102.6%, y el estndar de 0.06mg/L o su equivalente de 0.003mg/L, seala un porcentaje de recuperacin del 97.3%. Finalmente, se emple materia de referencia en rangos comprendidos entre 0,0144mg/L y 1mg/L, los dos materiales de referencia fueron concentrados a 0,28mg/L y se realizaron diluciones de 5 para el material de referencia de 0,014mg/L, y de 500 en el caso del material de referencia de 1mg/L. 4.1.2.2 Determinacin del Lmite de Confianza A partir del anlisis de linealidad, se calcularon los lmites de confianza del mtodo analtico y se fijaron los valores mximos y mnimos del mismo, los cuales se encuentran registrados en la Seccin 1 del Anexo 4, donde, el lmite de confianza para la pendiente fue de LCb=7.6337 0.4224, y para la ordenada fue de LCa=0.0058 0.0164; los clculos realizados fueron representados en el Grfico 9 del Anexo 5. 4.1.2.3 Determinacin de la sensibilidad En la Seccin 2 del Anexo 4, se describen los resultados obtenidos tras el clculo de la sensibilidad de los materiales de calibracin dada por el valor de la pendiente, que corresponde a 7.63 y el clculo de la sensibilidad analtica que se determinan a partir del empleo de la ecuacin determinada en la metodologa lo que proporciona un valor de 0,001 mg/L 4.1.2.4 Determinacin del lmite de deteccin y del lmite de cuantificacin En base a las ecuaciones registradas en el captulo tres (lmite de deteccin, ecuacin 8 y lmite de cuantificacin, ecuacin 9) se calcul en la Seccin 3 del Anexo 4, el valor del lmite de deteccin que fue de 0,0025 mg/L, el cual se consider como la mnima cantidad de analito detectada en la muestra. De la misma manera, se pudo especificar que el valor del lmite de cuantificacin terico fue de 0,01404 mg/L. 4.1.2.5 Precisin En la Tabla N 15 del Anexo 4, se describieron los resultados obtenidos de precisin en base al clculo de ANOVA, donde, se obtuvo el valor de F de cada concentracin utilizada, tanto de los estndares de calibracin como de los materiales de referencia empleados. Los valores obtenidos se compararon con el valor de F tabulado correspondiente a 3.89, en un nivel de confianza del 95%.

Se realizaron los clculos estadsticos para la determinacin de la reproducibilidad y la repetibilidad, los cuales se muestran en las Tablas N 16, 17,18 y 19 del Anexo 4; tiles para interpretar adecuadamente el valor de F calculado. La Tabla N 16, representa la reproducibilidad experimentada en los estndares de calibracin y en los materiales de referencia utilizados, para obtener porcentajes de reproducibilidad comprendidos entre 1.0 y 3.7%. La Tabla N 17, comprueba el clculo del valor promedio de los diferentes niveles de concentracin experimentales del analito de estudio tanto en los estndares de calibracin como en los materiales de referencia. Finalmente, en las Tablas N 18 y 19, se representan los valores de repetibilidad obtenidos en los tres das de estudio y en relacin con estos das, basndose de igual forma en los estndares de calibracin y en los materiales de referencia, lo que permiti evidenciar porcentajes de repetibilidad similares a los obtenidos en la Tabla N 16. 4.1.2.6 Exactitud Las Tablas N 20 y N 21 del Anexo 4, se reportaron los resultados obtenidos de exactitud del mtodo validado. Los valores obtenidos se compararon con el valor de t tabulado correspondiente a 2.78, en un nivel de confianza del 95%, los valores calculados de t experimental se encontraron entre 0.0 y 1.02, con porcentajes de recuperacin entre 98.15 y 102.65%. 4.1.2.7 Incertidumbre En la Tabla N 22 del Anexo 4, se describen los resultados que se obtuvieron del porcentaje de incertidumbre del mtodo analtico validado. Adems, en los Grficos 10 y 11 del Anexo 5 se exponen las fuentes de mayor incertidumbre que pudieron ser estudiadas de las concentraciones de los estndares de calibracin, tanto de los elaborados directamente entre 0.02mg/L y 0.06mg/L, como en los elaborados mediante tcnica de concentracin entre 0.001mg/L y 0.003mg/L y de los materiales de referencia. 4.1.3 Determinacin de los Rangos de trabajo Mediante los porcentajes de incertidumbre, se determin el rango de trabajo de mercurio para el clculo en mg/L obtenidos a travs de la ecuacin 3. En la Tabla N 23 del Anexo 4, se describen los resultados obtenidos. 4.1.4 Estudio de las Matrices de Anlisis con Adicin de Estndar Los datos resultantes del estudio de los tratamientos propuestos para determinar la precisin del mtodo analtico empleado en muestras de agua de consumo, agua natural y agua

residual se reportaron en la Tabla N 24 del Anexo 4. Especficamente el estudio obtenido de la matriz de agua residual se presenta en la Tabla N 25, del agua natural se demuestra en la Tabla N 26, y del agua de consumo se reporta en la Tabla N 27. 4.2 4.2.1 Interpretacin de Datos Condiciones de Operacin del Generador de Vapor Fro Tras el anlisis de los datos experimentales obtenidos se pudo evidenciar que las mejores condiciones en las que se oper el equipo de generacin de vapor fro fue con en el tratamiento propuesto a3b2, el cual corresponde a la combinacin de una solucin de NaBH4 con una concentracin del 0.40% como agente reductor, y un nivel de flujo de presin del gas de arrastre (Ar) de 46.4psi, lo cual registr el mayor valor de absorbancias reportadas con un promedio de 0.162ABS, que expresado en ppm corresponde a una concentracin de 0.018mg/L, y un porcentaje de recuperacin promedio del 105.0% (Anexo 4), se realiz un anlisis estadstico con lo cual se corrobor que estas variables al momento de combinarlas de manera adecuada permiten optimizar las condiciones de operacin del equipo de generacin de hidruros para la obtencin de lecturas con concentraciones reales conforme los estudios realizados por SHIMADZU CORPORATION. El estudio con el programa estadstico STATGRAPHICS, permiti reconocer que los valores obtenidos en el desarrollo del anlisis de ANOVA presentaron gran diferencia significativa con un nivel de confianza del 95%., para lo cual se realiz el estudio de la prueba de Tukey, lo que confirma que el mejor tratamiento en el Factor A es de 0.40% del agente reductor mientras que el Factor B present dos tratamientos con mayores posibilidades de ser las mejores respuestas obtenidas. Sin embargo, ha sido necesario analizar el comportamiento de cada uno de los factores debido a que cada uno presenta valores elevados pero uno solo permite la mayor recuperacin del analito de estudio, lo cual tiene buen comportamiento al momento de evaluar recuperacin y repetibilidad confirmando que en el Factor B es de 46.4 psi. 4.2.2 Validacin del Mtodo Analtico 4.2.2.1 Procesos de Elaboracin de Soluciones Estndar Segn la norma tcnica ambiental que se encuentra bajo el amparo de la Ley y el Reglamento de Gestin Ambiental, se han dispuesto los lmites permisibles de mercurio, mtodos para determinar la presencia de contaminantes en el agua y los criterios de calidad de las aguas para sus distintos usos, con los cuales se ha trabajado en el transcurso de esta investigacin, lo que permiti proponer procesos analticos directos y simulados para elaborar estndares de calibracin con concentraciones de mercurio que relacionados entre s nos permita obtener lecturas de absorbancia similares, tal es el caso de los procesos de la elaboracin de

soluciones estndar que fueron preparadas directamente en concentraciones de 0.02mg/L, 0.03 mg/L, 0.04 mg/L, 0.05 mg/L y 0.06 mg/L y que poseen una relacin directa con los estndares elaborados en concentraciones de 0.001mg/L, 0.0015mg/L, 0.0020mg/L, 0.025mg/L, 0.030mg/L luego de realizar el proceso de concentracin en los que bajo su experimentacin y los niveles de lecturas de absorbancia se comprob que son las adecuadas para bajar la concentracin del analito de estudio y as obtener un rango de trabajo aceptable en el laboratorio conforme las especificaciones establecidas por el TULAS. 4.2.2.2 Determinacin de la linealidad La obtencin de la curva de calibracin y el anlisis de la ecuacin de la recta de regresin (Anexo 5) facult la descripcin del ajuste del modelo lineal y la relacin estadsticamente significativa dada entre la absorbancia y la concentracin de las soluciones del analito de estudio que pudo ser confirmado con el coeficiente de correlacin de 0.9984, lo que significa una garanta de calidad para los resultados emitidos por el laboratorio de ensayos. Este criterio est sustentado en el coeficiente de correlacin en laboratorios de anlisis, al establecer que no debe ser menor que 0.995 (Norma INEN ISO/IEC 17025. 2005). Finalmente, se emple materia de referencia en rangos comprendidos entre 0,0144mg/L y 1mg/L, con el fin de comprobar que los valores obtenidos estn dentro de los lmites aceptables certificados. Esto demostr, que el mtodo analtico seleccionado y utilizado fue til en el desarrollo de la validacin. Los materiales de referencia se concentraron a 0,28mg/L y se realiz una dilucin de 5 para el material de referencia de 0,014mg/L, y en el del material de referencia de 1mg/L se realiz una dilucin de 500, con lo cual se determina que los procedimientos establecidos permiten una recuperacin de la concentracin del analito de estudio en cada uno de los materiales de referencia confirmndose la exactitud de la tcnica empleada. 4.2.2.3 Determinacin del Lmite de Confianza El trmino confianza implica que es posible afirmar con un cierto grado de probabilidad (por lo general del 95%), que el intervalo de confianza si incluye al valor verdadero, por ello ha sido importante estudiar los lmites que present tanto la ordenada como la pendiente en el anlisis de linealidad, para confirmar as la aceptacin de los valores obtenidos de la experimentacin, de este modo se corrobor que los valores extremos con los que trabaja la investigacin se encuentran entre 7.63370.4224<<0.00580.0164, lo cual contempla la inexistencia de errores sistemticos (Miller & Miller, 2002).

4.2.2.4 Determinacin de la sensibilidad La sensibilidad de un mtodo analtico es capaz de discernir pequeas variaciones en la concentracin del analito. Por lo tanto, tras el procedimiento utilizado se estipul que la pendiente de la recta de calibracin corresponde a 7.63 lo que representa la medida de la sensibilidad denominada sensibilidad de calibrado y considerada constante en todo el intervalo de linealidad. Por otro lado, la sensibilidad analtica o capacidad discriminante que present la investigacin fue de 0.001 mg/L, y es calificada como la menor diferencia de concentraciones que puede ponerse de manifiesto correspondiente a un umbral de probabilidad de 0.05. 4.2.2.5 Determinacin del lmite de deteccin y del lmite de cuantificacin Se puede especificar el lmite de deteccin de un analito, como aquella concentracin que proporciona una seal instrumental significativamente diferente de la seal de una muestra en blanco, o seal de fondo. Por otro lado, el lmite de cuantificacin o determinacin, es considerada como la concentracin ms baja para mediciones cuantitativamente precisas (Skoog et al, 2005). En la prctica, se ha utilizado los valores de la recta de calibrado para el clculo de estos lmites, en donde 0,0025 mg/L se considera como la cantidad mnima de analito que ha sido detectado en las muestras de anlisis, del mismo modo, se puede especificar que el valor del lmite de cuantificacin terico fue de 0,01404 mg/L en relacin al lmite de cuantificacin experimental correspondiente a 0,02 mg/L o su equivalente luego del proceso de concentracin de 0.001mg/L, que fue corroborado posteriormente con el clculo de la incertidumbre. Estos valores, son considerados como la mnima cantidad de analito presente en la muestra que ha podido ser cuantificada, bajos las condiciones experimentales descritas, con una adecuada prediccin y exactitud. 4.2.2.6 Precisin La precisin se refiere a la dispersin del conjunto de valores obtenidos de mediciones repetidas de una magnitud, es decir, es lo cerca que los valores medidos estn unos de otros. Junto con la medicin de varianza es posible determinar el grado de variabilidad que sintetiza una muestra de anlisis. En teora de probabilidad y estadstica, la varianza es un estimador de la divergencia de una variable en este caso la concentracin del analito de su valor esperado (Miller & Miller, 2002). En el tratamiento estadstico se realiz un anlisis de varianzas, mediante la prueba de F o del valor estimado de F; los valores obtenidos fueron comparados con el valor de F tabulado perteneciente a 3.89, en un nivel de confianza del 95%; dando como resultado que los valores de

F calculados de los estndares y del material de referencia son menores al valor de F tabulado, lo que representa que existe un estimado de precisin admisible. Este resultado indica, que las varianzas no presentan diferencias significativas, y que los resultados de repetibilidad y reproducibilidad se encuentran dentro de los valores aceptados del valor estimado de F Tabulado. 4.2.2.7 Exactitud La exactitud, se refiere a cun cerca del valor real se encuentra el valor medido. En trminos estadsticos, la exactitud est relacionada con el sesgo de una estimacin. Cuanto menor es el sesgo ms exacta es una estimacin. Cuando expresamos la exactitud de un resultado se expresa mediante el error absoluto que es la diferencia entre el valor experimental y el valor verdadero (Miller & Miller, 2002). La exactitud experimental tambin es la considerada la mnima variacin de magnitud que puede apreciar un instrumento. Por lo tanto, se determin la misma, mediante el porcentaje de recuperacin de cada estndar de calibracin y de los materiales de referencia empleados, que debe estar en un rango entre el 85 115%. Los valores obtenidos fueron comparados con el valor de t tabulado correspondiente a 2.78, en un nivel de confianza del 95%; lo cual trajo como resultado que los valores de t calculados de los estndares y del material de referencia sean menores al valor de t tabulado. Este anlisis indica que no se presentan diferencias significativa entre la recuperacin media y 100%, por lo que los valores de exactitud son aceptados (Skoog et al, 2005). 4.2.2.8 Incertidumbre La Norma INEN ISO/IEC 17025 (2005), en la divisin de Requisitos generales relativos a la competencia de los laboratorios de ensayo y calibracin, pone especial nfasis en la necesidad de estimar la incertidumbre del ensayo, as como en el clculo de las incertidumbres asociadas con calibraciones internas. La incertidumbre de una medicin es una estimacin de la parte del resultado completo que caracteriza el intervalo de valores dentro del cual se encuentra el valor verdadero de las cantidades medida. Los valores de porcentaje de incertidumbre obtenidos para cada concentracin analizada se encontraron dentro del alcance establecido por el laboratorio que es del 15% de incertidumbre. Los datos experimentales de incertidumbre obtenidos se hallaron entre el 4.06% y el 14.54%, por lo tanto, los porcentajes de incertidumbre alcanzados son aceptados. Adems fue posible verificar que las fuentes de incertidumbre son directamente proporcionales; al estar relacionadas entre el porcentaje de incertidumbre y la concentracin del analito de estudio.

4.2.3

Determinacin de los Rangos de trabajo Debido a que el porcentaje de incertidumbre tanto en la concentracin de 0.02mg/L

como en su equivalente de 0.001mg/L, es del 10.5% se estim que el rango de trabajo abarca todas las concentraciones de mercurio, que estn entre 0.001mg/L a 1mg/L que son los limites requeridos en el laboratorios y establecidos por las leyes ecuatorianas. 4.2.4 Estudio de las Matrices de Anlisis con Adicin de Estndar Se realiz el anlisis de las matrices de estudio con diferentes tipos de agua: agua residual, natural y de consumo; las muestras fueron proporcionadas por el laboratorio con la codificacin respectiva de las mismas. En la matriz se determin que tanto el agua natural como el agua de consumo no presentaron cambios de absorbancia al ser comparados con el blanco en la lectura inicial, al momento de realizar las lecturas de absorbancia se pudo corroborar que la concentracin del analito obtenido fue de 0,001mg/L, que corresponde al valor de la adicin de estndar. Por otro lado, el anlisis de matriz de agua residual demostr que la lectura inicial de la muestra nicamente present valores de absorbancia en un promedio de 0.112ABS, lo que represent una concentracin de 0,001mg/L. Despus de adicionar el estndar a la muestra de agua residual se report valores promedio de absorbancia de 0.239ABS; equivalente a una concentracin de 0,002mg/L; lo que permiti comprobar que el agua residual sometida al anlisis present una concentracin de 0,001mg/L de mercurio total, en tal sentido, se pudo concluir que existi una recuperacin aproximada del 100% de la concentracin adicionada, adems que la muestra de agua residual no present interferencias al momento de ser analizada, por consiguiente, se consigui que el tratamiento de digestin cumpliera con los requisitos para lo cual fue diseado, adems se verific que el efecto matriz no ocasionara interferencias en el mtodo. Finalmente, al validar este mtodo analtico se logr un procedimiento especfico para el anlisis de aguas naturales, residuales y de consumo con el fin de proporcionar reportes confiables de los niveles de mercurio que se pueden presentar en este tipo de matriz instituyndose de este modo, evidencia documentada de un alto grado de confianza, que permita mitigar el uso excesivo de mercurio en determinadas zonas del pas. 4.3 Verificacin de Hiptesis Tras el anlisis estadstico es posible aceptar la hiptesis alternativa, lo cual establece que los tratamientos resultantes producto de la correlacin de los factores de estudio presentan las mejores condiciones para el uso del equipo, adems de poseer caractersticas lineales

aceptables obtenidas de las respuestas experimentales al momento de ser relacionadas con los valores tabulados a un nivel de confianza del 95%.

CAPTULO V

5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 5.1 Conclusiones En la investigacin se corrobora que el equipo de generacin de vapor fro obtuvo las mejores condiciones de funcionamiento a 46.4psi de flujo de presin de Argn y una concentracin del 0.04% de borohidruro de sodio, logrndose un porcentaje de recuperacin del 105.0%, valor que est dentro de los rangos establecidos por la norma INEN ISO/IEC 17025 que es de entre el 85% al 115%. La utilizacin de un procedimiento de concentracin de muestras analizada dentro del mtodo, corrobor tanto la precisin como la exactitud del mismo, as como el cumplimiento de la linealidad en el mtodo analtico empleado en el intervalo de concentraciones utilizadas para su determinacin por su elevado valor de coeficiente de correlacin que fue de 0.9984, cumpliendo con los fines de validacin que debe ser de > 0.95, con lo cual se asegura que el uso del proceso de concentracin no afecta la calidad de los resultados. El proceso de concentracin empleado comprob que a mayor presin que se somete la solucin, se necesita menor temperatura, demostrndose una relacin inversamente proporcional, lo cual preserva la concentracin de la muestra en estas condiciones con el fin de no generar vapores de mercurio que puedan salir del sistema de concentracin, y se pierdan en la atmosfera. La investigacin muestra resultados obtenidos del lmite de deteccin que corresponde a 0,0025 mg/L y un lmite de cuantificacin de 0,01404 mg/L. El valor real de cuantificacin que dio el equipo que fue de 0,001mg/L, con un porcentaje de incertidumbre que se encuentra dentro del rango establecido en el laboratorio que es el 15%. El desarrollo del mtodo analtico empleado es considerado til para la determinacin de mercurio en muestras de agua natural, residual y de consumo, ya que mediante tratamientos estadsticos se pudo comprobar que es reproducible en el clculo la repetibilidad por varios das, se obtuvieron resultados que al ser evaluados por la prueba de F (comparacin de varianzas), no presentan diferencias significativas. El anlisis de la incertidumbre es un indicador importante en la calidad de la medicin, pues permiti evaluar las incertidumbres de todos los procesos realizados durante la validacin como: repetibilidad, reproducibilidad, preparacin de estndares, material de referencia y el material volumtrico utilizado proporcionando resultados confiables.

Los resultados corroboraron que tanto en las muestras de anlisis como en el material de referencia los valores reportados presentaron un nivel de incertidumbre no mayor al 15%, en un nivel de confianza del 95%, lo que determin el rango de trabajo para Mercurio que van de 0,001mg/L a 1mg/L, proporcionndose un servicio a la comunidad a partir del cumplimiento de los lmites mximos permisibles estipulados por el TULAS, y confirmndose la validez del mtodo empleado al haber obtenido valores certificados por el material de referencia. El porcentaje de recuperacin esperado de acuerdo con la experimentacin realizada se encontr entre 85 y el 115%, con un error relativo de 15% en cada uno de los tratamientos realizados dentro del rango establecido, ninguno es mayor a 110% o menor de 90% en cada una de las concentraciones, por lo tanto se establece que el mtodo empleado es exacto. La preparacin diaria experimental de las soluciones estndar de calibracin determin la repetibilidad y reproducibilidad del mtodo analtico de estudio relacionndose el tiempo con la concentracin del mercurio, lo que corrobora que los estndares de calibracin se degradan con facilidad confirmando que ste es voltil a temperatura variable desde el punto de vista ambiental. 5.2 Recomendaciones Es preciso controlar que el equipo de generacin de vapor fro se encuentre correctamente instalado en aras de verificar el flujo del gas de arrastre a travs de la manguera que conecta a la celda de cuarzo antes de iniciar las lecturas. De esta manera, se logra examinar los tubos de succin de las botellas de reactivos, debido a que si se producen burbujas en los mismos, la lectura de la absorbancia disminuye; por ello, conviene ultrasonar los reactivos (HCl y NaBH4) durante 20 minutos antes de ser utilizados en el equipo. Es necesario lograr una correcta cuantificacin del analito evitando la presencia de interferencias o compuestos que degraden las muestras de anlisis, emplendose condiciones instrumentales y material volumtrico adecuados y limpios. Se debe utilizar un mtodo de anlisis en el laboratorio cuyas caractersticas de rendimiento hayan sido evaluadas mediante un ensayo colectivo, de conformidad con un protocolo internacional para generar datos analticos. En este sentido, la validacin precisa que el laboratorio seleccione las caractersticas adecuadas a evaluar, como por ejemplo: aplicabilidad, selectividad, calibrado, exactitud, fidelidad, rango, lmite de cuantificacin, lmite de deteccin, sensibilidad y robustez teniendo en cuenta previamente los requisitos del cliente al elegir dichas caractersticas a determinar.

Es necesario realizar un control de la eficiencia tanto del mantenimiento de calibracin de equipo, como del desarrollo del mtodo analtico para evitar errores sistemticos. La verificacin debe realizarse con un estndar de cualquier concentracin de preferencia con el nivel bajo de la curva de calibracin, comprobndose tras su lectura que la absorbancia y concentracin corresponden a la del estndar de calibracin utilizado.

CAPTULO VI

6. PROPUESTA 6.1 Datos Informativos

Ttulo: Cuantificacin de los niveles de mercurio contenido en lmparas fluorescentes obsoletas previo a su eliminacin mediante la tcnica de generacin de vapor fro por medio de espectroscopa de absorcin atmica. Unidad Ejecutora: Universidad Tcnica de Ambato. Facultad de Ciencia e Ingeniera en Alimentos. Carrera de Ingeniera Bioqumica. Beneficiario: Estudiantes de la Facultad de Ciencia e Ingeniera en Alimentos Carrera de Ingeniera Bioqumica Director del Proyecto: Dr. Roman Rodrguez Ph.D. Personal Operativo: Egda. Cristina F. Alarcn Q. Tiempo de Duracin: 10 meses. Lugar de Ejecucin: Laboratorio de Servicios Analticos HAVOC Cia. Ltda. Costo: $ 13 511.00

6.2

Antecedentes de la Propuesta El mercurio, es un elemento no radiactivo y txico sobre la tierra por su estado fsico ya

que es el nico elemento metlico lquido a temperatura ambiente. Sus propiedades fsicas y qumicas lo convierten en un metal atractivo para aplicaciones cientficas e industriales (Snchez, 2005). El mercurio se presenta en forma inorgnica y orgnica en el ecosistema, los cuales difieren significativamente en sus grados de toxicidad, siendo su forma orgnica una de las formas ms perjudiciales para el hombre (Valiente, 2005). Estudios recientes, sugieren que las fuentes antropognicas, producto de la actividad del hombre, contribuyen a la liberacin de la mayor parte del mercurio, y su incremento atmosfrico desde el inicio de la era industrial. Aproximadamente, un tercio de las emisiones totales del mercurio global actual circulan en un ciclo cerrado entre los ocanos y la atmsfera (Manuhan, 2002). Las lmparas fluorescentes, contienen mercurio en forma de gas para producir radiacin que al contacto con un polvo fluorescente lo convierte en luz visible. Segn el toxiclogo David Ray, de la Universidad de Nottingham, citado por la BBC, expone que los tubos fluorescentes convencionales contienen entre 15 y 25 mg de mercurio, mientras que las lmparas de bajo consumo contienen entre 6 y 8 mg de mercurio. Con la optimizacin de la tecnologa de las lmparas, han surgido modelos con muy baja cantidad de mercurio. En este sentido, la Asociacin Nacional de Fabricantes Elctricos Norteamericana (NEMA), estipula un contenido mximo de 5 mg por lmpara, aunque no todos los fabricantes (Sylvania-Colombia, Iluminacin Promolux Internacional, Pantalamp, C.A-Venezuela y Toshiba) cumplen con este estndar. Con la reduccin del contenido de mercurio, distintas agencias de la salud recomiendan, en caso de rotura, salir de la habitacin por 15 minutos. Las lmparas CFL (compact fluorescent lamp) deben reciclarse por un procedimiento especfico ya que la bombilla es inocua mientras se mantenga intacta. El problema llega cuando se rompe la misma, algo que puede ocurrir comnmente, si el usuario la desecha, liberndose de esta manera el vapor de mercurio, el cual es capaz de viajar muy rpido y a grandes distancias. Tambin puede caer al agua y ser ingerido por los peces que luego sirven de alimento al ser humano (Bagheri y Gholami, 2001). 6.3 Justificacin Las lmparas fluorescentes tenan algunos inconvenientes y limitaciones, heredados de la tecnologa del tubo fluorescente clsico. La tecnologa de fabricacin ha mejorado ostensiblemente a las mismas gracias a la electrnica, y a la enorme mejora de los compuestos luminiscentes, emitiendo hoy da el doble de luz que un tubo clsico rectilneo usando la mitad

de la energa. No obstante, algunas caractersticas de estas luminarias son objeto de controversia, especialmente tras el inicio de la prohibicin de las bombillas incandescentes convencionales. De hecho, puede que se requiera regular la recoleccin y disposicin final adecuada de las luminarias de bajo consumo con mercurio al final de su vida til. El mercurio proveniente de las lmparas fluorescentes es un residuo que no puede estar en contacto con los residuos slidos urbanos por sus caractersticas txicas. Los comercios y negocios deben seguir las normativas y regulaciones sobre residuos especiales o peligrosos para el manejo adecuado de este tipo de luminarias con mercurio, cuando recolecten las lmparas y tubos fluorescentes que hayan terminado su vida til. La informacin acerca de la concentracin de mercurio en este tipo de desechos es de gran inters en la actualidad, ya que desde siempre ha sido conocido como un elemento txico que presenta daos asociados con su ingestin e inhalacin. En este sentido, no se ha detectado funcin vital en organismos vivientes, y sus propiedades txicas han ido en ascenso acelerado desde el siglo anterior dado su uso indiscriminado. Tomando en cuenta la capacidad de la espectroscopa de absorcin atmica de actuar como detector selectivo y especfico para la deteccin de mercurio y el acoplamiento de un generador de flujo continuo con tcnica de vapor fro (FC-GVF-EAA), es posible desarrollar un sistema de monitoreo de la concentracin de mercurio en lmparas fluorescentes de desecho. 6.4 6.4.1 Objetivos General Cuantificar los niveles de mercurio contenido en lmparas fluorescentes obsoletas previo a su eliminacin mediante la tcnica de generacin de vapor fro por medio de espectroscopa de absorcin atmica. 6.4.2 Especficos Seleccionar un mtodo adecuado de extraccin de mercurio proveniente de lmparas fluorescentes obsoletas. Determinar la concentracin de mercurio en lmparas fluorescentes compactas y lmparas fluorescentes convencionales antes de ser eliminadas. Contrastar los resultados obtenidos de los dos factores de estudio, lmparas fluorescentes compactas y lmparas fluorescentes, por medio de anlisis estadstico. Identificar el tipo de lmpara que emite mayor contaminacin de mercurio al ambiente.

6.5

Anlisis de Factibilidad El estudio que se debe desarrollar es de tipo investigativo, tecnolgico, y social con el

cual se puede implementar un mtodo confiable para obtener concentraciones de mercurio provenientes del tratamiento de lmparas fluorescentes de desecho, y su impacto en la sociedad. El anlisis de factibilidad es de carcter tcnico-social, pues permite valorar la concentracin de mercurio mediante el uso de espectroscopa de absorcin atmica con tcnica de generacin de vapor fro, lo cual constituye un aporte importante a la comunidad. De esta manera, se conoce la concentracin de mercurio procedente de lmparas fluorescentes mediante la utilizacin de mtodos adecuados, confiables y econmicos en aras de obtener informacin oportuna en la toma de decisiones, y que repercuta favorablemente al desarrollo de un plan de control de este tipo de desechos y concientice a la comunicad e incentive al desarrollo sostenible del pas. En la Tabla N 6.1, se detalla los costos de extraccin y determinacin de mercurio en lmparas fluorescentes de desecho. Tabla N 6.1 Recursos Econmicos Estimados para la Propuesta Planteada RUBROS Personal Equipos de Anlisis Materia Prima Reactivos Insumos de Oficina Transporte Impresin Encuadernado Imprevistos SUMAN (USD): TOTAL (USD): Aportado por: Graduando HAVOC 2800.00 6000.00 300.00 400.00 100.00 50.00 100.00 400.00 800.00 1350.00 13511.00 11361.00 200.00 2361.00

UTA 800.00

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

6.6

Fundamentacin Los beneficios ambientales y el ahorro energtico que suponen las lmparas

fluorescentes o bombilla de bajo consumo son innegables, pero al finalizar su vida til, estas bombillas deben reciclarse adecuadamente debido a lo especial de su composicin sabiendo que el mercurio es un metal pesado y muy txico para la salud y el medio ambiente. Mientras la bombilla permanezca intacta no existe ningn riesgo, puesto que el mercurio permanece confinado en su interior. El problema se presenta cuando se rompe o se desecha la bombilla de forma inadecuada. Al romperse la bombilla, el vapor de mercurio se libera y se dispersa por el ambiente, donde ejerce su efecto txico. Cantidades muy pequeas de este metal entraan un elevado riesgo para el medio ambiente y para la salud humana, pues se conoce que el mercurio realiza un proceso de bioacumulacin transmitindose a travs de las cadenas trficas. Para evitar problemas de contaminacin por los desechos de mercurio a travs de lmparas y bombillas fluorescentes finalizada su vida til, deben ser recicladas adecuadamente. Para ello, deben ser recogidas de forma selectiva, evitando su rotura, y transportadas por un gestor autorizado para su correcto tratamiento en una planta de reciclaje. En el pas no existe an la consciencia de realizar el reciclaje de este tipo de desechos. Sin embargo, se pueden establecer centros de recoleccin de residuos, como por ejemplo: los puntos limpios municipales. Sera de gran utilidad comprometer a empresas relacionadas con gestin ambiental para que puedan recoger de forma selectiva tanto lmparas como bombillas para poder llevrselas a una planta de tratamiento que opere de forma adecuada, separando los componentes que las integran para volver a tener una nueva vida. El vidrio se podra reciclar para fabricar envases destinados a usos no alimentarios, o como componente de asfaltos, cementos o cermicas. El mercurio recuperado aportara a la fabricacin de electrodos para plantas desalinizadoras.

6.7

Metodologa En la Tabla N 6.2 se detalla el plan de accin que se va de seguir.

Tabla N 6.2 Modelo Operativo (Plan de accin)

Fases Metas Actividades Responsable Recursos Presupuesto Tiempo

Determinacin del contenido Formulacin de la propuesta de mercurio en lmparas fluorescentes obsoletas Revisin bibliogrfica Investigador Humanos Tcnicos Econmicos $800 2 meses

Obtencin de Materia prima Desarrollo preliminar de la propuesta Extraccin del Cronograma de la propuesta. analito de estudio. Fijacin de la concentracin de mercurio Investigador Humanos Tcnicos Econmicos $ 3750 3meses

Ensayo de la obtencin y determinacin Implementacin de la propuesta Ejecucin de la propuesta de mercurio de muestras de lmparas de fluorescencia obsoletas. Investigador Humanos Tcnicos Econmicos $ 1500 2meses

Verificacin de la Evaluacin de la propuesta Comprobacin del mtodo de obtencin. funcionalidad del mtodo empleado para la extraccin de mercurio Econmicos Investigador Tcnicos $ 1200 2 meses Humanos

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

6.8

Administracin La propuesta planteada estar coordinada por el Dr. Roman Rodrguez y la Egda.

Cristina Alarcn, y se representa en la Tabla N 6.3. Tabla N 6.3 Administracin de la Propuesta

Indicadores a mejorar Situacin actual Resultados esperados Actividades Responsables

Cuantificar la concentracin de mercurio contenido en lmparas fluorescentes obsoletas

Inexistencia de estudios realizados dentro del pas que cuantifiquen la concentracin de mercurio en lmparas fluorescentes obsoletas

Obtencin de datos confiables que permitan establecer la concentracin de mercurio en los diferentes tipos de lmparas fluorescentes.

Extraccin de la cantidad de mercurio contenido en lmparas fluorescentes. Ejecucin de anlisis comparativos entre los tipos de lmparas fluorescentes encontrados.

Investigadores: Roman Rodrguez y Cristina Alarcn

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011 6.9 Previsin de la Evaluacin La Tabla N 6.4 muestra la previsin que se le dar a la propuesta al momento de ser evaluada. Tabla N 6.4 Previsin de la Evaluacin de la Propuesta Preguntas Bsicas Quines solicitan evaluar? Explicacin Sector Cientfico.

Por qu evaluar?

Utilizacin de mtodos analticos confiables en la determinacin de la concentracin de mercurio en lmparas fluorescentes.

Para qu evaluar?

Determinacin de niveles de contaminacin provocados por la eliminacin inadecuada de lmparas fluorescentes.

Qu evaluar?

Mtodo analtico. Tecnologa empleada. Muestras de anlisis. Resultados obtenidos.

Tabla N 6.4 (Continuacin) Director del proyecto Tutor Calificadores

Quin evala?

Cundo evaluar?

Todo el tiempo desde las pruebas preliminares, hasta los anlisis finales de comparacin de resultados.

Cmo evaluar?

Mediante instrumentos de evaluacin.

Con qu evaluar?

Experimentacin y Normativas de Desecho de Residuos Txicos.

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

MATERIALES DE REFERENCIAS BIBLIOGRAFA 1. ALEXANDER, Julio. 2005. Contaminacin con mercurio. Fuente: www.voltairenet.org 2. AMERICAN PETROLEUM INSTITUTE. 2005. Proceedings: Workshop to Identify Promising Technologies for the Treatment of Produced Water Toxicity. Health and Environmental Sciences Departmental Report No. DR351. Parsons Engineering Science. 3. ANTUA, Ismael Pablo. 2007. Efectos Toxicolgicos e Impacto Ambiental del Mercurio. Validaciones y Sistemas de control de calidad de ensayos qumicos bajo sistema de calidad ISO 17025:2005. Rosario Santa Fe Argentina. 22pgs. 4. APHA. 2005. Mtodos normalizados para el anlisis de aguas potables y residuales, 21av Edicin, editorial Daz de Santos, Madrid - Espaa, Mtodo 3112 B y Mtodo 3114 B. 5. BAIRD, C. 1999. Environmental Chemistry. 2nd Ed. W.H. Freman & Company. 65pgs. 6. BAGHERI, H. & GHOLAMI, A. 2001. Determination of very low levels of dissolved mercury (II) and methylmercury in rivers waters by continuous flow with on-line UV decomposition and cold-vapor atomic fluorescence spectrometry after preconcentration on a silica gel-2-mercaptobenzimidazol sorbent. Talanta, 55(6): 1141-1150. 7. BEDOYA, Franky. 2009. Homologacin de Mtodos de Anlisis Fisicoqumico Empleados en Postobn S.A. Para Materias Primas Y Producto Terminado, y Validacin del Mtodo para la Determinacin de Grados Brix. Universidad De Antioquia Facultad de Ingeniera Departamento de Ingeniera Qumica. 418pgs. 8. CARRASQUERO, Armando y ADAMS, Melitn. 2002. Comparacin de mtodos para el anlisis de mercurio en suelos procedentes del callao, Estado de Bolvar, Venezuela. INCI v.27 n.4 Caracas. 87pp. 9. CASTELLUCCI, Federico. 2005. Recomendaciones armonizadas para la validacin de mtodos de anlisis en un solo laboratorio. Resolucin OENO 8/2005. Simposio sobre armonizacin de sistemas de garanta de calidad para laboratorios analticos. OIV: Organisation Internationale de la Vigne et du Vin. France. 281pgs. 10. CASTRO ROCHA, E. 2000. Principios Bsicos de Espectroscopa. Editorial UACH. Mxico. 123-203pgs. 11. Colegio Nacional de Qumicos Farmacuticos Bilogos. 2002. Gua de validacin de mtodos analticos. Mxico A. C. 34pgs 12. COLOMBO L.D., MANGIONE S.B. y FIGLIOGLIA A. 2008. Soil profile distribution of heavy metals in soil atended with sewage sludge for eight years. Agr. Med. Inter. J. of Agric. Sci. 128: 273-283pgs.

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ANEXOS

ANEXOS 1 TULAS Norma de Calidad Ambiental y de Descarga de Efluentes

TULAS Norma de Calidad Ambiental y de Descarga de Efluentes RECURSO AGUA

Debido a lo largo de las tablas presentes en el Anexo 1 del TULAS concerniente a la Norma de Calidad Ambiental y de Descarga de Efluentes: Recurso Agua, las tablas han sido recortadas para mostrar nicamente la informacin referente a los lmites mximos permisibles de Mercurio. CONTINUACIN... TABLA 1. Lmites mximos permisibles para aguas de consumo humano y uso

domstico, que nicamente requieren tratamiento convencional.

Parmetros

Expresado Como

Unidad

Lmite Mximo Permisible

Materia flotante Mercurio (total) Nitrato Hg N-Nitrato mg/l mg/l

Ausencia 0,001 10,0

Fuente: TULAS, 2003

CONTINUACIN... TABLA 2. Lmites mximos permisibles para aguas de consumo humano y uso

domstico que nicamente requieran desinfeccin. Parmetros Expresado Como Materia Flotante Mercurio (total) Nquel Hg Ni mg/l mg/l Unidad Lmite Mximo Permisible

AUSENCIA 0,001 0,025

Fuente: TULAS, 2003

CONTINUACIN... TABLA 6. Criterios de calidad admisibles para aguas de uso agrcola

Parmetros

Expresado Como Mo Hg Ni

Unidad

Lmite Mximo Permisible 0,01 0,001 0,2

Molibdeno Mercurio (total) Nquel

mg/l mg/l mg/l

Fuente: TULAS, 2003

CONTINUACIN... TABLA 8. Criterios de calidad para aguas de uso pecuario Lmite Mximo Permisible 0,005 0,01 10,0

Parmetros

Expresado Como Unidad

Molibdeno Mercurio (total) Nitratos + nitritos

Mo Hg N

mg/l mg/l mg/l Fuente: TULAS, 2003

CONTINUACIN... TABLA 11. Lmites de descarga al sistema de alcantarillado pblico

Parmetros

Expresado Como

Unidad

Lmite Mximo Permisible

Materia flotante Mercurio (total) Nquel

VISIBLE Hg Ni mg/l mg/l

AUSENCIA 0,01 2,0

Fuente: TULAS, 2003

ANEXOS 2 Preparacin de Reactivos

Preparacin de Reactivos

Solucin de Boro hidruro de sodio (0,2% NaBH4)

En un baln volumtrico de 500 ml

Disolver con agua desionizada (0.054 s/cm) 1,25 g de lentejas de hidrxido de sodio Merck Y 1,0 g de Borohidruro de sodio Panreac (Reag. USP) PA Ultrasonar la solucin preparada de ser necesario para obtener una rpida disolucin. Aforar el baln volumtrico con agua desionizada (0.054 s/cm).
Solucin de Boro hidruro de sodio (0,3% NaBH4)

En un baln volumtrico de 500 ml

Disolver con agua desionizada (0.054 s/cm) 1,90 g de lentejas de hidrxido de sodio Merck Y 1,50 g de Borohidruro de sodio Panreac (Reag. USP) PA Ultrasonar la solucin preparada de ser necesario para obtener una rpida disolucin. Aforar el baln volumtrico con agua desionizada (0.054 s/cm).
Solucin de Boro hidruro de sodio (0,4% NaBH4)

En un baln volumtrico de 500 ml

Disolver con agua desionizada (0.054 s/cm) 2,5 g de lentejas de hidrxido de sodio Merck Y 2,0 g de Borohidruro de sodio Panreac (Reag. USP) PA Ultrasonar la solucin preparada de ser necesario para obtener una rpida disolucin. Aforar el baln volumtrico con agua desionizada (0.054 s/cm).
Solucin de Boro hidruro de sodio (0,5% NaBH4)

En un baln volumtrico de 500 ml

Disolver con agua desionizada (0.054 s/cm) 3,13 g de lentejas de hidrxido de sodio Merck Y 2,50 g de Borohidruro de sodio Panreac (Reag. USP) PA Ultrasonar la solucin preparada de ser necesario para obtener una rpida disolucin. Aforar el baln volumtrico con agua desionizada (0.054 s/cm).

Solucin de cido clorhdrico (5M HCl)

200 mL de cido clorhdrico 37% Panreac (mx. 0,000 000 5% de Hg) PAACS-ISO. Aforar con agua desionizada en un baln volumtrico de 500 mL.

Solucin de cido sulfrico (30% H2SO4)

En un baln volumtrico de 100 mL. Verter 31 mL de cido sulfrico 98% Panreac (mx. 0,000 000 5% de Hg) PAACS-ISO. Aforar con agua desionizada (0.054 s/cm).

Solucin de cido ntrico (30% HNO3)

44 mL de cido ntrico 69% Panreac (mx. 0,000 000 5% de Hg) PA-ISO. Aforar con agua desionizada en un baln volumtrico de 100 mL.

Solucin de cido ntrico (1.5% HNO3)

22 mL de cido ntrico 69% Panreac (mx. 0,000 000 5% de Hg) PA-ISO. Colocar en un baln de 1000 mL Aforar con agua desionizada (0.054 s/cm).

Solucin de Permanganato de potasio (5% KMnO4)

Pesar 0.25 g de permanganato de potasio Panreac (mx.0,000 005% de Hg) PAACS Diluir en un baln de 5 mL Aforar con agua desionizada (0.054 s/cm).

ANEXOS 3 Equipos Utilizados

Equipo Utilizados SHIMADZU GHV-1 SHIMADZU AA680

Botellas de Reactivos

Mangueras Grapa Grapa

Rotor Tubos de Interruptor Lmpara de flujo de presin Aspiracin

Imagen 1. Fotografa del Equipo SHIMADZU GHV-1

Celda de Cuarzo

Soporte de la Celda

Conducto de Caucho

Imagen 2. Fotografa del Mechero y Celda de Cuarzo

Monitor

Equipo de Absorcin Atmica

Equipo de Generacin de Vapor fro

Sistema de Lectura

Imagen 3. Fotografa de los Equipos SHIMADZU GHV-1 y SHIMADZU AA680

ANEXOS 4 Tabla de Resultados y Anlisis Estadstico

Tablas de Resultados Y Anlisis Estadstico

P REPARACIN DE E STNDARES C1 V1 = C2 V2 Concentracin Final Ppm (C2) 10 1 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 Volumen Final mL (V2) 50 50 50 50 50 50 50

Tabla N 1 Preparacin de Estndares de Calibracin Volumen inicial mL (V1) 0.5 5 1 1.5 2 2.5 3 Concentracin Inicial Ppm (C1) 1000 10 1 1 1 1 1

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011 C ONDICIONES DE O PERACIN DEL E QUIPO DE G ENERACIN DE VAPOR F RO Tabla N 2 Resultados Obtenidos de la Experimentacin con el Equipo de Generacin de Vapor Fro Tratamientos N Codificacin 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 a1b1 a1b2 a1b3 a2b1 a2b2 a2b3 a3b1 a3b2 a3b3 a4b1 a4b2 a4b3 ABS R1 0.004 0.020 0.047 0.014 0.088 0.110 0.129 0.162 0.110 0.091 0.031 0.012 R2 0.001 0.025 0.043 0.017 0.089 0.111 0.125 0.164 0.174 0.098 0.030 0.019 R3 0.003 0.023 0.048 0.010 0.087 0.115 0.127 0.163 0.148 0.096 0.038 0.015 R4 0.006 0.026 0.040 0.012 0.088 0.113 0.129 0.160 0.195 0.095 0.033 0.006 R5 0.005 0.028 0.046 0.017 0.085 0.114 0.128 0.163 0.165 0.099 0.039 0.018 Promedio 0.004 0.024 0.045 0.014 0.087 0.113 0.128 0.162 0.158 0.096 0.034 0.014

Elaborado por: Alarcn Quinapanta, 2011

Factor a: Agente Reductor (NaBH4) Factor b: Nivel de Presin de Argn Replicas Nivel a1: 0,20% Nivel b1: 32,70 psi R1 Nivel a2: 0,30% Nivel b2: 46,4 psi R2 Nivel a3: 0,40% Nivel b3: 57,6 psi R3 Nivel a4: 0,50% R4 R5 Tabla N3 Resultados Medios de la Experimentacin con el Equipo de Generacin de Vapor Fro Tratamiento 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 ABS 0.0038 0.0244 0.0448 0.0140 0.0874 0.1126 0.1276 0.1624 0.1146 0.0946 0.0342 0.014 mg/L 0.000 0.002 0.004 0.001 0.009 0.011 0.013 0.018 0.011 0.009 0.003 0.001

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011 Tabla N 4 Porcentajes de Recuperacin - Equipo de Generacin de Vapor Fro % DE RECUPERACIN R3 R4 R5 -2.6 -0.6 -1.3 10.9 12.9 14.3 27.8 22.4 26.4 2.1 3.5 6.8 54.1 54.8 52.7 73.0 71.6 72.3 81.1 82.4 81.8 105.4 103.4 105.4 27.8 66.2 87.2 103.4 59.5 14.9 21.0 17.6 21.7 5.5 -0.6 7.5

tem 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

R1 -1.9 8.9 27.1 4.8 54.8 69.6 82.4 104.7 69.6 56.8 16.3 3.5

R2 -4.0 12.2 24.4 6.8 55.4 70.3 79.7 106.1 112.8 61.5 15.6 8.2

Promedio -2.1 11.8 25.6 4.8 54.4 71.4 81.5 105.0 72.7 59.2 18.4 4.8

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

Tabla N 5 Resultados del Clculo de ANOVA de la Experimentacin con el Equipo de Generacin de Vapor Fro Fuente de varianza A: Factor A B: Factor B Replicas Suma de cuadrados 0.132646 0.00534323 0.000285208 Cuadrado Medio 0.0442153 0.00267162 0.000285208

GL

FC

F 0.0000 0.0000 0.0800

3 2 1

496.30 29.99 3.20

INTERACCIONES AB RESIDUOS Total (Corregido) P value <= 0.05 Fc>Ft 0.0468828 0.00418719 0.189344 0.000000053742 Tukey Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011 6 47 59 ** Estadsticamente significativo Estadsticamente significativo 0.00781379 0.0000890892 87.71 0.0000

Tabla N 6 Resultados del Contraste Mltiple de Rangos para Absorbancia segn Factor A Mtodo: 95.0 porcentaje HSD de Tukey Factor A 1 4 2 3 Media 0.0243333 0.048 0.0713333 0.149467 Grupos a b c d

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

Tabla N 7 Resultados del Contraste Mltiple de Rangos para Absorbancia segn Factor B Mtodo: 95.0 porcentaje HSD de Tukey Factor B 1 2 3 Media 0.0603 0.0771 0.08245 Grupos a b b

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011 Tabla N 8 Resultados de la Prueba de Tukey para la interaccion AB Factor A a1 a1 a1 a2 a2 a2 a3 a3 a3 a4 a4 a4 Factor B b1 b2 b3 b1 b2 b3 b1 b2 b3 b1 b2 b3 Medias 0.0038 0.0244 0.0448 0.014 0.0874 0.1126 0.1276 0.1624 0.1584 0.0958 0.0342 0.014

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

Validacin del Mtodo Analtico para la Determinacin de Mercurio. Tabla N 9 Reporte de ABS obtenidas en la curva de Calibracin N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Concentracin Experimental 0.000 0.000 0.000 0.02 0.02 0.02 0.03 0.03 0.03 0.04 0.04 0.04 0.05 0.05 0.05 0.06 0.06 0.06 Rplicas R3 0.000 0.000 0.000 0.162 0.160 0.162 0.240 0.238 0.244 0.296 0.318 0.302 0.392 0.392 0.408 0.462 0.451 0.447 Promedio 0.000 0.000 0.000 0.161 0.163 0.163 0.240 0.239 0.242 0.304 0.316 0.306 0.393 0.393 0.399 0.458 0.454 0.455

R1 0.000 0.000 0.000 0.162 0.165 0.164 0.238 0.239 0.241 0.298 0.322 0.311 0.388 0.387 0.399 0.449 0.459 0.457

R2 0.000 0.000 0.000 0.160 0.163 0.162 0.239 0.241 0.239 0.309 0.304 0.290 0.386 0.390 0.405 0.452 0.447 0.450

R4 0.000 0.000 0.000 0.159 0.164 0.165 0.243 0.236 0.242 0.312 0.326 0.328 0.400 0.392 0.395 0.459 0.464 0.462

R5 0.000 0.000 0.000 0.164 0.163 0.163 0.239 0.243 0.245 0.303 0.308 0.298 0.399 0.402 0.388 0.466 0.448 0.458

Elaborado por: Alarcn Cristina Investigador

Tabla N 10 Comprobacin de la Concentracin de los Estndares de Calibracin Concentracin Experimental mg/L 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.001/Fc 0.02 0.001/Fc 0.02 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.0015/Fc 0.03 0.0015/Fc 0.03 Concentracin Calculada ABS 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.162 0.160 0.162 0.159 0.164 0.238 0.239 0.240 0.243 0.239 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.165 0.163 0.160 0.164 0.163 0.239 0.241 0.238 0.236 0.243 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.164 0.162 0.162 0.165 0.163 0.241 0.239 0.244 0.242 0.245 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.020 0.020 0.020 0.020 0.021 0.030 0.031 0.031 0.031 0.031 mg/L 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.021 0.021 0.020 0.021 0.021 0.031 0.031 0.030 0.030 0.031 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.021 0.020 0.020 0.021 0.021 0.031 0.031 0.031 0.031 0.031

Continuacin 0.04 0.04 0.04 0.002/Fc 0.002/Fc 0.05 0.05 0.05 0.0025/Fc 0.0025/Fc 0.06 0.06 0.06 0.003/Fc 0.003/Fc 0.04 0.04 0.04 0.04 0.04 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.06 0.06 0.06 0.06 0.06 0.298 0.309 0.296 0.312 0.303 0.388 0.386 0.392 0.400 0.399 0.449 0.452 0.462 0.459 0.466 0.322 0.304 0.318 0.326 0.308 0.387 0.390 0.392 0.392 0.402 0.459 0.447 0.451 0.464 0.448 0.311 0.290 0.302 0.328 0.298 0.399 0.405 0.408 0.395 0.388 0.457 0.450 0.447 0.462 0.458 0.040 0.040 0.040 0.040 0.040 0.050 0.050 0.051 0.052 0.052 0.060 0.060 0.060 0.060 0.060 0.040 0.040 0.040 0.040 0.040 0.050 0.050 0.051 0.051 0.052 0.060 0.060 0.060 0.060 0.060 0.040 0.040 0.040 0.040 0.040 0.052 0.052 0.053 0.051 0.050 0.060 0.060 0.060 0.060 0.060

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011 Factor de concentracin (Fc) = 0.05

Tabla N11 Valores Promedios para la Determinacin de la Curva de Calibracin tem 1 2 3 4 5 6 Concentracin mg/L 0 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 ABS 0.000 0.163 0.240 0.308 0.395 0.455

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

Tabla N12 Porcentajes de Recuperacin de las Soluciones Estndar del Analito de Estudio Concentracin Estndar mg/L 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.001 0.02 0.001 0.02 0.001 0.02 0.0015 0.03 0.0015 0.03 0.0015 0.03 0.002 0.04 0.002 0.04 0.002 0.04 0.0025 0.05 0.0025 0.05 0.0025 0.05 0.003 0.06 0.003 0.06 0.003 0.06 Concentracin Experimental mg/L -0.001 -0.001 -0.001 0.020 0.021 0.021 0.031 0.031 0.031 0.039 0.041 0.040 0.051 0.051 0.052 0.058 0.058 0.059 Prom X estima 0.0

ABS 0 0 0 0.161 0.163 0.163 0.2398 0.2394 0.2422 0.3036 0.3156 0.3058 0.393 0.3926 0.399 0.4482 0.4462 0.4506

% de Rec. 0.00 0.00 0.00 102.00 103.06 103.19 102.60 102.42 103.66 98.07 102.04 98.79 102.13 102.02 103.71 97.29 96.84 97.82

X % rec. 0.0

0.021

102.7

0.031

102.9

0.040

99.6

0.051

102.6

0.058

97.3

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

M ATERIAL DE R EFERENCIA Tabla N 13 Datos obtenidos del Estudio del Material de Referencia TRACE METALS 1 QCI-034-1 CONC. mg/L TRACE METALS 1 QCI-034-1 0.073 0.070 0.071 0.069 0.069 ABS 0.068 0.071 0.069 0.072 0.070 0.069 0.069 0.072 0.068 0.071 0.0145 0.0138 0.0141 0.0136 0.0136 Concentracin mg/L 0.0134 0.0141 0.0136 0.0143 0.0138 0.0136 0.0136 0.0143 0.0134 0.0141

0.0144

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

Tabla N 14 Datos obtenidos del Estudio del Material de Referencia TRACE METALS 1 PQ-25A CONC. mg/L TRACE METALS 1 PQ-25 0.31 0.311 0.315 0.316 0.309 Concentracin mg/L 0.309 0.31 0.311 0.316 0.315 1.00 1.00 1.01 1.02 0.99 1.02 0.99 1.00 1.01 1.02 0.99 1.00 1.00 1.02 1.01

ABS 0.316 0.309 0.311 0.315 0.316

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011 S ECCIN 1. Lmites de confianza de la pendiente: = (5)

= 7,6337 (2,78 0,1519) Lmites de confianza de la ordenada al origen: = 7,6337 0,4224 =

(6)

= 0,0058 (2,78 0,0059) S ECCIN 2. = 0,0058 0,0164

S ENSIBILIDAD DE CALIBRADO : b = 7,6337 S ENSIBILIDAD A NALTICA : = = (7)

= 0,0014

0,0216 0,05 7,6337

S ECCIN 3. L MITE DE D ETECCIN : (8) 1 1 2 = + + )2 =1( = 1 1 (0,03)2 0,0216 + + 5 6 0,0024 7,3884 = 0,0025

L MITE DE C UANTIFICACIN : =

1 1 2 + + )2 =1( 1 1 (0,03)2 0,0216 7,3884 + + 5 6 0,0024 10 = 0,0140

(9)

P RECISIN Tabla N 15 Valores de F obtenidos PRUEBA F DCMB DCMW 0 0 8.3514E-08 5.1481E-08 1.9677E-07 9.5526E-08 3.5019E-06 1.9752E-06 1.1028E-06 7.7394E-07 3.3291E-07 8.1054E-07 3.7181E-09 7.3647E-08 0 0.00010618

CONCENTRACIONES 0 0 0.02 0.001 0.03 0.015 0.04 0.020 0.05 0.025 0.06 0.030 0.0144 0.0144 1 1

DCMB/DCMW 0.00 1.62 2.06 1.77 1.42 0.41 0.05 0.00

FTab

3.89

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

Tabla N 16 Reproducibilidad
mg/L 0 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.0144 1 0 0.001 0.015 0.020 0.025 0.030 0.0144 1 SDCB 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 SDCW 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0013 SDCT 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0013 N-1 14 14 14 14 14 14 14 14 SDCT/N-1 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0001 SRD 0.000 0.000 0.000 0.001 0.001 0.001 0.000 0.010 % SRD 1.2 1.1 3.7 1.8 1.4 1.8 1.0

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

Tabla N 17 Medias por Niveles de Concentracin

mg/L 0.00 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.0144 1 0 0.001 0.015 0.020 0.025 0.030 0.0144 1 0.000 0.020 0.031 0.039 0.051 0.059 0.014 1.003 Medias 0.000 0.021 0.031 0.041 0.051 0.059 0.014 1.007 MEDIA x NIVELES 0.000 0.021 0.031 0.040 0.051 0.059 0.014 1.005

0.000 0.021 0.031 0.039 0.052 0.059 0.014 1.003

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

Tabla N 18 Repetibilidad de los tres das

REPETIBILIDAD SDCW (Srd) Medias de das SDCW N-K 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 12.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 12.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 12.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 12.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 12.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 12.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 12.0000 0.0004 0.0004 0.0004 0.0013 12.0000

mg/L 0 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.01 1 0 0.001 0.015 0.020 0.025 0.030 0.0144 1

DCMW 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

Sr 0.000 0.000 0.000 0.001 0.001 0.001 0.000 0.010

% 1.1 1.0 3.5 1.8 1.5 1.9 1.0

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

Tabla N 19 Repetibilidad entre Das

ENTRE DAS SDCB SRD Medias entre das SDCB K-1 DCMB 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 2.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 2.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 2.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 2.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 2.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 2.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 2.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 2.0000 0.0000

mg/L 0 0 0.02 0.001 0.03 0.015 0.04 0.020 0.05 0.025 0.06 0.030 0.0144 0.0144 1 1

SR 0.0000 0.0003 0.0004 0.0019 0.0011 0.0006 0.0001 0.0000

% 1.4 1.5 4.7 2.1 1.0 0.4 0.0

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

E XACTITUD Tabla N 20 Porcentaje de Recuperacin-Exactitud Conc. mg/L 0.0000 0.0200 0.0300 0.0400 0.0500 0.0600 0.0144 1.0000 Conc Exp.mg/L -0.0008 0.0205 0.0307 0.0396 0.0510 0.0589 0.0144 1.0047 % Recup 102.6524 102.4653 99.0749 101.9313 98.1590 99.7602 100.4722 S 1.1838 1.1055 3.7024 1.8121 1.4360 1.7521 0.9731 CV 1.1532 1.0789 3.7370 1.7778 1.4629 1.7563 0.9685 t Exp 0.0000 1.0286 1.0219 0.1107 0.4858 0.5628 -0.0611 0.2180 t Tab

2.78

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

Tabla N 21 Porcentaje de Recuperacin-Exactitud Conc. mg/L*Fc 0.0000 0.0010 0.0015 0.0020 0.0025 0.0030 0.0144 1.0000 Conc Exp.mg/L -0.0004 0.00103 0.00154 0.00198 0.00255 0.00295 0.0144 1.0047 % Recup 102.6524 102.4653 99.0749 101.9313 98.1590 99.7602 100.4722 S 1.1838 1.1055 3.7024 1.8121 1.4360 1.7521 0.9731 CV 1.1532 1.0789 3.7370 1.7778 1.4629 1.7563 0.9685 t Exp 0.0000 1.0286 1.0219 0.1107 0.4858 0.5628 -0.0611 0.2180 t Tab

2.78

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

I NCERTIDUMBRE Tabla N 22 Incertidumbre del Mtodo

Func. Resp. 0.0010 0.0010 0.0010 0.0010 0.0010 0.0010 0.0010 0.0010 Correc. No realizada 0.001 0.001 0.001 0.000 0.001 0.001 0.000 0.005 Correc. no realizada 0.000 0.000 0.000 0.000 0.001 0.001 0.000 0.003 Suma cuadrados 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.001 Relativa % 10.534 7.490 9.070 5.817 4.814 4.057 14.537

mg/L 0.0000 0.0200 0.0300 0.0400 0.0500 0.0600 0.0144 1.0000 0.0000 0.0010 0.0015 0.0020 0.0025 0.0030 0.0144 1.0000

patrn 0 0.000200001 0.000200002 0.000200004 0.000200006 0.000200008 0.000200006 0.020000023

S repet. 0.000 0.000 0.000 0.002 0.001 0.001 0.000 0.010

0.002 0.002 0.002 0.004 0.003 0.003 0.002 0.045

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011 R ANGOS DE T RABAJO Tabla N 23 Rangos de Trabajo mg/L 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.0144 1 0.002 0.002 0.004 0.003 0.003 0.002 0.045 % 10.5 7.5 9.1 5.8 4.8 14.1 4.5 mg/L*Fc 0.0010 0.0015 0.0020 0.0025 0.0030 0.0144 1.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.002 % 10.5 7.5 9.1 5.8 4.8 14.1 4.5 FC

0.05

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011 E STUDIO DE LAS M ATRICES DE A NLISIS CON A DICIN DE E STNDAR Tabla N 24 Reporte de ABS obtenidas de la determinacin de los niveles de mercurio en muestras de anlisis Tratamientos Matriz+Estndar Agua Residual Agua Residual Agua Residual Agua Natural Agua Natural Agua Natural Agua de Consumo Agua de Consumo Agua de Consumo ABS R4 0.241 0.244 0.239 0.114 0.112 0.112 0.103 0.115 0.103

N 1 2 3 4 5 6 7 8 9

R1 0.232 0.240 0.237 0.104 0.111 0.114 0.108 0.114 0.102

R2 0.236 0.239 0.241 0.116 0.116 0.116 0.115 0.117 0.109

R3 0.238 0.245 0.244 0.102 0.114 0.109 0.116 0.109 0.115

R5 0.236 0.237 0.242 0.11 0.108 0.116 0.111 0.103 0.107

Promedio 0.236 0.241 0.241 0.109 0.112 0.113 0.111 0.112 0.107

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

Tabla N 25 Reporte de Datos de Adicin de Estndares en muestras de agua residual Agua Residual 0.112 0.116 0.112 0.114 0.110 0.232 0.236 0.238 0.241 0.236 Abs 0.110 0.116 0.114 0.112 0.108 0.240 0.239 0.245 0.244 0.237 0.112 0.111 0.115 0.113 0.107 0.237 0.241 0.244 0.239 0.242 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001 0.002 0.002 0.002 0.002 0.002 mg/L 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001 0.002 0.002 0.002 0.002 0.002 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001 0.002 0.002 0.002 0.002 0.002

A110215

A 110215 + st 0,001 mg/L

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011 Tabla N 26 Reporte de Datos de Adicin de Estndares en muestras de agua natural Agua Natural -0.002 -0.001 0.000 0.001 0.004 0.104 0.116 0.102 0.114 0.110 Abs 0.001 0.000 -0.002 0.000 0.002 0.111 0.116 0.114 0.112 0.108 0.003 -0.001 0.001 -0.001 0.000 0.114 0.116 0.109 0.112 0.116 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001 mg/L 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001

A1101137

A 1101137 + st 0,001 mg/L

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011 Tabla N 27 Reporte de Datos de Adicin de Estndares en muestras de agua de consumo Agua de Consumo -0.001 0.000 0.003 0.001 0.000 0.108 0.115 0.116 0.103 0.111 Abs 0.000 0.002 -0.002 0.000 0.002 0.114 0.117 0.109 0.115 0.103 0.003 -0.001 0.001 -0.002 0.000 0.102 0.109 0.115 0.103 0.107 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001 mg/L 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001

A110203

A 110203 + st 0,001mg/L

Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

ANEXOS 5

Grficos

Solucin Madre 1000ppm Tomar 0,5 mL

10 ppm

Tomar 5,0 mL

1,0 ppm

Tomar 1,0 mL

Tomar 1,5 mL

Tomar 2,0 mL

Tomar 2,5 mL

Tomar 3,0 mL

0,02 ppm

0,03 ppm

0,04 ppm

0,05 ppm

0,06 ppm

Grfico 1. Esquema de la Preparacin de Estndares de Calibracin. Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

Condiciones Experimentales del Equipo GVF-AAS

0,03 Recuperacin del Analito 0,02 0,02 0,01 0,01 0,00 -0,01

Absorbancias

Grfico 2. Condiciones de Operacin del Equipo de Generacin de Vapor Fro Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

Representacin por Cdigo de Nivel

0.2

Absorbancia

0.16 0.12 0.08 0.04 0 1 2 3 4

Factor A
Grfico 3. Representacin grafica del Factor A en relacin con los valores de absorbancia Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

Representacin por Cdigo de Nivel

0.2

Absorbancia

0.16 0.12 0.08 0.04 0 1 2 3

Factor B
Grfico 4. Representacin grafica del Factor B en relacin con los valores de absorbancia Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

Medias y 95.0 Porcentajes Intervalos HSD de Tukey

0.16

Absorbancia

0.12 0.08 0.04 0 1 2 3 4

Factor A
Grfico 5. Representacin del intervalo de la prueba de Tukey al 95% para el Factor A. Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

Medias y 95.0 Porcentajes Intervalos HSD de Tukey

(X 0.001) 96

Absorbancia

86 76 66 56 1 2 3

Factor B
Grfico 6. Representacin del intervalo de la prueba de Tukey al 95% para el Factor B. Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

Grfico de Interaccin
0.18

Absorbancia

0.15 0.12 0.09 0.06 0.03 0 1 2 3 4

Factor B 1 2 3

Factor A
Grfico 7. Comportamiento de la interaccin de los Factores de estudio. Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

CURVA DE CALIBRACIN
0,500 0,450 0,400 0,350 0,300 0,250 0,200 0,150 0,100 0,050 0,000 0 0,01 0,02 0,03 mg/L 0,04 0,05

y = 7,633x + 0,005 R = 0,998

ABS

0,06

0,07

Grfico 8. Curva de Calibracin de Mercurio Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

Lmites de Confianza
0,070 0,060 0,050 0,040 0,030 0,020 0,010 0,000 -0,010 0 0,01 0,02 0,03 Series1 LMin 0,04 0,05 0,06 0,07

LMax Series2

Grfico 9. Determinacin de los Lmites de Confianza Mximos y Mnimos Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

FUENTES DE INCERTIDUMBRE
0,025 0,02 INCERTIDUMBRE 0,015 0,01 0,005 0 0,00 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,01 1,00 CONCENTRACIN mg/L PATRN PATRON FR SR CORR.NO REALIZADA

-0,005

Grfico 10. Determinacin de las Fuentes de Incertidumbre en Estndares entre 0.02mg/L y 0.06mg/L y el Material de Referencia Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011

FUENTES DE INCERTIDUMBRE
0,025 0,02 INCERTIDUMBRE 0,015 0,01 0,005 0 0,00 0,001 0,02 0,0015 0,03 0,0020 0,04 0,0025 0,05 0,06 0,01 1,00 CONCENTRACIN mg/L PATRON PATRN FR SR CORR.NO REALIZADA

-0,005

Grfico 11. Determinacin de las Fuentes de Incertidumbre en Estndares entre 0.001mg/L y 0.003mg/L y el Material de Referencia Fuente: Elaborado por Alarcn Quinapanta, 2011