PRESE N T A CI N El ao 1997 despert sobresaltado las primeras planas de prensa oral y escrita del mundo que publicaban un hecho

cientfico sin precedentes, reforzado por Rev !ature "ebrero 97 #on el artculo $%n rebao de clones$ En Escocia,un &rupo de investi&adores lo&ran clonar un ma mfero superior, ba'o la (atuta del )r *am +ilmut ,bilo&o del *nstituto de Roslin de Edimbur&o-,contradiciendo las leyes naturales y amenazando el sentido com.n de la especie simult/neamente, $science$, la revista de mayor presti&io,e0plica minuciosamente los pormenores de la t1cnica llevada a cabo, y en virtud de la cual, nace "DOLLY", una ove'a id1ntica a su madre, y hu1rfana de $padre$2t1cnicamente, un clon En la terminolo&a &en1tica, la clonacin implica un con'unto de m1todos y t1cnica de laboratorio que producen replicas id1nticas del materialclonado &enes, y por aadidura,el mismo o m uy seme'ante aspecto fsico ,fenotipoEsta noticia causo revuelo en el mundo entero abriendo nu merosas Estas replicas se refieren a la misma constitucin &en1tica, es decir de los mismos

interro&antes, especialmente en el campo de la medicina 3, ahora que la modificacin &en1tica y ma mferos clonados es una realidad, las investi&aciones biom1dicas est/n empezando a desarrollar diversos caminos para usar esta biotecnolo&a-

INTR O D U C CI O N 4a clarinada hecho publico en febrero de 1997, sobre el primer ma mfero lo&rado a trav1s del proceso de "CLO N A CI O N" despert toda clase de interro&antes, temores, ad miracin y especulacin en diferentes /mbitos, que van desde los cientficoshasta los reli&iosos,pasando por los le&ales 5i bien, el hecho cientfico como tales de &ran valor para el desarrollo de conocimientos y hace realidad un evento que hasta este mo m e nto se considera imposible y que slo haca parte de la ciencia 6 ficcin, esto no imposibilita el cuestionamiento sobre la aplicabilidad y desarrollos futuros, teniendo como base esta metodolo&a 7or lo tanto, se hace necesario el conocimiento y compresin de lo que si&nificala "CLO N A CIO N" y con base en esto, acercarnos a la construccin de una posicin crtica que nos permita evaluar los pro, contras y alcances de este nuevo hecho cientfico LA VIDA PR O VIE NE DE LA VIDA MIS M A 7rovenimos de nuestros antecesores y en el antro materno dividimos tril lones de veces y durante 89 semanas nuestra c1lulas primordialpara finalmente, ser dados a luz y mostrar a nuestros padres el e0traordinarioproducto de la accin de sus &enes

GE N E R A LID A D E S DEFINICIN 1. CLO N A CI O N: Es una biotecnolo&a que consiste en la produccin de copias

id1nticas de una entidad individualviva de manera ase0ual ,18KL O N: Es palabra &rie&a, que si&nifica retoo, rama o brote empero,

cientficamente2 $#49!$ es el con'unto de individuos que descienden de otros por va ase0ual OT R O CO N C E P T O: )os seres vivos que tienen el mismo patrimonio &en1tico,son clones 4a palabra $#49!$ desi&na indistintamente, a la poblacin que forman, pero hay clones, incluidos los de la naturaleza )iversas especies ve&etales se reproducen principal o accesoriamente por clonacin 5e habla entonces de multiplicacin ve&etativa Es el caso de las fresas silvestres, de la patata o de la hierva ,que cuando se corta,se reproduce solo de esta manera4as bacterias, las amebas y m uchos animales simples se reproducen por simple divisin celular,lo que no e0cluye que ocurran mutaciones a lo lar&o de &eneraciones #iertos animales de reproducen por parte !"# e$%$ a partirde un vulo no ferti l izado: es otra forma de clonacin ;ambi1n en los ve&etales se da una especie de parteno&1nesis ,apomi0ia4as zarzas y al&unos rosales suelen reproducirse a partir solamente de c1lulas femeninas ;ambi1n hay ma mferos que slo producen clones: es el caso de diversas especies de $;at.s$,cuyos huevos se dividen para dar hasta 1< clones Recordemos, finalmente, que los &e melos verdaderos son clones, sin embar&o, en los ma mferos, a diferencia de lo que ocurre en los ve&etales y muchos animales simples, los clones no son la copia de un adulto en estado natural #arey + <da Ed 1997 4a clonacin es posible porque el cdi&o &en1tico de todas las c1lulas som/ticas contiene e0actamente la misma informacin &en1tica,aunque tiene una =or&e, $>en1tica ?1dica$, Ed 199@, 5olariA = >en1tica ?1dica

diferente morfolo&a y funcionalidad,debido a la diferencia,lo que quiere decirque son c1lulas diferenciadas,<1&. INGE NIER'A GE N ( TICA: 7ara enfocar la clonacin es inherente ocuparnos de esta biotecnolo&a de punta, que se refiere a la alteracin &en1tica efectuada en el laboratorio,@). TEC N O L O G' A O T(C NICA DEL D N A REC O M *I N A N T E 5e trata esta t1cnica, ya que esta implcita,la clonacin 7ara que un &en o una secuencia particular de )!A pueda ser analizada, primero debe aislarse de la serie completa de &enes, o &eno ma, de la c1lula u or&anismos %na vez aislado, el )!A deseado debe obtenerse en su forma pura y en cantidades adecuadas para el an/lisismolecular Estos ob'etivos pueden lo&rarse mediante procedimientos que se deno minan en su con'unto tecnolo&a del )!A recombinante 7arte de un &eno ma o todo 1ste puede cortarse en fra&mentos de un tamao .til usando una o m/s enzimas de restriccin o endonucleasas de restriccin,las cuales rompen ambas cadenas del )!A doble en sitios especficos de cada una de las enzimas conocidas 4os fra&mentos de restriccin,se separan de acuerdo a su lon&itud por medio de mi&racin en un &el ba'o la influencia de un campo el1ctrico )urante dicha electroforerisen &el,los fra&mentos cada vez m/s cortos se m ueven pro&resivamente m/s r/pido a trav1s del &el y los fra&mentos de restriccin pueden entonces aislarse y analizarse 4os seres individuales de los fra&mentos de restriccin de la coleccin &en mica se incuban con )!A vector,el cual tambi1n se ha contado con enzimas de restriccin,al&unas de las mol1culas de la mezcla ser/n el )!A recombinante, el cual es el )!A del &eno ma empalmado al )!A vector mediante el pareamiento de las bases entre los e0tremos e0puestos de las cadenas aisladas que han resultado de las rupturas escalonadas, debidas a la accin de las enzimas de restriccin sobre las d.ple0 El )!A vector sirve para varias funciones esenciales 17roporciona un medio de entrada para el &en deseado en una c1lula hu1sped <7roporciona un sistema replicador para hacer muchas copias del &en deseado que se le une 8- 7uede llevar &enes marcadores adecuados para indicar si hay o no )!A recombinante en las c1lulas hu1sped 4os vectores principales son el )!A viralo pl/smidos, csmidos yBo bacterifa&o, los cuales,son mol1culas de )!A no indispensables que pueden e0istiry replicarse en forma independiente del &eno ma del hu1sped en la c1lula anfitriona

7or medio de m1todos apropiados para e0aminar las colonias de c1lulas anfitrionas se pueden identificary aislarlas colonias deseadas que llevan un )!A recombinante )e esta manera, el &eno ma entero de un or&anismo se puede obtener como una coleccin de pedacitos y fra&mentos de un con'unto de colonias clonas que llevan )!A recombinante )e +%,-a .%./%!te,a "e 0 1%,a de )!A clonado se puede buscar un &en especificoo una secuencia de )!A 4a b.squeda se simplifica &racias al uso de pruebas que consisten en un )!A o un R!A conocidos que puede parecerse con la secuencia .nica del &en que se estudio 7or e'emplo, se pueden obtener &randes cantidades de R!A m marcado radioactivamente de c1lulas que producen en abundancia un polip1ptido particular,como los reticulocitos, que producen &lobinas para la he mo&lobina, o las c1lulas del oviducto, que producen ovoalb.mica, la protena del huevo Entonces pueden aplicarse la &lobina aislada, o la ovolb.mina R!A m, u otras pruebas conocidas a las muestras de c1lulas o el D N A ,/! a+! de al&una o de todas las colecciones de colonias de hu1spedes o fra&mentos de )!A, para encontrar la colonia o el )!A con la secuencia deseada en la .%./%!te,a "e 0 1%,a. %no de los procedimientos m/s usados es el ensayo de la 1 a ,-a +e S!2t-er , el cual fue desarrollado en 197C por E ? 5outhern 4os fra&mentos &en micos purificados se transfieren por contacto con la superficie o el $manchado$ en un papel de nitrato de celulosa y el )!A adherente se desnaturaliza para facili tar el pareamiento de bases 4as mol1culas de prueba marcadas radioactivamente se aplican a las $manchas$ y se permite que sufran $-%.r%+a,%0 1 !/e,2/ar". El )!A &en mico deseado retiene las mol1culas radioactivas de prueba unidas en hbridos dobles, mientras que las mol1culas de prueba que no est/n unidas se eliminan El )!A buscado se revela por su radioactividad en una autoradio&rafay el )!A de referencia en la coleccin puede proporcionar entonces el materialnecesario para que sea transferido a las c1lulas para que, en consecuencia, el )!A deseado crezca en cultivo y se amplifique con el fin de estudiarlocon posterioridad ,@%n se&uimiento importante para analizar un D N A ,/! a+! ya identificado es determinar su secuencia de bases 4os m1todos para hacerlo, desarrollados a mitad de los aos 7D por "redericE 5an&er y por Alan ?a0a m y + alter >ilbert,se usan ahora rutinariamente

en muchos laboratorios, como especficos,estos 1 #t!+!$ -a

sucede con los m1todos para clonar &enes re3!/2,%! a+! /a .%!/!"4a 1 !/e,2/ar

). SEC U E N CIACIO N. El m1todo qumico de ?AFA ? >ilbert para determinar la secuencia de fra&mentos del )!A de restriccin con lon&itud apropiada utiliza una marca radioactiva de 78< para identificarlos e0tremos CG de las < cadenas de )!A doble %na vez marcados los d.ple0 son fundidos en cadenas aisladas y se determina la secuencia de una de las < cadenas complementarias 4a preparacin de las cadenas por separado marcados en CG,se divide en H partes i&uales o alcuotas y cada una de 1stas se trata para identificaruna de las H clases de bases >, A, ; y # #ada uno de los H tratamientos qumicos provoca que la cadena de )!A se rompa en el punto de un tipo particular de las H clases 5olo se producir/ una ruptura, pero en el punto de la base particular que es sensible al tratamiento qumico2 por e'emplo para identificar la Adenina, se rompe en el sitio de Adenina y al&unos otros puntos de esta misma base 7or lo tanto,una serie de fra&mentos marcados radioactivamente se &enera en cada alcuota, las H series de fra&mentos corren en H rutas separados de un sistema de electroforesis en &el, y los fra&mentos forman bandas distintas en el &el en proporcin con la lon&itud del fra&mento #ada banda de los fra&mentos es visible por medio de autoradio&rafa, a causa del e0tremo CG marcado con 78<, y cada ruta del &el que contiene )!A tratado revela uno de los H tipos de bases 4a secuencia se lee del fondo de la superficie del &el ,esto es, desde los fra&mentos CG marcados como m/s cortos hasta los m/s lar&os-2tomando una banda a la vez a trav1s de las H rutas del &el 4a secuencia >AA;;#, del )!A, reconocida por la Enzima de restriccin E#9R*, tiene la propiedad conveniente de que su secuencia complementaria2 #;;AA>, es la misma secuencia,solo que en sentido contrario Estas secuencias se deno minan PAL'ND R O M O S 6 #uando un pl/smido o )!A hu mano es escindido con E#9R*, los fra&mentos del )!A presentan unos $e0tremos cohesivos$ Ello si&nifica que si cortamos )!A hu mano o pl/smido con esta enzima, ambos presentar/n unos e0tremos e0puestos que pueden someterse a empare'amiento de bases complementarias con la otra secuencia )espu1s, cuando se mezclan )!A hu mano y )!A del pl/smidio, se recombinan ,de ah el termino $D N A Re,! 1 .% a te $- En este mo m e nto, los pl/smidos contienen insertos de )!A hu mano A continuacin se insertan en las bacterias, donde pueden reproducirse con rapidez mediante la divisin celular natural )e este modo, la secuencia de )!A hu mano que se reproduce 'unto con el otro )!A del pl/smido se clonan Al

pl/smido se deno mina 3e,t!r, como

vehculos de clonacin tambi1n de pueden

utilizar otros tipos diversos de vectores Entre estos se incluyen los *a,ter%56a"!$ 4ambda ,virus que infectan las bacterias-,los ,0$ 1%+!$ ,%n hbrido bacterifa&o 6 pl/smido que es capaz de transportar inserciones de )!A relativamente lar&as- y los cromoso mas artificiales de levaduras ,vectores que se insertan en c1lulas de las levaduras y que se comportan en &ran parte como los cromoso mas ordinarios de las levaduras- ?ientras que los pl/smidos y los bacterifa&os pueden acomodar slo inserciones relativamente cortas ,cerca de 1D a <D Ib ,Iilobases-, respectivamente-,los csmidos pueden transferirinserciones de apro0imada mente de CD Ib y los cromoso mas artif iciales de levaduras pueden transportar inserciones hasta de 1,DDD Ib de lon&itud ).&. Le,t2ra: 5e pueden leer cerca de 1CD bases o m/s en una sola corrida del &el,y cuando se re.nen todos los datos de las secuencias de todos los fra&mentos de restriccin obtenidas del D N A entera de bases del )!A !r%"% a/ ,/! a+! , se ensambla la secuencia )e esta manera se pueden obtener las secuencias de

muchos miles de nucltidos,lo cual puede abarcar el &eno ma entero de los virus m/s pequeos y &enes completos de otros or&anismos, como los 7,C@H nucleotidos del &en de la ovoalb.mina 7. IMP O R T A N CIA DE LA CLO N A CI O N 8 INGE NIER'A GE N ( TICA 8 T(C NICA DE REC O M *I N A CI O N. Esta hibridacin termilonol&ica estriba en la enorme importancia actual en su aplicacin como veremos posteriormente en industria farmac1utica, estudio de &enes, en el ho mbre y transplante de r&anos, me'oramiento de razas en ma mferos, etc pero sobre todo en ese &ran proyecto comparado al via'e de la !A5A a la luna, es el proyecto del GE N O M A 9 U M A N A , que est/ en marcha, cuyo costo al principio era JC DD dlares por secuenciacin de cada base, con la t1cnica actual ha ba'ado a menos de un dlar, empero, considerando que un &eno ma tpico de ma mfero como el del ho mbre consta de 8 mil millones de pares de bases ,801D9 p b -de )!A a.n con fra&mentos de restriccin de <D,DDD a CD,DDD bp de lar&o, sera necesario establecerse CD,DDD a 1DD,DDD clones diferentes, llevando cada uno un fra&mento de restriccin .nico en una mol1cula del )!A recombinante :. 9ISTO RIA DE LA CLO N A CI O N

4a palabra clon ha ido adquiriendo nuevos usos a trav1s del tiempo en la medida en que el conocimiento avanza y a su vez 1ste es aplicado en forma de tecnolo&a *nicialmente era utilizado para desi&nar una poblacin de c1lulas u misma

or&anismos obtenidos por reproduccin ve&etativa ,ase0ual- a partirde una sola c1lula, de forma tal, que todos los mie mbros de un clon tienen la constitucin &en1tica 7osteriormente cuando la in&eniera &en1tica permiti multiplicar un &en o un fra&mento de )!A en bacterias, el t1rmino se e0tendi a la CLO N A CI O N DE GE N E S. 7ero en animales superiores este concepto era imposible de aplicar, puesto que ellos $no$ se pueden reproducir $ase0ualmente$ As, para clonarlos hay que eliminar quir.r&icamente el n.cleo de una c1lula fecundada ,ci&oto- y sustituirlapor el n.cleo entero de otro animal 4os primeros e0perimentos de este tipo se hicieron en anfibios 5e eli&ieron los vulos de rana, por ser una c1lula &rande, f/cilde obtener y de manipular, se les quito el n.cleo y por otro lado se e0tra'o el n.cleo de c1lulas embrionarias todava totipotentes y se introdu'eron en los vulos de rana enucleados "inalmente, estos estudios obtuvieron un 10ito relativo y se lo&raran crear RA N A S CLO NICA S, misma constitucin &en1tica 1 5in embar&o, cuando se intento el mismo diseo e0perimental pero e0actas unas de otras, con la

introduciendo c1lulas ya diferenciadas procedentes de renacua'os o ranas adultas, el e0perimento falloy los embriones resultantes no lle&aron a vivirm ucho tiempo Este estudio con resultados fall idos, sirvi para conocer que las c1lulas ya diferenciadas eran incompatibles con el citoplasma en el cual eran implantadas y este n.cleo era incapaz de sustituiral de la c1lula embrionaria 7or lo tanto en 19C< se lo&r con 10ito la clonacin de ranas a partir de huevos de esta especie, por cientficos de la %niversidad de 7ensilvania, %5A , quienes despu1s del 10ito lo&rado continuaron haciendo clonacin con ratones, y quedaba latente la interro&ante, si fuese posible dar el mismo paso con animales superiores, ma mferos,a partirde un animal adulto Este reto que se le impona a la comunidad cientfica llevo a la creacin de varios &rupos de investi&acin en este campo, corran los aos KD, y se hizo clonacin de renacua'os a partirsimplemente de &lbulos ro'os,lo que se lo&r en la Alle&heny %niversityof the Lealth 5ciencie,en 5an 4uis EE %% 2 empero, el fracaso fue rotundo, ya que no lle&eron a

edad adulta 5e continua utilizando el mismo

protocolo e0perimental, pero

tampoco los ratones no pasaban de embriones <,8 En 1991, en ;aiMan el )r + u ?in& 6 #he del instituto de investi&acin de &anado, clon C cerdos de una especie en e0tensin a partirde c1lulas embrionarias, aunque slo con 9D N de similitud En (1l&ica en 1998 el profesor Robertd 5choysman tratando de ma'orar la fertil izacin $in vitro$produ'o un embrin que se dividi produciendo as < &e melos a partirde un embrin hu mano2 vale la pena aclarar que la clonacin de animales superiores y de embriones hu manos ya haba sido posible,pero a trav1s de una t1cnica diferente,donde se separaban las blastmeras de embriones en estado de m/s o menos K c1lulas ,antes de que estas de diferencien-,obteniendo embriones id1nticos con la misma constitucin &en1tica 7recisamente en 1998 en la de embriones %niversidad de >eor&e +ashin&ton, lo&ran separar blastmeras

hu manos, las cuales mantenan la capacidad de divisin celular durante cierto tiempo, pero en nin&.n mo m e nto estos embriones fueron transferidos al .tero materno, por las connotaciones 1ticas que implicaba dicho e0perimento ?as tarde en 199@, en el ahora famoso *nstituto Roslin,en Escocia,se lo&r la clonacin de las ove'as $?e&an$ y $?ora&$ id1nticas &eneticamente, pues provenan del mismo te'ido embrionario y posteriormente en el mismo ao lue&o de superar m uchos obst/culos que amerit HD aos de e0haustiva investi&acin en diferentes /reas del conocimiento, tales como la &en1tica, y la biolo&a de la reproduccin, el fortalecimiento de las t1cnicas de manipulacin de embriones y reproduccin asistida y m.ltiples ensayos e0perimentales, hasta lle&ar finalmente a la obtencin de $D O LLY" primer ma mfero clonado a partirde una c1lula adulta ya diferenciada ;CU <L FUE LA DIFERE N CIA" ;ES POSI*LE = U E SEA LA CLA VE DEL PR O C E S O > O7ero qu1 es lo que ha hecho viable a )ollyP,y Oqu1 es lo que fall en los anteriores intentos de transplantar n.cleos de c1lulas adultasP 4os estudios anteriores en el transplante de n.cleos, tanto en anfibios como en ma mferos fallaron por la incompatibilidad en el ciclo celular entre el n.cleo donante y el oocito receptor,llevando a la aparicin de alteraciones cromoso micas que impiden el desarrollo embrionario 7or lo &eneral el n.cleo donante se encontraba en "A5E 5 o >< del ciclo celular, siendo incompatible con el oocito receptor que se encontraba parado en la metafase ** #uando el n.cleo en "ase 5 o >< es introducido dentro de un oocito arrestado en matafase ** En este tiende a

sufrir una replicacin adicional del )!A y una condensacin prematura de los cromoso mas dando como resultado AN E U P L OIDIA y por ende anormal de los embriones H +ilmut y #ols 7udieron solucionar este obst/culo en la c1lula EN LA C(LUL A: 7reviamente, una muestra de te'ido epitelio se obtuvo de la ubre de una ove'a "inn )orset, de @ aos de edad y con 8 1B< meses de &estacin, lue&o el cultivo fue sometido a inanicin para que las c1lulas entren en un estado de = UIESCE N CIA ,quietud-, es decir se les detuvo el relo' biol&ico $para que olvidaran su funcin anterior$ El n.cleo de las c1lulas estaban arrastradas en >D previo al transplante EN EL O V U L O: 4os vulos inferti l izados son coleccionados, e0trados dHe sendas ove'as para lo&rar el nacimiento de )olly fue necesario <77 fusiones de oocitos con c1lulas ma m arias de estas slo se obtuvieron <9 embriones, los cuales fueron transferidos a 18 ove'as,obteni1ndose un slo embarazo LA FUSIO N: En una incubadora un slo n.cleo de c1lula ma m aria es transplantado al vulo enucleado ,citoplasma- y la chispa de la vida, ocurre mediante una descar&a el1ctrica,convirti1ndose ahora en ci&oto DEL CULTIV O AL N U E V O VIENTRE. un desarrollo

El embrin, el cual creci e0itosamente, es transferido e implantado en el .tero de una 8ra ove'a, la cual se encuentra en el mismo estado del ciclo adhoc para el huevo 7or lo tanto el producto obtenido )olly es una copia &en1tica de la ove'a donante de la c1lula ma m aria pero no tiene nin&una relacin &en1tica ni con el oocito receptor ni con la ove'a que dio a luz a )olly ?. PA N O R A M A ACT U A L Y FUT U R O

?.1 SIGUIEN D O EL M O D E L O DE D OLLY En la ultima conferencia de la sociedad internacional de transferencia de embriones celebrado en (oston, %5A, a mediados de Enero de 199K, se presento, las fotos de < nuevos animales clnicos Esta vez eran < terneros >eor&e y #hirle y hay un tercero a punto de nacer, crearlos con una t1cnica que los e0pertos

calificados de muy similar a la empleada para crear )olly pero m/s simplificada y eficaz 4a diferencia radica en que no clonaron a partirde un animal adulto sino de fetos de uno a tres meses de edad 5in embar&o, los autores del e0perimento, =ames Robl y 5teven 5tice, dos cientficos de la universidad de ?assachussett, que tambi1n traba'an para la compaa de Advanced #ell;echnolo&y *nc ase&uran que dos de sus vacas estan a punto de partirterneros clonados a partirde c1lulas adultas Estos nuevos m1todos abren el camino para la creacin de &ran'as de animales capaces de producir f/rmacos para el ser hu mano En efecto #harlie y >eor&e son producto de una combinacin de t1cnicas 7or un lado, la in&eniera &en1tica , se ha manipulado el material&en1tico de c1lulas para que los animales fuesen capaces de producir en su leche una protena hu mana, la Alb.mina- y, por el otro lado la clonacin #on el e0perimento de los cientficos de (oston se lo&r con 10ito entre el CN y el 1D N de los intentos para crear embriones a partirde c1lulas adultas,pero faltaresultados 5e&.n los autores,con c1lulas fetales es m/s facl #uando utilizaron c1lulas de piel de feto de uno a tres meses de edad, el 10ito fue del 1D al <DN implantados en .teros de vacas, el HD N de ellos sobrevivi 4a compaa Avances #ell de tecnolo&a ya tiene contrato con de Alb.mina Ade m/s, esta tratando de clonar cerdos y tambi1n vacas modificando por in&eniera &en1tica como donantes de c1lulas nuurales para tratar enfermedades como el 7arEinson o la diabetes 9tros cientficos est/n probando otra variante de la t1cnica utilizada por +ilmut y sus cole&as El )r ?ichel (ishop, director m1dico de la compaa A(5 &lobal *!# dice que sus investi&adores han ido m/s le'os que el equipo de (oston, d/ndole a.n m/s oportunidades a los vulos para que se repro&ramen con 10ito 5e trata del tercer m1todo de clonacin que se ha diseado hasta ahora2 aaden a un vulo desnucleizado el n.cleo de una c1lula )espu1s de activacin el1ctrica, >enzime Robl y 5tice con&elaron embriones resultantes y los enviaron a ;e0as para que fuesen

trans&encs #orp para empezar a crear &anado por in&eniera &en1tica productor

de'an a la c1lula dividirse y repiten el e0perimento Es decir,sacan una c1lula de ese incipiente embrin y lo insertan en un nuevo vulo (ishop ase&ura que este m1todo ha resultado i&ual de eficaz utilizando c1lulas adultas que c1lulas fetales,y ha anunciado que tambi1n tiene varias vacas a punto de parirclones de animales adultos 5in embar&o, hay quienes no creen que la clonacin de animales adultos , y m ucho menos personas- es posible hasta que no se lo de muestren con pruebas El )r !orton Qinder profesor de &en1tica molecular de la Rochefeller %niversity de !ueva 3orE, dice $que no hay que olvidar que las .nicas vacas que hay en este mo m e nto caminando sobre la hierba son productos de clonacin conse&uidas a partirde c1lulas fetales$

pequeos se&mentos del c)!a El desarrollo de la metodolo&a de bandas de alta calidad permiti la utilidad del mapeo fish pues permiti localizar la seal en un /rea identificable del cromoso ma2 la importancia de mapear &enes en una re&in particular del cromoso ma es obvio, en hu manos el ratn por e'emplo, la informacin de enlace para marca de secuencias e0presadas abrebiadas E5;, se puede acumular en forma r/pida como en el PR O Y E C T O 9 U M A N O , haciendo este un medio poderoso para correlacionar la posicin cromoso mica en los &enes en el ras&os en particular del &en o del E5; conocido de esa re&in cromoso mica MAPEO DE FA MILIAS DE GR U P O S DE GE N E S Y GE N E S RELA CIO N A D O S A puede a menudo dar una pista para su en particular con un carotipo funcin potencialcorrelacionando un fenotipo

FU N CI N "ish ha descubierto aspectos interesantes de los &enes, a&rupaciones de &enes y familia de &enes en muchas especies 4ichter us el fish para a&rupar 98 #49!E5 que contenan dedos de zinc en <8 locus &en1ticos Revelando que el cromoso ma hu mano 19 llevaba una fraccin desproporcionada de los dedos de zinc mapeados, la a&rupacin de secuencias relacionadas no se e0tendi, sin embar&o a factores de transcripcin &eneral en hu manos 7or e'emplo mientras que las similaridades en frecuencia entre esos factores y subre&iones conservadas de factores o procarioticos indicaban la posible relacin ancestral el mapeo fish mostr que los &enes de factores de transcripcin se entremezclaban en el &eno ma hu mano 4a deteccin fish de alta resolucin,usando cromatina liberada de fibras de )!A, llamada metodolo&a de fibras fish,posiblemente ten&a un rolimportante en el estudio de las estructuras y evolucin y a&rupacin de &enes 7ues la relacin fsica entre les &enes dentro de la a&rupacin pueden visualizarse directamente a lo lar&o de fibras de )!A, de cromatina liberada, la conservacin de la sintenia entre el &eno ma del fish y la re&in del cromoso ma hu mano 1Hq y <H 8 se descubri tal metodolo&a desde la introduccin de la detencin fish en fibras de cromatina librada en 1991, el concepto de visualizacin directa del )!A o el componente proteico de la fibra e0tendida del cromatina del )!A ha evolucionado el mapeo fish de alta resolucin M A P E O DE REGIO N E S CR O M O S O M I C A S Y A GR A N ESCAL A. El inter1s en el clona'e posional ha llevado al e0tenso an/lisisfish de cierta re&in del &eno ma 4os datos previstos por fish son crticos para la inte&racin de

mapeo fsico y &en1tico 4a tecnolo&a fish permite tambi1n inte&rar la secuencia del )!A con mapas de cromoso mas cito&eneticos de lata resolucin 9tro E' del mapeo re&ional fish es usar la informacin de translocacin de reciprocas especficas que son las marcas cito&eneticas de linfomas y leucemias FIS9 M U L TIC OL O R ES EL M E T O D O DE ELECCIO N para la detencin an/lisisde traslocaciones cromosonicas en cromoso mas metafase e interfase "ish a dos colores con sondas ro'o y verdes en un n.cleo de INTERF A S E G1 N O R M A L &enera usualmente & SE@ ALE S ROAAS Y & VER D E S en la que los < colores est/n *IEN SEP A R A D O S, en contraste en un n.cleo que contiene una TRASL O C A CI O N, una seal doble de VER D E 8 R OAA ESTREC 9 A M E N T E LIGA D A A U N A A M A RILLA en la que se YU BT A P O N E el verde y la ro'a, apareceran indicando, sitiosde fusin Esto permite el an/lisisdirecto de puntos, rupturas y as como la identificacin de fra&mentos especficos del )!A entre secuencias de flanqueo LA DETEC CIO N M U L TIC OL O R ES MAS INFO R M A TIV A =UE LA

ISOT O PICA EN 9I*RIDA CIO N IN SITU.

ya que sondas separadas se pueden

marcar en forma diferencialsu detencin simult/nea permite que la relacin los se&mentos del )!A se investi&ue en metafase e interfase, as como en )!A y cromatina liberada 4a deteccin de alta resolucin ha sido b/sica para el estudio de interacciones del do minio de cromatina una reciente variacin de esta idea ha sido el desarrollar sondas que coloreen en forma diferenciada cada cromoso ma hu mano, el uso de estos cromoso mas pintados en an/lisiscito&en1tico,habla por simismo El mapeo fish tambi1n se ha usado tambi1n para mapeo fish &ran escala, como el M A P E O DE GE N O M A CO M P L E T O , usando cromoso mas artificiales de YAC, otros estudios usan fish para evaluar cuan Estos 3A#s ordenados dan un recurso levadura insertados llamados 3A# de cromoso mas

completa es la biblioteca 3A# hu mana especfica de cromoso mas as como mapeo individuales conveniente para ESTU DIO S M O L E C U L A R E S DE REGIO N E S CR O M O S O M I A L E S especificas, AR = UITECT U R A N U CLE A R E INTERPEL A CIO N E S ENTR E DIFERE N T E S 4a pre&unta de lar&o tiempo de la or&anizacin

D O MI NIO S DE CR O M A TI N A.

crom/tica temporal,se ha investi&ado en muchas especies de plantas, insectos y

ma mferos )efinido el arre&lo especial y temporal en el n.clo dilucidar/ la arquitectura nuclear como por e'emplo el simplificado de la posicin de la cromatina en relacin a los nucleolos, la cubierta nuclear o las /reas de otros cromoso mas tradicionalmente los estudios de los arre&los cromoso micos se han concentrado en metafase por las caractersticas morfol&icas de los cromoso mas, facili tan la identificacin del lu&ar y la coleccin de datos AN < LISIS EN INTERF A S E, CENT R O M E R O el do minio de la CR O M A TI N A produce, tales estudios fish ha mostrado que la FIS9 permite el realmente se DEL en

LOC ALICACIO N INTERF A S E

EN EL N U CLE O CA M *IA durante el curso de

una forma dependiente de la fase Ade m/s la cone0in de do minios R)!A en linfocitos hu manos en el nucleolo, su&iere que los elementos repetitivos en cromoso mas acroc1ntricos podran asociarse con el nucleolo "ish y tambi1n usaba para aclararla or&anizacin de la cromatina en interfase *ncluso en el uso de deteccin tridimensional y de pintado de cromatina en m.ltiples colores, el arre&lo tridimensional proceso de los do minios dentro de un volumen de cromatina especifico durante la interfase no se ha aclarado %na &ran dificultad radica en las din/micas en las clor/rmicas en la cromatina misma en la interfase El do minio a la para la localizacin que m uestra pronunciada variabilidad internuclear con respecto a la relativa posicin de los cromoso mas Al tratar de identificar do minios discretos e interaccin entre cromoso mas no ho mlo&os he mos usado fish a < colores para amparar de do minio de posiciones particulares uno con respeto a otro ?as que en posiciones nucleares absolutas en estudio anteriores, la interaccin de do minios especficos estara indicado por la asociacin fsica de la cromatina en estos do minios dentro del n.cleo los que en una pro0imidad cercana probablemente actuaran m/s amenudo entre s que aquellos con una frecuencia menor de asociacin 4os datos de los n.cleos pintados con un &rupo no que otros ESTU DIOS DE ESTR U C T U R A CR O M O S O M I C A "ish simplemente la t1cnica molecular tradicional y de biolo&a celular para microscopio electrnica, anticuerpos insmunocitol&icos, interaccin )!A y sondas centromeros fish indican que la secuencia centrom1rica de cromoso mas acroc1ntricas se asocian m/s cerca entre s que con aerocentrico #iertos aerocentricos tiene mayor tasa de asociacin

protenas in vitro y se ha vuelto el m1todo de eleccin para visualizardirectamente los diferentes componentes de or&anizacin estructuraldel cromoso ma SEC U E N CIA REPETID O S Y *A N D E O DE CR O M O S O M A S . ?ediante fish de alta resolucin incrementada por an/lisis en c/maras computarizadas llamadas ,5*!E- y secuencia blando 41 ,4*!E-y el cromoso ma en metafase hu mano: Iorenber y RyEoMsEi de mostraron que los banda R y > est/n caracterizados por familias clases de secuencias repetidas entremezclados 4as secuencias A4% do minantes en bandas R y las 4* que do minan en bandas >B< positivas

LA CLO N A CI O N 9 U M A N A EL DES A FIO ETICO DEL 9 O M * R E M O D E R N O 4a clonacin celular no es novedosa, los primeros intentos datan de 19C1 en el =ohns LopEins, Lospital%5a en EE %% >eor&e o >ey ,1K996197D-, estabelce la primera linea celularlo&rando cultivarcelulas de un cancer de cuello de utero de su paciente, Lenrietta 4 acEs Estas celululas, clolandas a partirde su ori&inal, se mantiene identivcas desde entonces2 y en me m oria de su dadora, se conoce en el m undo como c1lulas Le 4A E 5;A5
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