TRAZER PARA A AULA PRTICA (6 a feira, 22/3/2013) LER PREVIAMENTE FISIOLOGIA E BIOFSICA - IB - UNICAMP ROTEIRO DE AULA PRTICA DA DISCIPLINA

A CLULA (BS 111) PARA O CURSO DE MEDICINA

MANUTENO DA OSMOTICIDADE E DA TONICIDADE DOS LQUIDOS CORPORAIS COMO FATOR DE HOMEOSTASE E SADE
1. INTRODUO A vida depende da manuteno de uma srie de funes, que oscilam temporalmente dentro de certos limites. Num sentido analgico, para o contexto desta aula, um organismo vivo pode ser comparado a uma soluo aquosa contida no interior do seu corpo, em equilbrio com uma soluo do lado externo. Tanto o volume do organismo, quanto a concentrao de solutos em seu interior, so regulados dentro de limites, que no entanto podem apresentar variaes em funo de aspectos temporais (minutos, horas, dias, estaes do ano, etc). No obstante, desvios acentuados das condies normais so nocivos ou at fatais, o que significa que um indivduo deve permanecer em equilbrio dinmico com relao gua e solutos. A membrana celular atua como uma barreira seletiva entre os compartimentos formados pelo lquido intracelular (LIC) e lquido extracelular (LEC), permitindo a manuteno de considerveis diferenas de concentrao de muitos compostos orgnicos e inorgnicos (veja tabela nos livros-texto). Apesar disso, ambos permanecem em estado de isosmoticidade e isotonicidade.
Soluo salina hipertnica tem sido utilizada clinicamente, no tratamento de hemorragias severas, desde 1919.

No ser humano, o lquido intracelular tende a permanecer em isosmoticidade com o meio interno (LEC) (ca. 285 mOsmoles/L). Por sua vez, o LEC tem sua composio e volume regulados, principalmente, pela atividade renal, a qual ajusta a excreo urinria de gua e de solutos ingesto e perdas extra-renais dessas substncias.
Conceitualmente, meio interno no meio intracelular. Meio interno so lquidos extracelulares. Evolutivamente, meio interno o nosso mar interno.

Assim, torna-se evidente a importncia do conhecimento dos conceitos e processos bsicos relacionados com a osmorregulao, sendo o enfoque desses conceitos e processos a razo principal desta aula. Para esse fim, utilizar-se-o as hemcias de mamfero como modelo celular, em razo das caractersticas peculiares dessas clulas. Entretanto, as concluses bsicas dos experimentos devem ser estendidas s clulas em geral.
A permeabilidade gua, nas hemcias, muito maior que nas demais clulas. A cada 10 ms a troca de gua atravs da membrana plasmtica da hemcia equivale ao volume total de gua existente nessa clula. como se, a cada segundo, o volume hdrico das hemcias fosse trocado cem vezes. Essas trocas so feitas pelas molculas de aquaporina (AQP1) da membrana (aprox. 200 000/hemcia). Cada aquaporina medeia o transporte de cerca de 2 bilhes de molculas de gua por segundo.
O volume de gua adequado, para ser ingerido diariamente, pode ser deduzido da observao da colorao da urina. Colorao intensa (urina carregada) significa que maior volume de gua deve ser ingerido, at que a urina se apresente clara.

2. APLICAES DOS CONHECIMENTOS E CONCEITOS DESTA AULA

2.1. Edema cerebral. O edema cerebral intracelular (ou citotxico) o acmulo de osmis e gua dentro da clula (v.g. astrcito), que a faz inchar s custas de volume cerebral intersticial. Ocorre rapidamente no tecido cerebral isqumico, medida que falham as bombas inicas membranares dependentes de energia, e os ons sdio e a gua osmoticamente ligada, dos compartimentos intersticial e vascular, penetram na clula (Cecil, p. 2198, 19 ed., q.v.). 2.2. Diurese osmtica ou diurese de soluto Ocorre na(o) (em): cetoacidose diabtica; coma hiperosmolar hiperglicmico; queimados, com hiperuremia; aps administrao de manitol ou glicerol (Cecil, p. 512, q.v.).

2.3. Dilise peritoneal. Quando necessria, a remoo de lquido corporal realizada atravs de movimento osmtico de gua, usando-se elevadas concentraes de glicose (1500 a 4500 mg/dL) no dialisado. Solutos de baixo peso molecular atingem equilbrio completo com o lquido peritoneal, em 4 a 6 horas (Cecil, p. 551, q.v.).

3. OBJETIVOS 1) Estudar um aspecto fundamental da homeostase, tanto do meio interno (LEC), quanto do meio intracelular, qual seja, o controle da osmoticidade. 2) Observar os efeitos celulares provocados por variaes da osmoticidade e da tonicidade do meio extracelular. 3) Estudar o transporte por difuso passiva e a permeabilidade da membrana celular a diferentes molculas e ons. 4) Compreender os conceitos de osmoticidade e tonicidade e sua importncia para a regulao do volume celular. 5) Observar os efeitos de agentes que rompem a membrana plasmtica (tensoativos). 6) Fornecer fundamentos para a compreenso dos mecanismos fsico-qumicos de concentrao e diluio da urina pelos rins, bem como para a compreenso de processos patolgicos (v.g. edemas, desidratao, coma hiperosmolar) ou procedimentos teraputicos (v.g. dilise). 4. MATERIAIS Sangue heparinizado, de rato; pipetas Pasteur, estantes e tubos de ensaio, centrfuga, microscpio, lminas, lamnulas, solues de sacarose, uria, cloreto de sdio, detergente e gua destilada. 5. PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS (execute o experimento referente ao seu grupo, mais o experimento D).

EXPERIMENTO A

Voc sabia que o acar da cana vem sendo utilizado como antissptico e antibitico de uso local, no tratamento de feridas infectadas, com foco purulento? Este experimento fundamenta tal procedimento.

- Inicialmente, identifique 5 tubos de ensaio. Adicione, a cada tubo, apenas 3,0 mL de uma nica soluo, comeando pelo tubo da gua destilada, seguindo-se as solues de sacarose, nas concentraes de 0,1 M; 0,3 M (dois tubos) e 0,5 M, nos respectivos tubos. - Adicione trs gotas de sangue a cada tubo. A um dos tubos 0,3 M adicione trs gotas de detergente. Homogeneize por inverses suaves, sem agitar. A seguir, observe o aspecto das misturas (translcidas ou opalescentes) e anote. Centrifugue os tubos por 5 minutos, a 1000 rpm. Siga as instrues escritas mais abaixo.

EXPERIMENTO B

Por que a hiperglicemia (mas no a azotemia) provoca aumento da osmolaridade efetiva do LEC? Os experimentos A e B fornecem os fundamentos.

- Inicialmente, identifique 4 tubos de ensaio. Adicione, a cada tubo, apenas 3,0 mL de uma nica soluo, comeando pelo tubo da gua destilada, seguindo-se as solues de uria, nas concentraes de 0,1 M; 0,3 M e 0,5 M, nos respectivos tubos. - Adicione trs gotas de sangue a cada tubo. Homogeneize por inverses suaves, sem agitar. A seguir, observe o aspecto das misturas (translcidas ou opalescentes) e anote. Centrifugue os tubos por 5 minutos, a 1000 rpm. Siga as instrues escritas mais abaixo.

EXPERIMENTO C

Voc sabe por que o soro fisiolgico utilizado clinicamente constitudo de NaCl dissolvido em gua, na concentrao de 0,9 g/dL? No poderia ser, v.g., 0,45 ou 1,8 g/dL?. E por que no outro osmlito? o objetivo deste e do experimento D.

- Inicialmente, identifique 8 tubos de ensaio. Adicione, a cada tubo, apenas 3,0mL de uma nica soluo, comeando pelo tubo da gua destilada, seguindo-se as solues de cloreto de sdio, nas concentraes de 0,05 M; 0,07 M; 0,10 M; 0,15 M (dois tubos) ; 0,20 M e 0,25 M, nos respectivos tubos. - Adicione trs gotas de sangue a cada tubo. A um dos tubos 0,15 M adicione trs gotas de detergente. Homogeneize por inverses suaves, sem agitar. A seguir, observe os aspectos das misturas (translcidas ou opalescentes) e anote. Centrifugue os tubos por 5 minutos, a 1000 rpm. Siga as instrues abaixo. EXPERIMENTOS A, B e C: Aps a centrifugao, observe a colorao do sobrenadante e o volume do precipitado (quando houver). Anote os resultados, utilizando o sistema de cruzes, de 0 a ++++. Tome cuidado para no agitar os tubos, a fim de no misturar a fase slida com a fase lquida. Faa um grfico e explique os resultados com base na bibliografia mencionada ou em outras referncias. Copie os resultados dos demais grupos, para que possa compar-los com os obtidos pelo seu grupo de trabalho.

EXPERIMENTO D

Leia o inset do experimento C.

Faa uma nica lmina por vez (comeando por 0,15 M = referncia), para poder observar antes do dessecamento. Seqencialmente, faa e observe as outras lminas. Deposite sobre cada uma das trs lminas de vidro, respectivamente, uma gota de NaCl nas concentraes de 0,05 M ou 0,15 M ou 0,25 M (uma nica soluo em cada lmina). Adicione uma minscula gotcula de sangue a cada lmina, misture com o vrtice da lamnula e cubra com esta. Observe ao microscpio, comeando pela lmina onde foi colocada a soluo 0,15 M. Faa um desenho para cada situao. Analise suas observaes, levando em conta os resultados obtidos nos experimentos A, B e C. PENSE RPIDO: (Questes para serem discutidas e respondidas aps a execuo das misturas e durante a observao dos resultados da centrifugao dos tubos). a) Qual o significado da opalescncia na mistura de alguns tubos e da cristalinidade em outros?

b) Aps a centrifugao, como se apresentam o sobrenadante e o precipitado nos tubos que antes apresentavam opalescncia? O que a centrifugao provocou?

c) Aps centrifugao, como se apresentaram o sobrenadante e o precipitado, nos tubos que antes apresentaram mistura cristalina? Por qu?

6. RESULTADOS Indique no quadro abaixo, atravs de +, o grau de hemlise, pela colorao avermelhada do sobrenadante e pelo volume do precipitado. ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Aspecto Aspecto aps a centrifugao Soluo Concentrao inicial da Intensidade Quantidade de Molar Osm/L mistura da colorao precipitado -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

SACAROSE

0,50 0,30 0,10 H2O 0,3 M + 3 gotas deterg.

-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

URIA

0,50 0,30 0,10 H2O

-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

NaCl

0,25 0,20 0.15 0,10 0,07 0,05 H2O 0,15 M + 3 gotas deterg.
7. DISCUSSO
A Fisiologia o lugar natural para estudantes exercitarem o raciocnio de como nmeros geram idias concretas e do significado a um fenmeno (Hansen, P. & Roberts, K. B., 1992.).

1) Calcule a osmolaridade (em mOsm/L) de cada uma das solues utilizadas na aula. 2) Como se comporta a membrana celular diante dos seguintes solutos: sacarose; NaCl; uria? 3) Para cada uma das condies experimentais testadas em aula, esquematize uma grande hemcia em um frasco de soluo e indique o sentido dos fluxos resultantes do soluto e solvente, explicando o resultado final do processo. 4) O que so solues isosmticas, hiperosmticas e hiposmticas ? 5) O que so solues isotnicas, hipertnicas e hipotnicas ? 6) Classifique as solues utilizadas nesta aula, conforme suas osmolaridades e tonicidades. 7) Por que nem sempre uma soluo isosmtica isotnica? 8) O que necessrio para que uma soluo isosmtica seja, tambm, isotnica? 9) Por que no possvel preparar-se soluo isotnica de uria, nem mesmo quando a soluo isosmtica? 10) Diz-se que as clulas so operacionalmente impermeveis ao sdio e ao potssio. Fundamentado em que mecanismos pode-se afirmar isto? 11) Por que a soluo de glicose intravenosa, utilizada clinicamente, tem 5g/dL ao invs de, v.g., 2,5g/dL ou 10g/dL? 12) Que relao h entre esta aula e a transcrio gnica? 13) O que diurese osmtica? Cite uma patologia onde ela ocorre. Cite um diurtico que a provoca. 14) Por que recm-nascidos so incapazes de produzir urina hipertnica? 15) Qual a relao entre desnutrio protica crnica e menor capacidade de concentrar a urina? 16) Qual a funo da uria na manuteno do gradiente de hipertonicidade da medula renal? 17) Qual o significado evolutivo do mecanismo renal de concentrao da urina?

18) Por que roedores do deserto so capazes de concentrar a urina a valores muitas vezes maiores que os humanos? 19) Qual a vantagem evolutiva de o rato do deserto (Psammomys) apresentar hipertonicidade medular renal de at 10 000 mOsm/l? 20) De que maneira as clulas da medula renal se defendem da hipertonicidade do LEC dessa regio? 21) Piolhos e lndeas podem ser eficazmente eliminados, por meio da aplicao tpica de soluo aquosa, hipertnica, de sal de cozinha, dispensando, com isso, o uso dos frmacos apregoados pela mdia. Explique o fundamento desta tcnica. 22) Em cidades do hemisfrio norte, prtica corrente aspergir-se sal sobre a neve acumulada nas vias pblicas, para provocar seu derretimento. O que isso tem a haver com esta aula? 23) Certos cremes emolientes e solues hidratantes contm uria. Explique a ao desse componente.

8. BIBLIOGRAFIA BSICA 1. AIRES, M.M. - Fisiologia, Guanabara Koogan. 2. BERNE & LEVY - Fisiologia. Guanabara Koogan. 3. HENEINE, I.F. - Biofsica bsica. Ateneu, 1987, Cap. 8 4. CINGOLANI, H.E. & HOUSSAY, A.B. Fisiologia humana de Houssay. Artmed, 7 ed., 2004, Caps. 1, 39 e 75.