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A N A L I T I C O S

M E T O D O S

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A L I M E N T A R I A
D E A N A L I S I S

O F I C I A L E S

Cereales, derivados de cereales y cerveza

PANREAC QUIMICA, S.A. publica una nueva edicin de sus folletos de Mtodos Analticos en Alimentaria, en la que podrn apreciar a simple vista un cambio de formato respecto a las anteriores.
M E T O D O S A N A L I T I C O S E N A L I M E N T A R I A

Esta nueva imagen, pretende ser una expresin de los cambios que con el tiempo hemos experimentado en nuestros campos de actividad, puesto que si continuamos manteniendo una importante implantacin en el sector alimentario como fabricantes de reactivos para anlisis PANREAC y de los aditivos alimentarios ADITIO, actualmente hemos aumentado nuestra aportacin de productos para el anlisis alimentario con nuestras lneas de Cromatografa en Capa Fina PANREAC-TLC y Medios de Cultivo Deshidratados para Microbiologa CULTIMED. La coleccin Mtodos Analticos en Alimentaria se compone de 6 folletos monogrficos, por campos de alimentos, que recogen una transcripcin ntegra de los mtodos oficiales de anlisis en Espaa, que a su vez son publicados en los correspondientes B.O.E. mencionados en el ndice de cada monografa incorporando los reactivos y productos auxiliares PANREAC en la calidad considerada ms idnea, as como los medios de cultivo CULTIMED.

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Los ttulos de las 6 monografas son:

Aceites y grasas Aguas potables de consumo pblico y aguas de bebida envasadas Carne y productos crnicos Cereales, derivados de cereales y cerveza Leche y productos lcteos Productos derivados de la uva, aguardientes y sidras
Obviamente esta edicin ha sido actualizada con las disposiciones publicadas hasta el momento, que establecen nuevos procedimientos o que modifican notablemente caractersticas anteriormente establecidas. Por ltimo, comentarles que estn a su disposicin adems de esta coleccin, nuestros: Catlogo General de Reactivos PANREAC Catlogo ADITIO de Aditivos Alimentarios Catlogo CULTIMED de Medios de Cultivo Deshidratados Catlogo PANREAC-TLC de Placas, Folios y Accesorios para Cromatografa en Capa Fina.

Cereales
I N D I C E
METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 19-7-1977 y 20-7-1977) 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. Determinacin del ndice de materias celulsicas ........................................... Humedad ............................................. Cenizas ................................................ Protena ............................................... Grasa ................................................... Indice de Maltosa ................................. Acidez grasa ........................................ Agentes oxidantes (Reaccin con potasio yoduro) ..................................... Bromatos y yodatos en la harina (Mtodo cualitativo) ............................... Benzoilo Perxido (Mtodo cualitativo con bencidina) ...................................... Indice de Pelshenke .............................. Gluten .................................................. Faringrafo Brabender .......................... Alvegrafo Chopin (Provisional) ............. Determinacin del grado de sedimentacin (segn Zeleny) ............... Acido Ascrbico (Vitamina C) (Mtodo cualitativo) (B.O.E. 29-8-1979) Amonio Persulfato (Mtodo Cualitativo) (B.O.E. 20-7-1977) ............................... Fsforo (B.O.E. 29-8-1979) ................... Deteccin y cuantificacin de harinas de trigo comn (Triticum Vulgare) en smolas y pastas alimenticias ............... Deteccin de harinas degradadas por el ataque de pentatomidos ...................

7 9 9 10 11 12 13 14 14 15 15 15 16 17 20 21 21 21

23 25

20.

Cereales en copos o expandidos


METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 20-1-1988) 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. Preparacin de la muestra ................... Humedad ............................................. Cenizas ................................................ Grasa ................................................... Protenas .............................................. Fibra alimentaria insoluble ..................... Fibra bruta ........................................... Azcares .............................................. Cloruros ............................................... Zinc ...................................................... Plomo ................................................... Mercurio ............................................... 27 27 27 28 29 30 31 32 34 35 36 36

13. Cobre .................................................. 14. Arsnico ...............................................

37 38

Cerveza
METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 23-10-85) 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. Graduacin alcohlica .......................... Extracto real ......................................... Extracto seco primitivo ......................... Grado de fermentacin ......................... Acidez total .......................................... Anhdrido carbnico (CO2) ..................... pH ........................................................ Cenizas ................................................ Acido fosfrico ...................................... Anhdrido sulfuroso ............................... Cobre ................................................... Zinc ..................................................... Hidratos de carbono ............................. Color .................................................... 45 51 68 69 69 70 71 72 72 74 75 76 76 77

Pastas alimenticias
METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 8-9-87) 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. Preparacin de la muestra . ver pgina Humedad ........................... ver pgina Cenizas.............................. ver pgina Grasas ............................... ver pgina Protenas............................ ver pgina Fibra alimentaria insoluble .. ver pgina Fibra bruta ......................... ver pgina Azcares............................ ver pgina Cloruros ............................. ver pgina Grado de Acidez ................................... Plomo ................................ ver pgina Mercurio ............................ ver pgina Cobre ................................ ver pgina Arsnico............................. ver pgina 27* 27* 27* 28* 29* 30* 31* 32* 34* 41* 36* 36* 37* 38*

* Coinciden exactamente con los ensayos en Cereales en Copos o Expandidos, descritos en la pgina indicada.

Galletas
METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 24-11-87) 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. Preparacin de la muestra.. ver pgina Humedad ........................... ver pgina Cenizas.............................. ver pgina Grasas ............................... ver pgina Protenas............................ ver pgina Fibra alimentaria insoluble .. ver pgina Fibra bruta ........................ ver pgina Azcares............................ ver pgina Cloruros ............................. ver pgina Extraccin de la grasa para su identificacin ................................... Plomo ................................ ver pgina Mercurio ............................ ver pgina Cobre ................................ ver pgina Arsnico ............................ ver pgina 27* 27* 27* 28* 29* 30* 31* 32* 34* 43* 36* 36* 37* 38*

Relacin de reactivos y productos auxiliares que se utilizan en los mtodos analticos, Cereales, derivados de Cereales y Cerveza .... 78 Aditivos y coadyuvantes tecnolgicos para uso alimentario industrial.....................................

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* Coinciden exactamente con los ensayos en Cereales en Copos o Expandidos, descritos en la pgina indicada.

Cereales

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METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 19-7-1977 y 20-7-1977) 1. DETERMINACION DEL INDICE DE MATERIAS CELULOSICAS 1.1. Principio. Las materias celulsicas representan las sustancias no digestibles de origen vegetal que constituyen el residuo que queda despus de un ataque cido en condiciones bien definidas, con una mezcla de cido actico, cido ntrico y cido tricloroactico. Despus de hervir la muestra con la mezcla de cidos se separa el residuo insoluble, se seca y se incinera. El ndice de materias celulsicas se calcula mediante la prdida de masa en el curso de la incineracin. La aproximacin debe ser del 0,1%. 1.2. Material y aparatos. 1.2.1. Molino de laboratorio (se puede emplear cualquier tipo, excepto de bolas). 1.2.2. Matraces cnicos Erlenmeyer de 200 300 ml de boca normalizada. 1.2.3. Refrigerador de reflujo, de boca normalizada. 1.2.4. Mechero Bunsen. 1.2.5. Tela metlica con amianto o placa de material refractario. 1.2.6. Soporte de trpode o aparato anlogo. 1.2.7. Matraz de vaco con tulipa (Kitasato). 1.2.8. Agitadores de vidrio. Un agitador de vidrio revestido de caucho en la extremidad. 1.2.9. Crisol filtrante de cuarzo o de vidrio (porosidad de 40 a 90 mm). 1.2.10. Placas filtrantes de porcelana que cubran totalmente la superficie filtrante. 1.2.11. Trompa de agua. 1.2.12. Desecador contenido silicagel coloreado en azul (dimetro aproximado 25 cm). 1.2.13. Balanza de precisin (sensibilidad 0,1 mg). 1.2.14. Estufa. 1.2.15. Horno elctrico para incineracin. 1.2.16. Placa de material refractario. 1.2.17. Cartuchos deshidratantes de silicagel coloreado de azul. 1.3. Reactivos. 131007 Acetona PA-ACS-ISO 131008 Acido Actico glacial PA-ACS-ISO 131019 Acido Clorhdrico 35% PA-ISO 131036 Acido Ntrico 60% PA-ISO 131067 Acido Tricloroactico PA-ACS 131074 Agua PA-ACS 211160 Arena de Mar lavada, grano fino QP 132770 Eter Dietlico estabilizado con ~6 ppm de BHT PA-ACS-ISO 211335 Gel de Slice 3-6 mm con indicador QP 1.3.1. Acido Actico al 70% d. a 20C = 1,07. Usar Acido Actico glacial PA-ACS-ISO y diluir convenientemente con Agua PA-ACS. 1.3.2. Acido Ntrico 60% PA-ISO. 1.3.3. Acido Tricloroactico PA-ACS. 1.3.4. Acetona PA-ACS-ISO. 1.3.5. Eter Dietlico estabilizado con ~6 ppm de BHT PA-ACS-ISO 1.3.6. Arena de Mar lavada, grano fino QP. 1.3.7. Fragmentos de tierra cocida (platos porosos machacados), dimetro de 0,5 a 2 mm. 1.4. Procedimiento. 1.4.1. Preparacin de la solucin cida para la hidrlisis: Mezclar 900 ml de Acido Actico solucin 70% con 60 ml de Acido Ntrico 60% PA-ISO y 24 g de Acido Tricloroactico PA-ACS ( d. 20C =1,10). 1.4.2. Preparacin de la Arena de Mar y de los crisoles. Hacer hervir la Arena de Mar lavada, grano fino QP con Acido Clorhdrico 4N (diluir Acido Clorhdrico 35% PA-ISO con Agua PA-ACS a la concentracin indicada) para eliminar el hierro, lavar con Agua PA-ACS para eliminar el cloruro y calcinar a 550C durante seis horas. Preparar las placas de porcelana y el polvo de tierra cocida en la misma forma. Antes de la primera utilizacin de los crisoles filtrantes de cuarzo o vidrio, limpiarlos cuidadosamente e incinerarlos durante seis horas a 550C. Para evitar tensiones en la parte inferior deslustrada, colocar los crisoles filtrantes de vidrio en el horno de incineracin fro y no retirarlos hasta despus de enfriarlo alrededor de 200C. Los crisoles de cuarzo no experimentan tensiones y se pueden poner o sacar con toda seguridad en el horno caliente. Introducir en los crisoles filtrantes de 5 a 6 g de Arena de Mar. Igualar la superficie. Introducir a continuacin de 4 a 5 g de polvo de tierra cocida e igualar del mismo modo la superficie. Colocar a continuacin la placa filtrante de porcelana encima de estas dos capas y apretar ligeramente. Se puede utilizar de nuevo el crisol as preparado, sin limpieza especial, pero es necesario verificar la permanencia de las capas. 1.4.3. Preparacin de las muestras a ensayar. Triturar la muestra de forma que el 95 % del producto pase a travs de un tamiz de 1,0 mm. Solamente para algunas sustancias fibrosas, tales como los granos de avena, no se alcanza tal grado de finura. Est prohibido el empleo de molinos de bolas. 1.4.4. Cantidad inicial de la muestra a ensayar. La cantidad de muestra a tomar depende del contenido en materias celulsicas del producto de forma que se obtenga finalmente una masa de materias celulsicas del producto entre 50 y 150 mg. Para un producto que contenga materias celulsicas en

cantidad inferior al 5%, tomar 3 g de sustancia y utilizar 60 ml de solucin cida; para un contenido en materias celulsicas elevado, hacer hervir 102 g de materia en 40 ml de mezcla disolvente. 1.4.5. Dosificacin. Pesar la muestra a ensayar triturada y ponerla en suspensin en el matraz cnico Erlenmeyer con un tercio de la solucin cida que debe corresponder a 20 veces el peso de la muestra. Deshacer los grumos con un agitador de vidrio que debe permanecer en el Erlenmeyer. Lavar cuidadosamente la pared del Erlenmeyer con el resto de la solucin cida para que no quede ninguna partcula de la sustancia adherida a la pared. Para evitar que la sustancia suba a lo largo de las paredes, acoplar cuidadosamente el Erlenmeyer con el refrigerador de reflujo. Calentar de forma que se alcance la temperatura de ebullicin en tres minutos. Regular la llama del mechero Bunsen para que la altura de la espuma formada no sobrepase 10 mm. Mantener la ebullicin de la muestra durante 30 minutos exactamente, sin agitar el frasco ni la suspensin. Filtrar a continuacin bajo vaco la suspensin en ebullicin con ayuda de una trompa de agua y a travs del crisol filtrante preparado. Regular el vaco para asegurar la filtracin continua. Lavar el Erlenmeyer y el agitador de vidrio con Agua PA-ACS y caliente (de 70 a 80C) y trasvasar totalmente los residuos de materias celulsicas en el crisol filtrante con ayuda de un agitador revestido de caucho. Son necesarios, para un lavado cuidadoso y rpido, de 300 a 400 ml de Agua PA-ACS y caliente para obtener la reaccin neutra (comprobar con papel tornasol en el agua de lavado filtrada). Inmediatamente despus del lavado, vaciar el matraz de vaco. Llenar el crisol filtrante tres veces con Acetona PA-ACS-ISO y dejar filtrar sin ayuda del vaco (pero si el filtrado es demasiado lento, aspirar ligeramente sin sobrepasar la velocidad de una gota por segundo). Lavar a continuacin dos veces con Eter Dietlico estabilizado con ~6 ppm de BHT PA-ACS-ISO y aspirar fuertemente los vapores residuales de ter. Secar previamente los crisoles filtrantes durante algunos minutos y pesarlos aproximadamente. Secar los crisoles filtrantes en una estufa calentada a 130C durante 60 minutos exactos, introducir a continuacin cuatro crisoles como mximo en un desecador y dejarlos enfriar algunos minutos antes de poner la tapa. Dejar enfriar el desecador cerrado durante una hora al lado de la balanza. En el transcurso del enfriamiento y de la pesada, colocar dos cartuchos deshidratantes de Gel de Slice 3-6 mm con indicador QP en la balanza de precisin. Pesar rpidamente (es por lo que hay que conocer previamente el peso de los crisoles llenos antes del secado). Calcinar los crisoles filtrantes de cuarzo en el horno elctrico previamente calentado a 550C,

durante 30 minutos, colocarlos a continuacin sobre una placa refractaria durante cinco minutos por lo menos, para que se enfren hasta 100C, aproximadamente. Introducir de nuevo cuatro crisoles como mximo en un desecador, dejndolos enfriar al lado de la balanza durante una hora exactamente y pesar rpidamente. Si se emplean crisoles filtrantes de vidrio, ponerlos en el horno fro, a fin de evitar las tensiones en la parte inferior deslustrada. Despus de alcanzar la temperatura de 550C, incinerar durante treinta minutos, dejar enfriar los crisoles en el horno abierto hasta 200C, colocarlos a continuacin algunos minutos sobre la placa refractaria para dejarlos enfriar hasta 100C, aproximadamente, y operar despus como para los crisoles filtrantes de cuarzo. No es necesario hacer una prueba en vaco, ya que todo el material filtrante es inalterable al calor como consecuencia del tratamiento previo. 1.5. Clculo. El ndice de materias celulsicas viene dado por la expresin: (a - b) x 100 x 100 C = E (100 - H) siendo: C = ndice de materias celulsicas en porcentaje de materia seca. a = peso, en g, del crisol y del residuo despus del ataque cido y secado a 130C b = peso, en g, del crisol despus de la incineracin del residuo. E = peso, en g, de la muestra. H = humedad de la muestra en porcentaje. 1.6. Observaciones. 1.6.1. En el caso de los cereales y productos derivados, no es necesario extraer la grasa antes del ataque cido. 1.6.2. Los materiales filtrantes (crisoles filtrantes, arena de mar, placas de porcelana, polvo de tierra cocida) pueden ser utilizados nuevamente. Se separa por tamizado la arena de mar del polvo de tierra cocida; no es necesario limpiar de nuevo con el cido Clorhdrico los crisoles filtrantes, la arena de mar, el polvo de tierra cocida y las placas filtrantes de porcelana. 1.6.3. El tiempo necesario para la determinacin del ndice de materias celulsicas mediante el empleo de crisoles filtrantes de cuarzo, es aproximadamente de cinco horas, y mediante los crisoles filtrantes de vidrio alrededor de ocho horas. 1.7. Referencia. 1.7.1. International Association for Cereal Chemistry (I.C.C.) Standard Nr 113.

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2. HUMEDAD 2.1. Principio. El contenido en agua de un producto se define convencionalmente como la prdida de masa que experimenta en condiciones determinadas. El producto se seca a 130C bajo presin atmosfrica normal, durante una hora y media. Este mtodo de desecacin a 130C se aplica a los granos, harinas y otros productos derivados de los cereales, reducidos a partculas de dimensiones inferiores o iguales a 1.700 , de las cuales, menos del 10% sern superiores a 1.000 y ms del 50% inferiores a 500 . 2.2. Material y aparatos. 2.2.1. Balanza con precisin de 1 mg. 2.2.2. Aparato triturador que no provoque calentamiento, fcil de limpiar y que proporcione partculas de dimensiones especificadas en 2.1. 2.2.3. Pesafiltro metlico o de vidrio con tapadera, y con una superficie til que permita un reparto de la muestra de 0,3 g/cm3, como mximo. 2.2.4. Estufa isoterma de calefaccin elctrica, regulada de tal manera que la temperatura del aire en su interior sea de 130C, y que tenga aireacin suficiente. La estufa tendr una capacidad calorfica tal que, regulada previamente a la temperatura de 130C, puede alcanzar de nuevo esa temperatura en menos de media hora, despus de colocar simultneamente en su interior el nmero mximo de muestras a desecar. La eficacia de la ventilacin se determinar con la ayuda de smola como material de ensayo que tenga 1 mm como mximo de partcula. La ventilacin ser tal que secando simultneamente a 130C todas las muestras que la estufa pueda contener, primero durante dos horas y despus durante tres horas, los resultados presenten entre ellos una diferencia inferior a 0,15%. 2.2.5. Desecador provisto de placa de porcelana o metlica perforada, conteniendo un agente deshidratante como 141154 di-Fsforo penta-Oxido PRS, 141219 Calcio Cloruro anhidro, escoriforme PRS o 211335 Gel de Slice 3-6 mm con indicador QP. 2.3. Procedimiento. Introducir 5 g de la muestra en el pesafiltros, tarado despus de permanencia en la estufa y de enfriamiento en el desecador. Cerrar el pesafiltros y pesar con aproximacin de 1 mg. Debe operarse rpidamente. Tener en la estufa durante hora y media el pesafiltros destapado con la muestra. Transcurrido este tiempo, y operando rpidamente, retirar el pesafiltros de la estufa una vez tapado y colocarlo en el desecador. Pesar en cuanto se enfre en el desecador. 2.4. Clculo. 2.4.1. El contenido en agua de la muestra, en porcentaje, es: (M - m) 100 Humedad % = M en la que: M = masa inicial, en g, de la muestra. m = masa, en g, del producto seco. La media de dos resultados, con una aproximacin de 0,05% g, representar la humedad de la muestra. 2.4.2. Dispersin de los resultados. La diferencia resultante entre determinaciones duplicadas de la misma muestra no deber ser mayor de 0,1% en valor absoluto. En caso contrario, se repetir la determinacin por duplicado. 2.5. Referencia. 2.5.1. Instituto de Racionalizacin del Trabajo. Una Norma Espaola 34.400 h 5. 2.5.2. Mtodos de la Asociacin Internacional de Qumica Cerealista (I.C.C.).

3. CENIZAS 3.1. Principio. 3.1.1. Definicin. El contenido en cenizas de un producto es el residuo resultante despus de su incineracin en condiciones determinadas. Este mtodo es aplicable a los granos, harinas y otros productos derivados de los cereales. 3.2. Material y aparatos. 3.2.1. Balanza analtica con precisin de 0,1 mg. 3.2.2. Horno de mufla elctrico, con circulacin de aire suficiente, con mecanismo de regulacin y control de temperatura. 3.2.3. Cpsulas de incineracin redondas de fondo plano, preferiblemente de aleacin de oro y platino, o bien de cuarzo o de porcelana. El dimetro de las cpsulas ser de unos 5 cm, y la altura mxima de 2 cm. 3.2.4. Desecador provisto de llave, con placa perforada de aluminio, conteniendo un agente deshidratante como 141154 di-Fsforo penta-Oxido PRS, 141219 Calcio Cloruro anhidro, escoriforme PRS 211335 Gel de Slice 3-6 mm con indicador QP. 3.3. Procedimiento. Pesar 5 g de muestra con aproximacin de 10 mg; las restantes pesadas deben hacerse con una aproximacin de 0,1 mg. Inmediatamente antes de usar las cpsulas de incineracin, calentarlas en el horno a la temperatu-

ra de 910C durante 15 minutos. Enfriarlas en el desecador y pesarlas en cuanto alcancen la temperatura ambiente. Introducir la muestra pesada en la cpsula repartindola en una capa de espesor uniforme, sin comprimirla. Colocar la cpsula a la entrada del horno con la puerta abierta, y dejar que arda. Cuando las llamas se extingan, empujar la cpsula al interior del horno y cerrar la puerta del mismo. Una vez cerrada la puerta del horno debe mantenerse en l una corriente de aire suficiente, que no sea tan fuerte como para arrastrar la sustancia fuera de las cpsulas. La incineracin se contina hasta lograr la combustin total de la muestra, incluso de las partculas carbonosas que pueden quedar incrustadas en las cenizas. Dar por terminada la incineracin cuando el residuo es prcticamente blanco o gris despus del enfriamiento. Sacar las cpsulas del horno y dejarlas enfriar en el desecador. Pesarlas tan pronto alcancen la temperatura ambiente. La temperatura de incineracin es de 910C. 3.4. Clculo. 3.4.1. El porcentaje de cenizas sobre materia natural se obtiene por la formula siguiente: (P1 - P2) 100 Cenizas % (materia natural) = P - P1 en la que: P = peso en g de la cpsula con la muestra. P1 = peso en g de la cpsula con las cenizas. P2 = peso en g de la cpsula vaca. 3.4.2. El porcentaje de cenizas sobre material seco se obtiene relacionando el valor de contenido en cenizas obtenido sobre materia natural con el valor de contenido en humedad, segn la formula siguiente: Cenizas sobre x 100 materia natural
=

3.5. Referencias. 3.5.1. Instituto de Racionalizacin del Trabajo. Una Norma Espaola 34.400 h 8. 3.5.2. Mtodos de la Asociacin Internacional de Qumica Cerealista (I.C.C.).

4. PROTEINA 4.1. Principio. El contenido en protena bruta de un producto es el resultado de multiplicar el contenido en nitrgeno, determinado por el procedimiento Kjeldahl por un factor de transformacin del nitrgeno en protena. Este mtodo es aplicable a los granos, harinas y otros derivados de los cereales. 4.2. Material y aparatos. 4.2.1. Matraces Kjeldahl de 500 a 800 ml. 4.2.2. Batera de ataque. 4.2.3. Batera de destilacin o aparato de destilacin. 4.3. Reactivos. 131058 Acido Sulfrico 96% PA-ISO 181061 Acido Sulfrico 0,05 mol/l (0,1N) SV 131074 Agua PA-ACS 131270 Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO 121085 Etanol 96% v/v PA 131532 Potasio Sulfato PA-ACS-ISO 171618 Rojo de Metilo solucin 0,1% RE 171690 Sodio Hidrxido solucin 30% p/v RE 181693 Sodio Hidrxido 0,1 mol/l (0,1N) indicador Azul de Bromofenol SV 4.3.1. Acido Sulfrico 96% PA-ISO. 4.3.2. Potasio Sulfato PA-ACS-ISO. 4.3.3. Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO. 4.3.4. Sodio Hidrxido solucin 30% p/v RE. 4.3.5. Acido Sulfrico 0,05 mol/l (0,1N) SV. 4.3.6. Sodio Hidrxido 0,1 mol/l (0,1N) indicador Azul de Bromofenol SV. 4.3.7. Disolucin de indicador. Disolver 0,3 g de Rojo de Metilo solucin 0,1% RE en 100 ml de Etanol 96% v/v PA. 4.4. Procedimiento. Pesar un g de muestra, molida de forma que las partculas sean inferiores a 500 , e introducirla en un matraz Kjeldahl. Aadir 10 g de Potasio Sulfato PA-ACS-ISO y 0,1 g de Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO. Agregar 20 ml de Acido Sulfrico 96% PA-ISO y mezclar todo hasta que toda la sustancia est mojada por el cido. Iniciar el ataque a fuego lento, para evitar que la espuma arrastre el producto al cuello del matraz. Cuando desaparezca la espuma, hacer hervir vigorosamente hasta que la disolucin quede limpia y prolongar todava el ataque otros 30 minutos.

Cenizas % (materia seca)

100 -

humedad de la harina

10

3.4.3. Lmite de errores. Cuando el contenido de cenizas no rebase el 1% de la muestra, la diferencia de los resultados de un ensayo efectuado por duplicado no deber ser superior al 0,02. Si el contenido de cenizas rebasa el 1%, la diferencia no deber ser superior al 2% de dicho contenido. Si es superior, se repetir la determinacin. 3.4.4. Expresin de los resultados. El contenido de cenizas se expresa por 100 partes de sustancia seca y con dos cifras decimales.

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Dejar enfriar. Aadir unos 200 ml de Agua PAACS. Agregar 80 ml de Sodio Hidrxido solucin 30% p/v RE y proceder al destilado. El lquido que destila se recoge en un vaso que contiene 20 ml de Acido Sulfrico 0,05 mol/l (0,1N) SV y una gota de disolucin de Rojo de Metilo, aadindose nuevamente una cantidad conocida de Acido Sulfrico 0,05 mol/l (0,1N) SV si virase de color durante la destilacin. La cantidad de destilado a recoger es de unos 150 ml, dndose por acabada la destilacin cuando el lquido que se destila no haga virar a azul el papel rojo de tornasol. Acabada la destilacin, valorar el exceso de Acido Sulfrico con disolucin valorada de Sodio Hidrxido 0,1 mol/l (0,1N) indicador Azul de Bromofenol SV. Efectuar una prueba en blanco de destilacin y valoracin para controlar la pureza de los reactivos. 4.5. Clculo. 4.5.1. El porcentaje de protena bruta sobre sustancia natural es: (V x f - V1 x f1) 0,014 x F x 100 Protena bruta % = P en la que: V = volumen en ml de disolucin de cido sulfrico 0,1N empleado para recoger el nitrgeno amoniacal destilado. f = factor de la disolucin de cido sulfrico 0,1N. V1 = volumen en ml de disolucin de sodio hidrxido 0,1N necesario para neutralizar el cido sulfrico existente al final de la destilacin. f1 = factor de la disolucin de sodio hidrxido 0,1N. F = factor de transformacin de nitrgeno en protena. Para el trigo y derivados es de 5,7 y para los restantes cereales es de 6,25. P = peso de la muestra. 4.5.2. El porcentaje de protena bruta sobre sustancia seca se determina teniendo en cuenta el contenido en humedad. 4.5.3. Dispersin de los resultados. Se considerarn concordantes las determinaciones duplicadas cuando los resultados expresados en porcentaje difieran en menos de 0,25. 4.6. Referencias. 4.6.1. Instituto de Racionalizacin del Trabajo. Una Norma Espaola 24.400 h 7. 4.6.2. Mtodos de la Asociacin Internacional de Qumica Cerealista (I.C.C.). 5. GRASA 5.1. Principio. El contenido en grasa bruta de un producto se define convencionalmente como la parte del mismo extrable por ter etlico en condiciones determinadas. Incluye, adems de la grasa, otras muchas sustancias solubles en ter etlico, como son: ceras, pigmentos, vitaminas, etc. Este mtodo es aplicable a los granos, harinas y otros productos derivados de los cereales. 5.2. Material y aparatos. 5.2.1. Extractor tipo Soxhlet. 5.2.2. Balanza analtica con precisin de 0,1 mg. 5.2.3. Estufa de desecacin, graduada a 100C. 5.2.4. Desecador con placa de porcelana o metlica perforada, conteniendo un agente deshidratante, como anhdrido fosfrico o silicagel. 5.2.5. Cartuchos de extraccin. 5.2.6. Matraces de 100 a 150 ml, adaptable al extractor. 5.2.7. Batera de extraccin, bao de agua. 5.3. Reactivos. 132770 Eter Dietlico estabilizado con ~6 ppm de BHT PA-ACS-ISO 5.4. Procedimiento. Pesar de 5 a 10 g de muestra, molida de forma que pase por un tamiz de 500 y desecada a 100C, e introducirlos en un cartucho que se tapona con algodn. Tarar el matraz, desecado en la estufa y enfriado en el desecador. Introducir el cartucho en el extractor, aadir Eter Dietlico estabilizado con ~6 ppm de BHT PA-ACS-ISO una vez conectado el matraz y proceder a la extraccin, continundola hasta que el ter sea incoloro; son suficientes 4 horas a una velocidad de destilacin de 4 a 5 gotas/s, y 16 horas para 2 a 3 gotas/s. Sacar el cartucho del extractor y recuperar el ter. Llevar el matraz con el extracto y el resto del disolvente a la estufa de desecacin a 100C y tenerlo media hora. Dejar enfriar el matraz en el desecador y, en cuanto alcance la temperatura ambiente, pesarlo. 5.5. Clculo. El porcentaje de grasa bruta sobre sustancia seca viene dado por la frmula: (P1 - P2) x 100 Grasa bruta % (materia seca) = P en la que: P1 = peso, en g, del matraz con el extracto etreo. P2 = peso, en g, del matraz vaco.

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P = peso, en g, de la muestra empleada. 5.6. Referencia 5.6.1. American Association of Cereal Chemists. Cereal Laboratory Methods, 1967. Mtodo 30-20.

6.2.5. Mechero Bunsen y trpode. 6.3. Reactivos. 131058 Acido Sulfrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 251170 Azul de Metileno (C.I. 52015) DC 131270 Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO 131729 Potasio Sodio Tartrato 4-hidrato PA-ACS-ISO 131687 Sodio Hidrxido lentejas PA-ACS-ISO 131724 Sodio Tungstato 2-hidrato PA-ACS 6.3.1. Acido Sulfrico al 20%. Diluir Acido Sulfrico 96% PA-ISO con Agua PA-ACS, hasta la concentracin indicada. 6.3.2. Sodio Tunsgtato al 15%. Disolver Sodio Tungstato 2-hidrato PA-ACS en Agua PA-ACS y ajustar a la concentracin indicada.

6. INDICE DE MALTOSA 6.1. Principio. El ndice de maltosa es una medida relacionada con la capacidad de produccin de gas de un trigo. 6.2. Material y aparatos. 6.2.1. Matraz Erlenmeyer con tapn de 250 ml. 6.2.2. Bao de agua. 6.2.3. Bureta graduada de 50 ml de capacidad. 6.2.4. Matraz Erlenmeyer de 100 ml.

TABLA 6.1 Indice de maltosa Lquido Indice Lquido Indice vertido de maltosa vertido de maltosa 20,0 2,69 35,5 1,49 20,5 2,63 36,0 1,47 21,0 2,56 36,5 1,46 21,5 2,50 37,0 1,45 22,0 2,44 37,5 1,42 22,5 2,38 38,0 1,40 23,0 2,33 38,5 1,38 23,5 2,28 39,0 1,36 24,0 2,23 39,5 1,34 24,5 2,18 40,0 1,32 25,0 2,14 40,5 1,30 25,5 2,10 41,0 1,29 26,0 2,06 41,5 1,27 26,5 2,02 42,0 1,26 27,0 1,99 42,5 1,24 27,5 1,95 43,0 1,23 28,0 1,91 43,5 1,21 28,5 1,87 44,0 1,20 29,0 1,84 44,5 1,18 29,5 1,80 45,0 1,17 30,0 1,77 45,5 1,16 30,5 1,74 46,0 1,15 31,0 1,72 46,5 1,13 31,5 1,69 47,0 1,12 32,0 1,66 47,5 1,11 32,5 1,63 48,0 1,10 33,0 1,61 48,5 1,09 33,5 1,58 49,0 1,08 34,0 1,56 49,5 1,06 34,5 1,54 50,0 1,05 35,0 1,52

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6.3.3. Solucin de Sulfato de Cobre (69,28 g/l). Disolver Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO en Agua PA-ACS y ajustar a la concentracin indicada. 6.3.4. Solucin de 350 g de sal de Seignette (Potasio Sodio Tartrato 4-hidrato PA-ACS-ISO) y 100 g de Sodio Hidrxido lentejas PA-ACS-ISO en 1 l de Agua PA-ACS. 6.3.5. Indicador: Azul de Metileno (C.I. 52015) DC al 1% en Agua PA-ACS. 6.4. Procedimiento. Pesar 15 g de harina y colocarlos en un matraz Erlenmeyer con tapn. Aadir 95 ml de Agua PAACS e introducir el matraz en un bao de agua manteniendo a 27C de temperatura. Dejar en el bao durante una hora, agitar bien a intervalos de 15 minutos. Sacar el matraz del bao y aadir 15 ml de Acido Sulfrico al 20% y 3,5 ml de Sodio Tungstato al 15%. Filtrar. Prescindir del residuo y colocar el lquido en una bureta graduada de 50 ml de capacidad. Introducir en un matraz Erlenmeyer 5 ml de solucin de Cobre II Sulfato (69,28 g/l) y 6 ml de una solucin de 350 g de sal de Seignette (Potasio Sodio Tartrato 4-hidrato PA-ACS-ISO) y 100 g de Sodio Hidrxido lentejas PA-ACS-ISO en un litro de agua. Colocar el matraz en un trpode sobre un mechero Bunsen y verter en l desde la bureta 20 ml del lquido filtrado. Cuando hierva, aadir 5 gotas de indicador (solucin acuosa de Azul de Metileno al 1%). Verter gradualmente lquido desde la bureta hasta que la solucin del matraz ha perdido por completo la coloracin azul. Observar en la probeta la cantidad de lquido vertido y buscar en la tabla 6.1 el ndice de maltosa de la harina. 6.5. Referencia. 6.5.1. Anlisis de Cereales y Derivados. Ministerio de Agricultura, 1957, pginas 56-57. 7.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 131192 Benceno PA-ACS-ISO 121085 Etanol 96% v/v PA 131315 Eter de Petrleo 40-60C PA-ISO 131325 Fenolftalena PA-ACS 131500 Potasio Dicromato PA-ISO 121515 Potasio Hidrxido 85% lentejas PA 131527 Potasio Permanganato PA-ACS-ISO 7.3.1. Eter de Petrleo 35-60C. En su defecto, utilcese Eter de Petrleo 40-60C PA-ISO. 7.3.2. Benceno-alcohol-Fenolftalena (BAF). Mezclar partes iguales en volumen de Benceno PAACS-ISO, y de Etanol 96% v/v PA. Aadir 0,2 g de Fenolftalena PA-ACS por litro para obtener una solucin al 0,02%. 7.3.3. Potasio Hidrxido. Preparar una solucin 0,0178N (1 ml = 1 mg de KOH) con Potasio Hidrxido 85% lentejas PA libre de CO2. 7.3.4. Patrn de color. 7.3.4.1. Colocar 50 ml de Agua PA-ACS en un matraz del mismo tipo en que se va a hacer la valoracin. Aadir gota a gota una solucin de Potasio Dicromato al 0,05% hasta que tome la coloracin de la solucin que se va a valorar. Aadir 2,5 ml de una solucin recin preparada de Potasio Permanganato al 0,01% y se mezcla. El color final de la valoracin debe ser semejante a ste. 7.3.4.2. El color patrn para la valoracin de la prueba en blanco se obtiene aadiendo 2,5 ml de Potasio Permanganato al 0,01% de 50 ml de Agua PA-ACS. 7.4. Procedimiento. Para que los resultados sean ms precisos, el contenido en humedad de los granos no debe exceder del 11%. Se ha comprobado que mayores contenidos en humedad en el momento de la extraccin aumentan significativamente los valores de acidez grasa. Moler por lo menos 40 g de una muestra representativa para granos pequeos, tales como el trigo, o 200 g para granos ms grandes, tales como el maz. Preferiblemente, moler la muestra de tal forma que el 90% o ms pase a travs del tamiz de 500 m. Una vez molida la muestra se somete a extraccin antes de 1 hora para evitar cambios causados por enzimas lipolticos. Extraer 10 g de muestra slida, como en 5.4., utilizando Eter de Petrleo 35-60C. Evaporar el Eter de Petrleo 35-60C del extracto y redisolver el extracto en el matraz de extraccin con 50 ml de solucin BAF. Valorar la solucin extrada con Potasio Hidrxido 0,0178N hasta alcanzar el punto de color patrn. 7.4.1. Hacer la prueba en blanco valorando 50 ml de solucin BAF, hasta alcanzar el punto de color patrn 7.3.4.2.

7. ACIDEZ GRASA 7.1. Principio. Neutralizacin de los cidos grasos libres con sodio hidrxido. Se mide la rancidez hidroltica que se utiliza como ndice de deterioro en almacenamiento. Aplicable a granos de cereales y harinas. 7.2. Material y aparatos. 7.2.1. Extractor tipo Soxhlet. 7.2.2. Balanza analtica con precisin de 0,1 mg. 7.2.3. Cartuchos de extraccin. 7.2.4. Matraces de 100 a 150 ml adaptables al extractor. 7.2.5. Batera de extraccin con bao de agua. 7.2.6. Pipetas de 50 ml. 7.2.7. Bureta de 50 ml.

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7.5. Clculo. Expresar la acidez grasa como los mg de potasio hidrxido requeridos para neutralizar los cidos grasos libres de 100 g de granos sobre sustancia seca por la frmula: (V - V1) x 10 x 100 Valor acidez grasa = 100 - H donde: V = volumen en ml de potasio hidrxido 0,0178N utilizado para valorar la muestra extrada. V1 = volumen en ml de potasio hidrxido 0,0178N utilizado para la valoracin en blanco. H = peso en g de agua en 100 g de muestra. 7.6. Observaciones. En caso de granos con altos valores de acidez grasa se forman a veces emulsiones durante la valoracin que enmascaran parcialmente el punto de color final. Cuando aparecen emulsiones, aadir 50 ml adicionales de solucin BAF para asegurar una solucin clara. En este caso el valor de la prueba en blanco es el doble del valor determinado sobre 50 ml. 7.7. Referencia. 7.7.1. American Association of Cereal Chemistry Cereal Laboratory Methods, 1967. Mtodo 02-01.

temperatura ambiente, agitar bien y dejar reposar 1 hora, aproximadamente, con agitados frecuentes. Filtrar o centrifugar. A 5 ml del filtrado aadir 5 ml de solucin de Potasio Yoduro solucin 10% p/v RE y 5 ml de Acido Sulfrico 96% PA-ISO (1+10) v/v. Soluciones amarillas o pardas indican la presencia de agentes oxidantes. 8.5. Referencia. 8.5.1. American Association of Cereal Chemistry, Cereal Laboratory Methods. 1967. Mtodo 48-02.

9. BROMATOS Y YODATOS EN LA HARINA (Mtodo cualitativo) 9.1. Principio. Este mtodo sirve para determinar la presencia de bromato y yodato en la harina, que actan como mejorantes. 9.2. Material y aparatos. 9.2.1. Placa de Petri de un rea aproximada de 100 cm2. 9.2.2. Tamiz nmero 60. 9.3. Reactivos. 131019 Acido Clorhdrico 35% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 131534 Potasio Tiocianato PA-ISO 131542 Potasio Yoduro PA-ISO 9.3.1. Para el bromato y yodato solucin de Acido Clorhdrico 35% PA-ISO en Agua PA-ACS (1+7) v/v y Potasio Yoduro PA-ISO (1%) mezclados a volmenes iguales. 9.3.2. Para yodato solucin de 1 volumen de Potasio Tiocianato PA-ISO (1%) y 4 volmenes de solucin de Acido Clorhdrico 35% PA-ISO en Agua PA-ACS (1+32) v/v mezclados. 9.4. Procedimiento. 9.4.1. Bromatos y yodatos. Cubrir el fondo del recipiente con el reactivo Potasio Yoduro-Acido Clorhdrico. Cerner uniformemente con el tamiz nmero 60 sobre el reactivo, aproximadamente 4 g de harina a ensayar. Alternativamente, cerner harina sobre la superficie del recipiente seco y esparcir la mezcla de reactivo sobre la harina con un frasco pulverizador hasta que todas las partculas estn humedecidas. La aparicin de manchas negras o purpreas despus de la adicin del reactivo indica la presencia de bromato o yodato. 9.4.2. Yodatos. 9.4.2.1. (Aplicable a 10 ppm o ms). Distribuir suavemente, aproximadamente, 1 g de harina sobre el fondo de una placa de Petri y cubrir completa-

8. AGENTES OXIDANTES (Reaccin con Potasio Yoduro) 8.1. Principio. Este mtodo detecta todos los agentes oxidantes que se adicionan generalmente a la harina, para mejorar sus propiedades de panificacin, excepto perclorato y benzoilo perxido. 8.2. Material y aparatos. 8.2.1. Matraz Erlenmenyer de 500 ml. 8.2.2. Centrfuga. 8.3. Reactivos. 131058 Acido Sulfrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 171543 Potasio Yoduro solucin 10% p/v RE

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8.3.1. Potasio Yoduro solucin 10% p/v RE. 8.3.2. Solucin de Potasio Yoduro solucin 10% p/v RE y Acido Sulfrico 96% PA-ISO (1+10) v/v. 8.4. Procedimiento. Colocar 50 g de muestra en un matraz Erlenmeyer de 500 ml, aadir 200 ml de Agua PA-ACS a la

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mente con el reactivo Potasio-Sulfocianuro-Acido Clorhdrico recientemente preparado. 9.4.2.2. (Aplicable a 1-10 ppm). Proceder como para bromatos y yodatos, pero usar el reactivo Potasio-Sulfocianuro-Acido Clorhdrico. 9.5. Referencia. 9.5.1. Association of Official Agricultural Chemists. Official Methods of Analysis. 1970. 14.040 y 14.041, pg. 218. 11.3.1. Suspensin de levadura panaria. Formar una papilla espesa con 10 g de levadura y Agua PAACS, aadiendo ms agua hasta completar 100 ml. 11.4. Procedimiento. Pesar 10 g de trigo molido que pase por el tamiz de 1 mm y colocarlo en una cpsula de porcelana. Aadir 5,5 ml de la suspensin de levadura y amasar con una esptula. Dividir la masa en dos partes aproximadamente iguales y darle forma de bola compacta entre las palmas de las manos. Introducir las bolas as formadas en sendos vasos de forma baja de 150 ml, que contenga 75 ml de agua a 32C. Colocar los vasos en un bao de agua a dicha temperatura. Por la accin de los gases producidos en la fermentacin, las bolas suben a la superfcie, en la cual permanecen un tiempo variable, hasta que rompen y caen pedazos al fondo del vaso. 11.5. Clculo. Medir el tiempo en minutos transcurridos desde el momento de introducir la bola en el vaso hasta que se produce la disgregacin. La media de las dos determinaciones constituye el ndice de Pelshenke. 11.6. Referencias. 11.6.1. Anlisis de Cereales y Derivados. Ministerio de Agricultura, 1057, pg. 35. 11.6.2. American Association of Cereal Chemists Cereal Laboratory Methods, 1967. Mtodo 56-50.

10. BENZOILO PEROXIDO (Mtodo cualitativo con bencidina) 10.1. Principio. El benzoilo perxido da con solucin etnolica de bencidina, coloracin pardo-verdosa. 10.2. Material y aparatos. 10.2.1. Placa de vidrio. 10.2.2. Pulverizador. 10.3. Reactivos. 121085 Etanol 96% v/v PA Bencidina 10.3.1. Disolver 1,5 g de Bencidina (base libre) en 50 ml de Etanol 96% v/v PA. Calentar la solucin a 50-60C en un bao de agua antes de usarla. 10.4. Procedimiento. Verter el reactivo sobre una capa de harina en una placa de vidrio. Si aparecen manchas pardo-verdosas indica que la harina est tratada con benzoilo perxido. Observar mejor las manchas por detrs del vidrio y, en general, verter el reactivo pulverizando. 10.5. Referencia. 10.5.1. American Association of Cereal Chemists. Cereal Laboratory Methods, 1967. Mtodo 48-05.

12. GLUTEN 12.1. Principio. Complejo de protenas insolubles en agua que forman, por arrastre del almidn de la harina mediante lavado, una masa gomosa muy extensible. Este mtodo se aplica para la determinacin del contenido en gluten de la harina de trigo y smolas. 12.2. Material y aparatos. 12.2.1. Balanza con precisin de 0,01 g. 12.2.2. Extractor de gluten con disco excntrico y mecanismo tensor para gasa de seda; velocidad del disco excntrico 80 r.p.m. 12.2.3. Recipiente para agua con gasto regulable. 12.2.4. Cronmetro. 12.2.5. Tamiz de madera, de 30 por 40 cm, con gasa para smola nmero 56. 12.2.6. Placa de vidrio esmerilado 40 x 40 cm. 12.2.7. Guantes de caucho delgado y de superficie lisa. 12.2.8. Prensa para gluten, sistema Berliner, con distancia entre placas de 2,4 mm.

11. INDICE DE PELSHENKE 11.1. Principio. El ndice de Pelshenke proporciona una valoracin indirecta de la calidad panadera de los trigos, estando relacionado tanto con la capacidad de produccin de gas como con la capacidad de retencin del mismo. 11.2. Material y aparatos. 11.2.1. Bao de agua. 11.2.2. Vasos de forma baja de 150 ml. 11.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS Levadura

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12.2.9. Cpsula de porcelana barnizada interiormente o de metal esmerilado, de 10 a 15 cm de dimetro. 12.2.10. Esptula de 18 a 20 cm de longitud. 12.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 131509 Potasio di-Hidrgeno Fosfato PA-ACS-ISO 131659 Sodio Cloruro PA-ACS-ISO di-Sodio Hidrgeno Fosfato 2-hidrato 141771 Yodo resublimado perlas (USP, BP, F. Eur.) PRS-CODEX 12.3.1. Disolucin al 2% de Sodio Cloruro (pH 6,2). Disolver 200 g de Sodio Cloruro PA-ACS-ISO, en 10 litros de Agua PA-ACS. Aadir 7,54 g de Potasio di-Hidrgeno Fosfato PA-ACS-ISO y 1,40 g de di-Sodio Hidrgeno Fosfato 2-hidrato, de calidad reactivo para anlisis. La disolucin se preparar cada da que se utilice. 12.3.2. Solucin de Yodo, aproximadamente N/1000; sirve para comprobar la presencia de almidn. Preparar diluyendo Yodo resublimado perlas (USP, BP, F. Eur.) PRS-CODEX en Agua PA-ACS y ajustar a la concentracin indicada. 12.4. Procedimiento. Pesar 10 g de harina con una aproximacin de 0,01 g y colocarla en una cpsula de porcelana. Aadir gota a gota 5,5 ml de disolucin de Sodio Cloruro removiendo continuamente la harina con la esptula. Despus de haber aadido a la harina toda la disolucin de Sodio Cloruro, comprimir la mezcla cuidando de no perder nada de harina. La masa adherida a la pared de la cpsula se aade a la bola de masa. Homogeneizar la masa enrollndola con la palma de la mano sobre la placa de vidrio esmerilado hasta que tenga una longitud de 7 a 8 cm, volvindola a dar entonces la forma de bola y se repite el amasado en la misma forma hasta un total de cinco veces. La mano que efecta la homogeneizacin estar revestida de un guante de caucho que proteja la masa del calor y de la transpiracin de la mano. Colocar la bola de masa sobre la gasa de seda ligeramente tensa del extractor de gluten. Mojar la masa con unas gotas de solucin de Sodio Cloruro, colocando luego en su sitio el disco excntrico. Lavar durante 10 minutos, debindose gastar unos 400 ml de solucin de Sodio Cloruro. Cuando no se disponga del aparato extractor de gluten, se sustituir el anterior paso por un lavado a mano. Para ello, dejar caer gota a gota la solucin de Sodio Cloruro, que debe tener una temperatura de 18C, sobre la palma de la mano. El ritmo de goteo debe ser tal que aproximadamente 0,75 litros de la disolucin desage en 8 minutos. Durante este tiempo arrollar y prensar alternativamente la

masa y estirarla siete veces de forma que se parta en dos trozos que se juntan enseguida. La duracin del lavado depende del contenido de la masa en gluten; sin embargo, debe ser aproximadamente la misma siempre y no rebasar los 8 minutos. Al lavado mecnico del gluten sigue un lavado a mano cuya duracin, en general, no debe exceder de 2 minutos. Se puede considerar terminada la extraccin de gluten tan pronto como el amasar la bola de gluten con la disolucin fresca de Sodio Cloruro no se encuentren ms que trazas de almidn en el agua escurrida. Para comprobar la presencia de almidn en el lquido de lavado, utilizar una disolucin de Yodo 0,001N. Desprender de la bola de gluten la mayor parte de la disolucin de lavado adherente cogiendo el gluten con la punta de los dedos de una mano y sacudindolo tres veces brevemente, pero con fuerza. Estirar a continuacin, suavemente, el gluten en lmina delgada, mantenindolo entre los dedos, y llevarlo a la prensa, cerrando sta. Abrirla a los 5 segundos y pasar la lmina de gluten a posicin seca sin deformarla. Prensarla otra vez. Hacer esta operacin quince veces, secando bien las superficies de vidrio despus de cada prensada. Pesar el gluten en la balanza con aproximacin de 0,01 g. 12.5. Clculo. 12.5.1. Gluten hmedo. El peso obtenido multiplicado por diez da el porcentaje de gluten hmedo. Las determinaciones duplicadas se consideran concordantes cuando no difieran en ms de 0,5% de contenido en gluten. Si la desviacin es mayor, hacer una tercera determinacin y tomar la medida de las tres efectuadas como expresin del contenido en gluten. Si la desviacin hallada entre los valores ms alto y ms bajo en los tres ensayos es mayor del 1%, proceder a hacer una cuarta determinacin. 12.5.2. Gluten seco. La bola de gluten hmedo obtenida en la determinacin anterior se deseca en la estufa a temperatura de 100C hasta peso constante. Dejarla enfriar y pesar. El peso obtenido multiplicado por diez da el porcentaje de gluten contenido en la harina. 12.6. Referencia. 12.6.1. Instituto de Racionalizacin del Trabajo. Una Norma Espaola 34.400 h 6. 12.6.2. Mtodos de la Asociacin Internacional de Qumica Cerealista (I.C.C.).

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13. FARINOGRAFO BRABENDER 13.1. Principio. El mtodo se aplica para la determinacin de la absorcin de agua y el comportamiento al amasado

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de una harina de trigo. El faringrafo mide y registra la resistencia de una masa al amasado. Esta resistencia se llama consistencia. La absorcin de agua se define como el porcentaje de agua respecto al peso de harina que es necesario aadir para obtener una masa de consistencia determinada. 13.2. Material y aparatos. 13.2.1. Faringrafo Brabender con tanque de circulacin de agua. Calibracin del faringrafo: Velocidad de la paleta rpida: 90 3 r.p.m. Par: 100 2 g cm/U.B. Velocidad del papel: 1,00 0,03 cm/min. Bureta graduada de 135 ml a 225 ml. 13.2.2. Balanza de sensibilidad : 0,1 g. 13.2.3. Esptula de plstico blanco. 13.3. Reactivos 131074 Agua PA-ACS 13.3.1. Agua PA-ACS. 13.4. Procedimiento. Determinar el contenido de humedad de la harina como en 2. Hacer circular el agua por el termostato y el faringrafo al menos 1 hora antes de usar el instrumento. Durante el ensayo, la temperatura del Agua PA-ACS y de la amasadora deber ser de 30 0,2. Lubricar la amasadora con una gota de Agua PAACS entre la pared posterior y cada una de las paletas. Ajustar la posicin de los pesos de la balanza para obtener una defleccin cero del indicador con las paletas girando en vaco. Ajustar el brazo de la pluma de tal forma que coincidan las lecturas en el sector de la balanza y en el papel mvil. Ajustar el amortiguador de tal manera que con el motor girando el tiempo requerido por el indicador de la balanza para ir de 1.000 a 100 U.B. sea de 1,0 0,2 s. Poner en la amasadora el peso equivalente a 300 0,1 g de harina con el 15% de humedad. Tapar la amasadora. Llenar la bureta con Agua PA-ACS a 30 5. Si fuese necesario, llevar la harina a 30 10. Colocar el papel de tal manera que la pluma est en contacto con una lnea de 9 min. Mezclar durante 1 minuto. Comenzar a aadir Agua PA-ACS de la bureta en la esquina delantera de la derecha de la amasadora cuando la pluma cruce la lnea de 0 minutos. Aadir Agua PA-ACS en cantidad suficiente para que la consistencia mxima de la masa sea de 500 U.B. Cuando la masa se adhiera a las paredes de la amasadora, rasparla con una esptula de plstico. Cubrir la amasadora hasta el final del ensayo. Si la cantidad de Agua PA-ACS utilizada en el ensayo no se ha aadido en un intervalo de 25 segundos o si la consistencia mxima de la masa difiere de 500 20 U.B., se repite el ensayo corrigiendo la cantidad de Agua PA-ACS y aadindola en 25 segundos de forma que la masa adquiera una consistencia mxima de 500 20 U.B. Una vez alcanzada la consistencia mxima, continuar el ensayo durante 12 minutos. 13.5. Clculo. 13.5.1. Absorcin de agua. Calcular la absorcin de agua sobre una base del 15% de humedad como sigue: V + P - 300 Absorcin de agua % = 3 V = volumen en ml de agua aadida para obtener una masa con una consistencia mxima de 500 U.B. P = peso en g de harina utilizada, equivalente a 300 g con el 15% de humedad. Determinar la absorcin con una aproximacin del 0,1%. 13.5.2. Tiempo de desarrollo. Es el perodo comprendido desde el comienzo del amasado hasta el punto de la curva inmediatamente anterior al primer signo de decaimiento. Expresar este tiempo con una aproximacin de 0,5 minutos. En el caso, poco frecuente, de que aparezcan dos mximos, emplear el segundo para medir el tiempo de desarrollo. 13.5.3. Grado de decaimiento. Es la diferencia en U.B. entre el centro de la curva en el mximo y el centro de la curva 12 minutos despus de este mximo. Expresar el decaimiento con una aproximacin de 5 U.B. 13.6. Observaciones. Se obtienen los siguientes valores para el coeficiente de variacin de la determinacin simple correspondiente a un solo faringrafo: Absorcin de agua ......................... 0,55 % Tiempo de desarrollo de la masa ... 8,9 % Grado de decaimiento .................... 7,5 % 13.7. Referencia. 13.7.1. Mtodos de la Asociacin Internacional de Qumica Cerealista (I.C.C.).

14. ALVEOGRAFO CHOPIN (Provisional) 14.1. Principio. En el ensayo con el alvegrafo, la masa se extiende bidimensionalmente formando un alveolo, por efecto de la fuerza debida a la presin del aire que se insufla por debajo de una lmina de masa obtenida en condiciones normalizadas. Con este ensayo se imita a gran escala la formacin de alveolos en el seno de la masa por el anhdrido carb-

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nico producido por las levaduras durante la fermentacin. Las dimensiones y la forma de las curvas obtenidas y el volumen del alveolo en el momento de la rotura son una gua de las caractersticas de panificacin de la harina. 14.2. Material y aparatos. 14.2.1. Alvegrafo de Chopin (con depsito de circulacin de agua). Calibracin del alvegrafo: Velocidad de la paleta amasadora : 60 3 r.p.m. Altura de las guas : 1,2 0,1 cm. Dimetro del rodillo: 3,3 0,07 cm; 4,0 0,10 cm. Dimetro del cortador: 4,55 0,05 cm. Dimetro de la pieza de masa antes del ensayo: 5,50 0,05 cm. Volumen de la pera de goma : 20 5 ml. Volumen de la bureta: 625 3 ml. Flujo de agua en la bureta: 23,0 0,5 s. Velocidad del papel, 0,30 cm: 55 1 s o 0,55 0,01 cm/s. 14.2.2. Bureta de 200 ml de capacidad. 14.2.3. Balanza de la sensibilidad 0,1 g. 14.2.4. Matraz Erlenmeyer 250 ml. 14.2.5. Reloj avisador. 14.2.6. Planmetro. 14.3. Reactivos. Aceite de Cacahuete 131074 Agua PA-ACS 131659 Sodio Cloruro PA-ACS-ISO 14.3.1. Solucin de Sodio Cloruro. Disolver 25 g de Sodio Cloruro PA-ACS-ISO, en Agua PA-ACS y llevar hasta 1 litro. 14.3.2. Aceite de cacahuete. 14.4. Procedimiento. Determinar el contenido de humedad de la harina como en 2.3. Si fuese necesario, llevar la temperatura de la harina a 20 5. Poner el termostato en funcionamiento con antelacin suficiente para asegurar que durante el ensayo la temperatura de la amasadora y del alvegrafo sea de 25 0,2. Antes y durante el ensayo, comprobar las temperaturas. Verter de la bureta al matraz Erlenmeyer el volumen de solucin de Sodio Cloruro equivalente a 50 ml por cada 1.000 g de harina con el 15,0% de humedad. Este volumen puede encontrarse en la tabla 14.1. Poner en la amasadora 250 0,1 g de harina y colocar el suplemento de la amasadora en su posicin. Poner en marcha el motor de la amasadora en su posicin de marcha adelante, poner en marcha el reloj y aadir a la harina la solucin de Sodio Cloruro vertindola sobre el eje de la paleta amasadora. Esta adicin deber hacerse en 15 segundos.

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Esperar a que se forme la masa. Despus de 60 segundos retirar el suplemento de la amasadora y colocar la tapa sobre la amasadora. Despus de 6 minutos parar el motor de la amasadora. Poner en marcha el motor en su posicin de marcha atrs. Abrir la ranura de extrusin y colocar unas pocas gotas de aceite sobre la placa receptora. Desechar los 2 cm primeros de masa. Cuando la lmina de masa alcance las muescas de la placa receptora, cortar con dos rpidos cortes frente a las guas. Deslizar las piezas de masa sobre la placa de vidrio previamente aceitado. Repetir la operacin anterior tres veces ms y dejar una quinta pieza de masa sobre la placa receptora. Parar el motor de la amasadora. Colocar el rodillo, cuya superficie est aceitada, entre las dos piezas de masa y moverlo a lo largo de los railes 12 veces, primero lentamente y luego rpidamente. Repetirlo con la tercera y cuarta pieza. Cortar cada pieza con el cortador circular y colocarlas ordenadamente sobre las bandejas aceitadas en la cmara del alvegrafo. Pasar el rodillo y cortar la quinta pieza en la misma forma. Colocar el papel sobre el tambor registrador. Llenar la pluma, trazar la lnea de cero y volver el tambor a la posicin inicial. Comprobar que el nivel de agua en la bureta est en el cero. Comprobar que la manilla est en la posicin 1. Aceitar el obturador y el plano de la base de la prensa 26 minutos despus del comienzo del amasado, desenroscar el cuello de la prensa dos revoluciones. Retirar el collar pequeo y el obturador. Con la esptula deslizar cuidadosamente la primera pieza de masa sobre el centro de la base de la prensa. Volver a colocar el obturador y el collar. Girar el collar grande dos revoluciones en 20 segundos. Esperar 5 segundos. Retirar el collar pequeo y el obturador. Girar la manilla a la posicin 2. Elevar la vasija de agua destilada. Girar la vlvula de aire a su posicin horizontal. Comprimir la pera de goma. Girar la vlvula de aire a su posicin vertical. Soltar la pera de goma. Girar la manilla a la posicin 3, comenzando la formacin del alveolo y la rotacin del tambor registrador. Cuando el alveolo se rompa, girar inmediatamente la manilla a la posicin 4. Anotar el nivel de agua destilada en la bureta. Bajar la vasija de agua destilada. Girar la manilla a la posicin 1 y volver a colocar la pluma. Desenroscar el collar grande dos revoluciones y retirar la masa. Repetir el ensayo con las cuatro piezas de masa restantes. Si un alveolo o la curva es claramente anormal debe desecharse la curva. 14.5. Clculo. 14.5.1. Altura de la curva H. Es la media de las alturas mximas en mm de las cinco curvas. El valor P, tenacidad de la masa, puede calcularse multiplicando H por 1,1.

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14.5.2. Longitud de la curva L. Es la longitud media, en mm, de las cinco curvas. Se miden a lo largo de la lnea de cero, desde el comienzo de la curva hasta el punto correspondiente a la vertical trazada por el punto de la curva donde la presin desciende ms bruscamente debido a la ruptura del alveolo. 14.5.3. Area de la curva S. Es el rea media en cm2 de las curvas. Para determinar esta rea, trazar una curva media de las cinco. Si las curvas son diferentes medir la altura de la curva en el mximo, en el medio y hacia el final de cada curva. Marcar los valores medios sobre el grfico en los puntos apropiados y trazar la curva media tambin sobre el grfico conservando la forma caracterstica de la curva. Dar a esta curva una longitud igual a la longitud media L y terminar la curva con una lnea vertical en ese punto. Medir el rea de la curva media dos veces por lo menos con un planmetro y tomar el valor medio. 14.5.4. Indice de inflamiento G. Es el valor medio de las lecturas de la bureta tomadas cuando el alveolo se rompe, que equivalen a la raz cuadrada del volumen de aire usado para inflar el alveolo. 14.5.5. Trabajo de deformacin W. Es el trabajo mecnico, en ergios, usado para inflar el alveolo. Se calcula por la frmula siguiente: 132 x G2 x S W = L 14.6. Referencia. 14.6.1. Grupo de Estudio. Ensayo fsico de la masa. Asociacin Internacional de Qumica Cerealista (I.C.C.).

TABLA 14.1 Volumen de la solucin de sodio cloruro Humedad Volumen Humedad Volumen Porcentaje ml Porcentaje ml 8,0 156,1 14,0 129,4 8,2 155,2 14,2 128,6 8,4 154,4 14,4 127,7 8,6 153,5 14,6 126,8 8,8 152,6 14,8 125,9 9.0 151,7 15,0 125,0 9,2 150,8 15,2 124,1 9,4 149,9 15,4 123,2 9,6 149,0 15,6 122,3 9,8 148,1 15,8 121,4 10,0 147,2 16,0 120,6 10,2 146,3 16,2 119,7 10,4 145,5 16,4 110,8 10,6 144,6 16,6 117,9 10,8 143,7 16,8 117,0 11,0 142,8 17,0 116,1 11,2 141,9 17,2 115,2 11,4 141,0 17,4 114,3 11,6 140,1 17,6 113,4 11,8 139,2 17,8 112,5 12,0 138,3 18,0 111,7 12,2 137,5 18,2 110,8 12,4 136,6 18,4 109,9 12,6 135,7 18,6 109,0 12,8 134,8 18,8 108,1 13,0 133,9 19,0 107,2 13,2 133,0 19,2 106,3 13,4 132,1 19,4 105,4 13,6 131,2 19,6 104,5 13,8 130,3 19,8 103,7

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15. DETERMINACION DEL GRADO DE SEDIMENTACION (Segn Zeleny) 15.1. Principio. El esponjamiento de la fraccin de gluten de harina en solucin de cido lctico afecta el grado de sedimentacin de una suspensin de harina en el medio de cido lctico. Ms alto, contenido en gluten y mejor calidad de ste, conduce a sedimentacin ms lenta y a ms altos valores de la prueba de sedimentacin. El grado de sedimentacin de una harina suspendida en una solucin de cido lctico durante un intervalo de tiempo estndar se toma como medida de su calidad panadera. Es aplicable a harina de trigo. 15.2. Material y aparatos. 15.2.1. Pipeta de 25 ml. 15.2.2. Pipeta de 50 ml. 15.2.3. Cilindro graduado de 100 ml de vidrio o tefln, preferiblemente hecho de vidrio de precisin con una distancia de 180-185 mm, entre la marca cero y la marca 100 ml. 15.2.4. Reloj avisador o medida de intervalos de tiempo. 15.2.5. Bastidor mezclador movido por motor (agitador de vaivn). El bastidor es aproximadamente de 58 x 32 x 5 cm. Se coloca en el centro de cada extremo y oscila 30 a cada lado de la horizontal y a una velocidad de 40 oscilaciones por minuto. El bastidor est diseado para sujetar ocho cilindros, los cuales pueden ser colocados en sus posiciones rpidamente y con seguridad mientras el mezclador est en movimiento. 15.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS (o Agua Desionizada) 131034 Acido L(+)-Lctico 85% PA-ACS 131090 2-Propanol PA-ACS-ISO 171165 Azul de Bromofenol RE-ACS 181693 Sodio Hidrxido 0,1 mol/l (0,1N) indicador Azul de Bromofenol SV (o 181521 Potasio Hidrxido 0,1 mol/l (0,1N) acuosa SV) 15.3.1. 2-Propanol PA-ACS-ISO. 15.3.2. Agua PA-ACS o Agua Desionizada. El agua utilizada para preparar los reactivos y el agua de hidratacin no debe contener ms de 2 ppm de materia mineral. 15.3.3. Agua de hidratacin (solucin de Azul de Bromofenol). Aadir Azul de Bromofenol RE-ACS al Agua PA-ACS para conseguir una concentracin de 4 mg por litro. 15.3.4. Solucin de Acido Lctico.

Diluir 250 ml de Acido L(+)-Lctico 85% PA-ACS a 1 litro con Agua PA-ACS. Tener a reflujo el cido diluido durante 6 horas sin prdida de agua (15.6.2.). 15.3.5. Reactivo de prueba de sedimentacin. Mezclar ntimamente 180 ml de la solucin preparada de Acido Lctico (15.3.4.) con 200 ml de 2-Propanol PA-ACS-ISO (15.3.1.) y Agua PA-ACS hasta 1 litro. Dejar reposar durante 48 horas. Estandarizar a 0,50 0,01N utilizando Sodio Hidrxido 0,1 mol/l (0,1N) indicador Azul de Bromofenol SV o Potasio Hidrxido 0,1 mol/l (0,1N) acuosa SV. El peso especfico debe ser 0,985 0,001 a 15/15C. Evitar la evaporacin. La precisin debe ser como mximo de dos unidades. 15.4. Procedimiento. Pesar 3,2 g de harina (14% humedad) y colocarla en un cilindro graduado y taponado. Aadir 50 ml de Agua de hidratacin con Azul de Bromofenol REACS (15.3.3.) y empezar a medir el tiempo en ese instante. Mezclar harina y reactivo ntimamente sujetando el cilindro taponado en posicin horizontal y agitando a derecha e izquierda a una distancia de 18 cm doce veces en cada direccin, cada 5 segundos. La harina debe estar completamente suspendida durante esta operacin. Colocar el cilindro en el bastidor de mezcla y mezclar hasta que el tiempo transcurrido sea de 5 minutos. Quitar el cilindro del bastidor de mezcla y aadir 25 ml del reactivo (15.3.5.). Volver el cilindro al bastidor hasta que el tiempo transcurrido sea de 10 minutos. Quitar el cilindro del bastidor y dejarlo reposar exactamente 5 minutos. Transcurridos estos 5 minutos exactos, leer el volumen del sedimento en ml estimando con precisin de 1/10 ml. Este es el grado de sedimentacin. 15.5. Clculo. El grado de sedimentacin es el anteriormente hallado. Los valores de sedimentacin sern desde 8 aproximadamente para tipos de gluten con muy bajo contenido en protena hasta 78 aproximadamente para tipo de gluten fuerte con muy alto contenido en protena. 15.6. Observaciones. 15.6.1. El mtodo descrito dar resultados concordantes cuando las harinas son producidas de la misma manera. Cuando empleamos muestras de trigo, los resultados dependen en gran manera del mtodo de produccin de harina utilizado. En general, los mtodos de molienda que envuelven trituracin con cilindros ondulados darn resultados comparables y situarn series de muestras en orden similar. Otros molinos, como el tipo de caf, pueden dar resultados esencialmente carentes de significado.

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15.6.2. El cido lctico concentrado contiene molculas asociadas, las cuales se disocian en disolucin. Para resultados consistentes, la solucin preparada de cido lctico (15.3.4.) debe haber alcanzado el equilibrio antes de su uso en el ensayo. Esto se consigue por reflujo y almacenaje a temperatura ambiente. 15.6.3. Ambos, cido lctico y 2-propanol, deben estar esencialmente libres de materia mineral (no ms de 40 ppm). 15.6.4. La medida de los 5 minutos en el procedimiento es crtica y la lectura del grado de sedimentacin debe ser hecha exactamente a los 5 minutos de reposo. 15.7. Referencia. 15.7.1. International Association for Cereal Chemistry (I.C.C.). Standard Nv. 116. 17. AMONIO PERSULFATO (Mtodo cualitativo) (B.O.E. 20-7-1977) 17.1. Principio. Este mtodo sirve para determinar la presencia de amonio persulfato en harina y consiste en la aparicin de manchas azules con la bencidina. 17.2. Material y aparatos. 17.2.1. Placa Petri de 65 cm2. 17.3. Reactivos. 121086 Etanol absoluto PA Bencidina 17.3.1. Disolver Bencidina para anlisis en Etanol absoluto PA al 1% (p/v). 17.4. Procedimiento. Extender 6 g de la muestra en la cpsula Petri. Aadir unos 3 ml de reactivos. Al cabo de unos minutos aparecen unas manchas azules.

16. ACIDO ASCORBICO (VITAMINA C) (Mtodo cualitativo) (B.O.E. 29-8-1979) 16.1. Principio. Este mtodo sirve para determinar la presencia de vitamina C en harina y consiste en la aparicin de puntos blancos sobre fondo rosa del reactivo 2,6 diclorofenol indofenol sal sdica en medio cido. 16.2. Material y aparatos. 16.2.1. Placa Petri de 65 cm2. 16.3. Reactivos. Acido meta-Fosfrico 131074 Agua PA-ACS 122056 2,6-Diclorofenol Indofenol Sal Sdica 2-hidrato PA 16.3.1. Disolucin acuosa al 0,05% de 2,6-Diclorofenol Indofenol Sal Sdica 2-hidrato. Disolver 2,6Diclorofenol Indofenol Sal Sdica 2-hidrato PA en Agua PA-ACS y ajustar a la concentracin indicada. 16.3.2. Disolucin acuosa al 5% de Acido metaFosfrico. Disolver Acido meta-Fosfrico con Agua PA-ACS y ajustar a la concentracin indicada. 16.4. Procedimiento. Extender 10 g de la muestra sobre una placa de vidrio compactndola de forma que quede bien uniforme. Rociar por completo con la disolucin del Acido meta-Fosfrico y a continuacin hacer lo mismo con la disolucin de 2,6-Diclorofenol Indofenol Sal Sdica. Al cabo de unos minutos aparecen unos puntos blancos ms o menos grandes sobre el fondo rosa.

18. FOSFORO (B.O.E. 29-8-1979) 18.1. Principio. Transformacin de los compuestos fosforados en ortofosfatos y posterior valoracin colorimtrica con fosfomolibdovanadato. 18.2. Material y aparatos. 18.2.1. Espectrofotmetro o colormetro que permita lecturas a 430 nm. 18.2.2. Crisoles de porcelana, de 35 mm de dimetro y 45 mm de altura, sin tapadera. 18.2.3. Matraces aforados de 100 y 500 ml de capacidad. 18.2.4. Bao de agua. 18.2.5. Estufa de desecacin con sensibilidad de 1C. 18.3 Reactivos. 131020 Acido Clorhdrico 37% PA-ACS-ISO 131036 Acido Ntrico 60% PA-ISO (o 121737 Acido Ntrico 53% PA ) 131074 Agua PA-ACS 131129 Amonaco 25% (en NH3) PA 131134 Amonio Molibdato 4-hidrato PA-ACS-ISO 132352 Amonio meta-Vanadato PA-ACS 131509 Potasio di-Hidrgeno Fosfato PA-ACS-ISO 18.3.1. Amonaco 25% (en NH3) PA, densidad 0,910 g/ml.

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18.3.2. Disolucin de Amonio Molibdato al 10% (p/v). Disolver 100 g de Amonio Molibdato 4-hidrato PA-ACS-ISO en Agua PA-ACS; aadir 10 ml de Amonaco 25% (en NH3) PA, para asegurar su conservacin y completar hasta 1.000 ml con Agua PAACS. 18.3.3. Acido Ntrico 60% PA-ISO, densidad 1,38 g/ml. 18.3.4. Acido Ntrico al 10% (p/v). Disolver 16 ml de Acido Ntrico 60% PA-ISO, hasta 100 ml con Agua PA-ACS 18.3.5. Disolucin de Amonio meta-Vanadato.Disolver 2,35 g de Amonio meta-Vanadato PA-ACS en 400 ml de Agua PA-ACS y caliente. Aadir lentamente y agitando 20 ml de la disolucin que contiene 7 ml de Acido Ntrico 60% PA-ISO y 13 ml de Agua PA-ACS. 18.3.6. Reactivo Nitromolibdovanadato.- Mezclar 200 ml de la disolucin de Amonio Molibdato al 10% y 200 ml de la disolucin de Amonio meta-Vanadato, con 134 ml de Acido Ntrico 60% PA-ISO o en su lugar 192 ml de Acido Ntrico 53% PA. 18.3.7. Acido Clorhdrico 37% PA-ACS-ISO, densidad 1,19 g/ml. 18.3.8. Disolucin patrn de fsforo.- Pesar 4,394 g de Potasio di-Hidrgeno Fosfato PA-ACSISO, previamente desecado en estufa a 100C durante unas doce horas. Disolver en Agua PA-ACS y llevar a un volumen de 1.000 ml en un matraz aforado. 1 ml corresponde a 1.000 gammas de fsforo. 18.3.9. Disoluciones patrones.- Tomar 10 ml de la disolucin anterior y diluir con Agua PA-ACS hasta el enrase en un matraz aforado de 100 ml, obtenindose una concentracin de 100 gammas de fsforo por ml. Tomar partes alcuotas de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 ml y llevar a un volumen de 10 ml con Agua PA-ACS. Su concentracin ser de 5; 10; 15; 20 y 25 gammas/ml. Aadir 10 ml del reactivo Nitromolibdovanadato y proceder como se describe en el mtodo. 18.4. Procedimiento. Pesar, con una aproximacin de 0,1 mg, de 0,3 a 1,5 g de muestra en un crisol previamente calcinado y tarado. Introducir el crisol en la mufla a una temperatura inferior a 100C. Aumentar la temperatura paulatinamente hasta alcanzar los 550C; mantener esta temperatura durante 2 horas. No se debe pasar de 550C, para evitar decrepitaciones y volatilizaciones, ya que cuando existen cloruros en el producto a analizar, puedan afectar a los resultados. El tiempo que debe permanecer el crisol con la muestra en la mufla es variable y estar de acuerdo con la naturaleza y con la cantidad de la muestra. Suelen ser suficientes 2 horas, pero si transcurrido este tiempo las cenizas del crisol no presentan el color blanco grisceo deseado, sacar el crisol de la

mufla y dejar enfriar dentro de un desecador, aadiendo posteriormente unas gotas de agua o, mejor, unas gotas de agua oxigenada de 50 volmenes. Introducir el crisol en la estufa de desecacin a 100C para eliminar el agua o el agua oxigenada. Eliminada la humedad, introducir nuevamente el crisol en la mufla a 550C. Dejar transcurrir el tiempo necesario hasta que las cenizas contenidas en el crisol alcancen el color deseado. Sacar el crisol de la mufla y llevar a un desecador con sustancias desecadoras. Dejar enfriar hasta la temperatura ambiente. Obtenidas las cenizas, aadir en el crisol una cantidad de Acido Clorhdrico 37% PA-ACS-ISO (18.3.7.) hasta que las cenizas queden cubiertas. Evaporar el Acido Clorhdrico 37% PA-ACS-ISO en el bao de agua a ebullicin, hasta sequedad, en un dispositivo adecuado para la eliminacin de vapores cidos. Disolver el residuo en 3 ml de Acido Ntrico al 10% y hervir en el bao de agua durante 5 minutos, utilizando el dispositivo adecuado para la eliminacin de los vapores cidos. No se debe dejar secar el contenido para evitar la hidrlisis de los ortofosfatos que producira reacciones coloreadas. Filtrar a travs de papel, sobre un matraz aforado de 500 ml, lavando con Agua PA-ACS los crisoles donde estaban contenidas las cenizas y diluir hasta el enrase. Para desarrollar la reaccin de color, colocar, en una cubeta o tubo de espectrofotmetro o fotocolormetro, 10 ml de la disolucin problema y aadir 10 ml del reactivo Nitromolibdovanadato. Agitar, dejar reposar durante diez minutos. Efectuar la lectura espectrofotomtrica o fotocolorimtrica a 430 nm, utilizando como blanco la mezcla de 10 ml de Agua PA-ACS y 10 ml de reactivo Nitromolibdovanadato. La coloracin amarilla desarrollada es estable durante varios das. 18.5. Clculo. Leer en el espectrofotmetro o fotocolormetro y buscar su correspondencia en fsforo en la curva patrn. F 0,005 Fsforo (%) = P Siendo: F = concentracin de fsforo, en gramos, encontrada en la curva patrn/10 ml de disolucin. P = peso, en gramos, de la muestra empleada. 18.6. Referencia. 18.6.1. Instituto de Racionalizacin y Normalizacin del Trabajo. Una Norma Espaola UNE 64017.

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19. DETECCION Y CUANTIFICACION DE HARINAS DE TRIGO COMUN (TRITICUM VULGARE) EN SEMOLAS Y PASTAS ALIMENTICIAS 19.1. Principio. El mtodo se basa en la deteccin y cuantificacin de un componente designado CM1, del extracto cloroformo-alcohol metlico del endospermo de trigo o de productos derivados de l, cuyo control gentico radica en el cromosoma 1D de Triticum Vulgare y que por tanto no se encuentra en T. Durum. El mencionado extracto, al que se designa protena CM, se fracciona por electroforesis sobre gel de almidn, y el componente CM1 se estima visualmente o se cuantifica densitomtricamente. 19.2. Material y aparatos. 19.2.1. Balanza analtica. 19.2.2. Equipo de electroforesis.- Fuente de tensin, corriente continua 0-500 v, -100 mA. Placas de vidrio de 20 x 20 cm, marcos de plstico de 20 x 20 cm exterior, de 18 x 18 cm interior y de 3 mm de espesor. Depsitos de electrodos de 20 x 10 x 10 cm. 19.2.3. Densitmetro de reflexin, en el caso de que se quiera cuantificar. 19.2.4. Tubos de 8 x 50 mm o similar, con tapones de corcho. 19.2.5. Gradilla. 19.2.6. Dos placas de 5 x 7 x 1 cm o dimensiones similares de acero inoxidable. 19.2.7. Jeringa de vidrio de 1 ml de capacidad. 19.2.8. Capilares de 10 cm de largo. 19.2.9. Placa de porcelana con pocillos. 19.2.10. Probetas de 100 ml y de 1.000 ml. 19.2.11. Vasos de 500 ml y de 1.000 ml. 19.2.12. Bao de agua con termmetro. 19.2.13. Cubeta de al menos 25 x 25 x 5 cm de plstico. 19.3. Reactivos. 131008 Acido Actico glacial PA-ACS-ISO 131034 Acido L(+)-Lctico 85% PA-ACS 131074 Agua PA-ACS Etanol 70% (o preparar con 121085 Etanol 96% v/v PA) 131091 Metanol PA-ACS-ISO Almidn hidrolizado para electroforesis Connauglit o similar Aluminio Lactato 131252 Triclorometano estabilizado con etanol PA-ACS-ISO 132770 Eter Dietlico estabilizado con ~6 ppm de BHT PA-ACS-ISO Nigrosina soluble 131754 Urea PA-ACS Papel Albet nmero 502 Papel Filtro 19.3.1. Triclorometano estabilizado con etanol PA-ACS-ISO. 19.3.2. Metanol PA-ACS-ISO. 19.3.3. Eter Etlico libre de perxidos. Usar Eter Dietlico estabilizado con ~6 ppm de BHT PA-ACS-ISO. 19.3.4. Etanol 70%. En su defecto diluir Etanol 96% v/v PA en Agua PA-ACS ajustando a la concentracin indicada. 19.3.5. Papel Albet nmero 502 o similar, y papel de filtro. 19.3.6. Almidn hidrolizado para electroforesis Connauglit o similar. 19.3.7. Tampn Aluminio Lactato-Acido Lctico 0,1N, pH 3,2 en Urea 3 M.- Diluir 4,9 g de Aluminio Lactato en Agua PA-ACS, aadir 10,6 ml de Acido L(+)-Lctico 85% PA-ACS y 180 g de Urea PA-ACS, completando hasta 1 litro con Agua PA-ACS. Este tampn sirve para el Gel de Almidn como para los compartimentos de los electrodos. 19.3.8. Solucin de Nigrosina soluble en agua al 0,5% en Acido Actico glacial PA-ACS-ISO - Agua PA-ACS (1/1) (v/v). 19.3.9. Gel de Almidn.- Mezclar 24,5 g de Almidn y 180 ml de tampn en un vaso de 500 ml, agitar suavemente con una varilla en bao de agua a 80 3C hasta que gelifique (2-3 minutos). El gel caliente se vierte sobre una placa de vidrio a la que se ha superpuesto un marco de plstico de las mismas dimensiones externas que la placa y de 3 mm de espesor, extender uniformemente con la varilla y, finalmente, prensar suavemente con una placa de vidrio de las mismas dimensiones sin dejar burbujas. Dejar reposar durante al menos 3 horas. 19.4. Procedimiento. 19.4.1. Extraccin y preparacin para electroforesis de la protena CM.- Pesar 50 mg de harina, smola, grano o pasta alimenticia y transferirlos a un tubo de 8 x 50 mm o similar. El grano y la pasta se aplastan por presin entre dos placas de acero inoxidable antes de ser transferidas al tubo. Aadir aproximadamente 0,5 ml de Eter Dietlico estabilizado con ~6 ppm de BHT PA-ACS-ISO en cada tubo y dejar reposar durante no menos de 30 minutos, agitando ocasionalmente. Despus de la ltima agitacin se deja sedimentar por gravedad y el sobrenadante se elimina con la ayuda de una jeringa. El disolvente residual se deja evaporar a la temperatura ambiente o en una estufa a 35C durante 10 minutos. Agregar aproximadamente 0,25 ml de Triclorometano estabilizado con etanol PA-ACS-ISO - Metanol PA-ACSISO (2/1) (v/v) a cada tubo, tapar y dejar reposar durante 2 horas, agitando ocasionalmente. Despus de la ltima agitacin, dejar sedimentar por gravedad y transferir el extracto sobrenadante

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con un capilar a una pieza de papel Albet nmero 502 o similar, de dimensiones 3 x 10 mm. Con el capilar se satura el papel, que se deja evaporar antes de una nueva adicin (ver 19.6.4.), repitiendo la operacin hasta agotar el sobrenadante. Para esta operacin, las piezas de papel a las que se van a transferir las distintas muestras se depositan en distintos pocillos de una placa de porcelana o similar. Se recomienda realizar la transferencia entre 10 y 20 muestras simultneamente. 19.4.2. Electroforesis sobre Gel de Almidn de la protena CM.- Separar cuidadosamente una de las placas de vidrio con la ayuda de una esptula y recubrir la superficie expuesta del gel con un plstico fino. Marcar en dicha superficie una fila de ranuras (1 cm de largo cada una) a 3 cm de uno de los bordes del gel. Alojar en dicha ranura las piezas de papel Albet nmero 502 o similar que portan las muestras, previamente impregnadas con tampn. Disponer el gel horizontalmente apoyado sobre las cubetas de electrodos y establecer la conexin elctrica mediante puentes de papel de filtro (20 papeles de dimensiones apropiadas superpuestos). 19.5. Interpretacin de resultados. 19.5.1. Deteccin de trigo exaploide.- La electroforesis del extracto CM de trigo exaploide (T. Vulgare) muestra tres bandas, designadas CM1, CM2 y CM3, mientras que la de trigo tetraploide (T. durum) slo presenta dos CM2 y CM3. El trigo exaploide se detecta en una mezcla por la aparicin de CM1 en el perfil electrofortico. Para el tamao de muestra anteriormente propuesto, CM1 se detecta en mezcla de 10-15%. Usando muestras de tamao doble, el umbral de deteccin se reduce proporcionalmente. 19.5.2. Cuantificacin de trigo exaploide en mezclas.- La acotacin del porcentaje de T. Vulgare en

una mezcla se basa en la cuantificacin de la relacin CM1, CM2 y en la estimacin de la variabilidad intraespecfica de CM1 y CM2. En la figura 1-A se presenta la forma de acotar grficamente el porcentaje de trigo exaploide en mezclas basndose en la medida de la relacin CM1, CM2 mediante densintometra de reflectancia con luz de 620 mm. En la figura 1-B se representa la variacin de la amplitud de la acotacin segn el valor obtenido. Una estimacin semicuantitativa, ms imprecisa que la anterior, puede obtenerse por comparacin visual del problema con una serie de mezclas conocidas que pueden incorporarse al mismo gel. 19.6. Observaciones. 19.6.1. Las condiciones de electroforesis son 10 V/cm durante seis horas. 19.6.2. La tincin se realiza con nigrosina al 0,05% en cido actico glacial.- Agua destilada (1/1) (v/v) durante 14-16 horas en una cubeta de plstico de dimensiones apropiadas, dejando el gel con la cara opuesta a la de insercin hacia arriba. 19.6.3. La decoloracin del fondo se realiza en pocos minutos con alcohol etlico al 70%. 19.6.4. Cuando se manejan 10-20 muestras, despus de una transferencia se devuelve el capilar al tubo y se pasa a la muestra siguiente. Cuando se llega a la muestra final, ya se ha evaporado la primera y est en condiciones de una nueva transferencia. 19.7. Referencia. 19.7.1. R. Garca Faure y F. Garca Olmedo: A New Method for the Estimation of Common Wheat in Pasta Products. Lebensm. Wis. U. Technol. Vol. 2. 1969.

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Figura 1-A

Figura 1-B

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20. DETECCION DE HARINAS DEGRAGADAS POR EL ATAQUE DE PENTATOMIDOS 20.1. Principio. Se detecta la degradacin de la calidad panadera de la masa de harina mediante la determinacin del exceso de actividad proteoltica. 20.2. Material y aparatos. Como en 14.2. 20.3. Reactivos. Como en 14.3. 20.4. Procedimiento. Como en 14.4. con las siguientes modificaciones. 20.4.1. El nmero de piezas de masa sern seis. 20.4.2. Transcurrido el tiempo normal de 26 minutos del comienzo de amasado, extraer tres piezas de la cmara del alvegrafo y analizarlas, obteniendo sus correspondientes curvas. El resto de las piezas se analizan sobre el mismo papel despus de un perodo de reposo de tres horas. Si alguno de los alveolos o curvas fuera claramente anormal, debe desecharse la curva. 20.5. Expresin de los resultados. Si existe una actividad proteoltica excesiva, la segunda serie de curvas presentar menor extensibilidad y tenacidad, siendo mayor la diferencia entre ellas, a mayor actividad. Cuantificar esta actividad calculando la degradacin de W y G en la forma siguiente. Calcular los valores de estos ndices por separado para la primera serie de curvas (con tiempo de reposo normal) Wo y Go para la segunda (con tiempo de reposo de tres horas) W1 y G1 W0 - W1 % de degradacin de W = 100 W0 G0 -G1 % de degradacin de G = 100 G0 20.6. Referencias. 20.6.1. Harinas. Actividad proteoltica. H-80277A. Ministerio del Aire.

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Cereales en copos o expandidos

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METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 20-1-1988) 1. PREPARACION DE LA MUESTRA 1.1. Principio. Homogeneizacin y reduccin de la muestra al tamao adecuado para la correcta realizacin del anlisis. 1.2. Material y aparatos. 1.2.1. Aparato triturador que no provoque calentamiento, fcil de limpiar, y que proporcione un tamao de partculas comprendido entre 800 y 1.200 . 1.2.2. Envases de capacidad suficiente, con cierre hermtico, para conservar la muestra. 1.3. Procedimiento. 1.3.1. Muestra contenida en un solo envase: Homogeneizar la muestra. Tomar un mnimo de 200 g y triturarlo en el aparato descrito en 1.2.1. y volver a homogeneizar. 1.3.2. Muestra contenida en varios envases.Homogeneizar la porcin de muestra contenida en cada envase, tomar de cada uno cantidades iguales para obtener finalmente un mnimo de 200 g de muestra. Triturar en el aparato descrito en 1.2.1. y volver a homogeneizar. 1.4. Observaciones. Preparada la muestra, sta servir de base a todas las determinaciones, salvo mencin expresa en contra, procurando realizar la preparacin de los anlisis en el menor tiempo posible. La eficacia de la ventilacin se determinar con la ayuda de smola como material de ensayo, que tenga un milmetro como mximo de partcula. La ventilacin ser tal que, secando simultneamente a 130C todas las muestras que la estufa pueda contener, primero durante dos horas y despus durante tres horas, los resultados presenten entre ellos una diferencia inferior a 0,15 por 100 en valor absoluto. 2.2.4. Desecador provisto de un deshidratante eficaz. 2.3. Procedimiento. Pesar con precisin de 1 mg, aproximadamente 5 g de muestra en pesasustancias, previamente preparada segn mtodo nmero 1. Introducir el pesasustancias en la estufa (2.2.3.) a 130C 1C y destapar. Mantener en la estufa durante una hora y treinta minutos. Tapar el pesasustancias antes de sacar de la estufa y dejar enfriar a temperatura ambiente en desecador y pesar a continuacin. 2.4. Clculos. La humedad de la muestra expresada en tanto por ciento vendr dada por la siguiente frmula: (P1 - P2) 100 H % = P Siendo: P1 = Peso, en g, del pesasustancias con la muestra. P2 = Peso, en g, del pesasustancias con la muestra desecada. P = Peso, en g, de la muestra. La diferencia resultante entre determinaciones duplicadas de la misma muestra no deber ser mayor de 0,1% en valor absoluto. 2.5. Referencias. 2.5.1. Mtodos de la Asociacin Internacional de Qumica Cerealista (I.C.C.). 2.5.2. AOAC, M. 14.003 1980.

2. HUMEDAD 2.1. Principio. Se determina la prdida de peso de la muestra al someterla a calentamiento en estufa en condiciones determinadas. 2.2. Material y aparatos. 2.2.1. Balanza analtica con precisin de 0,1 mg. 2.2.2. Pesasustancias metlico o de vidrio con tapadera y con una superficie til que permita un reparto de la muestra de 0,3 g/cm2 como mximo. 2.2.3. Estufa isoterma de calefaccin elctrica, a ser posible de aire forzado, regulada de tal manera que la temperatura del aire en su interior sea de 130C y que tenga aireacin suficiente. La estufa tendr una capacidad calorfica tal que, regulada previamente a la temperatura de 130C, pueda alcanzar de nuevo esa temperatura en menos de media hora, despus de colocar simultneamente en su interior el nmero mximo de muestras a desecar.

3. CENIZAS 3.1. Principio. 3.1.1. Definicin. Residuo obtenido por incineracin a una temperatura de 550 10C hasta combustin completa de la materia orgnica y obtencin de un peso constante. 3.2. Material y aparatos. 3.2.1. Crisoles no atacables en las condiciones del ensayo, con unas dimensiones mnimas de 40 mm de altura y 45 mm de dimetro superior.

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3.2.2. Placa calefactora. 3.2.3. Horno elctrico (mufla) con dispositivo de control de temperatura. 3.2.4. Desecador capaz de contener un deshidratante eficaz, como 141219 Calcio Cloruro anhidro, escoriforme PRS, 141154 di-Fsforo pentaOxido PRS o 211335 Gel de Slice 3-6 mm con indicador QP. 3.3. Procedimiento. Pesar con precisin de 1 mg de 2 a 6 g de muestra preparada segn el mtodo oficial nmero 1, en un crisol previamente incinerado y tarado. Colocar el crisol y su contenido sobre una placa calefactora, teniendo cuidado de que la combustin no sea demasiado rpida, de manera que no haya prdidas de materia slida por proyeccin. Llevar a continuacin el crisol a la mufla (550 10C) hasta combustin completa de la sustancia (cenizas blancas o grises). Enfriar a temperatura ambiente en un desecador. Pesar seguidamente. 3.4. Clculos. 3.4.1. El contenido en cenizas sobre sustancia natural vendr dado por la siguiente frmula: P1 - P2 % cenizas = x 100 P Siendo: P1 = Peso, en gramos, del crisol con las cenizas. P2 = Peso, en gramos, del crisol vaco. P = Peso, en gramos, de la muestra. 3.4.2. El contenido en cenizas sobre sustancia seca vendr dado por la siguiente frmula: C x 100 % cenizas = 100 - H Siendo: C = % de cenizas obtenidas en (3.4.1.). H = Humedad. En ambos casos los resultados se darn considerando solamente la primera cifra decimal. 3.5. Observaciones. 3.5.1. En caso necesario, para obtener una incineracin uniforme puede humedecerse la muestra antes de la preincineracin con etanol del 95 por 100 o aceite vegetal exento de cenizas. 3.5.2. Si la muestra a analizar contiene cloruros aadidos, deducir del valor de cenizas obtenido por el procedimiento anterior el porcentaje correspondiente de los mismos.

3.5.3. Lmite de errores. Cuando el contenido de cenizas no rebase el 1 por 100 de la muestra, la diferencia de los resultados de un ensayo efectuado por duplicado no deber ser superior al 0,02 por 100. Si el contenido de cenizas rebasa el 1 por 100 la diferencia no deber ser superior al 2 por 100 de dicho contenido. Si es superior se repetir la determinacin. 3.6. Referencias. 3.6.1. AOAC, edicin 1980, 14.006.

4. GRASA 4.1. Principio. El producto es hidrolizado con cido clorhdrico diluido. De la masa seca resultante, las materias grasas son extradas con ter, el solvente evaporado y el residuo pesado. 4.2. Reactivos. 131019 Acido Clorhdrico 35% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 132770 Eter Dietlico estabilizado con ~6 ppm de BHT PA-ACS-ISO 211835 Piedra Pmez grnulos QP 131459 Plata Nitrato PA-ACS-ISO 4.2.1. Acido Clorhdrico 3N. Diluir Acido Clorhdrico 35% PA-ISO en Agua PA-ACS, hasta la concentracin indicada. 4.2.2. Eter Dietlico estabilizado con ~6 ppm de BHT PA-ACS-ISO, exento de perxidos. 4.2.3. Solucin de Plata Nitrato. Disolver unos gramos de Plata Nitrato PA-ACS-ISO en 1.000 ml de Agua PA-ACS. 4.3. Material y aparatos. 4.3.1. Extractor tipo Soxhlet. 4.3.2. Estufa de desecacin capaz de mantener constante la temperatura de 100C 1C. 4.3.3. Desecador provisto de un deshidratante eficaz. 4.4. Procedimiento. Pesar, con precisin de 1 mg, aproximadamente 10 g de muestra preparada segn el mtodo oficial (apartado 1) en un matraz de 250 a 300 ml. Agitando continuamente aadir 100 ml de Acido Clorhdrico 3N (4.2.1.), aadir unas perlas de vidrio o Piedra Pmez grnulos QP lavada y seca y cerrar con tapn de vidrio que no ajuste hermticamente o vidrio de reloj. Hervir unos sesenta minutos, agitando de vez en cuando, enfriar y filtrar sobre filtro previamente humedecido. Lavar el precipitado con Agua PA-ACS hasta que el filtrado no d precipitado con Plata Nitrato o no d reaccin cida de Papel de Tornasol. Poner el filtro en una cpsula y secar en estufa a 100C 1C.

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El filtro ya seco se introduce en un cartucho para extractor tipo Soxhlet y se tapa con algodn desengrasado. El cartucho se coloca en el extractor y se vierte el Eter Dietlico estabilizado con ~6 ppm de BHT PA-ACS-ISO, dejndolo sifonar unas ocho horas. El matraz receptor debe estar secado y tarado. Evaporar el solvente, secar en estufa y pesar. 4.5. Clculos. 4.5.1. El contenido de grasa en sustancia natural vendr dado por la siguiente frmula: P1 - P2 % grasas = x 100 P Siendo: P1 = Peso, en gramos, del matraz con la grasa. P2 = Peso, en gramos, del matraz vaco. P = Peso, en gramos, de la muestra. 4.5.2. El contenido de grasas en sustancia seca vendr dado por la siguiente frmula: G x 100 % grasas = 100 - H siendo: G = Porcentaje de grasa obtenida en 4.5.1. H = Humedad. 4.6. Observaciones. 4.6.1. Para efectuar el procedimiento anterior podrn utilizarse sistemas automticos o semiautomticos, adaptndose a las especificaciones del equipo. 4.7. Referencias. 4.7.1. AOAC, edicin 1980, 14.059. 251170 121085 171327 131532 171617 141625 131687 131716 Azul de Metileno (C.I. 52015) DC Etanol 96% v/v PA Fenolftalena solucin 1% RE Potasio Sulfato PA-ACS-ISO Rojo de Metilo (C.I. 13020) RE-ACS Selenio metal polvo PRS Sodio Hidrxido lentejas PA-ACS-ISO Sodio Sulfato anhidro PA-ACS-ISO

5.2.1. Acido Sulfrico 96% PA-ISO libre de nitrgeno. 5.2.2. Sodio Hidrxido al 40%. Diluir Sodio Hidrxido lentejas PA-ACS-ISO con Agua PA-ACS hasta la concentracin indicada. 5.2.3. Catalizador. (Mezclar 5 g de Sodio Sulfato anhidro PA-ACS-ISO o Potasio Sulfato PA-ACS-ISO con 5 mg de Selenio metal polvo PRS). Tambin puede utilizarse otro catalizador adecuado. 5.2.4. Indicador de Fenolftalena solucin 1% RE. 5.2.5. Indicador Taschiro. Mezclar 20 mg de Rojo de Metilo (C.I. 13020) RE-ACS y 10 mg de Azul de Metileno (C.I. 52015) DC en 100 ml de Etanol 96% v/v PA. Tambin puede utilizarse Rojo de Metilo (C.I. 13020) RE-ACS preparado en la proporcin de 0,5% en Etanol 96% v/v PA. 5.2.6. Acido Brico solucin 4% RE. 5.2.7. Acido Sulfrico 0,05 mol/l (0,1N) SV o Acido Clorhdrico 0,1 mol/l (0,1N) SV. 5.3. Material y aparatos. 5.3.1. Para digestin. 5.3.1.1. Matraces tipo Kjeldahl o similar. 5.3.1.2. Batera de mantas elctricas o similar. 5.3.2. Para destilacin. 5.3.2.1. Matraz generador de vapor. 5.3.2.2. Refrigerante. 5.3.2.3. Matraz receptor. 5.3.3. Titulacin. 5.3.3.1. Bureta de vidrio o bureta automtica. 5.4. Procedimiento. Pesar, con la precisin de 1 mg, aproximadamente 0,5-2,5 g de muestra, preparada segn el mtodo oficial nmero 1, introducirla en el matraz Kjeldahl (5.3.1.1.). Aadir unos 5 g del catalizador (5.2.3.), 20 ml de Acido Sulfrico 96% PA-ISO (la cantidad vara segn contenido en protenas y grasa de la muestra). Poner a digerir en 5.3.1.2., teniendo cuidado al principio de no elevar demasiado la temperatura hasta que cese el desprendimiento de la espuma (aadir si fuera preciso una pequea cantidad de parafina). Digerir hasta que la solucin est clara. Enfriar, diluir, aadir unas gotas de Fenolftalena solucin 1% RE y conectar el aparato destilador aadiendo Sodio Hidrxido al 40% (5.2.2.) hasta viraje. En el matraz receptor poner 100 ml de Acido Brico solucin 4% RE con unas gotas de indicador (5.2.5.), cuidando que el extremo del refrigerante quede bien cubierto del lquido.

5. PROTEINAS 5.1. Principio. Determinacin del nitrgeno, convirtiendo el nitrgeno orgnico presente en amonio sulfato con cido sulfrico. Despus de alcalinizar con sodio hidrxido, destilar recogiendo el destilado sobre cido brico, titulando el amonaco recogido con cido N/10. 5.2. Reactivos 172222 Acido Brico solucin 4% RE 181023 Acido Clorhdrico 0,1 mol/l (0,1N) SV 131058 Acido Sulfrico 96% PA-ISO 181061 Acido Sulfrico 0,05 mol/l (0,1N) SV 131074 Agua PA-ACS

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Mantener la destilacin aproximadamente 15 minutos (o ms, si es preciso, hasta que no d reaccin bsica); lavar el extremo del refrigerante y titular el destilado con Acido Sulfrico 0,05 mol/l (0,1N) SV o Acido Clorhdrico 0,1 mol/l (0,1N) SV. Hacer un blanco. 5.5. Clculos. 5.5.1. El contenido de protenas en materia natural vendr dado por la siguiente frmula: 0,14 x 6,25 (V1 - V0 ) % protenas = P Siendo: V1 = Volumen, en ml, de cido clorhdrico 0,1N o cido sulfrico 0,1N utilizado en la determinacin. V0 = Volumen, en ml, de cido clorhdrico 0,1N o cido sulfrico 0,1N utilizado en blanco. P = Peso, en gramos, de la muestra. 5.5.2. El contenido en protenas en materia seca vendr dado por la siguiente frmula: p x 100 % protena = 100 - H Siendo: p = % protena obtenida en 5.5.1. H = Humedad. 5.6. Observaciones. 5.6.1. La diferencia entre dos determinaciones sucesivas expresada en % de protenas no debe ser superior al 0,25 %. 5.6.2. Para efectuar el procedimiento Kjeldahl podrn utilizarse sistemas automticos o semiautomticos, adaptndose a las especificaciones del equipo. 5.7. Referencias. 5.7.1. AOAC (1980) 2.057. 5.7.2. Pearson, 5 edicin (1962).

6.2. Material. 6.2.1. Bao termostatizado y refrigerante de reflujo. 6.2.2. Filtros de vidrio filtrado del nmero 2. 6.2.3. Sistemas de filtracin por succin a vaco. 6.2.4. Desecador. 6.2.5. Estufa para 37C y 110C. 6.2.6. Horno elctrico (mufla) con dispositivo de control de temperatura. 6.2.7. Balanza de precisin. 6.3. Reactivos. 131007 Acetona PA-ACS-ISO 131669 Acido Etilendiaminotetraactico Sal Disdica 2-hidrato PA-ACS-ISO 131032 Acido orto-Fosfrico 85% PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS -Amilasa tipo VI-A 161805 Decahidronaftaleno, mezcla de ismeros PS 141317 Eter mono-Etlico del Etilenglicol PRS 131644 di-Sodio tetra-Borato 10-hidrato PA-ACS-ISO 122363 Sodio Dodecilo Sulfato PA Sodio di-Hidrgeno Fosfato anhidro 131679 di-Sodio Hidrgeno Fosfato anhidro PA-ACS 131717 Sodio Sulfito anhidro PA-ACS 6.3.1. Sodio Dodecilo Sulfato PA. 6.3.2. Acido Etilendiaminotetraactico Sal Disdica 2-hidrato PA-ACS-ISO. 6.3.3. di-Sodio tetra-Borato 10-hidrato PA-ACSISO. 6.3.4. Eter mono-Etlico del Etilenglicol PRS. 6.3.5. Decahidronaftaleno, mezcla de ismeros PS. 6.3.6. Sodio Sulfito anhidro PA-ACS. 6.3.7. di-Sodio Hidrgeno Fosfato anhidro PAACS. 6.3.8. di-Sodio tetra-Borato 10-hidrato PA-ACSISO 6.3.9. Acetona PA-ACS-ISO. 6.3.10. -Amilasa tipo VI-A (sigma A-6880 o equivalente). 6.3.11. Acido orto-Fosfrico 85% PA-ACS-ISO. 6.3.12. Solucin de detergente neutro: Mezclar 18,61 gramos de Acido Etilendiaminotetraactico Sal Disdica 2-hidrato PA-ACS-ISO y 6,81 gramos de di-Sodio tetra-Borato 10-hidrato PA-ACS-ISO con 150 ml de Agua PA-ACS y calentar hasta su disolucin. Disolver 30 g de Sodio Dodecilo Sulfato PA y 10 ml de Eter mono-Etlico del Etilenglicol PRS en 700 ml de Agua PA-ACS caliente y mezclar con la solucin anterior. Disolver 4,56 g de di-Sodio Hidrgeno Fosfato anhidro PA-ACS en 150 ml de Agua PA-ACS y mezclar con las soluciones anteriores. Ajustar a pH 6,9-7 con Acido orto-Fosfrico 85% PA-ACS-ISO, si fuera necesario.

6. FIBRA ALIMENTARIA INSOLUBLE 6.1. Principio. La muestra se extrae con una solucin de detergente neutro en caliente. El residuo se incuba con una solucin amilsica y se filtra. La determinacin de las cenizas en el residuo filtrado permite conocer, por diferencia de peso, la cantidad de celulosa, hemicelulosa y lignina de la muestra.

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M
6.3.13. Solucin tampn 0,1N: Mezclar 39,2 ml de Sodio di-Hidrgeno Fosfato anhidro 0,1 M (preparado disolviendo 13,6 g en 1 litro de Agua PAACS) con 60,8 ml de Sodio Fosfato di-Bsico 0,1M (preparado disolviendo 14,2 g en 1 litro de Agua PAACS). 6.4. Procedimiento. Pesar, con precisin de 1 mg, aproximadamente 1 g de muestra preparada segn mtodo 1. Agregar ordenadamente 100 ml de solucin de detergente neutro, 2 ml de Decahidronaftaleno, mezcla de ismeros PS y 0,5 g de Sodio Sulfito anhidro PAACS (6.3.6.). Calentar hasta ebullicin y mantener a reflujo durante una hora. Filtrar a travs de filtro de vidrio fritado del nmero 2 (previamente calcinado a 550C) conectado a un sistema de succin por vaco. Lavar sucesivamente con unos 300 ml de Agua PA-ACS hirviendo. Aadir hasta sobrepasar el nivel del residuo, una solucin al 2,5% de amilasa en tampn Fosfato 0,1N. Incubar a 37C durante 18 horas, aproximadamente. Filtrar la solucin enzimtica por succin a travs de un sistema de vaco y lavar el residuo con unos 80 ml de Acetona PA-ACS-ISO. Secar el filtro con el residuo a 110C durante 8 horas, como mnimo. Enfriar en desecador y pesar. Mantener el filtro con el residuo en mufla a 550C durante tres horas. Enfriar y pesar. 6.5. Clculos. El contenido en fibra alimentaria insoluble expresado en % vendr dado por la siguiente frmula: P1 - P2 x 100 % fibra alimentaria insoluble = P0 Siendo: P0 = Peso en mg de la muestra. P1 = Peso en mg de crisol + residuo desecado a 110C. P2 = Peso en mg de crisol + residuo calcinado. 6.6. Observaciones. 6.6.1. Las muestras conteniendo ms de un 10% de materia grasa debern desengrasarse previamente. 6.6.2. Para utilizar el procedimiento anterior podrn utilizarse sistemas automticos o semiautomticos adaptndose a las especificaciones del equipo. 6.7. Referencias. 6.7.1. Mtodo AACC, 32-20 (1979). 7. FIBRA BRUTA 7.1. Principio. Tratar la muestra, desengrasada si es necesario, con soluciones de cido sulfrico y potasio hidrxido de concentraciones conocidas. Separar el residuo por filtracin, lavar, desecar y pesar el residuo insoluble, determinando posteriormente su prdida de masa por calcinacin a 550C. 7.2. Material y aparatos. 7.2.1. Material de vidrio de uso corriente en laboratorio. 7.2.2. Crisol filtrante nmero 2. 7.2.3. Horno de mufla con termostato. 7.2.4. Desecador provisto de un deshidratante eficaz. 7.2.5. Estufa capaz de mantener constante la temperatura de 130 1C. 7.2.6. Equipo filtrante. 7.3. Reactivos. 131007 Acetona PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 132770 Eter Dietlico estabilizado con ~6 ppm de BHT PA-ACS-ISO 121515 Potasio Hidrxido 85% lentejas PA 151628 Silicona lquida antiespumante PR 7.3.1. Acido Sulfrico 0,26 N. Disolver 1,25 g de Acido Sulfrico 96% PA-ISO en 100 ml de Agua PAACS. 7.3.2. Silicona lquida antiespumante PR. 7.3.3. Potasio Hidrxido solucin 0,23N: Disolver 1,52 g de Potasio Hidrxido 85% lentejas PA en 100 ml de Agua PA-ACS. 7.3.4. Acetona PA-ACS-ISO. 7.3.5. Eter Dietlico estabilizado con ~6 ppm de BHT PA-ACS-ISO. 7.4. Procedimiento. Pesar, con precisin de 1 mg, de 1 a 3 g de muestra y aadir 200 ml de Acido Sulfrico 0,26 N y unas gotas de Silicona lquida antiespumante. Llevar a ebullicin y mantenerla durante treinta minutos en un sistema de refrigeracin a reflujo. Transcurridos los treinta minutos filtrar sobre el crisol (7.2.2.), previamente incinerado y lavar el residuo con Agua PA-ACS caliente hasta que no d reaccin cida. Transferir cuantitativamente el residuo a un matraz adaptable al sistema de reflujo, aadir 200 ml de solucin de Potasio Hidrxido 0,23N y unas gotas de antiespumante. Llevar a ebullicin y dejar hervir durante treinta minutos. Filtrar sobre el crisol filtrante y lavar con Agua PA-ACS caliente hasta que no d reaccin alcalina. Deshidratar lavando tres veces con Acetona PA-ACS-ISO usando un volumen total de unos 100 ml.

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Llevar el crisol a la estufa y secarlo a 130C durante dos horas. Dejar enfriar en desecador y pesar rpido. Introducir a continuacin el crisol en el horno (7.2.3.) y dejar calcinar durante tres horas como mnimo a 550C. Dejar enfriar en desecador y pesar rpidamente. 7.5. Clculos. 100 P1 - P2 Fibra bruta (%) = P0 Siendo: P0 = Peso inicial de la muestra. P1 = Peso del crisol conteniendo la muestra desecada. P2 = Peso del crisol conteniendo la muestra calcinada. 7.6. Observaciones. 7.6.1. Las muestras conteniendo ms de un 10% de materia grasa deben desengrasarse con ter etlico antes del anlisis. 7.6.2. Para efectuar el procedimiento anterior podrn utilizarse sistemas automticos o semiautomticos, adaptndose a las especificaciones del equipo. 7.7. Referencias. 7.7.1. Journal Officiel des Communauts Europenes, nmero L 83/24, 1973.

121428 131079 211835 131505 131542 172174 171618 131648 181694 181723 131775

Mercurio II Yoduro rojo PA 3-Metil-1-Butanol PA-ACS Piedra Pmez grnulos QP Potasio Hexacianoferrato II 3-hidrato PA-ACS Potasio Yoduro PA-ISO Reactivo de Luff-Schoorl RE Rojo de Metilo solucin 0,1% RE Sodio Carbonato anhidro PA-ACS-ISO Sodio Hidrxido 0,1 mol/l (0,1N) indicador Fenolftalena SV Sodio Tiosulfato 0,1 mol/l (0,1N) SV Zinc Acetato 2-hidrato PA-ACS

8. AZUCARES 8.1. Principio. Eliminacin de todas las materias reductoras distintas de los azcares, mediante defecacin a partir de las soluciones Carrez I, II, previa disolucin de los azcares en etanol diluido. Eliminacin del etanol y valoracin antes y despus de la inversin segn el mtodo de Luff-Schoorl. 8.2. Material y aparatos. 8.2.1. Agitador mecnico. 8.2.2. Matraces aforados de 1.000; 300; 200; 100 y 50 ml. 8.3. Reactivos. 131008 Acido Actico glacial PA-ACS-ISO 131018 Acido Ctrico 1-hidrato PA-ACS-ISO 131019 Acido Clorhdrico 35% PA-ISO 181023 Acido Clorhdrico 0,1mol/l (0,1N) SV 131058 Acido Sulfrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 171096 Almidn soluble RE 131270 Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO 121085 Etanol 96% v/v PA

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8.3.1. Etanol 40% (v/v) d= 0,948 a 20C. Diluir Etanol 96% v/v PA con Agua PA-ACS hasta la concentracin indicada. 8.3.2. Solucin de Carrez I. Disolver en Agua PAACS 24 g de Zinc Acetato 2-hidrato PA-ACS y 3 ml de Acido Actico glacial PA-ACS-ISO y aadir Agua PA-ACS hasta 100 ml. 8.3.3. Solucin de Carrez II. Disolver en Agua PA-ACS 10,6 g de Potasio Hexacianoferrato II 3hidrato PA-ACS K4(FeCN6).3H2O y aadir Agua PAACS hasta 100 ml. 8.3.4. Rojo de Metilo solucin 0,1% RE. 8.3.5. Acido Clorhdrico 4N. Diluir Acido Clorhdrico 35% PA-ISO con Agua PA-ACS hasta la concentracin indicada. 8.3.6. Acido Clorhdrico 0,1mol/l (0,1N) SV. 8.3.7. Sodio Hidrxido 0,1 mol/l (0,1N) indicador Fenolftalena SV. 8.3.8. Solucin de Cobre Sulfato. Disolver 25 g de Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO CuSO4.5H2O, exento de hierro, en Agua PA-ACS y enrasar a 100 ml. 8.3.9. Solucin de Acido Ctrico. Disolver 50 g de Acido Ctrico 1-hidrato PA-ACS-ISO C6H8O7.H2O en 50 ml de Agua PA-ACS. 8.3.10. Solucin de Sodio Carbonato. Disolver 143,8 g de Sodio Carbonato anhidro PA-ACS-ISO en unos 300 ml de Agua PA-ACS caliente, dejar enfriar y completar a 300 ml. 8.3.11. Solucin de Sodio Tiosulfato 0,1 mol/l (0,1N) SV. 8.3.12. Solucin de Almidn. Aadir una mezcla de 5 g de Almidn soluble RE en 30 ml de Agua PAACS a 1 l de Agua PA-ACS hirviendo. Dejar hervir durante 3 minutos. Dejar enfriar. Aadir 10 mg de Mercurio II Yoduro rojo PA como agente conservador. 8.3.13. Acido Sulfrico 6N. Diluir Acido Sulfrico 96% PA-ISO con Agua PA-ACS hasta concentracin indicada. 8.3.14. Solucin de Potasio Yoduro 30% (p/v). Disolver Potasio Yoduro PA-ISO con Agua PA-ACS hasta concentracin indicada. 8.3.15. Piedra Pmez grnulos QP, lavado con

M
Acido Clorhdrico 35% PA-ISO y aclarada con Agua PA-ACS. 8.3.16. 3-Metil-1-Butanol PA-ACS. 8.3.17. Reactivo de Luff-Schoorl RE o bien prepararlo de la siguiente forma: verter agitando cuidadosamente la solucin de Acido Ctrico (8.3.9.) en la solucin de Sodio Carbonato (8.3.10.). Agitar hasta la desaparicin del desprendimiento gaseoso. A continuacin aadir la solucin de Cobre Sulfato (8.3.8.) y completar hasta 1 l con Agua PAACS. Dejar reposar doce horas y filtrar. Verificar la normalidad del reactivo obtenido (Cu 0,1N; Na2CO32N). El pH de la solucin debe ser aproximadamente 9,4. 8.4. Procedimiento. 8.4.1. Preparacin de la muestra. Pesar con aproximacin de 1 mg, 2,5 g de la muestra e introducirla en un matraz aforado de 250 ml. Aadir 200 ml de Etanol 40% (v/v) y mezclar durante una hora en el agitador. Aadir 5 ml de la solucin Carrez I y agitar durante un minuto. Adicionar y agitar durante el mismo tiempo con 5 ml de la solucin Carrez II. Enrasar a 250 ml con la solucin de Etanol 40% (v/v) (8.3.1.), homogeneizar y filtrar. Tomar 200 ml de filtrado y evaporar aproximadamente hasta la mitad del volumen, a fin de eliminar la mayor parte del Etanol. Transvasar en su totalidad el residuo de evaporacin, con ayuda de Agua PA-ACS caliente, a un matraz aforado de 200 ml y enfriar, a continuacin enrasar con Agua PA-ACS y filtrar si es necesario. Esta solucin ser utilizada para la determinacin de azcares reductores y, despus de la inversin, para la determinacin de azcares totales. 8.4.2. Determinacin de azcares reductores. Tomar como mximo 25 ml de la solucin preparada segn 8.4.1. y que contenga menos de 60 mg de azcares reductores, expresado en glucosa. Si es necesario, completar el volumen hasta 25 ml con Agua PA-ACS y determinar la cantidad de azcares reductores segn Luff-Schoorl. El resultado ser expresado en tantos por ciento de glucosa. 8.4.3. Determinacin de azcares totales previa inversin. Tomar 50 ml de la solucin (8.4.1.) y llevar a un matraz aforado de 100 ml. Aadir unas gotas de Rojo de Metilo solucin 0,1% RE y adicionar lentamente agitando 15 ml de la solucin de Acido Clorhdrico 0,1mol/l (0,1N) SV y sumergirlo en un bao de agua caliente a ebullicin durante 30 minutos. Refrigerar hasta 20C y aadir a continuacin 15 ml de Sodio Hidrxido 0,1 mol/l (0,1N) indicador Fenolftalena SV (8.3.7.). Enrasar a 100 ml con Agua PA-ACS y homogeneizar. Tomar una cantidad que no exceda de 25 ml y contenga menos de 60 mg de azcares reductores, expresado en glucosa. Si es necesario, completar el volumen hasta 25 ml con Agua PA-ACS y determinar la cantidad de azcares reductores segn LuffSchoorl. El resultado ser expresado en tantos por ciento de glucosa. De expresarlo en sacarosa, se debe multiplicar por el factor 0,95. 8.4.4. Valoracin de Luff-Schoorl. Tomar 25 ml del reactivo Luff-Schoorl (8.3.17.) y llevarlo a un Erlenmeyer de 300 ml, aadir 25 ml exactamente medidos de la solucin defecada de azcares, adicionar un poco de Piedra Pmez grnulos QP y calentar agitando. Adaptar en seguida un refrigerante de reflujo sobre el Erlenmeyer, a partir de este momento hacer hervir la solucin y mantener en ebullicin durante diez minutos exactamente. Refrigerar inmediatamente al chorro de agua fra durante cinco minutos y proceder a su valoracin. Aadir 10 ml de la solucin de Potasio Yoduro (8.3.14.) inmediatamente despus y, con cuidado, 25 ml de Acido Sulfrico 6N (8.3.13.). Valorar a continuacin mediante la solucin de Sodio Tiosulfato 0,1 mol/l (0,1N) SV (8.3.11.) hasta la aparicin de color amarillo, aadir en ese momento la solucin de Almidn y terminar de valorar. Efectuar la misma valoracin sobre una mezcla que contenga 25 ml, exactamente medidos, del reactivo de Luff-Schoorl, 25 ml de Agua PA-ACS, 10 ml de la solucin de Potasio Yoduro (8.3.14.) y 25 ml de la solucin de Acido Sulfrico 6N (8.3.13.) sin llevar a ebullicin. 8.5. Clculos. Establecer por medio de la tabla I la cantidad de glucosa en mg correspondiente a la diferencia entre las dos valoraciones, segn los ml de sodio tiosulfato 0,1N gastados en cada una de las valoraciones. Expresar el resultado en tanto por ciento de azcares en la muestra. 8.6. Observaciones. 8.6.1. Es recomendable aadir aproximadamente 1 ml de alcohol iso-amlico (sin tener en cuenta el volumen) antes de la ebullicin, con el reactivo LuffSchoorl para evitar la formacin de espuma. 8.6.2. La diferencia entre la cantidad de azcares totales despus de la inversin, expresada en glucosa, y la cantidad de azcares reductores, expresada igualmente en glucosa, multiplicada por 0,95 da la cantidad en tanto por ciento de sacarosa. 8.6.3. Para calcular la cantidad de azcares reductores, excluyendo la lactosa, se puede determinar de las siguientes formas: 8.6.3.1. Para un clculo aproximado, multiplicar por 0,675 la cantidad de lactosa obtenida, por determinacin separada y restar el resultado obtenido de la cantidad en azcares reductores. 8.6.3.2. Para el clculo preciso de azcares reductores, excluyendo la lactosa, es necesario partir de la misma muestra 8.4.1. para las dos determinaciones finales. Uno de los anlisis es efectuado a partir de la solucin obtenida en 8.4.1. y el otro sobre una parte de la solucin obtenida para la valoracin de la lactosa segn el mtodo para la determinacin de la lactosa.

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En los casos 8.6.3.1. y 8.6.3.2. la cantidad de azcares presentes se determinan segn el mtodo de Luff-Schoorl, expresado en mg de glucosa. La diferencia entre los dos valores se expresa en tanto por ciento de la muestra.

8.7. Referencias. 8.7.1. Journal Officiel des Communauts Europennes, nm. L 155/32, 1971.

TABLA 1 Para 25 ml de reactivo Luff-Schoorl Na2S203 0,1N ml 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 Glucosa, fructosa azcares invertidos C6 H12 06 mg 2,4 4,8 7,2 9,7 12,2 14,7 17,2 19,8 22,4 25,0 27,6 30,3 33,0 35,7 38,5 41,3 44,2 47,1 50,0 53,0 56,0 59,1 62,2 Diferencia 2,4 2,4 2,5 2,5 2,5 2,5 2,6 2,6 2,6 2,6 2,7 2,7 2,7 2,8 2,8 2,9 2,9 2,9 3,0 3,0 3,1 3,1 mg 3,6 7,3 11,0 14,7 18,4 22,1 25,8 29,5 33,2 37,0 40,8 44,6 48,4 52,2 56,0 59,9 63,8 67,7 71,7 75,7 79,8 83,9 88,0 Lactosa C12 H22 011 Diferencia 3,7 3,7 3,7 3,7 3,7 3,7 3,7 3,7 3,8 3,8 3,8 3,8 3,8 3,8 3,9 39 39 4,0 4,0 4,1 4,1 4,1 mg 3,9 7,8 11,7 15,6 19,6 23,5 27,5 31,5 35 5 39,5 43.5 47,5 51,6 55,7 59,8 63,9 68,0 72,2 76,5 80,9 85,4 90,0 94,6 Maltosa C12 H22 011 Diferencia 3,9 3,9 3,9 4,0 3,9 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 4,1 4,1 4,1 4,1 4,1 4,2 4,3 4,4 4,5 4,6 4,6

9. CLORUROS 9.1. Principio. Los cloruros se solubilizan en agua, defecndose la solucin si contienen materias orgnicas, posterior acidificacin de la misma con cido ntrico y precipitacin de los cloruros con plata nitrato. El exceso de nitrato se valora con una solucin de amonio sulfocianuro.

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9.2. Material y aparatos. 9.2.1. Agitador de 35 a 40 r.p.m. 9.3. Reactivos. 131007 Acetona PA-ACS-ISO 131008 Acido Actico glacial PA-ACS-ISO 131036 Acido Ntrico 60% PA-ISO

131074 Agua PA-ACS 171366 Alumbre de hierro amoniacal solucin saturada RE 181144 Amonaco Tiocianato 0,1 mol/l (0,1N) SV 121237 Carbn Activo polvo PA 132770 Eter Dietlico estabilizado con ~6 ppm de BHT PA-ACS-ISO 181464 Plata Nitrato 0,1 mol/l (0,1N) SV 131505 Potasio Hexacianoferrato II 3-hidrato PA-ACS 131775 Zinc Acetato 2-hidrato PA-ACS 9.3.1. Solucin de Amonaco Tiocianato 0,1 mol/l (0,1N) SV. 9.3.2. Solucin de Plata Nitrato 0,1 mol/l (0,1N) SV.

M
9.3.3. Alumbre de hierro amoniacal solucin saturada RE. 9.3.4. Acido Ntrico 60% PA-ISO. 9.3.5. Eter Dietlico estabilizado con ~6 ppm de BHT PA-ACS-ISO. 9.3.6. Acetona PA-ACS-ISO. 9.3.7. Solucin de Carrez I: Disolver en Agua PAACS 24 g de Zinc Acetato 2-hidrato PA-ACS y 3 g de Acido Actico glacial PA-ACS-ISO. Completar hasta 1.000 ml con Agua PA-ACS. 9.3.8. Solucin de Carrez II: Disolver en Agua PA-ACS 10,6 g de Potasio Hexacianoferrato II 3hidrato PA-ACS. Completar a 100 ml con Agua PAACS. 9.3.9. Carbn Activo, exentos de cloruros. Usar Carbn Activo polvo PA. 9.4. Procedimiento. Pesar, con precisin de 1 mg aproximadamente, 5 g de muestra e introducirla con 1 g de Carbn Activo exento de cloruros en un matraz aforado de 500 ml. Aadir 400 ml de Agua PA-ACS a 20C aproximadamente y 5 ml de la solucin de Carrez I, agitar y aadir seguidamente 5 ml de la solucin de Carrez II. Agitar durante 30 minutos, enrasar, homogeneizar y filtrar. Tomar de 25 a 100 ml de filtrado (con contenido en cloro inferior a 150 mg) e introducirlo en un Erlenmeyer, diluir si es necesario, hasta 50 ml con Agua PA-ACS. Aadir 5 ml de Acido Ntrico 60% PA-ISO, 20 ml de Alumbre de hierro amoniacal solucin saturada RE y dos gotas de la solucin de Amonaco Tiocianato 0,1 mol/l (0,1N) SV, aadidas mediante una bureta llena hasta el trazo cero. Aadir seguidamente mediante una bureta la solucin de Plata Nitrato 0,1 mol/l (0,1N) SV hasta un exceso de 5 ml. Aadir 5 ml de Eter Dietlico estabilizado con ~6 ppm de BHT PA-ACS-ISO y agitar fuertemente para recoger el precipitado. Valorar el exceso de Plata Nitrato 0,1 mol/l (0,1N) SV mediante la solucin de Amonaco Tiocianato 0,1 mol/l (0,1N) SV hasta que el viraje a rojo oscuro persista durante un minuto. 9.5. Clculos. La cantidad de cloro (p) expresada en sodio cloruro presente en el volumen del filtrado separado para la valoracin viene dada por la frmula: p = 5,845 (V1 - V2) mg Siendo: V1 = Volumen, en ml, de solucin de Plata Nitrato aadida. V2 = Volumen, en ml, de solucin de Amonaco Tiocianato 0,1 mol/l (0,1N) SV utilizados en la valoracin. Efectuar un ensayo en blanco sin la muestra a analizar y si consume solucin de Plata Nitrato 0,1 mol/l (0,1N) SV, restar este valor al volumen (V1 - V2). Expresar el resultado en porcentaje de la muestra. 9.6. Observaciones. 9.6.1. Para los productos ricos en materias grasas, desengrasar previamente mediante eter etlico. 9.7. Referencias. 9.7.1. Journal Officiel des Communauts Europennes Nm. L 155/23-1971.

10. ZINC 10.1. Principio. Determinacin del zinc por A.A. previa mineralizacin de la muestra. 10.2. Material y aparatos. 10.2.1. Espectrofotmetro de A.A. 10.2.2. Lmpara de zinc. 10.2.3. Los utilizados para el plomo en (11.2.3.), (11.2.4.), (11.2.5.) y (11.2.6.). 10.3. Reactivos. 131037 Acido Ntrico 70% PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 313193 Zinc solucin patrn Zn = 1,000 0,002 g/l AA 10.3.1. Los utilizados para el plomo en (11.3.1.) y (11.3.2.). 10.3.2. Zinc solucin patrn Zn = 1,000 0,002 g/l AA. 10.4. Procedimiento. 10.4.1. Preparacin de la muestra. Como en (11.4.1.). 10.4.2. Construccin de la curva patrn. Diluir partes alcuotas de la solucin patrn (10.3.2.), con el Acido Ntrico 1%, para obtener soluciones de 0,5; 1,5 y 2 mg/l. 10.4.3. Determinacin. Igual que para el plomo. La lectura se efectuar a 213,5 nm. 10.5. Clculos. Partiendo de los valores de absorbancias obtenidos, hallar las concentraciones de Zn para la muestra, teniendo en cuenta el factor concentracin o dilucin. 10.6. Referencias. 10.6.1. H.E.Parker: Atomic Absorption Newsletter (1963), 13.

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11. PLOMO 11.1. Principio. Determinacin del plomo por A.A. previa mineralizacin de la muestra. 11.2. Material y aparatos. 11.2.1. Espectrofotmetro de A.A. 11.2.2. Lmpara de plomo. 11.2.3. Cpsula de platino, cuarzo o similar. 11.2.4. Bao de arena o placa calefactora. 11.2.5. Horno elctrico (mufla) con dispositivo de control de temperatura. 11.3. Reactivos. 131037 Acido Ntrico 70% PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 313189 Plomo solucin patrn Pb = 1,000 0,002 g/l AA 11.3.1. Acido Ntrico 70% PA-ACS-ISO (d=1,413). 11.3.2. Acido Ntrico al 1% en Agua PA-ACS (v/v). Diluir Acido Ntrico 70% PA-ACS-ISO con Agua PA-ACS, hasta la concentracin indicada. 11.3.3. Plomo solucin patrn Pb = 1,000 0,002 g/l AA. 11.4. Procedimiento. 11.4.1. Preparacin de la muestra. Poner 10 g de la muestra en la cpsula (11.2.3.), llevar sobre la placa calefactora teniendo cuidado que la combustin no sea demasiado rpida de manera que no haya prdidas de materia slida por proyeccin. Aadir a continuacin 2 ml de Acido Ntrico 70% PA-ACS-ISO y carbonizar el residuo en el bao de arena o placa calefactora. Seguidamente introducir la cpsula en la mufla y mantenerla a 450C hasta mineralizacin total (11.6.1.). Dejar enfriar. Disolver a continuacin las cenizas con Acido Ntrico 70% PA-ACS-ISO y Agua PA-ACS. Llevar la solucin a un matraz de 10 ml, lavar la cpsula con Agua PA-ACS y aadir las aguas de lavado hasta el enrase, filtrando posteriormente. 11.4.2. Construccin de la curva patrn. Diluir alcuotas apropiadas de la solucin patrn (11.3.3.) con Acido Ntrico al 1% necesario para que su concentracin sea similar a la dilucin final de la muestra para obtener una curva de concentraciones 1; 2 y 3 mg/l. 11.4.3. Determinacin. Operar segn las especificaciones del aparato; usando llama de aire-acetileno. Medir las absorbancias de la muestra y patrones a 283 nm. Si la solucin est muy concentrada diluirla con Acido Ntrico al 1%. 11.5. Clculos. Calcular el contenido en plomo, expresado en

mg/l mediante comparacin con la correspondiente curva patrn y teniendo en cuenta el factor de dilucin. 11.6. Observaciones. 11.6.1. En caso de que la muestra no est totalmente mineralizada aadir unas gotas de Acido Ntrico 70% PA-ACS-ISO y repetir el proceso. 11.7. Referencias. 11.7.1. Mtodos Oficiales de Anlisis de Vinos. Ministerio de Agricultura, pg. 134 (I), 1976.

12. MERCURIO 12.1. Principio. Determinacin de mercurio por absorcin atmica con tcnica de vapor fro previa digestin de la muestra. 12.2. Material y aparatos. 12.2.1. Balanza de precisin. 12.2.2. Espectrofotmetro de absorcin atmica. 12.2.3. Lmpara de mercurio. 12.2.4. Cmara de absorcin con ventanas de cuarzo acoplable al espectrofotmetro. 12.2.5. Equipo de reduccin del ion mercurio a mercurio metlico y de arrastre hasta la cmara de absorcin incluyendo sistema de desecacin. 12.2.6. Registrador grfico de voltaje y velocidad de carta variable. 12.2.7. Material de vidrio corriente de laboratorio lavado con Acido Ntrico (1:1) y enjuagado con agua destilada. 12.2.8. Bloque de digestin con temperatura programable. 12.2.9. Tubos de digestin para el bloque anterior. 12.2.10. Tubos de condensacin adaptables a los tubos de digestin. 12.3. Reactivos. 131037 Acido Ntrico 70% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfrico 96% PA-ISO Agua Desionizada 131074 Agua PA-ACS Estao II Cloruro 10% (exento de Hg) 141076 Hidrgeno Perxido 30% p/v (100 vol.) PRS 313186 Mercurio solucin patrn Hg = 1,000 0,002 g/l AA 12.3.1. Acido Sulfrico 96% PA-ISO (d = 1,84 ). 12.3.2. Hidrgeno Perxido 18% p/v. Diluir convenientemente Hidrgeno Perxido 30% p/v (100 vol.) PRS con Agua PA-ACS. 12.3.3. Acido Ntrico 70% PA-ACS-ISO (d = 1,41). 12.3.4. Estao II Cloruro 10% (exento de Hg).

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12.3.5. Agua PA-ACS. 12.3.6. Mercurio solucin patrn Hg = 1,000 0,002 g/l AA. 12.3.7. Solucin patrn de Mercurio de 0,1 mg/l. Se obtiene de la anterior por sucesivas diluciones con Agua Desionizada. Debe prepararse al igual que las soluciones intermedias, diariamente. 12.4. Procedimiento. 12.4.1. Preparacin de la muestra: Colocar de 3 a 5 g de muestra en un tubo digestor (12.2.9.) acoplando ste a un tubo de condensacin (12.2.10.). Aadir 10 ml de Acido Sulfrico 96% PA-ISO a incrementos de 1 ml (la muestra se carboniza; pero si el cido se aade lentamente, de modo que la temperatura de la solucin permanezca baja, y se toma la precaucin de que no se formen masas de carbn, el mercurio queda en solucin). Aadir 10 ml de Hidrgeno Perxido 18% p/v (12.3.2.) a incrementos de 1 ml. Dejar reaccionar antes de aadir el siguiente incremento. Aadir 10 ml de Acido Ntrico 70% PA-ACS-ISO a incrementos de 1 ml. Lavar los condensadores con Agua PA-ACS y retirarlos. 12.4.2. Digestin de la muestra: Colocar los tubos de digestin en el bloque calefactor y calentar a 100C. Mantener esta temperatura durante 6 minutos, aumentarlo entonces hasta 200C a razn de 4C/minuto. Retirar los tubos del bloque y dejar enfriar. Transferir las soluciones a matraces de 100 ml y enrasar con Agua PA-ACS. 12.4.3. Determinacin: Se analiza la muestra por la tcnica de vapor fro A.A. segn las instrucciones propias de cada aparato, utilizando Estao II Cloruro 10% (exento de Hg) como agente reductor (12.3.4.) siendo la longitud de onda de medida 254 nm. 12.4.4. Construccin de la curva patrn: Se obtiene representando en abcisas los contenidos en mercurio de los patrones preparados con alcuotas de 0; 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 y 10 ml de solucin patrn de 0,1 mg/l de forma que contenga de 0 a 1 mg de mercurio y en ordenada a la altura de los correspondientes mximos de absorcin. Dichos patrones se habrn sometido al mismo procedimiento que las muestras. 12.5. Clculos. Calcular el contenido en mercurio refirindolos a la curva patrn obtenida previamente y operando en idnticas condiciones. P = Peso, en gramos, de la muestra. 12.6. Referencias. 12.6.1. Munns y Holland. JAOAC 60 833-837, 1977. 12.6.2. Marts y Blahc. JAOAC vol. 66, nmero 6 1983. 12.6.3. AOAC Mtodos oficiales de anlisis, 1980.

13. COBRE 13.1 Principio. Determinacin del cobre por A.A. previa mineralizacin de la muestra. 13.2. Material y aparatos. 13.2.1. Espectrofotmetro de A.A. 13.2.2. Lmpara de cobre. 13.2.3. Las utilizadas para el plomo, en (11.2.3.), (11.2.4.) y (11.2.5.). 13.3. Reactivos 131037 Acido Ntrico 70% PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 313178 Cobre solucin patrn Cu = 1,000 0,002 g/l AA 13.3.1. Los utilizados para el plomo, en (11.3.1.) y (11.3.2.). 13.3.2. Cobre solucin patrn Cu = 1,000 0,002 g/l AA. 13.4. Procedimiento. 13.4.1. Preparacin de la muestra. Como en (11.4.1.). 13.4.2. Construccin de la curva patrn. Diluir parte alcuota de la solucin patrn (13.3.2.) con Acido Ntrico del 1% para obtener soluciones que contengan de 1 a 5 mg de Cu/l. 13.4.3. Determinacin. Igual que para el plomo. Medir a 324,7 nm. 13.5 Clculos. Partiendo de los valores de absorbancia obtenidos para la muestra, hallar mediante la curva patrn las concentraciones de cobre de la muestra. 13.6 Referencias. 13.6.1. H. E. Parker: Atomic Absorption Newsletter (1963),13. 13.6.2 F. Rousselet: Spectrophotometrie pour absorption atomique Boudin Ed. Paris (1968), pgs. 59-144.

L mg de Hg/Kg = P en donde: L = La lectura obtenida a partir de la grfica expresada en microgramos.

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14. ARSENICO 14.1. Principio. La muestra se somete a una digestin cida con una mezcla de cido ntrico y sulfrico. La determinacin del arsnico se realiza por espectrofotometra de absorcin atmica, con generador de hidruros. 14.2. Material y aparatos. 14.2.1. Balanza analtica con precisin de 0,1 mg. 14.2.2. Matraces Kjeldahl de 250 ml. 14.2.3. Espectrofotmetro de absorcin atmica equipado con sistema generador de hidruros. 14.2.4. Lmpara de descarga sin electrodos. 14.2.5. Fuente de alimentacin para lmpara de descarga sin electrodos. 14.2.6. Registro grfico. 14.3. Reactivos. Se utilizan solamente reactivos de grado de pureza para anlisis y agua destilada. 131020 Acido Clorhdrico 37% PA-ACS-ISO 131669 Acido Etilendiaminotetraactico Sal Disdica 2-hidrato PA-ACS-ISO 131037 Acido Ntrico 70% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 313171 Arsnico solucin patrn As = 1,000 0,002 g/l AA 121515 Potasio Hidrxido 85% lentejas PA 123314 Sodio Borohidruro PA 131687 Sodio Hidrxido lentejas PA-ACS-ISO 14.3.1. Acido Clorhdrico 37% PA-ACS-ISO (d = 1,19 g/ml). 14.3.2. Disolucin de Acido Clorhdrico 32% v/v. Disolver 32 ml de Acido Clorhdrico 37% PAACS-ISO con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 14.3.3. Disolucin de Acido Clorhdrico 1,5% v/v. Disolver 15 ml de Acido Clorhdrico 37% PAACS-ISO con Agua PA-ACS hasta un volumen de 1.000 ml. 14.3.4. Acido Ntrico 65% (d = 1,40). Diluir Acido Ntrico 70% PA-ACS-ISO con Agua PA-ACS hasta la concentracin indicada. 14.3.5. Acido Sulfrico 96% PA-ISO (d = 1,84). 14.3.6. Disolucin de Sodio Hidrxido al 1%. Pesar 1 g de Sodio Hidrxido lentejas PA-ACS-ISO y disolverlo con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 14.3.7. Disolucin de Sodio Borohidruro al 3%. Pesar 3 g de Sodio Borohidruro PA y disolverlos hasta 100 ml con Sodio Hidrxido al 1%. 14.3.8. Disolucin de EDTA Sal Disdica 2-hidrato al 1%. Pesar 1 g de Acido Etilendiaminotetraactico Sal Disdica 2-hidrato PA-ACS-ISO y disolverlo hasta 100 ml con Agua PA-ACS.

14.3.9. Disolucin de Potasio Hidrxido al 20%. Pesar 20 g de Potasio Hidrxido 85% lentejas PA y disolverlo con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 14.3.10. Disolucin de Acido Sulfrico al 20% (v/v). Diluir 20 ml de Acido Sulfrico 96% PA-ISO (14.3.5.) con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 14.3.11. Disolucin de Acido Sulfrico al 1% (v/v). Diluir 1 ml de Acido Sulfrico 96% PA-ISO con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 14.3.12. Arsnico solucin patrn As = 1,000 0,002 g/l AA. 14.3.13. Solucin patrn de Arsnico de concentracin 10 mg/l. Pipetear 1 ml de la solucin patrn de Arsnico (14.3.12.) en un matraz aforado de 100 ml. Diluir hasta el enrase con Agua PA-ACS. 14.3.14. Solucin patrn de Arsnico de concentracin 0,1 mg/l. Pipetear 1 ml de la solucin de Arsnico (14.3.13.) en un matraz aforado de 100 ml. Diluir hasta el enrase con Agua PA-ACS. 14.4. Procedimiento. 14.4.1. Preparacin de la muestra.- En un matraz Kjeldahl, de 250 ml introducir 2 g de muestra con 20 ml de Acido Ntrico 65% y 5 ml de Acido Sulfrico 96% PA-ISO. Llevar a ebullicin hasta un volumen aproximado de 5 ml. Dejar enfriar y disolver con Agua PA-ACS en un matraz de 50 ml de la solucin resultante. 14.4.2. Preparacin del blanco y patrones de trabajo. En un matraz Kjeldahl, introducir 5 ml de la solucin de Arsnico (14.3.14.) y someterlo al mismo tratamiento que la muestra. 1 ml de la solucin contiene 10 ng de Arsnico. Preparar un blanco con todos los reactivos utilizados siguiendo el tratamiento dado a la muestra. 14.4.3. Condiciones del espectrofotmetro.Encender la fuente de alimentacin de las lmparas de descarga sin electrodos con el tiempo suficiente para que se estabilice la energa de la lmpara. Encender el espectrofotmetro, ajustar la longitud de onda a 193,7 nm, colocando la rejilla de acuerdo con las condiciones del aparato. Encender el generador de hidruros, colocando la temperatura de la celda a 900C, esperando hasta que se alcance dicha temperatura. Se ajustan las condiciones del generador de hidruros segn las especificaciones del aparato. Ajustar el flujo de Argn de acuerdo con las caractersticas del aparato. Encender el registrador. 14.4.4. Determinacin.- Las determinaciones de la concentracin de Arsnico se realizan por el mtodo de adicin de patrones, por medio de medidas duplicadas en el espectrofotmetro en las condiciones especificadas en (14.4.3.), aadiendo al matraz de reaccin 3 ml de la solucin (14.3.8.) usando como reductor la solucin (14.3.7.); como patrones internos se usan 10, 20 y 50 ng de As.

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M
Lavar los matraces antes y despus de cada uso, con Acido Clorhdrico 1,5% (14.3.3.). Al construir la grfica de adicin hay que descontar el valor de absorbancia del blanco obtenido en las mismas condiciones anteriores, pero aadiendo 3 ml de la solucin en blanco. En estas condiciones el lmite de deteccin de la tcnica es de 5 ng.

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Pastas alimenticias

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METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 8-9-1987) 10. GRADO DE ACIDEZ 10.1. Principio. La acidez del extracto alcohlico de las pastas alimenticias se determina por titulacin y se expresa en ml de NaOH 1N. 10.2. Material y aparatos. 10.2.1. Molino de laboratorio, que sin calentar la muestra sea capaz de obtener partculas inferiores a 550 micras. 10.2.2. Filtro de filtracin rpida. 10.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 121085 Etanol 96% v/v PA 171327 Fenolftalena solucin 1% RE 182296 Sodio Hidrxido 0,025 mol/l (0,025N) SV 10.3.1. Etanol de 95, exento de perxidos. 10.3.2. Etanol de 50. Mezclar 100 ml de Etanol de 95 con 96 ml de Agua PA-ACS. 10.3.3. Sodio Hidrxido 0,025 mol/l (0,025N) SV o preparar disolviendo Sodio Hidrxido lentejas PAACS-ISO en Agua PA-ACS, hasta la concentracin indicada. 10.3.4. Fenolftalena solucin 1% RE. 10.4. Procedimiento. Moler la muestra a analizar de modo que pase completamente a travs de un tamiz de malla de 500 micras. Pesar, con precisin de un miligramo, 4 g de producto, transfirindolo a un matraz Erlenmeyer de 500 ml con tapn esmerilado, y aadir 100 ml de etanol de 50 previamente neutralizado a la fenolftalena con NaOH 0,02N. Agitar vigorosamente y dejar en contacto con la solucin alcohlica durante tres horas, agitando peridicamente. Transcurridas las tres horas, filtrar a travs del filtro 10.2.2. Tomar del filtrado 50 ml y titular con NaOH 0,02N, empleando como indicador tres gotas de Fenolftalena solucin 1% RE. 10.5. Expresin de los resultados. Se define el grado de acidez (G) como el nmero de ml de sodio hidrxido 1N necesario para neutralizar la acidez de 100 g de producto seco. V x 100 G = 100 - H Siendo: V = Volumen, en ml, de NaOH 0,02N empleados en la neutralizacin. H = Porcentaje de humedad de la muestra. Expresar el resultado con una cifra decimal.

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Galletas

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METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 24-11-1987) 10. EXTRACCION DE LA GRASA PARA SU IDENTIFICACION 10.1. Principio. Extraccin de la grasa con ter de petrleo mediante aparato de extraccin continuo. 10.2. Material y aparatos. 10.2.1. Extractor tipo Soxhlet. 10.2.2. Cartuchos de extraccin. 10.2.3. Matraces de 100 a 150 ml adaptables al extractor. 10.2.4. Batera de extraccin. 10.3. Reactivos. 131315 Eter de Petrleo 40-60C PA-ISO 10.3.1. Eter de Petrleo 40-60C PA-ISO. 10.4. Procedimiento. Tomar de 5 a 10 g de muestra, preparada segn mtodo 1, y efectuar la extraccin con Eter de Petrleo 40-60C PA-ISO, en el aparato de extraccin continuo (10.2.1.) a una temperatura entre 4060C. 10.5. Observaciones. 10.5.1. En el caso de necesitarse la grasa para la determinacin de componentes que se puedan alterar a 60C, se podr realizar la extraccin en fro utilizando ter etlico o cloroformo-etanol (1:1).

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Cerveza

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