2 Congreso Nacional de Qumica Mdica

Almanza-Prez y col.

EFECTO DE EXTRACTOS VEGETALES OBTENIDOS DE 5 PLANTAS ANTIDIABTICAS SOBRE LOS NIVELES DE GLUCOSA E INSULINA EN RATONES SANOS Y DIABTICOS
Almanza Prez Julio, Lpez Cruz Evelyn, Vzquez Carrillo Laura, Banderas Dorantes Tania, Romn Ramos Rubn y Alarcn Aguilar Francisco. Laboratorio de Farmacologa, Departamento de Ciencias de la Salud. Div. de Ciencias Biolgicas y de la Salud. Universidad Autnoma Metropolitana Unidad Iztapalapa. Email: aaasj2@prodigy.net.mx

RESUMEN
La gravedad de la diabetes mellitas y sus complicaciones, as como el aumento en el nmero de personas afectadas, nos ha llevado a continuar la bsqueda de nuevas alternativas para su control. Dentro de la medicina tradicional, uno de los recursos ms socorridos por la poblacin se refiere al uso de plantas medicinales. En Mxico se han reportado ms de 300 plantas empleadas en el control emprico de este padecimiento y Catharanthus roseous, Cecropia obtusifolia, Cucrbita ficifolia, Ibervillea sonorae y Psacalium peltatum son algunas de ellas. De estas cinco plantas se ha logrado demostrar, experimental y clnicamente, su efecto hipoglucmico. Sin embargo, poco se sabe acerca de su mecanismo de accin hipoglucemiante, aspecto primordial para poder fundamentar y validar cientficamente su uso en los pacientes. De estas plantas se han propuesto diferentes extractos hipoglucemiantesque han demostrado ser activos en animales sanos y con diabetes moderada (an con clulas beta pancreticas funcionales), pero no han mostrado actividad en animales con diabetes severa (sin clulas beta pancreticas). Por lo tanto es probable que su efecto se deba a un incremento en los niveles de insulina. El objetivo del presente trabajo consisti en determinar el efecto producido por los extractos hipoglucemiantes de las plantas citadas sobre los niveles de glucosa en sangre e insulina srica, en ratones sanos y con diabetes experimental inducida con aloxana. Todos los extractos evaluados redujeron la glucemia de manera significativa (P<0.05) y, aunque varios de los extractos mostraron tendencia a incrementar los niveles de insulina, nicamente el extracto obtenido de C. ficifolia lo hizo de manera estadsticamente significativa (P<0.05). As, adems del incremento en los niveles de insulina, otros mecanismos de accin extrapancreticos tambin necesitan ser explorados para poder explicar la accin hipoglucemiante de las plantas medicinales usadas en el control de la diabetes mellitus.
Palabras clave: Plantas medicinales, Plantas hipoglucemiantes, Diabetes mellitus.

INTRODUCCIN
La gravedad de la diabetes mellitus y sus complicaciones, as como el aumento en el nmero de personas afectadas, nos ha llevado a continuar la bsqueda de nuevas alternativas para su control. Dentro de la medicina tradicional, uno de los recursos ms socorridos por la poblacin se refiere al uso de plantas medicinales (Alarcn-Aguilar y Romn Ramos, 2006). En Mxico se han reportado ms de 300 plantas empleadas en el control emprico de este padecimiento y Catharanthus roseous, Cecropia obtusifolia, Cucurbita ficifolia, Ibervillea sonorae y Psacalium peltatum son algunas de ellas (Hernndez-Galicia y col., 2005). De estas cinco plantas se ha logrado demostrar, experimental y clnicamente, su efecto hipoglucmico (Andrade-Cetto y Heinrich, 2005; Simmonds y Howes, 2006). Sin embargo, poco se

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sabe acerca de su mecanismo de accin hipoglucemiante, aspecto primordial para poder fundamentar y validar cientficamente su uso en los pacientes. De estas plantas se han propuesto diferentes extractos hipoglucemiantes que han demostrado ser activos en animales sanos y con diabetes moderada (an con clulas beta pancreticas funcionales), pero no han mostrado actividad en animales con diabetes severa (sin clulas beta pancreticas) (Romn-Ramos y col., 1992; Contreras-Weber y col., 2002; Alarcn-Aguilar y col., 2002a). Por lo tanto es probable que su efecto se deba a un incremento en los niveles circulantes de insulina.

OBJETIVO
El objetivo del presente trabajo consisti en determinar el efecto producido por los extractos hipoglucemiantes de las plantas citadas sobre los niveles de glucosa en sangre e insulina srica, en ratones sanos y con diabetes experimental inducida con aloxana.

MATERIAL Y MTODOS
Animales de experimentacin y diseo experimental. Se trabaj con ratones de la cepa CD1, adultos, machos de 25-35 g, alimentados con nutricubos Harlan para roedores y agua ad limitum. Se hicieron dos lotes de animales: uno de ratones sanos y otro de ratones diabticos. La diabetes se indujo por administracin intravenosa de dos dosis del agente diabetgeno de 75 mg/kg de peso corporal en das alternados. Despus de 7 das, aquellos animales que presentaron niveles glucmicos por encima de los 200 mg/dl fueron considerados con diabetes experimental. En el primer experimento se trabaj con ratones sanos sometidos a un ayuno previo de 16 horas. Con estos animales se formaron al azar 4 grupos de 6 ratones cada uno de la siguiente forma: Grupo 1-S control tratado intraperitonealmente (ip) con 4ml/kg de solucin salina isotnica (SSI); Grupo 2-S control tratado ip con 4 ml/kg de aceite de maz; Grupo 3-S que recibi ip 500 mg/kg de una fraccin acuosa de Psacalium peltatum (AP); Grupo 4-S que recibi ip 300 mg/kg de una fraccin diclorometnica de Ibervillea sonorae (FP9). Ambos extractos se obtuvieron de acuerdo al protocolo descrito en reportes previos: para P. peltatum en Contreras y col. (2005); I. sonorae en Alarcn-Aguilar et al., (2005) y Hernndez-Galicia y col., (2006). En el segundo experimento se trabaj con ratones diabticos con libre acceso al alimento (sin ayuno). Con estos animales se formaron al azar 4 grupos de 6 ratones cada uno, distribuyendo los tratamientos en la misma forma que en el primer experimento: Grupo 1-D control con SSI, Grupo 2-D control con aceite de maz; Grupo 3-D con la fraccin AP de P. peltatum y Grupo 4-D con la fraccin FP9 de I. sonorae. El tercer experimento se realiz tambin en ratones sanos, pero ahora se les permiti el libre acceso al alimento (sin ayuno). Con estos animales se formaron al azar 3 grupos experimentales de 6 animales cada uno: Grupo 5-S de que recibi ip SSI como control; Grupo 6-S que recibi por la misma va 500 mg/kg de una fraccin acuosa de Cucurbita ficifolia (AP); y Grupo 7-S tratado ip con 300 mg/kg de una fraccin neutra de Cataranthus roseous (FN). Ambas fracciones fueron obtenidos, con algunas modificaciones, de acuerdo al protocolo descrito para P. peltatum en Contreras-Weber y col. (2002). El cuarto experimento se realiz nuevamente en ratones diabticos, con los cuales se formaron 4 grupos experimentales: Grupo 5-D control, que recibi ip SSI; Grupo 6-D, que recibi C. ficifolia en la misma forma y cantidad que en el tercer

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experimento; Grupo 7-D que recibi C. roseous en la misma forma y cantidad que en el tercer experimento; y Grupo 8-D, que recibi por la misma va 500 mg/kg de un extracto acuoso (preparacin tradicional) de Cecropia obtusifolia. Dicho extracto fue preparado de acuerdo al protocolo descrito en Romn-Ramos y col. (1991). Determinacin de parmetros. En todos los casos se cuantificaron los niveles de glucosa en sangre y los niveles de insulina en suero de los animales al inicio (t=0) y a los 360 minutos despus de la administracin de las sustancias. Las muestras sanguneas para la determinacin de la glucemia se tomaron por puncin de la vena caudal y la cuantificacin se realiz con ayuda de tiras reactivas y un glucmetro porttil AccuChek Comfort (Roche). Las muestras sanguneas para la determinacin de insulina se tomaron, bajo anestesia con ter, del seno orbital del ojo. Estas muestras se congelaron a -20 C hasta su uso, haciendo las cuantificacines por el mtodo de Elisa (Lynco Research).

RESULTADOS
En la Figura 1 se muestran los resultados de los dos primeros experimentos. Como se puede observar, tanto los ratones sanos como los ratones diabticos que fueron tratados con los extractos de P. peltatum e I. sonorae mostraron disminuciones significativas (P<0.05) en los niveles de glucosa con respeto a su valor inicial (A y C). La Figura 1 tambin muestra los niveles de insulina srica de los ratones tratados con estas dos plantas (B y D). Aunque es notable el incremento de dichos niveles en ratones sanos, la diferencia con respecto al control no es estadsticamente significativa (P>0.05). En ratones diabticos no se observa aumento en los niveles de insulina con respecto al control. Por su parte, los resultados con las otras tres plantas se muestran en la Tabla 1. En este caso, nuevamente todos los extractos evaluados redujeron la glucemia de manera significativa (P<0.05), tanto en ratones sanos como en diabticos. Adems, aunque los extractos evaluados mostraron tendencia a incrementar los niveles de insulina, nicamente el extracto obtenido de C. ficifolia lo hizo de manera estadsticamente significativa en ratones diabticos (P<0.05). As, podemos decir que todos los extractos evaluados mostraron efecto hipoglucmico, tanto en ratones sanos como en ratones con diabetes experimental, lo que corrobora el efecto sobre la glucemia que ya se haba reportado en estudios previos (Alarcn-Aguilar y col., 1998; 2002; 2002b; 2005; Contreras-Weber y col., 2002; Nammi y col., 2003). Aunque los extractos de I. sonorae y P. peltatum incrementaron los niveles de insulina en ratones sanos, la diferencia con respecto al estudio control no fue significativa (P>0.05); es probable que aumentando el nmero de experimentos y cuidando algunos aspectos tcnicos estas dos plantas verdaderamente ejerzan su accin hipoglucemiante a travs de un incremento en los niveles de insulina. Estos mismos extractos (I. sonorae y P. peltatum) no aumentaron los niveles de insulina en animales con diabetes experimental inducida con alloxana. Es probable que debido a las condiciones en las que se llev a cabo la induccin de diabetes experimental (2 dosis administradas de 75 mg/kg por va iv) se produjo una diabetes grave en los animales, quedando stos prcticamente sin clulas beta funcionales y carentes, por lo tanto, de insulina, como lo demuestran los valores tan elevados de la glucemia mayores a los 500 mg/dl, haciendo prcticamente imposible detectar cambios en los niveles de esta hormona.

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Los extractos de C. roseous y C. obtusifolia no incrementaron los niveles de insulina, por lo tanto, el mecanismo de accin hipoglucemiante de estos dos extractos no est mediado por la hormona, sino ms bien por un mecanismo extrapancretico. Cabe aclarar finalmente que en la actualidad, adems de repetir con un mayor nmero de animales los experimentos con las dos plantas que mostraron tendencia a incrementar los niveles de insulina, estamos trabajando tambin en la realizacin de estudios in Vitro para la posible interaccin de estos extractos con los canales de potasio dependientes de ATP, que son los que regulan la secrecin de insulina en las clulas beta pancreticas, para poder determinar si en verdad el mecanismo de accin de estos extractos se puede explicar por un incremento en los niveles de insulina. Con estos resultados se puede concluir que, adems del incremento en los niveles de insulina, es necesario explorar tambin otros mecanismos de accin extrapancreticos para poder explicar la accin hipoglucemiante de las plantas medicinales usadas en el control de la diabetes mellitus.

A
Sanos

B
Tiempo 0
100 80 60 40 20 0

Tiempo 360

Sanos
. Insulina (ng/ml)
0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0

S S I

Ac m az

P. peltatum

I.sonorae

Control T- 0

S:S.I. 360

A. de Maiz 360

Tratamiento

Tratamiento

P. peltatum 360

I. sonorae 360

C
Diabticos 800
Glucosa (mg/dl)

D
D iabticos 0.4 0.3 0.2 0.1
SSI Aceite de Maz P.peltaum I.sonorae

Tiempo 0

Tiempo 360

Tiem po 0

Tiem po 360

600 400 200 0

Tratamiento

0
SSI Ac ma z P. peltatum I.sonorae Tr at ami ent o

Fig. 1. Niveles de glucosa e insulina, en ratones sanos en ayunas (A y B) y ratones diabticos con libre acceso al alimento (C y D), antes y despus de la administracin de las sustancias control (SSI y Ac. de maz), P. peltatum (500 mg/kg) e I. sonorae (300 mg/kg).

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Glucemia mg/dl (meanSEM) T=0 240 min 65.74.6 58.04.7 57.83.9 513.035.8 363.5162.2 487.8127.7 542.980.5 69.74.9 39.67.7* 47.73.3* 467.740.8 189.7151.8* 277.0172.2* 308.9124.7*

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Niveles de Insulina ng/ml (meanSEM) t=0 300 min 0.42530.2442 0.52560.2949 (n=6) (n=6) 0.29810.0512 n=4 0.3372.0551 n=3 0.17770.0655 (n=4) 0.33790.1298 n=5 0.36750.2133 n=4 0.18420.1727 (n=3) 0.46770.2581* (n=4) 0.19940.0666 (n=5) 0.16110.0196

Ratones sanos

Tratamiento Control (SSI)

n 6

C. ficifolia maduro (AP) C. roseous (FN)

Ratones diabticos

6 6 6 6 6 6

Control (SSI) C. ficifolia maduro (AP) C. roseous (FN) C. obtusifolia (EA)

Tabla 1. Niveles de glucosa e insulina, en ratones sanos y ratones diabticos con libre acceso al alimento, antes y despus de la administracin de las sustancias control (SSI), Cucurbita ficifolia maduro (500 mg/kg), Cataranthus roseous FN (300 mg/kg) y C. obtusifolia EA (300 mg/kg) *Diferencia significativa con respecto al nivel basal (P<0.05).

BIBLIOGRAFA
1. 2. Alarcon Aguilar Fj, Roman Ramos R, Perez Gutierrez S, Aguilar Contreras A, Contreras Weber Cc Y Flores Saenz Jl.1998. Study Of The Anti-Hyperglycemic Effect Of Plants Used As Antidiabetics. Journal Of Ethnopharmacology 61: 101-110. Alarcon-Aguilar Fj, Hernandez-Galicia E, Campos-Sepulveda Ae, Xolalpa-Molina S, Rivas-Vilchis Jf, Vazquez-Carrillo Li, Roman-Ramos R. 2002a. Evaluation Of The Hypoglycemic Effect Of Cucurbita Ficifolia Bouch (Cucurbitaceae) In Different Experimental Models. Journal Of Ethnopharmacology 82:185-189. Alarcon-Aguilar Fj, Campos-Sepulveda Ae, Xolalpa-Molina S, Hernandez-Galicia E, Roman-Ramos R. 2002b. Hypoglycaemic Activity Of Ibervillea Sonorae Roots In Healthy And Diabetic Mice And Rats. Pharmaceutical Biology 40: 570-575. Alarcon-Aguilar Fj, Calzada-Bermejo F, Hernandez-Galicia E, Ruz Angeles Cristina Y Roman-Ramos R. 2005. Acute And Chronic Hypoglycemic Effect Of Ibervillea Sonorae Root Extracts Ii. Journal Of Ethnopharmacology, 97: 447-452. Alarcn-Aguilar Fj Y Romn Ramos R. 2006. Anti-Diabetic Plants In Mexico And Central America. En: Traditional Medicines For Modern Times Antidiabetic Plants. Editado Por Amala Soumyanath. Crc Press Taylor & Francis Group, Boca Raton, Fl. Usa. Pp. 179-187. Andrade-Cetto A Y Heinrich M. 2005. Mexicans Plants With Hypoglycaemic Effect Used In The Treatment Of Diabetes. Journal Of Ethnopharmacology 99: 325-348. Contreras-Weber Cc, Prez Gutirrez S, Alarcn Aguilar Fj Y Romn Ramos R. 2002. Antihyperglycemic Effect Of Psacalium Peltatum Extracts. Proc. West. Pharmacol. Soc. 45: 128-130. Contreras Claudia, Ruben Roman, Cuahutemoc Perez, Francisco Alarcon, Miguel A. Zavala, Salud Perez. 2005. Hypoglycemic Activity Of A New Carbohydrate Isolated From The Roots Of Psacalium Peltatum. Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 53: 1408-1410. Hernndez Galicia E, Romn Ramos R, Aguilar Santamaria L, Alarcn-Aguilar Fj. 2005. Plantas Medicinales Usadas En Mxico Para El Control De La Diabetes Mellitus. En: Anuario De Investigacin En Etnomedicina, Medicinas Compementarias Y Utilizacin De Plantas Medicinales 2005. Jos Federico Rivas Vilchis Ed. Editado Por La Uam-I. Pp. 65-79. Hernandez-Galicia E, Ae Campos Sepulveda, F Calzada, Li Vazquez-Carrillo, R Roman-Ramos Y Fj. Alarcon-Aguilar. 2006. Acute Toxicity And Hypoglycaemic Activity-Guided Fractionation Of A Dichlorometane Extract Of Root From Ibervillea Sonorae. Journal Of Ethnopharmacology. (Enviado). Nammi S, Boini Mk, Lodagala D Y Behara Rbs. 2003. The Juice Of Fresh Leaves Of Catharanthus Roseous Linn. Reduces Blood Glucose In Normal And Alloxan Diabetic Rabbits. Bmc Complementary And Alternative Medicine 3: 1-4. Roman R, Jl Flores, G Partida, A Lara Y F Alarcon. 1991. Experimental Study Of The Hypoglycemic Effect Of Some Antidiabetic Plants. Archivos De Investigacion Medica 22: 87-92. Roman R, A Lara, F Alarcon Y Jl Flores. 1992. Hypeglycemic Activity Of Some Antidiabetic Plants. Archives Of Medical Research 23: 105-109. Simmonds Msj Y Howes M-Jr. 2006. Plants Used In The Treatment Of Diabetes. En: Traditional Medicines For Modern Times Antidiabetic Plants. Edited By Amala Soumyanath. Crc Press Taylor & Francis Group, Boca Raton, Fl. Usa. Pp. 19-82.

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