Romero Blanco, Eric; Meza Nez, Humberto; Poveda Calvo, Vanessa.

Metodologa para la determinacin de residuos de plaguicidas organofosforados en leche de consumo nacional mediante cromatografa de gases y extraccin en fase slida.

Metodologa para la determinacin de residuos de plaguicidas organofosforados en leche de consumo nacional mediante cromatografa de gases y extraccin en fase slida
Eric Romero Blanco Humberto Meza Nez Vanessa Poveda Calvo
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Palabras clave
Cromatografa de gases, plaguicidas organofosforados, leche, extraccin en fase slida.

Resumen
Se desarroll un nuevo mtodo orientado a la deteccin y cuantificacin de 15 plaguicidas organofosforados en muestras de leche cruda para consumo nacional. Se utiliz un cromatgrafo de gases equipado con columna capilar de polidimetilsiloxano y detector NPD, en combinacin con la tcnica de extraccin en fase slida (SPE) para el proceso de limpieza de la muestra y extraccin de los plaguicidas. Se
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obtuvieron porcentajes de recuperacin cercanos al 100% y lmites de deteccin inferiores a 20 g/L para 13 de los organofosforados analizados. El mtodo en general present importantes ventajas en comparacin con metodologas convencionales de extraccin lquido-lquido.

Introduccin
Las causas principales de la presencia de residuos de plaguicidas organofosforados (OF) en leche son sus propiedades fisicoqumicas particulares de liposolubilidad. En adicin se debe mencionar el uso excesivo y poco regulado de estos compuestos en las prcticas agropecuarias para el control

Instituto Tecnolgico de Costa Rica. Escuela de Qumica. Laboratorio de Servicios Qumicos y Microbiolgicos CEQIATEC. Tel. 550-2368. Correo electrnico: eromero@costarricense.cr. Instituto Tecnolgico de Costa Rica. Escuela de Qumica. Laboratorio de Servicios Qumicos y Microbiolgicos CEQIATEC. Tel. 550-2368. Correo electrnico: hmeza@itcr.ac.cr Instituto Tecnolgico de Costa Rica. Escuela de Biologa. Tel. 550-2285. Correo electrnico: vpoveda@itcr.ac.cr.

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de las enfermedades de los animales, transmitidas por insectos y parsitos. Se comprueba que los animales productores de leche expuestos a tales condiciones son capaces de trasladar a su proceso metablico una carga importante de contaminacin por plaguicidas y ser acumulada en lpidos y lipoprotenas. Debido al porcentaje de lpidos presentes en la leche, esta se convierte en un medio en el cual es de esperar la presencia de residuos de plaguicidas organofosforados o de algn metabolito de biotransformacin de este. La toxicidad de estos compuestos, la cual se sita desde aguda a crnica, aun en pequeas cantidades, ha sido confirmada por diferentes estudios. Esta problemtica determina la clara necesidad de establecer mecanismos de control y monitoreo en lo referente a la contaminacin por plaguicidas organofosforados presentes en la leche destinada al consumo humano. La necesidad de contar con metodologas de anlisis qumico que permitan detectar la presencia de estos contaminantes, es parte fundamental de estos mecanismos. Al considerar los bajos niveles que caracterizan las concentraciones mximas permitidas reportadas para plaguicidas organofosforados en leche, se debe recalcar que las metodologas de anlisis qumico orientadas a la deteccin y cuantificacin de estos plaguicidas deben ser capaces de brindar altos porcentajes de recuperacin y bajos lmites de deteccin. Ha sido de uso generalizado paralelo al empleo de la cromatografa de gases, utilizar procedimientos basados en tcnicas de extraccin lquido-lquido en varias etapas como forma de extraccin de los plaguicidas de la leche. Sin embargo, estos estn caracterizados por requerir cantidades importantes de disolventes, logrando alcanzar en la mayora de los casos porcentajes

apenas aceptables de recuperacin y un efecto negativo en los lmites de deteccin obtenidos. Presentamos en este trabajo el desarrollado e implementacin de un procedimiento que permite de manera eficiente la deteccin y cuantificacin de plaguicidas organofosforados en leche. El procedimiento utiliza la cromatografa de gases y el proceso de extraccin del plaguicida se basa en la tcnica de extraccin en fase slida (SPE) como alternativa al mtodo tradicional de extraccin lquidolquido.

Materiales y equipo
Plaguicidas organofosforados Fueron utilizados estndares slidos certificados obtenidos de Supelco para los 15 plaguicidas organosfosforados analizados: clorpirifos, clorpirifos metil, coumafos, diazinon, diclorvos, dimetotato, disulfoton, etion, fenamifos, forato, isofenfos, malation, metil paration, paration y terbufos. Reactivos Disolventes calidad anlisis de residuos: Acetonitrilo (JTBaker), Acetona (JTBaker), Hexano (OmniSolv), Tolueno (Merck), Etanol absoluto (Merck), Cloruro de sodio (Merck), Sulfato de sodio anhidro (Merck). Agua destilada/desionizada. Cartuchos de extraccin en fase slida para limpieza de la muestra y extraccin de los plaguicidas: ENVI-8 (Supelco), LC-18 (Supelco), LC-NH2 (Supelco). Equipo El proceso de extraccin y concentracin se realiz utilizando un Sistema mltiple de vaco VisiTrap (Supelco) y Rotavapor (Buchi), con sistema de vaco y temperatura controlada. El anlisis cromatogrfico se realiz en un

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Cromatgrafo de gases Perkin Elmer Auto System, equipado con detector NPD, columna PE-1 (polidimetilsiloxano) de 25 m de largo, 0,33 mm de dimetro interno y 0.25 m grosor de pelcula.

lmite de deteccin y porcentaje de recuperacin del proceso de extraccin.

Resultados y conclusiones
El mtodo desarrollado en nuestro laboratorio permite de manera eficiente el anlisis de la mayora de los plaguicidas organofosforados ms comunes utilizados en la actividad agropecuaria en nuestro pas. Es apto para el anlisis en serie de nmeros grandes de muestras. La metodologa propuesta, en comparacin con mtodos convencionales de extraccin lquidolquido, se caracteriza por requerir una menor cantidad de muestra, un menor consumo de disolventes orgnicos, y brindar una mejora significativa en porcentajes de recuperacin y lmites de deteccin. Para muestras de leche que contenan concentraciones iniciales de alrededor de 100 g/L, se obtuvieron para 13 de los 15 plaguicidas analizados, excelentes porcentajes de recuperacin que se sitan entre el 105% para el caso de forato y 154% para el malation. Para el caso del diclorvos, se obtuvo un rendimiento del 32% por razones an no confirmadas al momento de esta publicacin; sin embargo, podra estar relacionado con la alta polaridad que presenta la molcula de este plaguicida (i.e., alta solubilidad en agua). Estudios preliminares realizados en nuestro laboratorio, indican que es de esperar, que porcentajes de recuperacin similares sean obtenidos para el anlisis de los plaguicidas incluidos en este trabajo, en caso de estar presentes en muestras de leche contaminadas con concentraciones an menores que los 100 g/L. Por otro lado, para los lmites de deteccin se obtuvieron resultados que se sitan entre 2 g/L para el caso del diclorvos y un mximo de 17 g/L para el coumafos.

Procedimiento
Extraccin de plaguicidas Cada muestra de 25 mL de leche se extrajo con 50 mL de acetonitrilo/5 g NaCl, empleando agitacin magntica por un perodo de 10 minutos. La mezcla de extraccin se centrifug por 15 minutos a 4000 rpm. Se procedi a limpiar el extracto orgnico de acetonitrilo empleando cartuchos LC-18 y secarlo sobre sulfato de sodio anhidro. Seguidamente, 5 mL del extracto se diluyeron con agua destilada a un volumen final de 50 mL. Los plaguicidas organofosforados se atraparon pasando el extracto acuoso a travs de un cartucho ENVI-8. Los plaguicidas fueron eluidos con 3 mL de hexano-acetona (90:10) y 3 mL de acetona-tolueno (75:25), acoplando la salida del cartucho ENVI8 un cartucho de limpieza LC-NH2. Posteriormente, el eluato se concentr utilizando un sistema Rotavapor a 3540 C hasta un volumen final de 1 mL para ser inyectado al cromatgrafo. Anlisis cromatogrfico El anlisis cromatogrfico de los extractos se realiz en las siguientes condiciones: temperatura del detector: 300 C, temperatura del inyector: 250 C, volumen de inyeccin: 1L, gas de arrastre: helio, split-less (1 min), programacin del horno: 80 C (1 min), 15 C/min, 160 C (5 min), 15 C/min, 275 C (5 min). Validacin del mtodo Para determinar la competencia tcnica del mtodo se evaluaron para cada uno de los plaguicidas organofosforados analizados los parmetros de mrito:

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Figura N. 1. Anlisis mediante CLAR de extracto de corteza de raz de Uncaria tomentosa (simplex N. 13).

Un anlisis comparativo entre los resultados de porcentajes de recuperacin y lmites de deteccin alcanzados, con los lmites mximos permitidos reportados en la literatura (ej. Codex alimentarius), permite concluir que el mtodo de anlisis desarrollado, puede ser utilizado como mecanismo de monitoreo y control de la contaminacin por plaguicidas organofosforados presentes en leche destinada al consumo humano

residuos. Junio 2004, www.faostat. fao.org. Daz, O. y Garca, M. Avances en Toxicologa de Contaminantes Qumicos en Alimentos 2003, Programa Iberoamericano de Ciencia y Tecnologa para el Desarrollo (CYTED) y Universidad de la Frontera, Santiago, Chile. EURACHEM. The Fitness for Purpose of Analytical Methods: A Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics, 1998. Garca, J. Introduccin a los Plaguicidas 2000, Universidad Estatal a Distancia, San Jos, Costa Rica. Horwitz, W. J. Analytical Chemistry 1982, 54, 67A. IUPAC. Pure Appl. Chem. 1999, 71, 337. Supelco Guide to Solid Phase Extraction 1998, Bulletin 910.

Bibliografa
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